Name: spatiotemporal analysis of cytokinetic events in fission yeast
Uploaded: 2017-02-20T14:00:00
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This work was supported by startup funds from The University of Tennessee and TN-SCORE, a multi-disciplinary research program sponsored by NSF-EPSCoR (EPS-1004083).

1. Preparação da Amostra <ol><li> Cultivar células de levedura de fissão que expressam o marcador fuso pólo corpo Sad1-mCherry 23 e tipo de cadeia leve reguladora da miosina II Rlc1-Tomate 24 em meios líquidos YE a 32 ° C durante 8 gerações. NOTA: Para mutantes sensíveis à temperatura, crescer as células a 25 ° C. Cultivar células à fase mid-log a uma DO600 de 0,5 em YE. Para saber mais sobre a fissão condições de crescimento de levedu...

<ol>
	<li>Pollard, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanics+of+cytokinesis+in+eukaryotes.">Mechanics of cytokinesis in eukaryotes.</a> Curr Opin Cell Biol. 22 (1), 50-56 (2010).</li><li>Guertin, D. A., Trautmann, S., McCollum, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokinesis+in+eukaryotes.">Cytokinesis in eukaryotes.</a> Microbiol Mol Biol Rev. 66 (2), 155-178 (2002).</li><li>Xu, X., Vogel, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+secreted+protein+promotes+cleavage+furrow+maturation+during+cytokinesis.">A secreted protein promotes cleavage furrow maturation during cytokinesis.</a> Curr Biol. 21 (2), 114-119 (2011).</li><li>Sagona, A. P., Stenmark, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokinesis+and+cancer.">Cytokinesis and cancer.</a> FEBS Lett. 584 (12), 2652-2661 (2010).</li><li>Fujiwara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokinesis+failure+generating+tetraploids+promotes+tumorigenesis+in+p53-null+cells.">Cytokinesis failure generating tetraploids promotes tumorigenesis in p53-null cells.</a> Nature. 437 (7061), 1043-1047 (2005).</li><li>Li, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokinesis+in+development+and+disease:+variations+on+a+common+theme.">Cytokinesis in development and disease: variations on a common theme.</a> Cell Mol Life Sci. 64 (23), 3044-3058 (2007).</li><li>Daniels, M. J., Wang, Y., Lee, M., Venkitaraman, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+cytokinesis+in+cells+deficient+in+the+breast+cancer+susceptibility+protein+BRCA2.">Abnormal cytokinesis in cells deficient in the breast cancer susceptibility protein BRCA2.</a> Science. 306 (5697), 876-879 (2004).</li><li>Storchova, Z., Pellman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+polyploidy+to+aneuploidy,+genome+instability+and+cancer.">From polyploidy to aneuploidy, genome instability and cancer.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 5 (1), 45-54 (2004).</li><li>Lee, I. J., Coffman, V. C., Wu, J. 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Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+the+TRAPP-II+Complex+and+the+Exocyst+in+Membrane+Deposition+during+Fission+Yeast+Cytokinesis.">Roles of the TRAPP-II Complex and the Exocyst in Membrane Deposition during Fission Yeast Cytokinesis.</a> PLoS Biol. 14 (4), e1002437 (2016).</li><li>Liu, J., Wang, H., McCollum, D., Balasubramanian, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drc1p/Cps1p,+a+1,3-beta-glucan+synthase+subunit,+is+essential+for+division+septum+assembly+in+Schizosaccharomyces+pombe.">Drc1p/Cps1p, a 1,3-beta-glucan synthase subunit, is essential for division septum assembly in Schizosaccharomyces pombe.</a> Genetics. 153 (3), 1193-1203 (1999).</li><li>Cortes, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+(1,3)beta-D-glucan+synthase+subunit+Bgs1p+is+responsible+for+the+fission+yeast+primary+septum+formation.">The (1,3)beta-D-glucan synthase subunit Bgs1p is responsible for the fission yeast primary septum formation.</a> Mol Microbiol. 65 (1), 201-217 (2007).</li><li>Cortes, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cooperation+between+Paxillin-like+Protein+Pxl1+and+Glucan+Synthase+Bgs1+Is+Essential+for+Actomyosin+Ring+Stability+and+Septum+Formation+in+Fission+Yeast.">Cooperation between Paxillin-like Protein Pxl1 and Glucan Synthase Bgs1 Is Essential for Actomyosin Ring Stability and Septum Formation in Fission Yeast.</a> PLoS Genet. 11 (7), e1005358 (2015).</li><li>Cortes, J. C., Ishiguro, J., Duran, A., Ribas, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+the+(1,3)beta-D-glucan+synthase+catalytic+subunit+homologue+Bgs1p/Cps1p+from+fission+yeast+suggests+that+it+is+involved+in+septation,+polarized+growth,+mating,+spore+wall+formation+and+spore+germination.">Localization of the (1,3)beta-D-glucan synthase catalytic subunit homologue Bgs1p/Cps1p from fission yeast suggests that it is involved in septation, polarized growth, mating, spore wall formation and spore germination.</a> J Cell Sci. 115 (Pt 21), 4081-4096 (2002).</li><li>Liu, J., Tang, X., Wang, H., Oliferenko, S., Balasubramanian, M. 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C., Sullivan, W., Karess, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reassessing+the+role+and+dynamics+of+nonmuscle+myosin+II+during+furrow+formation+in+early+Drosophila+embryos.">Reassessing the role and dynamics of nonmuscle myosin II during furrow formation in early Drosophila embryos.</a> Mol Biol Cell. 15 (2), 838-850 (2004).</li><li>Figard, L., Xu, H., Garcia, H. G., Golding, I., Sokac, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plasma+membrane+flattens+out+to+fuel+cell-surface+growth+during+Drosophila+cellularization.">The plasma membrane flattens out to fuel cell-surface growth during Drosophila cellularization.</a> Dev Cell. 27 (6), 648-655 (2013).</li><li>Wei, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unique+Spatiotemporal+Activation+Pattern+of+Cdc42+by+Gef1+and+Scd1+Promotes+Different+Events+during+Cytokinesis.">Unique Spatiotemporal Activation Pattern of Cdc42 by Gef1 and Scd1 Promotes Different Events during Cytokinesis.</a> Mol Biol Cell. , (2016).</li><li>Nabeshima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+centromeres+during+metaphase-anaphase+transition+in+fission+yeast:+Dis1+is+implicated+in+force+balance+in+metaphase+bipolar+spindle.">Dynamics of centromeres during metaphase-anaphase transition in fission yeast: Dis1 is implicated in force balance in metaphase bipolar spindle.</a> Mol Biol Cell. 9 (11), 3211-3225 (1998).</li><li>Johnson, A. E., Gould, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dma1+ubiquitinates+the+SIN+scaffold,+Sid4,+to+impede+the+mitotic+localization+of+Plo1+kinase.">Dma1 ubiquitinates the SIN scaffold, Sid4, to impede the mitotic localization of Plo1 kinase.</a> EMBO J. 30 (2), 341-354 (2011).</li><li>Yonetani, A., Chang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+cytokinesis+by+the+formin+cdc12p.">Regulation of cytokinesis by the formin cdc12p.</a> Curr Biol. 20 (6), 561-566 (2010).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fission Yeast: A laboratory Manual. , (2016).</li><li>Hachet, O., Simanis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mid1p/anillin+and+the+septation+initiation+network+orchestrate+contractile+ring+assembly+for+cytokinesis.">Mid1p/anillin and the septation initiation network orchestrate contractile ring assembly for cytokinesis.</a> Genes Dev. 22 (22), 3205-3216 (2008).</li><li>Zhou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+contractile+ring+coordinates+curvature-dependent+septum+assembly+during+fission+yeast+cytokinesis.">The contractile ring coordinates curvature-dependent septum assembly during fission yeast cytokinesis.</a> Mol Biol Cell. 26 (1), 78-90 (2015).</li><li>Chen, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lattice+light-sheet+microscopy:+imaging+molecules+to+embryos+at+high+spatiotemporal+resolution.">Lattice light-sheet microscopy: imaging molecules to embryos at high spatiotemporal resolution.</a> Science. 346 (6208), 1257998 (2014).</li><li>Huang, Y. S., Karashima, T., Yamamoto, M., Hamaguchi, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular-level+investigation+of+the+structure,+transformation,+and+bioactivity+of+single+living+fission+yeast+cells+by+time-+and+space-resolved+Raman+spectroscopy.">Molecular-level investigation of the structure, transformation, and bioactivity of single living fission yeast cells by time- and space-resolved Raman spectroscopy.</a> Biochemistry. 44 (30), 10009-10019 (2005).</li><li>Huang, C. K., Ando, M., Hamaguchi, H. O., Shigeto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disentangling+dynamic+changes+of+multiple+cellular+components+during+the+yeast+cell+cycle+by+in+vivo+multivariate+Raman+imaging.">Disentangling dynamic changes of multiple cellular components during the yeast cell cycle by in vivo multivariate Raman imaging.</a> Anal Chem. 84 (13), 5661-5668 (2012).</li><li>Le Goff, X., Woollard, A., Simanis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+cps1+gene+provides+evidence+for+a+septation+checkpoint+in+Schizosaccharomyces+pombe.">Analysis of the cps1 gene provides evidence for a septation checkpoint in Schizosaccharomyces pombe.</a> Mol Gen Genet. 262 (1), 163-172 (1999).</li></ol>

Aqui nós descrevemos um protocolo para estudar eventos cytokinetic em levedura de fissão de uma forma temporal. O protocolo aqui descrito fornece resolução temporal de diferentes eventos cytokinetic com referência um ao outro; calendário de recrutamento de proteínas ou perda com referência à fase de cytokinetic; estrutura do anel ao longo das diferentes fases de citocinese; e a progressão da citocinese com referência a mitose. Com este protocolo, é possível definir com precisão a fase cytokinetic que podem...

A citocinese, o passo final na divisão celular, é essencial um processo complexo para a diferenciação adequada, o desenvolvimento e sobrevivência de um organismo. Citocinese envolve vários eventos que são organizados para garantir a separação de células com sucesso, mantendo a integridade genômica 1. A citocinese envolve eventos em que um anel de actomiosina, depois de montado sofre constrição, que é simultâneo com a expansão da membrana e estrias, e remodelação da matriz celular extracelular, finalmente seguido por abscisão célula 1, 2, 3. Organização indevido de eventos cytokinetic pode levar a defeitos de separação de células e de ploidia, e pode causar doenças como câncer 4, 5, 6, 7, 8. Os princípios fundamentais que permitem SRGANIZAÇÃO de eventos cytokinetic não são bem compreendidos, conduzindo assim a bloqueios na nossa compreensão da etiologia destas doenças. A levedura Schizosaccharomyces pombe (S. pombe) é um excelente sistema modelo para estudar a citocinese devido à natureza conservada das proteínas envolvidas 1. Em levedura, após actomiosina conjunto do anel, o anel entra em uma fase de maturação / pausa onde não contraem 9. Maturação termina com o início da constrição do anel actomiosina, concomitante com franzindo a membrana e ingresso septo. Trabalho seminal ao longo dos anos deram-nos uma boa compreensão do conjunto do anel actomiosina na fissão de levedura 1, 9, 10. Em alguns eucariotas, incluindo levedura de fissão, a montagem bem-sucedida do anel actomiosina não é suficiente para franzir membrana. na flevedura issão, anel de constrição por si só não fornece força suficiente para superar a pressão de turgescência interna para a formação do sulco 11. Um modelo recente indica que esta força é, em vez fornecido pelo septo ingresso 11. Noutro modelo, o papel da extensão da membrana de plasma tem sido sugerido para contribuir para a formação de sulco 12, 13. Constrição do anel e franzindo a membrana não ocorrem na temperatura Bgs1 / CPS1 cps1-191 mutante sensível, a principal enzima para a formação do septo primário 14, 15. Células sem Bgs1 mostrar septo primário defeituoso e prolongada constrição do anel 15, 16. Bgs1 é recrutado para o site da divisão celular para ingresso septo durante a maturação após actomiosina conjunto do anel 17, 18. Similarly, durante celularização em embriões de Drosophila, anel de constrição é bifásica com um significativamente lenta taxa de constrição inicial 19, assemelhando-se a fase de maturação observada em levedura. Constrição anel bifásica pode abrandar franzindo a membrana para permitir a expansão suficiente membrana 20 e a modificação da matriz extracelular. Isto sugere que, após actomiosina conjunto de anel, anel de constrição ocorre de forma eficiente apenas quando a célula tenha satisfeito os requisitos para a formação de sulco. Não está bem compreendido que as condições são necessárias para a constrição do anel actomiosina após a montagem do anel, nem os eventos moleculares que regulam este processo. Temos demonstrado recentemente que, após anel actomiosina montagem da pequena GTPase Cdc42 sofre um padrão de ativação espaço-temporal única 21. Este padrão é estabelecido pelo padrão de localização única dos factores de troca de nucleótidos de guanidina CDC42 (GEFs) que activam Cdc42. O GEF Gef1 localiza ao anel actomiosina montado e promove aparecimento da constrição do anel e ingresso de septo, enquanto SCD1 localiza na membrana franzindo e promove a formação normal septo. Nós achamos que o padrão de ativação Cdc42 estabelecida por seus GEFs levar à regulamentação de eventos cytokinetic distintas. Para entender o mecanismo molecular de eventos que, eventualmente, levar à separação de células após a montagem do anel de actomiosina, é preciso seguir os eventos cytokinetic distintas no tempo e no espaço. Em levedura, citocinese envolve primeiro o conjunto de nós precursoras ao redor do núcleo, que acabou por recrutar a miosina tipo II, o formin Cdc12 e outras proteínas necessárias para a montagem do anel actomiosina. Para tempo os eventos cytokinetic distintas e fornecem um quadro de referência, a separação de marcadores de corpos polares de fusos (formação do fuso) é considerado como tempo de 0 22. A montagem do the actomiosina anel pode ser seguida por monitorização ao longo do tempo a intensidade de uma proteína de anel de actomiosina fluorescente etiquetado, tais como o tipo de cadeia leve reguladora da miosina II Rlc1. Aqui nós descrevemos uma abordagem microscópica para analisar diferentes estágios de citocinese ao longo do tempo.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Yeast extract media</td>
			<td>Sunrise Science Products</td>
			<td>YES 225</td>
			<td>0.5% w/v yeast extract, 3% w/v glucose, 225mg/L adenine, histidine, leucine, uracil, and lysine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>SeaKem LE agarose, Lonza</td>
			<td>50001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4544</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bottomed culture dish</td>
			<td>MatTek Corporation</td>
			<td>P35G-1.5-14-C</td>
			<td>Coverslip No. 1.5 was used. This will vary as per the microscope specifications used.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VT-Hawk 2D array laser scanning confocal microscopy system</td>
			<td>Visitech International, UK</td>
			<td></td>
			<td>with an Olympus IX-83 inverted microscope with a 100X / numerical aperture 1.49 UAPO lens (Olympus) and EM-CCD digital camera (Hamamatsu).&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spatiotemporal analysis of cytokinetic events in fission yeast

A citocinese, o passo final na divisão celular é crítica para a manutenção da integridade do genoma. cytokinesis adequada é importante para a diferenciação celular e desenvolvimento. A citocinese envolve uma série de eventos que são bem coordenados no tempo e no espaço. A citocinese envolve a formação de um anel de actomiosina no local de divisão, seguido de constrição do anel, a formação de sulco de membrana e remodelação da matriz extracelular. A levedura de fissão, Schizosaccharomyces pombe (S. pombe) é um sistema modelo bem estudado que revelou com clareza substancial dos eventos iniciais em citocinese. No entanto, nós não entendemos claramente como diferentes eventos cytokinetic são coordenadas espaço-temporalmente. Para determinar isso, é preciso analisar os diferentes eventos cytokinetic em grandes detalhes no tempo e no espaço. Aqui nós descrevemos uma abordagem microscopia para examinar diferentes ev cytokineticentos em células vivas. Com esta abordagem, é possível de tempo diferentes eventos cytokinetic e determinar o tempo de recrutamento de proteínas diferentes durante a citocinese. Além disso, descreve-se os protocolos para comparar localização de proteínas, e de distribuição no local de divisão celular. Este é um protocolo básico para estudar citocinese na levedura de fissão e também pode ser utilizado para outras leveduras e sistemas de fungos.

Células de levedura que expressam o marcador de anel, Rlc1-GFP (verde, Figura 2) e o fuso marcador de corpos polares de Sad1-mCherry (vermelho, Figura 2) foram fotografadas durante citocinese. O início de marcador de corpos polares de fusos (seta branca, as Figuras 2A, B) é considerada como o tempo 0. sinal Rlc1-GFP aparece no momento -4 min com referência à separação de corpos polares de fuso (seta vermelha, as Figuras 2A, 2B). S...

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Spatiotemporal Analysis of Cytokinetic Events in Fission Yeast

A levedura de fissão, Schizosaccharomyces pombe é um excelente sistema modelo para estudar a citocinese, a fase final na divisão celular. Aqui nós descrevemos uma abordagem microscopia para analisar diferentes eventos cytokinetic em células de levedura de fissão ao vivo.

Análise espacial e temporal da Cytokinetic Eventos na levedura de fissão

Cytokinesis, the final step in cell division is critical for maintaining genome integrity. Proper cytokinesis is important for cell differentiation and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Analysis of the Development of a Morphological Phenotype as a Function of Protein Concentration in Budding Yeast

Análise do desenvolvimento de um fenótipo morfológico como uma função da concentração de proteínas em levedura de brotamento

Gene deletion and protein overexpression are common methods for studying functions of proteins. In this article, we describe a protocol for analysis of ...

Biologia

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

Quantitativas de células vivas de Análise de microscopia de fluorescência de levedura

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Live Cell Imaging of Early Autophagy Events: Omegasomes and Beyond

Imagens de células vivas dos primeiros autofagia Eventos: Omegasomes and Beyond

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Spatiotemporal Mapping of Motility in Ex Vivo Preparations of the Intestines

Spatiotemporal Mapping of Motility in Ex Vivo Preparations of the Intestines

Mapeamento espacial e temporal da motilidade em<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Preparações dos intestinos

Multiple approaches have been used to record and evaluate gastrointestinal motility including: recording changes in muscle tension, intraluminal pressure, ...

Microscopy of Fission Yeast Sexual Lifecycle

Microscopia do ciclo de vida sexual por fissão de levedura

The fission yeast Schizosaccharomyces pombe has been an invaluable model system in studying the regulation of the mitotic cell cycle progression, the ...

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Aplicações de pHluorin para Quantitative, Kinetic e de alta capacidade: Análise de endocitose em brotamento Yeast

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Imagens de alta resolução e Análise de individuais Astral microtúbulos Dynamics em brotamento Yeast

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4D microscopia de levedura

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Quantifying Spatiotemporal Parameters of Cellular Exocytosis in Micropatterned Cells

Quantificando parâmetros espáteris de exocitose celular em células micropatteradas

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