Name: spatiotemporal analysis of cytokinetic events in fission yeast
Uploaded: 2017-02-20T14:00:00
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This work was supported by startup funds from The University of Tennessee and TN-SCORE, a multi-disciplinary research program sponsored by NSF-EPSCoR (EPS-1004083).

1. Preparazione del campione <ol><li> Crescere cellule di lievito di fissione che esprimono il marcatore palo fuso corpo sad1-mCherry 23 e di tipo II miosina catena leggera normativo Rlc1-pomodoro 24 in YE mezzi liquidi a 32 ° C per 8 generazioni. NOTA: per i mutanti sensibili alla temperatura, crescere le cellule a 25 ° C. Crescere le cellule a fase di mid-log a un OD 600 di 0,5 YE. Per maggiori informazioni sulla fissione condizioni di crescita del ...

<ol>
	<li>Pollard, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanics+of+cytokinesis+in+eukaryotes.">Mechanics of cytokinesis in eukaryotes.</a> Curr Opin Cell Biol. 22 (1), 50-56 (2010).</li><li>Guertin, D. A., Trautmann, S., McCollum, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokinesis+in+eukaryotes.">Cytokinesis in eukaryotes.</a> Microbiol Mol Biol Rev. 66 (2), 155-178 (2002).</li><li>Xu, X., Vogel, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+secreted+protein+promotes+cleavage+furrow+maturation+during+cytokinesis.">A secreted protein promotes cleavage furrow maturation during cytokinesis.</a> Curr Biol. 21 (2), 114-119 (2011).</li><li>Sagona, A. P., Stenmark, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokinesis+and+cancer.">Cytokinesis and cancer.</a> FEBS Lett. 584 (12), 2652-2661 (2010).</li><li>Fujiwara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokinesis+failure+generating+tetraploids+promotes+tumorigenesis+in+p53-null+cells.">Cytokinesis failure generating tetraploids promotes tumorigenesis in p53-null cells.</a> Nature. 437 (7061), 1043-1047 (2005).</li><li>Li, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokinesis+in+development+and+disease:+variations+on+a+common+theme.">Cytokinesis in development and disease: variations on a common theme.</a> Cell Mol Life Sci. 64 (23), 3044-3058 (2007).</li><li>Daniels, M. J., Wang, Y., Lee, M., Venkitaraman, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+cytokinesis+in+cells+deficient+in+the+breast+cancer+susceptibility+protein+BRCA2.">Abnormal cytokinesis in cells deficient in the breast cancer susceptibility protein BRCA2.</a> Science. 306 (5697), 876-879 (2004).</li><li>Storchova, Z., Pellman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+polyploidy+to+aneuploidy,+genome+instability+and+cancer.">From polyploidy to aneuploidy, genome instability and cancer.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 5 (1), 45-54 (2004).</li><li>Lee, I. J., Coffman, V. C., Wu, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contractile-ring+assembly+in+fission+yeast+cytokinesis:+Recent+advances+and+new+perspectives.">Contractile-ring assembly in fission yeast cytokinesis: Recent advances and new perspectives.</a> Cytoskeleton (Hoboken). 69 (10), 751-763 (2012).</li><li>Balasubramanian, M. K., Bi, E., Glotzer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+cytokinesis+in+budding+yeast,+fission+yeast+and+animal+cells.">Comparative analysis of cytokinesis in budding yeast, fission yeast and animal cells.</a> Curr Biol. 14 (18), R806-R818 (2004).</li><li>Proctor, S. A., Minc, N., Boudaoud, A., Chang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contributions+of+turgor+pressure,+the+contractile+ring,+and+septum+assembly+to+forces+in+cytokinesis+in+fission+yeast.">Contributions of turgor pressure, the contractile ring, and septum assembly to forces in cytokinesis in fission yeast.</a> Curr Biol. 22 (17), 1601-1608 (2012).</li><li>Munoz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+cell+wall+beta(1,3)glucan+is+required+to+couple+septation+to+actomyosin+ring+contraction.">Extracellular cell wall beta(1,3)glucan is required to couple septation to actomyosin ring contraction.</a> J Cell Biol. 203 (2), 265-282 (2013).</li><li>Wang, N., Lee, I. J., Rask, G., Wu, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+the+TRAPP-II+Complex+and+the+Exocyst+in+Membrane+Deposition+during+Fission+Yeast+Cytokinesis.">Roles of the TRAPP-II Complex and the Exocyst in Membrane Deposition during Fission Yeast Cytokinesis.</a> PLoS Biol. 14 (4), e1002437 (2016).</li><li>Liu, J., Wang, H., McCollum, D., Balasubramanian, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drc1p/Cps1p,+a+1,3-beta-glucan+synthase+subunit,+is+essential+for+division+septum+assembly+in+Schizosaccharomyces+pombe.">Drc1p/Cps1p, a 1,3-beta-glucan synthase subunit, is essential for division septum assembly in Schizosaccharomyces pombe.</a> Genetics. 153 (3), 1193-1203 (1999).</li><li>Cortes, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+(1,3)beta-D-glucan+synthase+subunit+Bgs1p+is+responsible+for+the+fission+yeast+primary+septum+formation.">The (1,3)beta-D-glucan synthase subunit Bgs1p is responsible for the fission yeast primary septum formation.</a> Mol Microbiol. 65 (1), 201-217 (2007).</li><li>Cortes, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cooperation+between+Paxillin-like+Protein+Pxl1+and+Glucan+Synthase+Bgs1+Is+Essential+for+Actomyosin+Ring+Stability+and+Septum+Formation+in+Fission+Yeast.">Cooperation between Paxillin-like Protein Pxl1 and Glucan Synthase Bgs1 Is Essential for Actomyosin Ring Stability and Septum Formation in Fission Yeast.</a> PLoS Genet. 11 (7), e1005358 (2015).</li><li>Cortes, J. C., Ishiguro, J., Duran, A., Ribas, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+the+(1,3)beta-D-glucan+synthase+catalytic+subunit+homologue+Bgs1p/Cps1p+from+fission+yeast+suggests+that+it+is+involved+in+septation,+polarized+growth,+mating,+spore+wall+formation+and+spore+germination.">Localization of the (1,3)beta-D-glucan synthase catalytic subunit homologue Bgs1p/Cps1p from fission yeast suggests that it is involved in septation, polarized growth, mating, spore wall formation and spore germination.</a> J Cell Sci. 115 (Pt 21), 4081-4096 (2002).</li><li>Liu, J., Tang, X., Wang, H., Oliferenko, S., Balasubramanian, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+localization+of+the+integral+membrane+protein+Cps1p+to+the+cell+division+site+is+dependent+on+the+actomyosin+ring+and+the+septation-inducing+network+in+Schizosaccharomyces+pombe.">The localization of the integral membrane protein Cps1p to the cell division site is dependent on the actomyosin ring and the septation-inducing network in Schizosaccharomyces pombe.</a> Mol Biol Cell. 13 (3), 989-1000 (2002).</li><li>Royou, A., Field, C., Sisson, J. C., Sullivan, W., Karess, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reassessing+the+role+and+dynamics+of+nonmuscle+myosin+II+during+furrow+formation+in+early+Drosophila+embryos.">Reassessing the role and dynamics of nonmuscle myosin II during furrow formation in early Drosophila embryos.</a> Mol Biol Cell. 15 (2), 838-850 (2004).</li><li>Figard, L., Xu, H., Garcia, H. G., Golding, I., Sokac, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plasma+membrane+flattens+out+to+fuel+cell-surface+growth+during+Drosophila+cellularization.">The plasma membrane flattens out to fuel cell-surface growth during Drosophila cellularization.</a> Dev Cell. 27 (6), 648-655 (2013).</li><li>Wei, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unique+Spatiotemporal+Activation+Pattern+of+Cdc42+by+Gef1+and+Scd1+Promotes+Different+Events+during+Cytokinesis.">Unique Spatiotemporal Activation Pattern of Cdc42 by Gef1 and Scd1 Promotes Different Events during Cytokinesis.</a> Mol Biol Cell. , (2016).</li><li>Nabeshima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+centromeres+during+metaphase-anaphase+transition+in+fission+yeast:+Dis1+is+implicated+in+force+balance+in+metaphase+bipolar+spindle.">Dynamics of centromeres during metaphase-anaphase transition in fission yeast: Dis1 is implicated in force balance in metaphase bipolar spindle.</a> Mol Biol Cell. 9 (11), 3211-3225 (1998).</li><li>Johnson, A. E., Gould, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dma1+ubiquitinates+the+SIN+scaffold,+Sid4,+to+impede+the+mitotic+localization+of+Plo1+kinase.">Dma1 ubiquitinates the SIN scaffold, Sid4, to impede the mitotic localization of Plo1 kinase.</a> EMBO J. 30 (2), 341-354 (2011).</li><li>Yonetani, A., Chang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+cytokinesis+by+the+formin+cdc12p.">Regulation of cytokinesis by the formin cdc12p.</a> Curr Biol. 20 (6), 561-566 (2010).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fission Yeast: A laboratory Manual. , (2016).</li><li>Hachet, O., Simanis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mid1p/anillin+and+the+septation+initiation+network+orchestrate+contractile+ring+assembly+for+cytokinesis.">Mid1p/anillin and the septation initiation network orchestrate contractile ring assembly for cytokinesis.</a> Genes Dev. 22 (22), 3205-3216 (2008).</li><li>Zhou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+contractile+ring+coordinates+curvature-dependent+septum+assembly+during+fission+yeast+cytokinesis.">The contractile ring coordinates curvature-dependent septum assembly during fission yeast cytokinesis.</a> Mol Biol Cell. 26 (1), 78-90 (2015).</li><li>Chen, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lattice+light-sheet+microscopy:+imaging+molecules+to+embryos+at+high+spatiotemporal+resolution.">Lattice light-sheet microscopy: imaging molecules to embryos at high spatiotemporal resolution.</a> Science. 346 (6208), 1257998 (2014).</li><li>Huang, Y. S., Karashima, T., Yamamoto, M., Hamaguchi, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular-level+investigation+of+the+structure,+transformation,+and+bioactivity+of+single+living+fission+yeast+cells+by+time-+and+space-resolved+Raman+spectroscopy.">Molecular-level investigation of the structure, transformation, and bioactivity of single living fission yeast cells by time- and space-resolved Raman spectroscopy.</a> Biochemistry. 44 (30), 10009-10019 (2005).</li><li>Huang, C. K., Ando, M., Hamaguchi, H. O., Shigeto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disentangling+dynamic+changes+of+multiple+cellular+components+during+the+yeast+cell+cycle+by+in+vivo+multivariate+Raman+imaging.">Disentangling dynamic changes of multiple cellular components during the yeast cell cycle by in vivo multivariate Raman imaging.</a> Anal Chem. 84 (13), 5661-5668 (2012).</li><li>Le Goff, X., Woollard, A., Simanis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+cps1+gene+provides+evidence+for+a+septation+checkpoint+in+Schizosaccharomyces+pombe.">Analysis of the cps1 gene provides evidence for a septation checkpoint in Schizosaccharomyces pombe.</a> Mol Gen Genet. 262 (1), 163-172 (1999).</li></ol>

Qui abbiamo descritto un protocollo per studiare gli eventi cytokinetic in lievito di fissione in modo temporale. Il protocollo qui descritto fornisce risoluzione temporale di eventi diversi cytokinetic con riferimento l&#39;uno all&#39;altro; tempi di assunzione di proteine ​​o la perdita con riferimento alla fase di cytokinetic; Struttura dell&#39;anello durante le diverse fasi di citochinesi; e la progressione della citochinesi con riferimento alla mitosi. Con questo protocollo è possibile definire con precision...

Citocinesi, la fase finale di divisione cellulare, è un processo complesso indispensabile per il corretto differenziazione, lo sviluppo e la sopravvivenza di un organismo. Citochinesi coinvolge molteplici eventi che vengono organizzati per garantire il successo di separazione cellulare pur mantenendo l&#39;integrità genomica 1. Citochinesi comporta eventi in cui un anello actomiosina volta assemblato subisce costrizione, che è concomitante con l&#39;espansione della membrana e Assolcatore e rimodellamento della matrice extracellulare cellulare, infine seguita da abscission cella 1, 2, 3. Organizzazione improprio di eventi cytokinetic può portare a difetti di separazione cellulare e ploidia, e può causare malattie come il cancro 4, 5, 6, 7, 8. I principi fondamentali che consentono organizzazione di eventi cytokinetic non sono ben compresi, determinando in tal modo posti di blocco nella nostra comprensione della eziologia di queste malattie. Il pombe Schizosaccharomyces fissione lievito (S. pombe) è un sistema modello eccellente per studiare cytokinesis a causa della natura conservata delle proteine coinvolte 1. Nel lievito di fissione, dopo actomyosin gruppo ad anello, l&#39;anello entra in una fase di maturazione / di sosta dove non costrizione 9. Maturazione termina con l&#39;inizio di costrizione anello actomiosina, in concomitanza con Assolcatore membrana e setto ingression. Lavoro seminale nel corso degli anni ci hanno dato una discreta comprensione di assemblaggio dell&#39;anello actomiosina nel lievito di fissione 1, 9, 10. In alcuni eucarioti, compreso lievito di fissione, di successo assemblaggio dell&#39;anello actomiosina non è sufficiente per Assolcatore membrana. in fissione lievito, anello di costrizione da solo non fornisce una forza sufficiente a superare la pressione di turgore interna per la formazione solco 11. Un modello recente indica che questa forza è invece fornita da setto ingression 11. In un altro modello, il ruolo di estensione membrana plasmatica è stato suggerito di contribuire alla formazione solco 12, 13. Anello costrizione e Assolcatore membrana non si verificano in temperatura Bgs1 / CPS1 sensibile cps1-191 mutante, il principale enzima per la formazione del setto primaria 14, 15. Le cellule prive Bgs1 mostrano setto primaria difettosa e prolungata costrizione anello 15, 16. Bgs1 viene reclutato per il sito di divisione cellulare per setto ingressione durante la maturazione dopo actomiosina gruppo dell&#39;anello di 17, 18. Similarly, durante cellularization in embrioni di Drosophila, anello di costrizione è bifasica con un tasso di costrizione iniziale di rallentare significativamente 19, che assomiglia alla fase di maturazione osservato nel lievito di fissione. Bifasica costrizione anello potrebbe rallentare Assolcatore membrana per consentire l&#39;espansione della membrana sufficienti 20 e la modifica di matrice extracellulare. Ciò suggerisce che, dopo il montaggio actomyosin anello, anello di costrizione si verifica in modo efficiente solo quando la cellula ha soddisfatto i requisiti per la formazione del solco. Non è ben chiaro quali condizioni sono necessarie per costrizione anello actomiosina dopo l&#39;assemblaggio anello, né gli eventi molecolari che regolano questo processo. Abbiamo recentemente dimostrato che in seguito anello actomiosina assemblaggio piccola GTPasi Cdc42 subisce un pattern di attivazione spazio-temporale unico 21. Questo modello è stabilito dal pattern di localizzazione unica dei fattori di scambio guanidina nucleotide Cdc42 (GEFs) che attivano Cdc42. Il GEF GEF1 localizza all&#39;anello actomiosina assemblato e favorisce l&#39;insorgenza di costrizione ring e setto ingressione, mentre scd1 localizza alla membrana che solca e promuove la normale formazione del setto. Troviamo che il pattern di attivazione Cdc42 istituito dalle sue GEFs portano alla regolazione degli eventi cytokinetic distinti. Per comprendere il meccanismo molecolare di eventi che alla fine portano alla separazione delle cellule dopo il montaggio anello actomiosina, si ha la necessità di seguire gli eventi cytokinetic distinti nel tempo e nello spazio. Nel lievito di fissione, cytokinesis prima prevede l&#39;assemblaggio dei nodi precursori attorno al nucleo, che alla fine reclutano la miosina di tipo II, la Formin Cdc12, e altre proteine ​​necessarie per il montaggio dell&#39;anello actomiosina. Per ora gli eventi cytokinetic distinti e fornire un quadro di riferimento, la separazione dei marcatori del corpo poli del fuso (formazione del fuso) è considerato come tempo 0 22. L&#39;assemblaggio di thanello actomiosina e può essere seguito da monitorare nel tempo l&#39;intensità di una proteina anello actomiosina fluorescently etichettato come il tipo II miosina catena leggera normativo Rlc1. Qui si descrive un approccio microscopico per analizzare diverse fasi di cytokinesis nel corso del tempo.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Yeast extract media</td>
			<td>Sunrise Science Products</td>
			<td>YES 225</td>
			<td>0.5% w/v yeast extract, 3% w/v glucose, 225mg/L adenine, histidine, leucine, uracil, and lysine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>SeaKem LE agarose, Lonza</td>
			<td>50001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4544</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bottomed culture dish</td>
			<td>MatTek Corporation</td>
			<td>P35G-1.5-14-C</td>
			<td>Coverslip No. 1.5 was used. This will vary as per the microscope specifications used.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VT-Hawk 2D array laser scanning confocal microscopy system</td>
			<td>Visitech International, UK</td>
			<td></td>
			<td>with an Olympus IX-83 inverted microscope with a 100X / numerical aperture 1.49 UAPO lens (Olympus) and EM-CCD digital camera (Hamamatsu).&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spatiotemporal analysis of cytokinetic events in fission yeast

Citochinesi, il passo finale nella divisione cellulare è fondamentale per mantenere l&#39;integrità del genoma. Una corretta cytokinesis è importante per la differenziazione cellulare e lo sviluppo. Citochinesi comporta una serie di eventi che sono ben coordinati nel tempo e nello spazio. Citochinesi comporta la formazione di un anello actomiosina nel sito divisione, seguita dalla costrizione anello, formazione solco membrana ed extra rimodellamento della matrice cellulare. Il lievito di fissione, SCHIZOSACCHAROMYCES POMBE (S. pombe) è un modello di sistema ben studiato, che ha rivelato con notevole chiarezza gli eventi iniziali in citocinesi. Tuttavia, non capiamo chiaramente come i diversi eventi cytokinetic sono coordinati spatiotemporally. Per determinare questo, si ha la necessità di analizzare i diversi eventi cytokinetic in grandi dettagli nel tempo e nello spazio. Qui si descrive un approccio microscopio per esaminare diversi ev cytokineticEnt in cellule vive. Con questo approccio è possibile in volta diversi eventi cytokinetic e determinare il momento del reclutamento di diverse proteine ​​durante cytokinesis. Inoltre, descriviamo protocolli di confrontare localizzazione delle proteine, e distribuzione nel sito di divisione cellulare. Questo è un protocollo di base per studiare citochinesi in lievito di fissione e può essere utilizzato anche per altri lieviti e sistemi fungine.

Cellule di lievito di fissione che esprimono il marcatore anello, Rlc1-GFP (green, Figura 2) e il mandrino marcatore palo corpo sad1-mCherry (rosso, figura 2) sono stati ripresi durante cytokinesis. L&#39;insorgenza di marcatore palo corpo mandrino (freccia bianca, figure 2A, B) è considerato come tempo 0. segnale Rlc1-GFP appare al momento -4 min con riferimento al mandrino separazione corpo palo (freccia rossa, figure 2A, 2B). Segnale...

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Spatiotemporal Analysis of Cytokinetic Events in Fission Yeast

Il lievito di fissione, SCHIZOSACCHAROMYCES POMBE è un sistema modello eccellente per studiare citocinesi, la fase finale nella divisione cellulare. Qui si descrive un approccio microscopio per analizzare i diversi eventi cytokinetic in cellule fissione lieviti vivi.

Analisi spazio-temporale di Cytokinetic Eventi in lievito di fissione

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Research

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