Name: spatiotemporal analysis of cytokinetic events in fission yeast
Uploaded: 2017-02-20T14:00:00
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This work was supported by startup funds from The University of Tennessee and TN-SCORE, a multi-disciplinary research program sponsored by NSF-EPSCoR (EPS-1004083).

サンプルの調製<ol><li> 8世代のために32℃でYE液体培地で24スピンドルポール本体マーカーSAD1-mCherryを23とII型ミオシン調節軽鎖RLC1-トマトを発現している分裂酵母細胞を成長させます。 注：温度感受性変異体について、25℃で細胞を増殖させます。 YEで0.5のOD 600に対数期中期に細胞を増殖させます。分裂酵母の成長条件の詳細については分裂酵?...

<ol>
	<li>Pollard, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanics+of+cytokinesis+in+eukaryotes.">Mechanics of cytokinesis in eukaryotes.</a> Curr Opin Cell Biol. 22 (1), 50-56 (2010).</li><li>Guertin, D. A., Trautmann, S., McCollum, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokinesis+in+eukaryotes.">Cytokinesis in eukaryotes.</a> Microbiol Mol Biol Rev. 66 (2), 155-178 (2002).</li><li>Xu, X., Vogel, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+secreted+protein+promotes+cleavage+furrow+maturation+during+cytokinesis.">A secreted protein promotes cleavage furrow maturation during cytokinesis.</a> Curr Biol. 21 (2), 114-119 (2011).</li><li>Sagona, A. P., Stenmark, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokinesis+and+cancer.">Cytokinesis and cancer.</a> FEBS Lett. 584 (12), 2652-2661 (2010).</li><li>Fujiwara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokinesis+failure+generating+tetraploids+promotes+tumorigenesis+in+p53-null+cells.">Cytokinesis failure generating tetraploids promotes tumorigenesis in p53-null cells.</a> Nature. 437 (7061), 1043-1047 (2005).</li><li>Li, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokinesis+in+development+and+disease:+variations+on+a+common+theme.">Cytokinesis in development and disease: variations on a common theme.</a> Cell Mol Life Sci. 64 (23), 3044-3058 (2007).</li><li>Daniels, M. J., Wang, Y., Lee, M., Venkitaraman, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+cytokinesis+in+cells+deficient+in+the+breast+cancer+susceptibility+protein+BRCA2.">Abnormal cytokinesis in cells deficient in the breast cancer susceptibility protein BRCA2.</a> Science. 306 (5697), 876-879 (2004).</li><li>Storchova, Z., Pellman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+polyploidy+to+aneuploidy,+genome+instability+and+cancer.">From polyploidy to aneuploidy, genome instability and cancer.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 5 (1), 45-54 (2004).</li><li>Lee, I. J., Coffman, V. C., Wu, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contractile-ring+assembly+in+fission+yeast+cytokinesis:+Recent+advances+and+new+perspectives.">Contractile-ring assembly in fission yeast cytokinesis: Recent advances and new perspectives.</a> Cytoskeleton (Hoboken). 69 (10), 751-763 (2012).</li><li>Balasubramanian, M. K., Bi, E., Glotzer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+cytokinesis+in+budding+yeast,+fission+yeast+and+animal+cells.">Comparative analysis of cytokinesis in budding yeast, fission yeast and animal cells.</a> Curr Biol. 14 (18), R806-R818 (2004).</li><li>Proctor, S. A., Minc, N., Boudaoud, A., Chang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contributions+of+turgor+pressure,+the+contractile+ring,+and+septum+assembly+to+forces+in+cytokinesis+in+fission+yeast.">Contributions of turgor pressure, the contractile ring, and septum assembly to forces in cytokinesis in fission yeast.</a> Curr Biol. 22 (17), 1601-1608 (2012).</li><li>Munoz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+cell+wall+beta(1,3)glucan+is+required+to+couple+septation+to+actomyosin+ring+contraction.">Extracellular cell wall beta(1,3)glucan is required to couple septation to actomyosin ring contraction.</a> J Cell Biol. 203 (2), 265-282 (2013).</li><li>Wang, N., Lee, I. J., Rask, G., Wu, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+the+TRAPP-II+Complex+and+the+Exocyst+in+Membrane+Deposition+during+Fission+Yeast+Cytokinesis.">Roles of the TRAPP-II Complex and the Exocyst in Membrane Deposition during Fission Yeast Cytokinesis.</a> PLoS Biol. 14 (4), e1002437 (2016).</li><li>Liu, J., Wang, H., McCollum, D., Balasubramanian, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drc1p/Cps1p,+a+1,3-beta-glucan+synthase+subunit,+is+essential+for+division+septum+assembly+in+Schizosaccharomyces+pombe.">Drc1p/Cps1p, a 1,3-beta-glucan synthase subunit, is essential for division septum assembly in Schizosaccharomyces pombe.</a> Genetics. 153 (3), 1193-1203 (1999).</li><li>Cortes, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+(1,3)beta-D-glucan+synthase+subunit+Bgs1p+is+responsible+for+the+fission+yeast+primary+septum+formation.">The (1,3)beta-D-glucan synthase subunit Bgs1p is responsible for the fission yeast primary septum formation.</a> Mol Microbiol. 65 (1), 201-217 (2007).</li><li>Cortes, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cooperation+between+Paxillin-like+Protein+Pxl1+and+Glucan+Synthase+Bgs1+Is+Essential+for+Actomyosin+Ring+Stability+and+Septum+Formation+in+Fission+Yeast.">Cooperation between Paxillin-like Protein Pxl1 and Glucan Synthase Bgs1 Is Essential for Actomyosin Ring Stability and Septum Formation in Fission Yeast.</a> PLoS Genet. 11 (7), e1005358 (2015).</li><li>Cortes, J. C., Ishiguro, J., Duran, A., Ribas, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+the+(1,3)beta-D-glucan+synthase+catalytic+subunit+homologue+Bgs1p/Cps1p+from+fission+yeast+suggests+that+it+is+involved+in+septation,+polarized+growth,+mating,+spore+wall+formation+and+spore+germination.">Localization of the (1,3)beta-D-glucan synthase catalytic subunit homologue Bgs1p/Cps1p from fission yeast suggests that it is involved in septation, polarized growth, mating, spore wall formation and spore germination.</a> J Cell Sci. 115 (Pt 21), 4081-4096 (2002).</li><li>Liu, J., Tang, X., Wang, H., Oliferenko, S., Balasubramanian, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+localization+of+the+integral+membrane+protein+Cps1p+to+the+cell+division+site+is+dependent+on+the+actomyosin+ring+and+the+septation-inducing+network+in+Schizosaccharomyces+pombe.">The localization of the integral membrane protein Cps1p to the cell division site is dependent on the actomyosin ring and the septation-inducing network in Schizosaccharomyces pombe.</a> Mol Biol Cell. 13 (3), 989-1000 (2002).</li><li>Royou, A., Field, C., Sisson, J. C., Sullivan, W., Karess, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reassessing+the+role+and+dynamics+of+nonmuscle+myosin+II+during+furrow+formation+in+early+Drosophila+embryos.">Reassessing the role and dynamics of nonmuscle myosin II during furrow formation in early Drosophila embryos.</a> Mol Biol Cell. 15 (2), 838-850 (2004).</li><li>Figard, L., Xu, H., Garcia, H. G., Golding, I., Sokac, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plasma+membrane+flattens+out+to+fuel+cell-surface+growth+during+Drosophila+cellularization.">The plasma membrane flattens out to fuel cell-surface growth during Drosophila cellularization.</a> Dev Cell. 27 (6), 648-655 (2013).</li><li>Wei, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unique+Spatiotemporal+Activation+Pattern+of+Cdc42+by+Gef1+and+Scd1+Promotes+Different+Events+during+Cytokinesis.">Unique Spatiotemporal Activation Pattern of Cdc42 by Gef1 and Scd1 Promotes Different Events during Cytokinesis.</a> Mol Biol Cell. , (2016).</li><li>Nabeshima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+centromeres+during+metaphase-anaphase+transition+in+fission+yeast:+Dis1+is+implicated+in+force+balance+in+metaphase+bipolar+spindle.">Dynamics of centromeres during metaphase-anaphase transition in fission yeast: Dis1 is implicated in force balance in metaphase bipolar spindle.</a> Mol Biol Cell. 9 (11), 3211-3225 (1998).</li><li>Johnson, A. E., Gould, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dma1+ubiquitinates+the+SIN+scaffold,+Sid4,+to+impede+the+mitotic+localization+of+Plo1+kinase.">Dma1 ubiquitinates the SIN scaffold, Sid4, to impede the mitotic localization of Plo1 kinase.</a> EMBO J. 30 (2), 341-354 (2011).</li><li>Yonetani, A., Chang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+cytokinesis+by+the+formin+cdc12p.">Regulation of cytokinesis by the formin cdc12p.</a> Curr Biol. 20 (6), 561-566 (2010).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fission Yeast: A laboratory Manual. , (2016).</li><li>Hachet, O., Simanis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mid1p/anillin+and+the+septation+initiation+network+orchestrate+contractile+ring+assembly+for+cytokinesis.">Mid1p/anillin and the septation initiation network orchestrate contractile ring assembly for cytokinesis.</a> Genes Dev. 22 (22), 3205-3216 (2008).</li><li>Zhou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+contractile+ring+coordinates+curvature-dependent+septum+assembly+during+fission+yeast+cytokinesis.">The contractile ring coordinates curvature-dependent septum assembly during fission yeast cytokinesis.</a> Mol Biol Cell. 26 (1), 78-90 (2015).</li><li>Chen, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lattice+light-sheet+microscopy:+imaging+molecules+to+embryos+at+high+spatiotemporal+resolution.">Lattice light-sheet microscopy: imaging molecules to embryos at high spatiotemporal resolution.</a> Science. 346 (6208), 1257998 (2014).</li><li>Huang, Y. S., Karashima, T., Yamamoto, M., Hamaguchi, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular-level+investigation+of+the+structure,+transformation,+and+bioactivity+of+single+living+fission+yeast+cells+by+time-+and+space-resolved+Raman+spectroscopy.">Molecular-level investigation of the structure, transformation, and bioactivity of single living fission yeast cells by time- and space-resolved Raman spectroscopy.</a> Biochemistry. 44 (30), 10009-10019 (2005).</li><li>Huang, C. K., Ando, M., Hamaguchi, H. O., Shigeto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disentangling+dynamic+changes+of+multiple+cellular+components+during+the+yeast+cell+cycle+by+in+vivo+multivariate+Raman+imaging.">Disentangling dynamic changes of multiple cellular components during the yeast cell cycle by in vivo multivariate Raman imaging.</a> Anal Chem. 84 (13), 5661-5668 (2012).</li><li>Le Goff, X., Woollard, A., Simanis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+cps1+gene+provides+evidence+for+a+septation+checkpoint+in+Schizosaccharomyces+pombe.">Analysis of the cps1 gene provides evidence for a septation checkpoint in Schizosaccharomyces pombe.</a> Mol Gen Genet. 262 (1), 163-172 (1999).</li></ol>

ここでは、一時的な方法で、分裂酵母における細胞質分裂のイベントを研究するためのプロトコルを記述しています。ここで説明するプロトコルは、互いを基準とした異なる細胞質分裂のイベントの時間分解能を提供します。細胞質分裂の位相を基準としたタンパク質の動員または損失のタイミング。細胞質分裂の異なる段階を通じてリングの構造;有糸分裂を参照して、細胞質分裂の進行。...

細胞質分裂、細胞分裂の最後のステップは、適切な分化、開発、および生物の生存に不可欠複雑なプロセスです。細胞質分裂は、ゲノムの完全性1を維持しながら、成功した細胞分離を確実にするために編成されている複数のイベントが含まれます。細胞質分裂は、一旦組み立てアクトミオシンリングは、最終的に細胞器官脱離1、2、3、続いて膜の拡大とfurrowing、および細胞外細胞マトリックスリモデリング、と同時であるくびれを受けるイベントを伴います。細胞質分裂のイベントの不適切な組織は、細胞分離および倍数性の欠陥につながることができ、そして癌4、5、6、7、8のような疾患を引き起こす可能性があります。 Oを有効にする基本原則細胞質分裂のイベントのrganizationがよく、したがって、これらの疾患の病因の我々の理解に障害物につながる、理解されていません。 分裂酵母シゾサッカロミセス・ポンベ （S.ポンベ）が原因で1関与するタンパク質の保存された性質のために細胞質分裂を研究するための優れたモデルシステムです。分裂酵母では、リングアセンブリをアクトミオシンた後、リングは、9を収縮しない成熟/ドウェル段階に入ります。成熟は、膜furrowingとセプタム侵入と同時にアクトミオシンリング収縮の開始に終了します。年間の独創的な研究は、分裂酵母1、9、10に私たちのアクトミオシンリングアセンブリのかなり良い理解を与えています。分裂酵母を含むいくつかの真核生物では、アクトミオシンリングの成功のアセンブリは、膜furrowingのために十分ではありません。 Fでission酵母、単独のリング収縮は、溝形成の11のための内部膨圧を克服するのに十分な力を提供していません。最近のモデルは、この力は、代わりに隔壁侵入11によって提供されることを示しています。別のモデルでは、原形質膜の延長の役割が形成12,13の畝間に寄与することが示唆されています。リング狭窄および膜furrowingはBgs1 / CPS1の温度感受性変異体cps1-191、一次中隔形成14、15の主要な酵素では発生しません。 Bgs1を欠く細胞は、欠陥の一次中隔と延長リングくびれ15、16を示しています 。 Bgs1は、リング組立体17,18のアクトミオシン後成熟の間に隔壁進入のための細胞分裂部位に補充されます。 Similarlyは、 ショウジョウバエの胚における細胞化の際に、リング収縮は、分裂酵母で観察された成熟期に似た、かなり遅い初期収縮率19二相性です。二相性リング収縮は、十分な膜膨張20と細胞外マトリックスの修正を可能にするために、膜furrowingが遅くなる場合があります。このリングアセンブリアクトミオシン後、リング狭窄は、細胞は、溝形成のための要件を満たした効率的にのみ発生することを示唆しています。これは、アクトミオシンリングリング組立後の収縮、また、このプロセスを制御する分子事象のために必要とされるどのような条件のよく理解されていません。我々は最近、アクトミオシンリングアセンブリ以下の低分子量GTPaseのCdc42はユニークな時空間活動パターン21を受けることが示されています。このパターンは、（Cdc42のグアニジンヌクレオチド交換因子の独特の局在パターンによって確立されますCdc42のを活性化させるのGEF）。 GEF Gef1は、組み立てられたアクトミオシンリングに局在し、SCD1がfurrowing膜に局在化し、通常の隔壁形成を促進しながら、リングのくびれとセプタム侵入の発症を促進します。私たちは、そのGEFにによって確立されたCdc42の活性化パターンは明確な細胞質分裂のイベントの規制につながることがわかります。 最終的にはアクトミオシンリングアセンブリ以下の細胞分離につながる事象の分子機構を理解するためには、時間と空間の明確な細胞質分裂のイベントに従ってくださいする必要があります。分裂酵母では、細胞質分裂は、まず最終的には、II型ミオシン、formin Cdc12、およびアクトミオシンリングアセンブリのために必要な他のタンパク質を動員する、核の周りの前駆体ノードの組み立てを伴います。時間に明確な細胞質分裂のイベントや参照のフレームを提供し、紡錘体極体マーカー（紡錘体形成）の分離は、時間0 22として考えられています。目の組立電子のアクトミオシンリングは、時間の経過とともに蛍光II型ミオシン調節軽鎖RLC1としてアクトミオシンリングタンパク質をタグ付けの強度をモニターすることによって追跡することができます。ここでは、時間をかけて細胞質分裂のさまざまな段階を分析するために微細なアプローチについて説明します。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Yeast extract media</td>
			<td>Sunrise Science Products</td>
			<td>YES 225</td>
			<td>0.5% w/v yeast extract, 3% w/v glucose, 225mg/L adenine, histidine, leucine, uracil, and lysine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>SeaKem LE agarose, Lonza</td>
			<td>50001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4544</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bottomed culture dish</td>
			<td>MatTek Corporation</td>
			<td>P35G-1.5-14-C</td>
			<td>Coverslip No. 1.5 was used. This will vary as per the microscope specifications used.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VT-Hawk 2D array laser scanning confocal microscopy system</td>
			<td>Visitech International, UK</td>
			<td></td>
			<td>with an Olympus IX-83 inverted microscope with a 100X / numerical aperture 1.49 UAPO lens (Olympus) and EM-CCD digital camera (Hamamatsu).&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spatiotemporal analysis of cytokinetic events in fission yeast

細胞質分裂、細胞分裂の最後のステップは、ゲノムの完全性を維持するために重要です。適切な細胞質分裂は、細胞分化と発展のために重要です。細胞質分裂がよく、時間と空間にコーディネートされた一連のイベントを伴います。細胞質分裂は、リング収縮、膜の溝の形成と細胞外マトリックスリモデリングに続く分割サイトでのアクトミオシン環の形成を伴います。分裂酵母、 シゾサッカロミセス・ポンベ （S.ポンベ）は 、実質的な明快さと細胞質分裂の最初のイベントを明らかにした十分に研究モデルシステムです。しかし、我々は、細胞質分裂のイベントが時空間的に調整されている方法の異なる明確に理解していません。これを決定するためには、両方の時間と空間で素晴らしい詳細で異なる細胞質分裂のイベントを分析する必要があります。ここでは、異なる細胞質分裂のEVを調べるために顕微鏡のアプローチを説明します生きた細胞内でエント。このアプローチでは、異なる細胞質分裂のイベントの時間および細胞質分裂中に異なるタンパク質の動員の時間を決定することが可能です。また、我々は、細胞分裂の部位でのタンパク質の局在化、および分布を比較するためのプロトコルを説明します。これは、分裂酵母において細胞質分裂を研究するための基本的なプロトコルであり、また、他の酵母および真菌システムのために使用することができます。

リングマーカーを発現する分裂酵母細胞は、RLC1-GFP（緑色、 図2）および紡錘体極本体マーカーSAD1-mCherryを（赤、 図2）は、細胞質分裂の際に画像化しました。紡錘体極体マーカーの発現（白矢印、 図2A、Bを図）は時刻0 RLC1-GFPシグナルとして考えられている時に表示されます-4極体の分離スピンドルを基準とした分（赤い矢印は、...

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Spatiotemporal Analysis of Cytokinetic Events in Fission Yeast

分裂酵母は、 分裂酵母は、細胞質分裂を研究するための優れたモデル系、細胞分裂の最終段階です。ここでは、ライブ分裂酵母細胞内の異なる細胞質分裂のイベントを分析するために、顕微鏡のアプローチを説明します。

分裂酵母における細胞質分裂のイベントの時空間解析

Cytokinesis, the final step in cell division is critical for maintaining genome integrity. Proper cytokinesis is important for cell differentiation and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Analysis of the Development of a Morphological Phenotype as a Function of Protein Concentration in Budding Yeast

出芽酵母のタンパク質濃度の関数としての形態学的表現型の開発の分析

Gene deletion and protein overexpression are common methods for studying functions of proteins. In this article, we describe a protocol for analysis of ...

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

分裂酵母の定量的なライブセル蛍光-顕微鏡解析

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Live Cell Imaging of Early Autophagy Events: Omegasomes and Beyond

初期のオートファジーイベントの細胞イメージングライブOmegasomesを以降

Autophagy is a  cellular response triggered by the lack of nutrients, especially the absence of  amino acids. Autophagy is defined by the formation of ...

Spatiotemporal Mapping of Motility in Ex Vivo Preparations of the Intestines

Spatiotemporal Mapping of Motility in Ex Vivo Preparations of the Intestines

運動の時空間マッピングで<em&gt;エクスビボ</em腸の&gt;準備

Multiple approaches have been used to record and evaluate gastrointestinal motility including: recording changes in muscle tension, intraluminal pressure, ...

Microscopy of Fission Yeast Sexual Lifecycle

分裂酵母セクシャルライフサイクルの顕微鏡観察

The fission yeast Schizosaccharomyces pombe has been an invaluable model system in studying the regulation of the mitotic cell cycle progression, the ...

Applications of pHluorin for Quantitative, Kinetic and High-throughput Analysis of Endocytosis in Budding Yeast

出芽酵母におけるエンドサイトーシスの定量的、動力学的およびハイスループット分析のためのpHluorinの応用

Green fluorescent protein (GFP) and its variants are widely used tools for studying protein localization and dynamics of events such as cytoskeletal ...

High-resolution Imaging and Analysis of Individual Astral Microtubule Dynamics in Budding Yeast

出芽酵母における高解像度画像と個人アストラル微小管動態の解析

Dynamic microtubules are fundamental to many cellular processes, and accurate measurements of microtubule dynamics can provide insight into how cells ...

4D Microscopy of Yeast

酵母の4D顕微鏡検査

The goal of this protocol is to characterize how membrane compartments form and transform in live cells of budding yeast. Many intracellular compartments ...

Examination of Mitotic and Meiotic Fission Yeast Nuclear Dynamics by Fluorescence Live-cell Microscopy

蛍光生細胞顕微鏡によるミトティック・マイオシス酵母核ダイナミクスの検討

Live-cell imaging is a microscopy technique used to examine cell and protein dynamics in living cells. This imaging method is not toxic, generally does ...

Quantifying Spatiotemporal Parameters of Cellular Exocytosis in Micropatterned Cells

微小パターン化細胞における細胞興奮性の時空間的パラメータの定量

Live imaging of the pHluorin tagged Soluble N-ethylmaleimide-sensitive-factor Attachment protein REceptor (v-SNARE) Vesicle-associated membrane protein 7 ...