Name: spatiotemporal analysis of cytokinetic events in fission yeast
Uploaded: 2017-02-20T14:00:00
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This work was supported by startup funds from The University of Tennessee and TN-SCORE, a multi-disciplinary research program sponsored by NSF-EPSCoR (EPS-1004083).

1. Préparation de l&#39;échantillon <ol><li> Cultiver des cellules de levure de fission exprimant le pôle de broche corps marqueur SAD1-mCherry 23 et type II myosine chaîne légère régulatrice RLC1-Tomato 24 YE milieu liquide à 32 ° C pendant 8 générations. REMARQUE: Pour des mutants sensibles à la température, faire croître des cellules à 25 ° C. Cultiver les cellules à la phase mi-log à une DO 600 de 0,5 à YE. Pour en savoir plus sur...

<ol>
	<li>Pollard, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanics+of+cytokinesis+in+eukaryotes.">Mechanics of cytokinesis in eukaryotes.</a> Curr Opin Cell Biol. 22 (1), 50-56 (2010).</li><li>Guertin, D. A., Trautmann, S., McCollum, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokinesis+in+eukaryotes.">Cytokinesis in eukaryotes.</a> Microbiol Mol Biol Rev. 66 (2), 155-178 (2002).</li><li>Xu, X., Vogel, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+secreted+protein+promotes+cleavage+furrow+maturation+during+cytokinesis.">A secreted protein promotes cleavage furrow maturation during cytokinesis.</a> Curr Biol. 21 (2), 114-119 (2011).</li><li>Sagona, A. P., Stenmark, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokinesis+and+cancer.">Cytokinesis and cancer.</a> FEBS Lett. 584 (12), 2652-2661 (2010).</li><li>Fujiwara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokinesis+failure+generating+tetraploids+promotes+tumorigenesis+in+p53-null+cells.">Cytokinesis failure generating tetraploids promotes tumorigenesis in p53-null cells.</a> Nature. 437 (7061), 1043-1047 (2005).</li><li>Li, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokinesis+in+development+and+disease:+variations+on+a+common+theme.">Cytokinesis in development and disease: variations on a common theme.</a> Cell Mol Life Sci. 64 (23), 3044-3058 (2007).</li><li>Daniels, M. J., Wang, Y., Lee, M., Venkitaraman, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+cytokinesis+in+cells+deficient+in+the+breast+cancer+susceptibility+protein+BRCA2.">Abnormal cytokinesis in cells deficient in the breast cancer susceptibility protein BRCA2.</a> Science. 306 (5697), 876-879 (2004).</li><li>Storchova, Z., Pellman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+polyploidy+to+aneuploidy,+genome+instability+and+cancer.">From polyploidy to aneuploidy, genome instability and cancer.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 5 (1), 45-54 (2004).</li><li>Lee, I. J., Coffman, V. C., Wu, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contractile-ring+assembly+in+fission+yeast+cytokinesis:+Recent+advances+and+new+perspectives.">Contractile-ring assembly in fission yeast cytokinesis: Recent advances and new perspectives.</a> Cytoskeleton (Hoboken). 69 (10), 751-763 (2012).</li><li>Balasubramanian, M. K., Bi, E., Glotzer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+cytokinesis+in+budding+yeast,+fission+yeast+and+animal+cells.">Comparative analysis of cytokinesis in budding yeast, fission yeast and animal cells.</a> Curr Biol. 14 (18), R806-R818 (2004).</li><li>Proctor, S. A., Minc, N., Boudaoud, A., Chang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contributions+of+turgor+pressure,+the+contractile+ring,+and+septum+assembly+to+forces+in+cytokinesis+in+fission+yeast.">Contributions of turgor pressure, the contractile ring, and septum assembly to forces in cytokinesis in fission yeast.</a> Curr Biol. 22 (17), 1601-1608 (2012).</li><li>Munoz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+cell+wall+beta(1,3)glucan+is+required+to+couple+septation+to+actomyosin+ring+contraction.">Extracellular cell wall beta(1,3)glucan is required to couple septation to actomyosin ring contraction.</a> J Cell Biol. 203 (2), 265-282 (2013).</li><li>Wang, N., Lee, I. J., Rask, G., Wu, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+the+TRAPP-II+Complex+and+the+Exocyst+in+Membrane+Deposition+during+Fission+Yeast+Cytokinesis.">Roles of the TRAPP-II Complex and the Exocyst in Membrane Deposition during Fission Yeast Cytokinesis.</a> PLoS Biol. 14 (4), e1002437 (2016).</li><li>Liu, J., Wang, H., McCollum, D., Balasubramanian, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drc1p/Cps1p,+a+1,3-beta-glucan+synthase+subunit,+is+essential+for+division+septum+assembly+in+Schizosaccharomyces+pombe.">Drc1p/Cps1p, a 1,3-beta-glucan synthase subunit, is essential for division septum assembly in Schizosaccharomyces pombe.</a> Genetics. 153 (3), 1193-1203 (1999).</li><li>Cortes, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+(1,3)beta-D-glucan+synthase+subunit+Bgs1p+is+responsible+for+the+fission+yeast+primary+septum+formation.">The (1,3)beta-D-glucan synthase subunit Bgs1p is responsible for the fission yeast primary septum formation.</a> Mol Microbiol. 65 (1), 201-217 (2007).</li><li>Cortes, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cooperation+between+Paxillin-like+Protein+Pxl1+and+Glucan+Synthase+Bgs1+Is+Essential+for+Actomyosin+Ring+Stability+and+Septum+Formation+in+Fission+Yeast.">Cooperation between Paxillin-like Protein Pxl1 and Glucan Synthase Bgs1 Is Essential for Actomyosin Ring Stability and Septum Formation in Fission Yeast.</a> PLoS Genet. 11 (7), e1005358 (2015).</li><li>Cortes, J. C., Ishiguro, J., Duran, A., Ribas, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+the+(1,3)beta-D-glucan+synthase+catalytic+subunit+homologue+Bgs1p/Cps1p+from+fission+yeast+suggests+that+it+is+involved+in+septation,+polarized+growth,+mating,+spore+wall+formation+and+spore+germination.">Localization of the (1,3)beta-D-glucan synthase catalytic subunit homologue Bgs1p/Cps1p from fission yeast suggests that it is involved in septation, polarized growth, mating, spore wall formation and spore germination.</a> J Cell Sci. 115 (Pt 21), 4081-4096 (2002).</li><li>Liu, J., Tang, X., Wang, H., Oliferenko, S., Balasubramanian, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+localization+of+the+integral+membrane+protein+Cps1p+to+the+cell+division+site+is+dependent+on+the+actomyosin+ring+and+the+septation-inducing+network+in+Schizosaccharomyces+pombe.">The localization of the integral membrane protein Cps1p to the cell division site is dependent on the actomyosin ring and the septation-inducing network in Schizosaccharomyces pombe.</a> Mol Biol Cell. 13 (3), 989-1000 (2002).</li><li>Royou, A., Field, C., Sisson, J. C., Sullivan, W., Karess, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reassessing+the+role+and+dynamics+of+nonmuscle+myosin+II+during+furrow+formation+in+early+Drosophila+embryos.">Reassessing the role and dynamics of nonmuscle myosin II during furrow formation in early Drosophila embryos.</a> Mol Biol Cell. 15 (2), 838-850 (2004).</li><li>Figard, L., Xu, H., Garcia, H. G., Golding, I., Sokac, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plasma+membrane+flattens+out+to+fuel+cell-surface+growth+during+Drosophila+cellularization.">The plasma membrane flattens out to fuel cell-surface growth during Drosophila cellularization.</a> Dev Cell. 27 (6), 648-655 (2013).</li><li>Wei, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unique+Spatiotemporal+Activation+Pattern+of+Cdc42+by+Gef1+and+Scd1+Promotes+Different+Events+during+Cytokinesis.">Unique Spatiotemporal Activation Pattern of Cdc42 by Gef1 and Scd1 Promotes Different Events during Cytokinesis.</a> Mol Biol Cell. , (2016).</li><li>Nabeshima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+centromeres+during+metaphase-anaphase+transition+in+fission+yeast:+Dis1+is+implicated+in+force+balance+in+metaphase+bipolar+spindle.">Dynamics of centromeres during metaphase-anaphase transition in fission yeast: Dis1 is implicated in force balance in metaphase bipolar spindle.</a> Mol Biol Cell. 9 (11), 3211-3225 (1998).</li><li>Johnson, A. E., Gould, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dma1+ubiquitinates+the+SIN+scaffold,+Sid4,+to+impede+the+mitotic+localization+of+Plo1+kinase.">Dma1 ubiquitinates the SIN scaffold, Sid4, to impede the mitotic localization of Plo1 kinase.</a> EMBO J. 30 (2), 341-354 (2011).</li><li>Yonetani, A., Chang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+cytokinesis+by+the+formin+cdc12p.">Regulation of cytokinesis by the formin cdc12p.</a> Curr Biol. 20 (6), 561-566 (2010).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fission Yeast: A laboratory Manual. , (2016).</li><li>Hachet, O., Simanis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mid1p/anillin+and+the+septation+initiation+network+orchestrate+contractile+ring+assembly+for+cytokinesis.">Mid1p/anillin and the septation initiation network orchestrate contractile ring assembly for cytokinesis.</a> Genes Dev. 22 (22), 3205-3216 (2008).</li><li>Zhou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+contractile+ring+coordinates+curvature-dependent+septum+assembly+during+fission+yeast+cytokinesis.">The contractile ring coordinates curvature-dependent septum assembly during fission yeast cytokinesis.</a> Mol Biol Cell. 26 (1), 78-90 (2015).</li><li>Chen, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lattice+light-sheet+microscopy:+imaging+molecules+to+embryos+at+high+spatiotemporal+resolution.">Lattice light-sheet microscopy: imaging molecules to embryos at high spatiotemporal resolution.</a> Science. 346 (6208), 1257998 (2014).</li><li>Huang, Y. S., Karashima, T., Yamamoto, M., Hamaguchi, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular-level+investigation+of+the+structure,+transformation,+and+bioactivity+of+single+living+fission+yeast+cells+by+time-+and+space-resolved+Raman+spectroscopy.">Molecular-level investigation of the structure, transformation, and bioactivity of single living fission yeast cells by time- and space-resolved Raman spectroscopy.</a> Biochemistry. 44 (30), 10009-10019 (2005).</li><li>Huang, C. K., Ando, M., Hamaguchi, H. O., Shigeto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disentangling+dynamic+changes+of+multiple+cellular+components+during+the+yeast+cell+cycle+by+in+vivo+multivariate+Raman+imaging.">Disentangling dynamic changes of multiple cellular components during the yeast cell cycle by in vivo multivariate Raman imaging.</a> Anal Chem. 84 (13), 5661-5668 (2012).</li><li>Le Goff, X., Woollard, A., Simanis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+cps1+gene+provides+evidence+for+a+septation+checkpoint+in+Schizosaccharomyces+pombe.">Analysis of the cps1 gene provides evidence for a septation checkpoint in Schizosaccharomyces pombe.</a> Mol Gen Genet. 262 (1), 163-172 (1999).</li></ol>

Ici, nous avons décrit un protocole pour étudier les événements cytokinétique dans la levure de fission d&#39;une manière temporelle. Le protocole décrit ici fournit une résolution temporelle des événements différents cytokinétique en se référant à l&#39;autre; moment du recrutement de protéines ou de la perte par rapport à la phase cytokinétique; la structure de l&#39;anneau à travers les différentes phases de la cytokinèse; et la progression de la cytokinèse en se référant à la mitose. Avec ce...

Cytocinèse, l&#39;étape finale dans la division cellulaire, est un processus complexe essentiel de la différenciation appropriée, le développement et la survie d&#39;un organisme. Cytocinèse implique plusieurs événements qui sont organisés pour assurer la séparation cellulaire avec succès , tout en maintenant l&#39; intégrité du génome 1. Cytocinèse implique des événements où un anneau actomyosine une fois assemblé subit une constriction, ce qui coïncide avec l&#39; expansion de la membrane et froncement et extracellulaire matrice cellulaire remodelage, finalement suivi par la cellule abscission 1, 2, 3. Organisation inadéquate des événements cytokinétique peut conduire à la séparation cellulaire et ploïdie défauts, et peut provoquer des maladies comme le cancer 4, 5, 6, 7, 8. Les principes fondamentaux qui permettent organisation des événements cytokinétique ne sont pas bien compris, conduisant ainsi à des barrages routiers dans notre compréhension de l&#39;étiologie de ces maladies. La fission Schizosaccharomyces pombe de levure (S. pombe) est un excellent modèle pour étudier la cytokinèse en raison de la nature préservée des protéines impliquées 1. Dans la levure de fission, après actomyosine ensemble d&#39;anneau, la bague entre une maturation / phase de séjour où il ne restreint pas 9. Maturation se termine par l&#39;initiation de l&#39;anneau de constriction actomyosine, concurremment avec froncement de membrane et d&#39;un septum ingression. Travail séminal au fil des ans nous ont donné une assez bonne compréhension de l&#39; actomyosine ensemble de bague dans la levure de fission 1, 9, 10. Dans certains eucaryotes, y compris la levure à fission, l&#39;assemblage réussie de l&#39;anneau de actomyosine est insuffisante pour froncement de la membrane. En fission levure, anneau de constriction seul ne fournit pas une force suffisante pour surmonter la pression de turgescence interne pour la formation de sillon 11. Un modèle récent indique que cette force est la place fournie par septum ingression 11. Dans un autre modèle, le rôle de l&#39; extension de la membrane plasmique a été suggérée pour contribuer à la formation de sillon 12, 13. Constriction Ring et froncement de la membrane ne se produisent pas dans la température Bgs1 / CPS1 cps1-191 mutant sensible, la principale enzyme pour la formation du septum primaire 14, 15. Les cellules dépourvues Bgs1 montrent septum primaire défectueuse et prolongée constriction de l&#39; anneau 15, 16. Bgs1 est recruté sur le site de la division cellulaire pour septum ingression pendant la maturation après actomyosine assemblage en anneau 17, 18. Similarly, pendant cellularisation dans des embryons de drosophile, l&#39; anneau de constriction est biphasique avec un taux de rétrécissement initial significativement lent 19, ressemblant à la phase de maturation observée dans la levure de fission. Biphasique constriction annulaire peut ralentir froncement de la membrane pour permettre l&#39;expansion de la membrane suffisante 20 et la modification de la matrice extracellulaire. Cela donne à penser que, après actomyosine assemblage, anneau de constriction se produit efficacement que lorsque la cellule a satisfait aux exigences en matière de formation sillon. Il ne comprend pas bien quelles sont les conditions nécessaires pour l&#39;anneau de constriction actomyosine après assemblage de l&#39;anneau, ni les événements moléculaires qui régulent ce processus. Nous avons récemment montré que , suite à l&#39; anneau de actomyosine ensemble la petite GTPase Cdc42 subit un motif d&#39;activation spatiotemporelle uniques 21. Ce modèle est établi par le motif de localisation unique des guanidique facteurs d&#39;échange nucléotidiques Cdc42 (GEFs) Cdc42 qui activent. Le GEF1 FEM localise à l&#39;anneau de actomyosine assemblé et favorise l&#39;apparition de constriction annulaire et septum ingression, tandis que scd1 localise à la membrane fronçant et favorise la formation du septum normal. Nous constatons que le modèle d&#39;activation Cdc42 établi par ses GEFs conduisent à la réglementation des événements cytokinétique distincts. Pour comprendre le mécanisme moléculaire d&#39;événements qui conduisent finalement à la séparation cellulaire après assemblage d&#39;anneau de actomyosine, il faut suivre les événements cytokinétique distincts dans le temps et l&#39;espace. Dans la levure de fission, cytokinesis implique d&#39;abord l&#39;ensemble des précurseurs nœuds autour du noyau, qui a finalement recrutent la myosine de type II, l&#39;Formin CDC12, et d&#39;autres protéines nécessaires à l&#39;assemblage de bague de actomyosine. Pour le temps des événements cytokinétique distincts et fournir un cadre de référence, la séparation des marqueurs de corps polaires des fuseaux (formation de broche) est considérée comme temps 0 22. L&#39;assemblage de the actomyosine anneau peut être suivi par le suivi au fil du temps l&#39;intensité d&#39;une actomyosine protéine fluorescente marqué de cycle tel que le type II myosine chaîne légère régulatrice RLC1. Nous décrivons ici une approche microscopique pour analyser les différentes étapes de la cytokinèse au fil du temps.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Yeast extract media</td>
			<td>Sunrise Science Products</td>
			<td>YES 225</td>
			<td>0.5% w/v yeast extract, 3% w/v glucose, 225mg/L adenine, histidine, leucine, uracil, and lysine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>SeaKem LE agarose, Lonza</td>
			<td>50001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4544</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bottomed culture dish</td>
			<td>MatTek Corporation</td>
			<td>P35G-1.5-14-C</td>
			<td>Coverslip No. 1.5 was used. This will vary as per the microscope specifications used.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VT-Hawk 2D array laser scanning confocal microscopy system</td>
			<td>Visitech International, UK</td>
			<td></td>
			<td>with an Olympus IX-83 inverted microscope with a 100X / numerical aperture 1.49 UAPO lens (Olympus) and EM-CCD digital camera (Hamamatsu).&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spatiotemporal analysis of cytokinetic events in fission yeast

Cytocinèse, la dernière étape de la division cellulaire est essentielle pour le maintien de l&#39;intégrité du génome. cytokinèse est importante pour la différenciation cellulaire et le développement. Cytocinèse implique une série d&#39;événements qui sont bien coordonnés dans le temps et l&#39;espace. Cytocinèse implique la formation d&#39;un anneau de actomyosine sur le site de la division, suivie par l&#39;anneau de constriction, la formation de sillon de membrane et extra matrice cellulaire remodelage. La levure de fission, Schizosaccharomyces pombe (S. pombe) est un système de modèle bien étudié qui a révélé avec une clarté substantielle les événements initiaux dans cytokinèse. Cependant, nous ne comprenons pas clairement comment les différents événements cytokinétique sont coordonnés spatiotemporelle. Pour le déterminer, il faut analyser les différents événements cytokinétique en grands détails dans le temps et dans l&#39;espace. Nous décrivons ici une approche de microscopie pour examiner différents ev cytokinétiqueents dans les cellules vivantes. Avec cette approche, il est possible en temps différents événements cytokinétique et de déterminer le moment du recrutement de protéines différentes au cours de la cytocinèse. En outre, on décrit des protocoles pour comparer la localisation des protéines, et la distribution à l&#39;emplacement de la division cellulaire. Ceci est un protocole de base pour étudier la cytokinèse dans une levure à fission, et peut également être utilisé pour d&#39;autres levures et des systèmes fongiques.

Des cellules de levure de Fission exprimant le marqueur de cycle, RLC1-GFP (vert, Figure 2) et de la broche marqueur de corps polaire SAD1-mCherry (rouge, Figure 2) ont été imagées au cours cytokinèse. Début de la broche marqueur de corps polaire (flèche blanche, les figures 2A, B) est considéré comme temps 0. signal de RLC1-GFP apparaît au moment -4 min en référence à la broche de séparation de corps polaire (flèche rouge,...

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Spatiotemporal Analysis of Cytokinetic Events in Fission Yeast

La levure de fission, Schizosaccharomyces pombe est un excellent modèle pour étudier la cytocinèse, la dernière étape de la division cellulaire. Nous décrivons ici une approche de microscopie pour analyser différents événements cytokinétique dans des cellules vivantes de levure fission.

Analyse spatiotemporelle des cytokinétique événements dans la levure de Fission

Cytokinesis, the final step in cell division is critical for maintaining genome integrity. Proper cytokinesis is important for cell differentiation and ...

Research

JoVE Journal

Biology

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Analyse du développement d&#39;un phénotype morphologique en fonction de la concentration de protéines dans la levure bourgeonnante

Gene deletion and protein overexpression are common methods for studying functions of proteins. In this article, we describe a protocol for analysis of ...

Recherche

Biologie

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

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Vivre imagerie cellulaire de l&#39;autophagie premiers événements: Omegasomes et au-delà

Autophagy is a  cellular response triggered by the lack of nutrients, especially the absence of  amino acids. Autophagy is defined by the formation of ...

Spatiotemporal Mapping of Motility in Ex Vivo Preparations of the Intestines

Spatiotemporal Mapping of Motility in Ex Vivo Preparations of the Intestines

Cartographie spatio-temporelle de la motilité<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Préparation des intestins

Multiple approaches have been used to record and evaluate gastrointestinal motility including: recording changes in muscle tension, intraluminal pressure, ...

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Microscopie de levure Fission Lifecycle sexuelle

The fission yeast Schizosaccharomyces pombe has been an invaluable model system in studying the regulation of the mitotic cell cycle progression, the ...

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Quantifying Spatiotemporal Parameters of Cellular Exocytosis in Micropatterned Cells

Quantification des paramètres spatiotemporal de l’exocytose cellulaire dans les cellules micropatternées

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