Name: monitoring astrocyte reactivity and proliferation in vitro under ischemic-like conditions
Uploaded: 2017-10-21T13:00:00
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著者のテクニカル サポート パオラ ・ ロペス Pieraldi を感謝したいです。A.H.M. は助成金 8G12MD007600 と U54 NS083924 このパブリケーションをサポートに感謝しています。NIH NIMHD-G12 MD007583 助成施設支援に感謝いたします。D.E.R.A. は、NIHNIGMS R25GM110513 によって提供される交わりに感謝しています。共通の計測領域の使用のため感謝しております、博士プリシラ サナブリアの RCMI プログラムでの光イメージング施設の使用のための援助を与える G12MD007583。さらに、私たちは撮影・編集視覚的プロトコルの彼の顕著な役割のホセパディーヤを感謝したいと思います。

生後ラット (スプレイグ ドーリー) 1-4 日古い皮質を分離する使用されます。安楽死の方法は斬首、NIH ガイドラインで認められています。
 1。 器具用材料手術準備 <ol><li>定置滅菌器オートクレーブ (温度: 121 ° c、圧力: 15 psi、時間: 30 分) スチール ボックスまたは瞬時滅菌袋のシールを使用。材料表 の材料を参照してください</li>。
</ol> 2。...

<ol>
	<li>Goldstein, L. B., Bertels, C., Davis, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interrater+reliability+of+the+NIH+stroke+scale.">Interrater reliability of the NIH stroke scale.</a> Arch Neurol. 46 (6), 660-662 (1989).</li><li>Hinkle, J. L., Guanci, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+ischemic+stroke+review.">Acute ischemic stroke review.</a> J Neurosci Nurs. 39 (5), 285-293 (2007).</li><li>Kassner, A., Merali, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Blood-Brain+Barrier+Disruption+in+Stroke.">Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in Stroke.</a> Stroke. 46 (11), 3310-3315 (2015).</li><li>Moskowitz, M. A., Lo, E. 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J., Molnar, C., Andrew, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blocking+the+anoxic+depolarization+protects+without+functional+compromise+following+simulated+stroke+in+cortical+brain+slices.">Blocking the anoxic depolarization protects without functional compromise following simulated stroke in cortical brain slices.</a> Journal of neurophysiology. 93 (2), 963-979 (2005).</li><li>Jarvis, C. R., Anderson, T. R., Andrew, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anoxic+depolarization+mediates+acute+damage+independent+of+glutamate+in+neocortical+brain+slices.">Anoxic depolarization mediates acute damage independent of glutamate in neocortical brain slices.</a> Cerebral Cortex. 11 (3), 249-259 (2001).</li></ol>

このプロトコルでは、ラット皮質アストロ サイトの分離について説明します。このメソッドは、線維芽細胞、オリゴデンドロ サイト、ミクログリアなど他の細胞の種類と汚染を減らすために重要です。ミクログリアの数を減らすためには、いくつかの手順を取ることができる: メディア、揺れ、軌道と化学治療を変更します。選択的細胞マーカーを用いた蛍光抗体法によって、最も顕著な細...

ストロークは、「、急性神経障害血管由来の症状と脳の焦点区域の関与に対応する徴候の突然または急速な開発と」1,2として定義されます。ストロークの 2 つの種類があります: 出血性および虚血性。動脈瘤や、動脈の破裂の後弱体化を伴う動静脈の故障により血管機能不全が引き起こされるときほとんどの場合、死につながる3出血性脳卒中と呼びます。血栓または塞栓は、血流を妨げ、脳の領域に酸素とグルコースの一時剥奪の原因と呼びます虚血性脳卒中4。影響を受ける地域や恒常性、代謝の不均衡、エネルギッシュな不全、神経細胞死および炎症5患者6生涯障害を誘発することができますに虚血性の芯線の周りの細胞に栄養を与えるに失敗しました。
虚血性脳卒中は多因子性傷害を含むいくつかの種類の細胞が反応し、異なる時点でその効果を発揮します。多くの相互作用は、個々 の細胞の挙動を調べるための困難な環境を作成します。だから、どのようにこのような複雑な環境下で特定のセルタイプの寄与を調べたか?虚血の認められた体外モデルは、平地の環境に、細胞の修復に続く一定の期間酸素とグルコースの剥奪 (OGD) へ細胞を公開するための構成されます。このシステムは、脳虚血再潅流をシミュレートします。この方法では細胞や組織が削除されるは特殊な低酸素室を用いた酸素環境のブドウ糖自由な媒体に公開されます。最大 24 h で、テストしたい仮説によって数分から OGD インキュベーション時間は異なります。研究が示している OGD 回数に応じて、平地環境、ストローク (すなわち、急性または亜慢性) の特定の表現型が実現できます。平地の条件に後部修復 OGD にさらされる主の孤立したアストロ サイトは、ストローク体外7を模倣するよく研究細胞モデルです。OGD を使用してストロークのような環境下での隔離されたセルの独立した分子メカニズムを明らかにすることができます。
アストロ生物学の知識が増えると、彼らがシナプスを維持し、神経の修復、開発、および可塑性8を維持するために重要なことは明白になりました。通常の条件下でアストロ サイトは解放し、サイトカイン、ケモカイン、成長因子、gliotransmitters、新陳代謝のバランスとシナプス5,9内の恒常性を維持に対応します。虚血性脳卒中などの急性 neuroinflammation でこれらの細胞が反応になって、長期的な過剰発現のグリア線維性酸性タンパク質 (GFAP) を示し肥大の形態5,10,11,12. 虚血性梗塞が発展すると、アストロ サイトによって提供される恒常性、通常グルタミン酸取り込み、エネルギー代謝、活性と抗酸化活性13の交換に関する影響になります。
再アクティブ化されたアストロ サイトは、白血球の破壊領域14に向けて移行中周囲の梗塞組織増殖します。アストロ サイトの増殖は、増殖細胞核抗原 (PCNA)、キ67、ブロモデオキシウリジン (BrdU)15などのマーカーを使用して測定できます。この増殖応答が時間依存的に生成されます、それグリア瘢痕、外傷9後破損したサイトの実質に沿って不可逆的反応性アストロ サイトの配列を形成できます。この傷跡の初期の機能の 1 つはこの区域から免疫細胞漏出を制限します。しかし、研究では、傷跡が拡張、軸索の成長を阻害する分子をリリースおよび軸索が16患部の周りを拡張することを防ぐ物理的な障壁を作成する軸索の物理的な障害になることを示しています。それにもかかわらず、脊髄損傷後完全にグリア瘢痕の形成を防止するが17軸索の再生を損なうことができるを示す科学的な証拠があります。したがって、傷害の検討の枠組みに、測定する特定のアストロ サイトの応答コンテキストを考慮されなければなりません。
酸素無グルコース後アストロ サイトの個別の機能の研究に提示された方法論を適用できるし、調査官が答えたい質問に応じて変更することができます。たとえば、形態変化、OGD 時期を表明したマーカーのほか OGD にさらされているアストロ サイトから清さらに分析できる可溶性因子これらの細胞によって解放または評価するために調節されたメディアとして使用を識別するために、他の脳細胞に影響します。このアプローチにより、支配すると虚血性脳卒中のシナリオでその応答を調節する因子の解明につながる可能性がアストロ サイトの反応性に関する研究です。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="933">
	<tbody>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:395px;">Instruments for Surgery - Step 1</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:253px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Operating scissor 5.5&#8221;</td>
			<td>Roboz Company</td>
			<td style="width:119px;">RS-6812</td>
			<td style="width:253px;">Tools used to decapitate the rats.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:395px;">Curved forceps 7&#8221;&#160;</td>
			<td>Roboz Company</td>
			<td>RS-5271</td>
			<td style="width:253px;">Holds the skin of the rat while the skull is removed.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:395px;">Micro-dissecting scissors 4&#8221;&#160;</td>
			<td>Roboz Company</td>
			<td>RS-5882</td>
			<td style="width:253px;">Cuts both the skin and skull of the rat.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:395px;">Micro-dissecting forceps 4&#8221; angled, fine sharp&#160;</td>
			<td>Roboz Company</td>
			<td>RS-5095</td>
			<td style="width:253px;">Holds the skin of the rat while the skull is removed.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Micro-dissecting forceps 4&#8221; slightly curved 0.8</td>
			<td>Roboz Company</td>
			<td>RS-5135</td>
			<td>Tool used to separate cortices.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Micro-dissecting tweezers</td>
			<td>Roboz Company</td>
			<td>RS-4972</td>
			<td>Peels brain meninges.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:395px;">Dissection microscope</td>
			<td style="width:167px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;">SZX16</td>
			<td style="width:253px;">Important for removing the meninge from the cortices.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">DMEM Preparation - step 2</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:253px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium (DMEM)</td>
			<td>GibCo. Company</td>
			<td>11995-065</td>
			<td style="width:253px;">Supports the growth of cells.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich Company</td>
			<td>S7277</td>
			<td style="width:253px;">Supplement for the cell culture media.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>GibCo. Company</td>
			<td>10437-010</td>
			<td style="width:253px;">Serum-supplement for the cell culture.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Penicillin-Streptomycin&#160;</td>
			<td>GibCo. Company</td>
			<td>15140-148</td>
			<td style="width:253px;">Inhibits the growth of bacterias in the cell culture.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Filter System 1L with 0.22um pore</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;">Astrocyte culture - step 3</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:253px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:395px;">Serological pipets 5mL</td>
			<td style="width:167px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">89130-896</td>
			<td style="width:253px;">To pipette DMEM to containers with cells.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:395px;">Serological pipets 10mL</td>
			<td style="width:167px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">89130-898</td>
			<td style="width:253px;">To pipette DMEM to containers with cells.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:395px;">Serological pipets 25mL</td>
			<td style="width:167px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">89130-900</td>
			<td style="width:253px;">To pipette DMEM to containers with cells.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:395px;">Centrifuge conical tube 15mL</td>
			<td style="width:167px;">Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td style="width:119px;">sc-200250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Safe-lock tube 1.5mL</td>
			<td style="width:167px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">022363204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:395px;">Barrier Tips 200 uL</td>
			<td style="width:167px;">Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td style="width:119px;">sc-201725</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:395px;">Barrier Tips 1 mL</td>
			<td style="width:167px;">Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-201727</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Biohazard Orange Bag 14 x 19&#34;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>14220-048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">60mm petri dishes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>351007</td>
			<td style="width:253px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Sterile gauze pads</td>
			<td>Honeywell Safety</td>
			<td>89133-086</td>
			<td style="width:253px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Stomacher 80 Biomaster</td>
			<td style="width:167px;">Sewar Lab System</td>
			<td style="width:119px;">030010019</td>
			<td style="width:253px;">Triturate the brain tissue.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:395px;">Stomacher 80 Blender Sterile Bags</td>
			<td style="width:167px;">Sewar Lab System</td>
			<td style="width:119px;">BA6040</td>
			<td style="width:253px;">Sterile bag for the stomacher cell homogenizer.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Beaker 400mL</td>
			<td style="width:167px;">Pyrex</td>
			<td style="width:119px;">1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:395px;">Sterile cell dissociation sieve, mesh #60&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich Company</td>
			<td>S1020</td>
			<td style="width:253px;">To obtain a uniform single cell suspension.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:395px;">Sterile cell dissociation sieve, mesh #100</td>
			<td>Sigma-Aldrich Company</td>
			<td>S3895</td>
			<td style="width:253px;">To obtain a uniform single cell suspension.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:395px;">Invert phase microscope</td>
			<td style="width:167px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;">Eclypse Ti-S</td>
			<td style="width:253px;">Verify cells for contamination or abnormal cell growth.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">75cm2 sterile flasks</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353136</td>
			<td style="width:253px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Multi-well plate</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353046</td>
			<td style="width:253px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Micro cover glasses (coverslips), 18mm, round</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48380-046</td>
			<td style="width:253px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Bright-Line hemacytometer</td>
			<td style="width:167px;">Sigma-Aldrich Company</td>
			<td style="width:119px;">Z359629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Pasteur pipettes</td>
			<td style="width:167px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">13-678-20D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Ethyl alcohol&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Sigma-Aldrich Company</td>
			<td style="width:119px;">E7023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">L-leucine methyl ester hydrochloride 98% (LME)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Company</td>
			<td>L1002</td>
			<td style="width:253px;">Promotes the elimination of microglia cells in the primary cortical astrocyte cultutre.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cytosine &#946;-D-arabinofuranoside (Ara-C)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Company</td>
			<td>C1768</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Poly-D-Lysine Hydrobromide, mol wt 70,000-150,000</td>
			<td>Sigma-Aldrich Company</td>
			<td>P0899</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin/EDTA</td>
			<td>GibCo. Company</td>
			<td>15400-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypan Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich Company</td>
			<td>T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate buffer saline (PBS) tablets</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>524650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Sterile Water</td>
			<td style="width:167px;">Sigma-Aldrich Company</td>
			<td style="width:119px;">W3500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">&#160;OGD Medium Preparation - step 5</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:253px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Centrifuge conical tube 50 mL</td>
			<td style="width:167px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">89039-658</td>
			<td style="width:253px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium-free glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich Company</td>
			<td>D5030</td>
			<td style="width:253px;">Supports the growth of cells.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich Company</td>
			<td>S7277</td>
			<td style="width:253px;">Supplement for the cell culture media.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Penicillin-Streptomycin&#160;</td>
			<td>GibCo. Company</td>
			<td>15140-148</td>
			<td style="width:253px;">Inhibits the growth of bacterias in the cell culture.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">200mM&#160; L-glutamine&#160;</td>
			<td>GibCo. Company</td>
			<td>25030-081</td>
			<td style="width:253px;">Amino acid that supplements the growth of cells.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phospahet buffer saline (PBS) tablets</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>524650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Filter System 50mL with 0.22um pore</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Centrifuge conical tube 50 mL</td>
			<td style="width:167px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">89039-658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Single Flow Meter&#160;</td>
			<td>Billups-Rothenberg</td>
			<td>SMF3001</td>
			<td style="width:253px;">Measure gas flow in oxygen purge.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Hypoxia Incubator Chamber&#160;</td>
			<td>StemCell</td>
			<td>27310</td>
			<td style="width:253px;">Generates a hypoxic environment for the cell culture.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Traceable Dissolved Oxygen Meter</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21800-022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">95% N2/ 5% CO2 Gas Mixture</td>
			<td>Linde</td>
			<td></td>
			<td style="width:253px;">Purges the environment of oxygen.</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:395px;">primary astrocyte immunofluorescence - step 6</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:253px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate buffer saline (PBS) tablets</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>524650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Formaline Solution Neutral Buffer 10%</td>
			<td style="width:167px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">HT501128</td>
			<td style="width:253px;">Solution used to fix cells.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Methanol&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">A4544</td>
			<td style="width:253px;">Solution used to fix cells.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Non-ionic surfactant (Triton X-100)</td>
			<td style="width:167px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">T8787</td>
			<td style="width:253px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>GibCo. Company</td>
			<td>10437-010</td>
			<td style="width:253px;">Serum-supplement for the cell culture.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Anti-NeuN</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>24307</td>
			<td style="width:253px;">Detects mature neurons, serves to validate the astrocytic culture.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-PCNA</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>2586</td>
			<td style="width:253px;">Detects proliferating cells.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Propidium Iodide (PI)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Company</td>
			<td>P4170</td>
			<td style="width:253px;">Apoptosis staining.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-Olig1</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>AB68105</td>
			<td style="width:253px;">Detects mature oligodendrocytes.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-Iba1+</td>
			<td>Wako</td>
			<td>016-20001</td>
			<td style="width:253px;">Detects microglial cells.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:395px;">Anti-GFAP Conjugated with Cy3&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich Company</td>
			<td>C9205</td>
			<td style="width:253px;">Detects reactive astrocytes in the treated cells.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:395px;">Alexa Fluor 488</td>
			<td style="width:167px;">Molecular Probe Life Technology</td>
			<td style="width:119px;">A1101</td>
			<td style="width:253px;">Anti-Mouse Secondary Antibody</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:395px;">Alexa Fluor 555</td>
			<td style="width:167px;">Molecular Probe Life Technology</td>
			<td style="width:119px;">A21428</td>
			<td style="width:253px;">Anti-Rabbit Secondary Antibody</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">4&#8217;,6&#8217;-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td style="width:167px;">Sigma-Aldrich Company</td>
			<td style="width:119px;">D9542</td>
			<td style="width:253px;">Nuclear staining</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:395px;">Confocal microscope</td>
			<td style="width:167px;">Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring astrocyte reactivity and proliferation in vitro under ischemic-like conditions

虚血性脳卒中は血栓や塞栓脳の部分への血流を妨害によって引き起こされる複雑な脳損傷です。これは、酸素とブドウ糖のエネルギー不全や神経細胞死を引き起こすの剥奪に します。虚血性脳卒中の侮辱後、アストロ サイトは反応になるし、それが発展するにつれ、損傷部位の周囲増殖します。このシナリオの下では、虚血にさらされている脳の領域にアストロ サイトの特定の貢献を研究することは困難です。したがって、プライマリ アストロ サイトの反応と酸素無グルコース (OGD) と呼ばれる虚血のような環境の生体外モデルの下で増殖を検討する方法を紹介します。アストロ サイトは 1-4 日から分離された-古い新生児ラットと非特異的アストロ サイト細胞の数は、アストロ サイト選択的マーカー グリア線維性酸性蛋白質 (GFAP) と染色性が核を使用して評価されました。公開されている酸素の割合のと同様、OGD 条件に服従するアストロ サイトの期間をカスタマイズできます。この柔軟性により、細胞の試験管内のさまざまなグループの虚血のような条件の期間を特徴付けるための科学者です。この資料では、反応性アストロ サイト、肥大形態と増殖細胞核抗原 (PCNA) を用いた蛍光抗体法によって測定される増殖を誘発する OGD の時間枠について説明します。増殖、ほかアストロ サイトはエネルギーと酸化ストレスを受けるし、細胞培地に可溶性因子を放出し OGD に対応します。このメディアを収集し、分子細胞間相互作用のない初代神経細胞培養アストロ サイトによるリリースの影響を分析するために使用することができます。要約すると、傷害に孤立したアストロ サイトの役割を理解するこの一次電池文化モデルを効率的に使用できます。

培養アストロ サイトの主な懸念の 1 つは、ニューロン、オリゴデンドロ サイト、線維芽細胞、ミクログリアなど他の細胞の存在です。図 1、ラット皮質から隔離されたセルごとに 3 日間メディアの変更があったし、か未処理または処理追加 LME 1, 24 時間後の細胞 GFAP の immunostained, DAPI で counterstained。未処理の細胞は、LME 処理細胞を示した 8% 陽?...

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Monitoring Astrocyte Reactivity and Proliferation in Vitro Under Ischemic-Like Conditions

虚血性脳卒中、酸素無グルコース (OGD) に影響を受ける脳の領域にアストロ サイトの特定の貢献がさらされて複雑なイベントは調査しにくい。孤立したアストロ サイトを取得し、反応性、OGD 条件下での増殖を研究する手法を紹介します。

反応性アストロ サイトと増殖の in Vitro虚血のような条件下での監視

Ischemic stroke is a complex brain injury caused by a thrombus or embolus obstructing blood flow to parts of the brain. This leads to deprivation of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Monitoring Astrocyte Reactivity and Proliferation in Vitro Under Ischemic-Like Conditions

Screening Assay for Oxidative Stress in a Feline Astrocyte Cell Line, G355-5

猫のアストロサイト細胞株における酸化ストレスのためのスクリーニングアッセイ、G355 - 5

An often-suggested mechanism of virus induced neuronal damage is oxidative stress. Astrocytes have an important role in controlling oxidative stress of ...

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

で社会空間に影響を与える条件<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a ...

The Indirect Neuron-astrocyte Coculture Assay: An In Vitro Set-up for the Detailed Investigation of Neuron-glia Interactions

The Indirect Neuron-astrocyte Coculture Assay: An In Vitro Set-up for the Detailed Investigation of Neuron-glia Interactions

間接ニューロン、星状細胞共培養アッセイ：<em&gt;インビトロ</em&gt;ニューロングリアの相互作用の詳細な調査のためのセットアップ

Proper neuronal development and function is the prerequisite of the developing and the adult brain. However, the mechanisms underlying the highly ...

A Protocol for Measuring Cue Reactivity in a Rat Model of Cocaine Use Disorder

コカイン使用障害のモデルラットにおけるキュー反応を測定するためのプロトコル

Cocaine use disorder (CUD) follows a trajectory of repetitive self-administration during which previously neutral stimuli gain incentive value. Cue ...

Determining Cell-surface Expression and Endocytic Rate of Proteins in Primary Astrocyte Cultures Using Biotinylation

ビオチン化を用いた初代星状細胞培養におけるタンパク質の細胞表面発現およびエンドサイトーシス速度の測定

Cell-surface proteins mediate a wide array of functions. In many cases, their activity is regulated by endocytic processes that modulate their levels at ...

A Novel In Vitro Live-imaging Assay of Astrocyte-mediated Phagocytosis Using pH Indicator-conjugated Synaptosomes

A Novel In Vitro Live-imaging Assay of Astrocyte-mediated Phagocytosis Using pH Indicator-conjugated Synaptosomes

貪食能アッセイのアストロ サイトを介した新規体外ライブ イメージングを使用して pH インジケーター共役シナプトソーム

Astrocytes are the major cell type in the brain and directly contact synapses and blood vessels. Although microglial cells have been considered the major ...

Diffuse Reflectance Spectroscopy: Getting the Capillary Refill Test Under One's Thumb

拡散反射率分光: 取得 1 つの親指の下の毛細血管リフィル テスト

The capillary refill test was introduced in 1947 to help estimate circulatory status in critically ill patients. Guidelines commonly state that refill ...

Levator Auris Longus Preparation for Examination of Mammalian Neuromuscular Transmission Under Voltage Clamp Conditions

Levator Auris Longus Preparation for Examination of Mammalian Neuromuscular Transmission Under Voltage Clamp Conditions

オーリスの挙筋哺乳類の神経筋伝達電圧クランプ条件下での試験のための準備

This protocol describes a technique to record synaptic transmission from the neuromuscular junction under current-clamp and voltage-clamp conditions. An ...

Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase

気相で、嗅覚による嗅覚受容体活性化の In Vitro モニタリング リアルタイム

Olfactory perception begins with the interaction of odorants with odorant receptors (OR) expressed by olfactory sensory neurons (OSN). Odor recognition ...

Visualizing Astrocyte Morphology Using Lucifer Yellow Iontophoresis

ルシファー黄イオン球形成を用いてアストロサイト形態を可視化

Astrocytes are essential components of neural circuits. They tile the entire central nervous system (CNS) and are involved in a variety of functions, ...

反応性アストロ サイトと増殖の in Vitro虚血のような条件下での監視

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