Name: murine full-thickness skin transplantation
Uploaded: 2017-01-02T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Full-thickness Skin Transplantation at JoVE.com

Este trabalho foi financiado pelo NIH conceder R01AI077610.

Todos os procedimentos foram realizados de acordo com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório do Instituto Nacional de Saúde (NIH) e foram aprovados pela Comissão de Johns Hopkins University animal Cuidado e Uso (JHUACUC). Os procedimentos específicos foram realizados sob a MO13M292 protocolos ACUC aprovado e MO13M370. 1. Donor Colheita da pele <ol><li> Anestesiar o rato doador com isoflurano (vaporizador de indução a 4%, manutenção a 1 - 2% através do cone mouse). U...

<ol>
	<li>Furtmuller, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+Hind+Limb+Transplantation+in+the+Mouse.">Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse.</a> J Vis Exp. , (2016).</li><li>Oh, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Microsurgical+Model+for+Heterotopic,+En+Bloc+Chest+Wall,+Thymus,+and+Heart+Transplantation+in+Mice.">A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice.</a> J Vis Exp. , (2016).</li><li>Oberhuber, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+cervical+heart+transplantation+model+using+a+modified+cuff+technique.">Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique.</a> J Vis Exp. , e50753 (2014).</li><li>Jones, T. R., Shirasugi, N., Adams, A. B., Pearson, T. C., Larsen, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+identifies+selectins+that+regulate+T+cell+traffic+into+allografts.">Intravital microscopy identifies selectins that regulate T cell traffic into allografts.</a> J Clin Invest. 112, 1714-1723 (2003).</li><li>Celli, S., Albert, M. L., Bousso, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+the+innate+and+adaptive+immune+responses+underlying+allograft+rejection+by+two-photon+microscopy.">Visualizing the innate and adaptive immune responses underlying allograft rejection by two-photon microscopy.</a> Nat Med. 17, 744-749 (2011).</li><li>Medawar, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+behaviour+and+fate+of+skin+autografts+and+skin+homografts+in+rabbits:+A+report+to+the+War+Wounds+Committee+of+the+Medical+Research+Council.">The behaviour and fate of skin autografts and skin homografts in rabbits: A report to the War Wounds Committee of the Medical Research Council.</a> J Anat. 78, 176-199 (1944).</li><li>Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B., Sparrow, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+studies+on+tissue+transplantation+immunity.+I.+The+survival+times+of+skin+homografts+exchanged+between+members+of+different+inbred+strains+of+mice.">Quantitative studies on tissue transplantation immunity. I. The survival times of skin homografts exchanged between members of different inbred strains of mice.</a> Proc R Soc Lond B Biol Sci. 143, 43-58 (1954).</li><li>Garrod, K. R., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+skin+transplantation.">Murine skin transplantation.</a> J Vis Exp. , (2008).</li><li>Schmaler, M., Broggi, M. A., Rossi, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+tail+skin+to+study+allogeneic+CD4+T+cell+responses+in+mice.">Transplantation of tail skin to study allogeneic CD4 T cell responses in mice.</a> J Vis Exp. , e51724 (2014).</li><li>Bergstresser, P. R., Toews, G. B., Gilliam, J. N., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unusual+numbers+and+distribution+of+Langerhans+cells+in+skin+with+unique+immunologic+properties.">Unusual numbers and distribution of Langerhans cells in skin with unique immunologic properties.</a> J Invest Dermatol. 74, 312-314 (1980).</li><li>Chen, H. D., Silvers, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+Langerhans+cells+on+the+survival+of+H-Y+incompatible+skin+grafts+in+rats.">Influence of Langerhans cells on the survival of H-Y incompatible skin grafts in rats.</a> J Invest Dermatol. 81, 20-23 (1983).</li><li>Chong, A. S., Alegre, M. L., Miller, M. L., Fairchild, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lessons+and+limits+of+mouse+models.">Lessons and limits of mouse models.</a> Cold Spring Harb Perspect Med. 3, a015495 (2013).</li><li>Mayumi, H., Nomoto, K., Good, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+surgical+technique+for+experimental+free+skin+grafting+in+mice.">A surgical technique for experimental free skin grafting in mice.</a> Jpn J Surg. 18, 548-557 (1988).</li><li>McFarland, H. I., Rosenberg, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+allograft+rejection.">Skin allograft rejection.</a> Curr Protoc Immunol. Chapter 4, (2009).</li><li>Lee, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preventing+Allograft+Rejection+by+Targeting+Immune+Metabolism.">Preventing Allograft Rejection by Targeting Immune Metabolism.</a> Cell reports. 13, 760-770 (2015).</li><li>Pollizzi, K. N., Powell, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrating+canonical+and+metabolic+signalling+programmes+in+the+regulation+of+T+cell+responses.">Integrating canonical and metabolic signalling programmes in the regulation of T cell responses.</a> Nat Rev Immunol. 14, 435-446 (2014).</li><li>Pearce, E. L., Poffenberger, M. C., Chang, C. H., Jones, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fueling+immunity:+insights+into+metabolism+and+lymphocyte+function.">Fueling immunity: insights into metabolism and lymphocyte function.</a> Science. 342, 1242454 (2013).</li></ol>

Desde a sua introdução por Medawar, primeiro em estudos humanos e, em seguida, em coelhos e ratinhos, o transplante de pele tem sido um modelo de valor inestimável para o estudo das respostas imunitárias alogénicas 6,7. Neste artigo, apresentamos um modelo de grande escala, o transplante de pele não-vascularizado de espessura total com a pele para trás superior e inferior. Vários métodos alternativos, incluindo o uso da pele da cauda ou da pele da orelha de rato como fonte de tecido do enxerto, foram...

O transplante de órgãos é o tratamento de escolha para pacientes com casos de insuficiência terminal de órgãos, e os resultados têm melhorado notavelmente com os avanços em procedimentos cirúrgicos e protocolos de imunossupressão. No entanto, a imunossupressão a longo prazo está associada a efeitos colaterais significativos, e o desenvolvimento de novas estratégias que promovem a tolerância continua a ser o objectivo da investigação moderna transplante. Numerosos modelos animais têm sido desenvolvidos para a pesquisa básica em transplante, para estudar os mecanismos da rejeição do enxerto e para testar se aproxima de imunossupressão para a prevenção da rejeição de enxertos e para promover a tolerância a longo prazo 1-3. mouse modelos tornaram-se o esteio da pesquisa imunológica devido à disponibilidade exclusiva e vasta de anticorpos diagnósticos e terapêuticos e estirpes puras e transgênicas bem definidas. transplante de pele é um procedimento simples que não requer habilidades especiais de microcirurgia e podeser facilmente monitorizado no pós-operatório. Tomados em conjunto, o transplante de pele de ratinho tem sido uma ferramenta excepcional para estudar muitos aspectos envolvidos na resposta aloimune, incluindo a entrega de antigénio, o tráfico de células, e a destruição do tecido durante a rejeição de enxerto de 4,5. Aqui, mostramos o procedimento passo-a-passo para o transplante de pele de espessura total utilizando o modelo de rato, e descrevemos as etapas importantes necessárias para um enxerto bem-sucedida da pele transplantada.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="923">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Straight micro forceps&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Sigma</td>
			<td style="width:136px;">F4017</td>
			<td style="width:415px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Curved micro forceps&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Aesculap</td>
			<td style="width:136px;">BD333R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Curved Stevens tenotomy scissors&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Aesculap</td>
			<td style="width:136px;">BC905R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Mayo dissecting&#160; scissors</td>
			<td style="width:125px;">Sigma</td>
			<td style="width:136px;">S3146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Micro needle holder</td>
			<td style="width:125px;">Aesculap</td>
			<td style="width:136px;">BM563R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Sterile gauze</td>
			<td style="width:125px;">Covidien</td>
			<td style="width:136px;">441218</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">6-0 Nylon suture&#160;</td>
			<td style="width:125px;">MWI</td>
			<td style="width:136px;">31849</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:247px;">Plastic Strips Band-Aid</td>
			<td style="width:125px;">Johnson &#38; Johnson</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td>Obtained from pharmacy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">10 cm Petri dish</td>
			<td style="width:125px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:136px;">FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:247px;">PBS</td>
			<td style="width:125px;">Quality Biological</td>
			<td style="width:136px;">119069131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Buprenorphine</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td>DEA Number required; Obtained from hospital pharmacy</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:247px;">Enrofloxacin</td>
			<td style="width:125px;">Bayer Health Care</td>
			<td style="width:136px;">186599</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine full-thickness skin transplantation

O transplante de pele de espessura total de murino é um modelo bem estabelecido para o estudo in vivo de resposta aloimune e rejeição de enxerto. Apesar da sua aplicação limitada a seres humanos, o transplante de pele em ratinhos tem sido amplamente utilizada para a pesquisa em transplantes. O procedimento é fácil de aprender e executar, e não requer técnicas de microcirurgia delicada, nem treinamento extensivo. Além disso, a rejeição do enxerto neste modelo ocorre em uma reacção imunológica muito reprodutível e é facilmente monitorizado por inspecção e palpação directa. Além disso, o transplante de pele secundário combinados com enxertos de pele de doadores ou de terceiros pode ser realizada em modelos de transplante mais complexos como um método alternativo e simples para avaliar a tolerância específica do dador. As complicações são baixos e são, em geral, limitado a uma overdose de anestesia ou angústia respiratória após o procedimento. falha do enxerto, por outro lado, ocorre geralmente como um resultado da má preparação da Grpopa, posicionamento incorreto no leito do enxerto, ou posicionamento inadequado de o curativo. Neste artigo, apresentamos um protocolo para o transplante de pele de espessura total em ratos e descrever os passos importantes necessários para o sucesso do procedimento.

A colocação do curativo sobre o mouse destinatário é um passo importante do processo. O enxerto de pele é posicionada no tronco recipiente, entre o ombro, anca e espinha (Figura 1). A ligadura é feita com gaze dobrada e a combinação de duas ataduras adesivas de plástico. O rato receptor é colocado com o enxerto para baixo sobre a gaze sobre o centro da ligadura. Usando dois micro pinças curvas, a extremidade inferior da ligadura é primeiro removido, e em segu...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Full-thickness Skin Transplantation at JoVE.com

Murine Full-thickness Skin Transplantation

transplante de pele de espessura total murino é um modelo bem estabelecido para estudar a rejeição em um ambiente alloimmune. Aqui, nós fornecemos um tutorial de cada etapa envolvida na realização de um / c BALB -&gt; C57BL / 6 transplante de pele de espessura total.

Murino Transplante de pele de espessura total

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Murine Model of CD40-activation of B cells

Modelo murino de CD40-ativação de células B

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Imunologia e Infecção

Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering

Granulócitos-dependente Blistering pele induzida por auto-anticorpos

Autoimmune phenomena occur in healthy individuals, but when self-tolerance fails, the autoimmune response may result in specific pathology. According to ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

O transplante de pele da cauda para estudar as respostas das células T CD4 alogênico em camundongos

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Isolation and Transplantation of Different Aged Murine Thymic Grafts.

Isolamento e Transplante de diferentes envelhecidas murino tímicos enxertos.

The mechanisms that regulate the efficacy of thymic selection remain ill-defined. The method presented here allows in vivo analyses of the development and ...

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Gu&#233;rin

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-GuÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â©rin

Um ensaio baseado em CFSE para estudar a migração de Murino pele as células dendríticas em drenagem gânglios linfáticos durante a infecção com<em&gt; Mycobacterium bovis</em&gt; Bacilo de Calmette-Guérin

Dendritic cells (DCs) are important for initiating immune responses, in part through their ability to acquire and shuttle antigen to the draining lymph ...

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

In Vitro e In Vivo de avaliação da atividade supressiva, T, B e células mieloides e respostas Humoral de pacientes transplantados

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms ...

Using Robotic Systems to Process and Embed Colonic Murine Samples for Histological Analyses

Usando sistemas robóticos para processar e incorporar Colônica murino amostras para análise histológica

The understanding of human diseases has been greatly expanded thanks to the study of animal models. Nonetheless, histopathological evaluation of ...

Renal Subcapsular Transplantation of 2'-Deoxyguanosine-Treated Murine Embryonic Thymus in Nude Mice

Transplantação subcapsular renal do Thymus Embryonic murine 2 '-Deoxyguanosine-Tratado em ratos nus

The thymus is an important central immune organ, which plays an essential role in the development and differentiation of T cells. Thymus transplantation ...

Isolation of Lamina Propria Mononuclear Cells from Murine Colon Using Collagenase E

Isolamento de células mononucleares de lamina propria de cólon murino usando Collagenase E

The intestine is the home to the largest number of immune cells in the body. The small and large intestinal immune systems police exposure to exogenous ...

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

Otimização da Técnica de Manguito para Transplante de Coração de Murine

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...