Name: intravital microscopy of tumor-associated vasculature using advanced dorsal skinfold window chambers on transgenic fluorescent mice
Uploaded: 2018-01-19T12:30:00
Duration: 8 min 52 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intravital Microscopy of Tumor-associated Vasculature Using Advanced Dorsal Skinfold Window Chambers on Transgenic Fluorescent Mice at JoVE.com

نود أن نشكر هابيرين فإن رين وكروم دي ريني لتنميتها والتبرع بخط انوستاج-التجارة والنقل، جوست أ فب Rens لمساعدته التقنية مع عمل الحيوان، والقائمين على رعاية الحيوان للمساعدة. مرافق الفحص المجهري المستخدمة جزء من مركز التصوير الضوئي إيراسموس، ونود أن نشكر موظفي منظمة المؤتمر الإسلامي لخدمتهم. هذه الدراسة كانت تدعمها منحة 2000 دك-2224 من جمعية السرطان الهولندية، "Vereniging تروستفوندس" جامعة إيراسموس في روتردام، و "Stichting إيراسموس هيلكونديج كانكيرونديرزوك"، ونحن نشكر أعضاء اللجان على التبرع السخي.

<ol>
	<li>Massoud, T. F., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+imaging+in+living+subjects:+seeing+fundamental+biological+processes+in+a+new+light.">Molecular imaging in living subjects: seeing fundamental biological processes in a new light.</a> Genes Dev. 17, 545-580 (2003).</li><li>Ellenbroek, S. I., van Rheenen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+hallmarks+of+cancer+in+living+mice.">Imaging hallmarks of cancer in living mice.</a> Nat Rev Cancer. 14, 406-418 (2014).</li><li>Brown, E., Munn, L. L., Fukumura, D., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+tumors.">In vivo imaging of tumors.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2010 (7), (2010).</li><li>Palmer, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+optical+molecular+imaging+and+analysis+in+mice+using+dorsal+window+chamber+models+applied+to+hypoxia,+vasculature+and+fluorescent+reporters.">In vivo optical molecular imaging and analysis in mice using dorsal window chamber models applied to hypoxia, vasculature and fluorescent reporters.</a> Nat. Protocols. 6, 1355-1366 (2011).</li><li>Seynhaeve, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+necrosis+factor+alpha+mediates+homogeneous+distribution+of+liposomes+in+murine+melanoma+that+contributes+to+a+better+tumor+response.">Tumor necrosis factor alpha mediates homogeneous distribution of liposomes in murine melanoma that contributes to a better tumor response.</a> Cancer Res. 67, 9455-9462 (2007).</li><li>Schiffelers, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ligand-targeted+liposomes+directed+against+pathological+vasculature.">Ligand-targeted liposomes directed against pathological vasculature.</a> J Liposome Res. 12, 129-135 (2002).</li><li>Straetemans, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-cell+receptor+gene+therapy+in+human+melanoma-bearing+immune-deficient+mice:+human+but+not+mouse+T+cells+recapitulate+outcome+of+clinical+studies.">T-cell receptor gene therapy in human melanoma-bearing immune-deficient mice: human but not mouse T cells recapitulate outcome of clinical studies.</a> Hum Gene Ther. 23, 187-201 (2012).</li><li>Pittet, M. J., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+imaging.">Intravital imaging.</a> Cell. 147, 983-991 (2011).</li><li>van Haperen, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+expression+of+endothelial+nitric+oxide+synthase+fused+to+green+fluorescent+protein+in+transgenic+mice.">Functional expression of endothelial nitric oxide synthase fused to green fluorescent protein in transgenic mice.</a> Am J Pathol. 163, 1677-1686 (2003).</li><li>Muzumdar, M. D., Tasic, B., Miyamichi, K., Li, L., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+global+double-fluorescent+Cre+reporter+mouse.">A global double-fluorescent Cre reporter mouse.</a> Genesis. 45, 593-605 (2007).</li><li>Manzoor, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+limitations+in+nanoparticle+drug+delivery:+triggered,+intravascular+release+to+improve+drug+penetration+into+tumors.">Overcoming limitations in nanoparticle drug delivery: triggered, intravascular release to improve drug penetration into tumors.</a> Cancer Res. 72, 5566-5575 (2012).</li><li>Pitulescu, M. E., Schmidt, I., Benedito, R., Adams, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+gene+targeting+in+the+neonatal+vasculature+and+analysis+of+retinal+angiogenesis+in+mice.">Inducible gene targeting in the neonatal vasculature and analysis of retinal angiogenesis in mice.</a> Nat Protoc. 5, 1518-1534 (2010).</li><li>Tual-Chalot, S., Allinson, K. R., Fruttiger, M., Arthur, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+mount+immunofluorescent+staining+of+the+neonatal+mouse+retina+to+investigate+angiogenesis+in+vivo.">Whole mount immunofluorescent staining of the neonatal mouse retina to investigate angiogenesis in vivo.</a> J Vis Exp. , e50546 (2013).</li><li>Hobbs, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+transport+pathways+in+tumor+vessels:+role+of+tumor+type+and+microenvironment.">Regulation of transport pathways in tumor vessels: role of tumor type and microenvironment.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 4607-4612 (1998).</li><li>Minchinton, A. I., Tannock, I. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+penetration+in+solid+tumours.">Drug penetration in solid tumours.</a> Nat Rev Cancer. 6, 583-592 (2006).</li><li>Koning, G. A., Eggermont, A. M., Lindner, L. H., Hagen, t. e. n., L, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperthermia+and+thermosensitive+liposomes+for+improved+delivery+of+chemotherapeutic+drugs+to+solid+tumors.">Hyperthermia and thermosensitive liposomes for improved delivery of chemotherapeutic drugs to solid tumors.</a> Pharm Res. 27, 1750-1754 (2010).</li><li>Seynhaeve, A. L., Eggermont, A. M., ten Hagen, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF+and+manipulation+of+the+tumor+cell-stromal+interface:+&amp;#34;ways+to+make+chemotherapy+effective&amp;#34;.">TNF and manipulation of the tumor cell-stromal interface: &amp;#34;ways to make chemotherapy effective&amp;#34;.</a> Front Biosci. 13, 3034-3045 (2008).</li><li>Brouckaert, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+necrosis+factor-alpha+augmented+tumor+response+in+B16BL6+melanoma-bearing+mice+treated+with+stealth+liposomal+doxorubicin+(Doxil)+correlates+with+altered+Doxil+pharmacokinetics.">Tumor necrosis factor-alpha augmented tumor response in B16BL6 melanoma-bearing mice treated with stealth liposomal doxorubicin (Doxil) correlates with altered Doxil pharmacokinetics.</a> Int J Cancer. 109, 442-448 (2004).</li><li>Hoving, S., Seynhaeve, A. L., van Tiel, S. T., Eggermont, A. M., ten Hagen, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Addition+of+low-dose+tumor+necrosis+factor-alpha+to+systemic+treatment+with+STEALTH+liposomal+doxorubicin+(Doxil)+improved+anti-tumor+activity+in+osteosarcoma-bearing+rats.">Addition of low-dose tumor necrosis factor-alpha to systemic treatment with STEALTH liposomal doxorubicin (Doxil) improved anti-tumor activity in osteosarcoma-bearing rats.</a> Anticancer Drugs. 16, 667-674 (2005).</li><li>Gabizon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolonged+circulation+time+and+enhanced+accumulation+in+malignant+exudates+of+doxorubicin+encapsulated+in+polyethylene-glycol+coated+liposomes.">Prolonged circulation time and enhanced accumulation in malignant exudates of doxorubicin encapsulated in polyethylene-glycol coated liposomes.</a> Cancer Res. 54, 987-992 (1994).</li><li>Bergers, G., Benjamin, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumorigenesis+and+the+angiogenic+switch.">Tumorigenesis and the angiogenic switch.</a> Nat Rev Cancer. 3, 401-410 (2003).</li><li>Eilken, H. M., Adams, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+endothelial+cell+behavior+in+sprouting+angiogenesis.">Dynamics of endothelial cell behavior in sprouting angiogenesis.</a> Curr Opin Cell Biol. 22, 617-625 (2010).</li><li>Nakasone, E. S., Askautrud, H. A., Egeblad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+drug+responses+in+the+tumor+microenvironment+in+mouse+models+of+breast+cancer.">Live imaging of drug responses in the tumor microenvironment in mouse models of breast cancer.</a> J Vis Exp. , e50088 (2013).</li><li>van Vliet, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MR+angiography+of+tumor-related+vasculature:+from+the+clinic+to+the+micro-environment.">MR angiography of tumor-related vasculature: from the clinic to the micro-environment.</a> Radiographics. 25, S85-S97 (2005).</li><li>Dicheva, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cationic+thermosensitive+liposomes:+a+novel+dual+targeted+heat-triggered+drug+delivery+approach+for+endothelial+and+tumor+cells.">Cationic thermosensitive liposomes: a novel dual targeted heat-triggered drug delivery approach for endothelial and tumor cells.</a> Nano Lett. 13, 2324-2331 (2013).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+intratumoral+nanoparticle+extravasation+and+penetration+by+mild+hyperthermia.">Improved intratumoral nanoparticle extravasation and penetration by mild hyperthermia.</a> J Control Release. 167, 130-137 (2013).</li></ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

كما الورم والورم سفينة التنمية، فضلا عن الآثار العلاجية الورم، عمليات ديناميكية للغاية، التقييم إينترافيتال أداة أنيقة لجعل تقييم صحيح لهذه العمليات بطريقة تعتمد الزمنية ومكانية. مع زيادة توافر علامات خلية حية وخلق الحيوانات المحورة وراثيا، والنهوض بأساليب التصوير، تصوير إينترافيتال أصبحت أكثر وأكثر شعبية. على الرغم من أن علم الأنسجة بشكل روتيني لا يزال يستخدم، ويمكن استخدام العديد من علامات تحديد الخلايا والهياكل، تقطيع الأنسجة له العيوب عند التحقيق في العمليات الحيوية. مطلوب تشريح الأنسجة، توفير معلومات ثابتة فقط؛ تثبيت يؤثر على نوعية النسيج؛ وتقطيع الأضرار التفاعلات الخلوية. أيضا، عند التحقيق في العمليات الحيوية، يتطلب تشريح الأنسجة في نقاط زمنية مختلفة، وكثيراً ما يفترض، كمية كبيرة من الحيوانات. مع التصوير إينترافيتال، يمكن تقييم الأبعاد المكانية XYZ وبعدا إضافيا من الزمن في الحيوان نفسه، مما يجعل تحديد المواقع المناسبة لمختلف اللاعبين الممكن في المكان والزمان. ولذلك، لا غاب عن النقاط الزمنية المثلى، وإلى حد كبير هو خفض عدد الحيوانات المستخدمة لكل تجربة. ثانيا، يمكن استقراء النافذة الزمنية المنشأة مع التقييم إينترافيتال لتحسين استخراج الأنسجة. ثالثا، يمكن تحديدها إينترافيتالي مرحلة النمو السفينة المطلوب والملون كنسيج كل جبل.
تصميم إينترافيتال المذكورة في هذه المخطوطة يستخدم مزيجاً من الحيوانات المحورة وراثيا معربا عن تسمية فلورسنت في خلايا بطانية، تعديل الظهرية skinfold الدائرة النموذجية، ومجهر مولتيفوتون [كنفوكل] مخصصة.
خلايا بطانية الذهاب من خلال عدد من المراحل21،22 خلال الأوعية، وهذه المراحل غالباً ما يتبين في وقت واحد في ورم. استخدام السطر الماوس انوستاج-التجارة والنقل، يمكن اتباعها من خلايا بطانية الفردية، ويمكن تتبع حتى فيلوبوديا ديناميات. ومن ثم نموذجا جيدا لدراسة التنمية السفينة إينترافيتالي. اعتماداً على التسميات مضمن مسبقاً إلى الوقت الحاضر، يمكن استخدام وكلاء الفلورية القابلة للحقن لتقييم تشكيل التجويف وتدفق الدم، والتسرب، وتطهير الدم. يتم تصويرها الماوس باستمرار ليصل إلى 5 س. من الممكن تقييم طويلة الأجل للحيوان عندما يتم اتخاذ احتياطات عدة فيما يتعلق بتخدير الحيوان، الذي كان وصف سابقا23. كما تركز هذه الأبحاث على السرطان، تم زرع أورام الأنسجة أو الخلايا. ومع ذلك، نحن أيضا جربت الامشاط والرئتين الجنينية. ومع ذلك، معدل نمو الأنسجة قيد الدراسة هو الحد، بعد بضعة أسابيع، يبدأ الجلد لتنمو، الذي يمكن أن يكون مشكلة مع الأورام بطيئة النمو أو الأنسجة.
أثناء مرحلة التحقق، الظهرية skinfold نافذة غرفة تعديل إلى حد كبير مقارنة ب النموذج التقليدي4. الإطارات هي التي شيدت من المواد الاصطناعية أوتوكلافابل والخفيفة والصغيرة، مع مساحة لعرض نافذة كبيرة. هوك للحلقة من الاحتفاظ (الشكل 1Bg، رأس السهم الأبيض) يستخدم فقط لإزالة سهلة من الطوق. يمكن استخدام الحلقات التجنيب دون خطاطيف عند هذه تتداخل مع التصوير. الجلد لا تمتد كثيرا، والتيسير لا يحدث في هذا النموذج، والالتهابات إلا نادراً. هذه التعديلات الحد من إزعاج الحيوانات وتحسين الإجراء الحيوانية إلى حد كبير. أيضا، يمكن إزالة الأجزاء المعدنية بسهولة عند التصوير الورم باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي24.
يمكن اعتماد أي مجهر إينترافيتالي الصورة الظهرية الدوائر skinfold. الشرط الرئيسي هو المساحة المتوفرة بين مرحلة مجهر وعدسة الهدف. من جوانب هامة التي تؤثر على تصوير الحركة. لمنع حركة القطع الأثرية، وينبغي استخدام منصة التي تناسبها في الجدول المجهر (بعد إزالة جميع إدراجات) ويدعم الماوس. فإنه ليس من الضروري لكبح جماح الماوس عندما يكون تحت التخدير، وأنه من الأفضل ترك الماوس التنفس بحرية. ومع ذلك، هو انسحب النافذة إلى ساحة، إعطاء التثبيت الأمثل لمجال الرؤية (أي الورم مرئياً من خلال الدائرة النافذة). يتم تسخين المنهاج باستخدام منصة إلكترونية تدفئة، كما تستخدم لتدفئة الحيوان. هذا المنهاج داخل المنظمة، ويمكن الحصول على التفاصيل عند الطلب. عدسة الهدف عالية الدقة هو ضرورة عند تقييم العمليات داخل الخلية، ويجعل من الممكن لتميز بين السيتوبلازم والنواة. استخدام عدسة مدبب مع الدقة بصرية جيدة (نا عالية) لكن طويلة نسبيا العمل عن بعد (يفضل أن يكون 2 مم أو أعلاه) ينصح. القيد في التصوير من الاختراق عمق وكثافة فلوري من بطاقات العنونة. وعلاوة على ذلك، يجب تجنب فوتوبليتشينج، الضيائية، وتشبع أثناء التصوير.
واستخدمت هنا، متكاملة من [كنفوكل] مولتيفوتون ومجهر [كنفوكل]. مولتيفوتون تستقيم، في حين [كنفوكل] مجهر مقلوب. ميزة المجهر تستقيم هي سهلة الاستخدام للعدسات غمر المياه. هذه العدسات لها نا عالية وطويلة المسافة العمل، حتى في تكبير عالية (مثلاً 20 أو 40 س). على وجه التحديد، من المستحسن الحصول على عدسة غمر مياه 1.0 نا س 20، الذي يباع في عدة شركات. أن ندرك أنه عندما يتم استخدام عدسات الغمر، عدسة الهدف وغمر السائل تحتاج إلى يتم تسخينها إلى 37 درجة مئوية. لأفضل الصور، من المستحسن استخدام الإعدادات المثلى [كنفوكل] (أي الثقب في 1 وحدة متجددة الهواء، الليزر طاقة منخفضة قدر المكاسب المحتملة، ليست عالية جداً (لا سيما إذا كان الكسب يدخل الضوضاء)، خط السرعة كحد أقصى، ولا في المتوسط من الأشعة). التعرض المفرط والتشبع، والفرق بين الصور في كثافة خرق نوعية البيانات. من المستحسن لمنع التعرض المفرط والتشبع. وهذا يمكن التحايل عليها بالحصول على الصور في اكتساب مختلف الإعدادات. تغيير الكسب هو أسهل طريقة لتغيير سطوع الصورة. إذا لزم الأمر، يمكن تعديل قوة الليزر. لتوحيد جودة الصورة، ويمكن استخدام الشرائح بكثافة fluorescence ثابتة. واحد يجب أن نضع في اعتبارنا أن حتى عندما يتم تعيين المجهر على النحو الأمثل، يتم تحديد جودة الصورة إلى حد كبير بنوعية الدائرة النافذة والأنسجة
عند مسح علامات مضيئة متعددة في وقت واحد، التسييل خلال، التي تم الكشف عن فلوروفوري واحد في قناة واحدة أخرى، ويجب تجنب. تجنب التسييل خلال باستخدام مزيج من فلوروفوريس مع الحد الأدنى من أطياف متداخلة ومتتابعة المسح بين الإطارات. تم تفحص الصور المعروضة هنا باستخدام عمليات التفحص متسلسلة 3 (المسار 1: التجارة والنقل، فعلت أو fluor647 مع الليزر 488 و 633؛ المسار 2: والرودامين، دوكسيل أو متوماتو مع الليزر 543؛ وتتبع 3: هويشت مع الليزر 405).
ويرد هنا إمكانية تقييم عدة مراحل الورم سفينة التنمية ونصيحة خلية حيوية، وتشكيل التجويف، والتسرب، وتلف الأوعية الدموية. استخدام خط انوستاج-التجارة والنقل، وتكتشف مناطق الورم مع سرير الأوعية الدموية مدمرة بسهولة بحبيبات بقايا الخلوية لا تزال تعرب عن التجارة والنقل. تم الكشف عن لا عامل عن طريق الحقن في هذه المناطق، مما يشير إلى عدم وجود تدفق. وهذا يعني أن إدارة وكلاء العلاج الكيميائي سوف لا تصل إلى هذه المناطق أما. ومع ذلك، يمكن تدمير السفينة أيضا نتيجة علاجية. التقييم المسبق للورم، للتحقق من تدمير السفينة قبل المعالجة، هو شرط أساسي لتقييم علاجية دقيقة ويمكن بسهولة إجراء استخدام هذا التصميم التجريبي.
وهناك عدد كبير احتمالات التي يمكن استخدام الفحص المجهري إينترافيتال، ومناقشة مفصلة خارج نطاق هذا المنشور. لإعطاء فكرة موجزة، والتطبيقات الممكنة تشمل دراسات عن تراكم تشريعات في أنسجة الورم، وتطوير السفن (مثلاً، العدد من السفن، والفروع، وتقاطعات) وتدفق الدم، والتفاعلات خلية خلية، خلية الاستهداف، وتجهيز داخل الخلايا، فضلا عن الأمثلة المذكورة أعلاه وهو موضح هنا. كما يستند التحليل إلى الأسفار، أن ندرك شدة تقلبات بسبب نوعية الإطار أو الأنسجة. الأسفار من أعلى أو أسفل الطائرة من العرض أيضا، ورم الأنسجة سميكاً نسبيا، له تأثير على الإشارة في الصورة. فمن الأفضل الجمع بين التحليل الكمي الصورة مع القياسات موضوعية. على سبيل المثال، إذا كانت مهتمة بتركيزات المخدرات، إزالة ورم الأنسجة من النافذة بعد الفحص المجهري إينترافيتال وتحديد الدواء المحتوى باستخدام مع [هبلك] لمقارنتها بالصور [كنفوكل].
يمكن إجراء تقييم استجابة الورم بشكل جيد باستخدام هذا النموذج، ولكن مع بعض الاحتياطات. يجب أن يدرك المرء أن ينمو أيضا الأورام إلى الداخل، في الجلد. ويمكن إجراء قياسات ثلاثية الأبعاد إذا كان الاختراق العميق ما يكفي لتغطية كامل الورم. وفي هذه حالة، يجب استخدام الأصباغ استعملنا. قاعة نافذة كالموضحة هنا يتعامل مع الأورام في بيئة جلد، ومن المهم أن نشير إلى أن الإطار يحافظ على درجة حرارة أقل قليلاً من درجة حرارة الجسم الماوس العادية. ولذلك، فمن الأفضل لدراسة الأورام في الإعداد البيئي الصغير حق إلى تأكيد الدراسات إينترافيتال مع الظهرية skinfold إطار الدائرة. الأهم من ذلك، الظهرية الدائرة skinfold يقدم نظرة ثاقبة حركية العمليات والآليات، يوفر أساسا مفيداً لتحسين العلاج. أيضا، يمكن الحصول على معلومات إضافية بشأن بيوديستريبوشن والدوائية. تقليديا، يتم تنفيذ هذه الدراسات بيوديستريبوشن بعلاج الحيوانات الحاملة للورم وتشريح الأورام/أجهزة لقياس الإقبال على المخدرات. باستخدام هذا النموذج إينترافيتال، ويمكن توفير موقع إينتراتومورال للمخدرات (أي داخل الأوعية، إينتراتومورال، داخل الخلايا، أو النووية)5،،من2526. ليس فقط هو موقع المخدرات كشفت، ولكن أيضا الوقت النافذة-من-الفرصة للاستفادة المثلى.
استخدام التصميم التجريبي الموضحة في هذه المقالة، يمكن تقييم مجموعة واسعة من المعلمات في إعداد الزماني والمكاني. على وجه التحديد، نعرض هنا أن إينترافيتال المجهري يوفر أفكاراً هامة في ديناميات التنمية السفينة الورم والاستجابة العلاجية.

في حين أن الدراسات في المختبر يتيح التصوير عالية الدقة الحركية للعمليات، لا تمكن التجريب في المختبر التقييم في السياق الصحيح. على سبيل المثال، لا يمكن دراسة التفاعل بين الخلايا السرطانية مع مقصورات السدويه المعدية المعوية أو إيصال الأدوية وتوزيعها داخل ورم في لوحة ثقافة. ولذلك تستخدم نماذج حيوانية لتقليد الفسيولوجيا البشرية وعلم الأمراض. بيد أن التصوير الطولي للعمليات، ولا سيما في قرار سوبسيلولار، التحدي. التصوير الأساليب الجزيئية، مثل التصوير بالرنين المغناطيسي (التصوير بالرنين المغناطيسي)، انبعاث فوتون واحد تم حسابها التصوير المقطعي (SPECT)، والتصوير المقطعي بالبوزيترون (PET)، وقد عمق تغلغل جيد لكن قرار عدم أو تفشل لتوضيح البنى التشريحية. التصوير الضوئي ويوفر دقة عالية ويتيح تصوير هياكل، ولكن كان مصحوبا بالفقراء لاختراق الحد الأدنى1. التطبيق للفحص المجهري إينترافيتال في تركيبة مع نافذة غرفة التكنولوجيات، مثل الظهرية skinfold أو نافذة البطن، يسمح الاستبانة التصوير في فيفو2،،من34. هذه التكنولوجيا بمزايا واضحة، كما أنه يسمح للتصوير الطولي على مدى ساعات وحتى أيام، لتصوير العمليات في السياق الصحيح (مثلاً، تفاعلات الخلية الخلية في الأنسجة المصورة)، وقرارات في حدود بصري المجاهر المتقدمة [كنفوكل] ومولتيفوتون.
إدخال الحيوانات المحورة وراثيا مع تسميات الفلورسنت الخلية أو البروتين محددة يفتح عدد كبير احتمالات للتجريب في فيفو و السابقين فيفو . ليمكن دراسة مثيل، التفاعلات خلية خلية، وإنتاج البروتينات، والاستجابة للعلاج أو التلاعب في فيفو استخدام هذه النماذج5،6،،من78. الأهم من ذلك، ضع في مكان ووقت يمكن تحديده بمعدات التصوير السليم والمنهجية. هنا، والفحص المجهري إينترافيتال الحيوانات معربا عن علامة غشائي في تركيبة مع وكلاء القابلة للحقن في ورم مزروع في تعديل الظهرية skinfold نافذة غرفة يرد.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D1145</td>
			<td>Supplemented with 10% FCS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-versene (EDTA)</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE17-161E</td>
			<td>Make a 0.1% solution in PBS, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Window frames</td>
			<td>Costum made</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filler glass 10 mm, 0.55 mm</td>
			<td>Abrisia technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass 12mm, #1 thickness</td>
			<td>Thermo Scientific/VWR</td>
			<td>631-0713</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hear removal gel (veet)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for sensitive skin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye ointment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorfine hydrochloride</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>use 0.05 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia unit</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>O2/Isoflurane inhalation unit with an chamber and tubeing+cone</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>insulin syringe 0.5ml x 12.7mm 29g, green</td>
			<td>BD</td>
			<td>324824</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles 23G 1 1/4&#34;</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4657640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles 25G 5/8&#34;</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4657853</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures silkan 0.7</td>
			<td>Braun</td>
			<td>1134019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuts</td>
			<td>Jeveka</td>
			<td>934 A2 1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bolts</td>
			<td>Jeveka</td>
			<td>84 A2 1 10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% NaCl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope + software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>The space between table and objective need to be wide enough to hold the animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heated temperature controlled platform</td>
			<td>Costum made</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Window holder</td>
			<td>Costum made</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tetramethylrhodamine 2,000,000 MW dextran</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D7139</td>
			<td>100 &#181;g/mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa-fluor 647 10,000 MW dextran</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D22914</td>
			<td>100 &#181;g/mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>H1399</td>
			<td>25 &#181;g/mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pegulated nanoparticles</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>ref 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LEICA TCS SP5 Multiphoton Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LAS AF Software</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intravital microscopy of tumor-associated vasculature using advanced dorsal skinfold window chambers on transgenic fluorescent mice

الورم والورم سفينة التنمية، فضلا عن استجابة الورم للمداواة، هي العمليات البيولوجية ديناميكية للغاية. علم الأنسجة ويوفر معلومات ثابتة وغالباً ما لا يكفي لتفسير صحيح. التقييم إينترافيتال، الذي يتبع عملية في الوقت المناسب، معلومات إضافية وغالباً غير متوقعة. مع خلق الحيوانات المحورة وراثيا معربا عن علامات خلية على حدة وتتبع الخلية الحية وإدخال تحسينات على معدات التصوير وتطوير عدة دوائر التصوير، الفحص المجهري إينترافيتال قد أصبح أداة هامة فهم أفضل العمليات البيولوجية. وتصف هذه الورقة تصميم تجريبي للتحقيق من ورم سفينة التنمية والآثار العلاجية بطريقة المكانية والزمانية. باستخدام هذا الإعداد، يمكن تصور مرحلة التنمية السفينة وتشكيل الخلية والتجويف تلميح، تدفق الدم، والتسرب، سرير الأوعية الدموية الراسخة وتدمير الأوعية الدموية واتباعها. وعلاوة على ذلك، يمكن أيضا الآثار العلاجية ومصير intratumoral وإضفاء الطابع المحلي على العلاج الكيميائي مركبات الواجب اتباعها.

Watch this Scientific Journal Video about Intravital Microscopy of Tumor-associated Vasculature Using Advanced Dorsal Skinfold Window Chambers on Transgenic Fluorescent Mice at JoVE.com

Intravital Microscopy of Tumor-associated Vasculature Using Advanced Dorsal Skinfold Window Chambers on Transgenic Fluorescent Mice

ويصف هذا البروتوكول التصوير إينترافيتال من الفئران المحورة وراثيا معربا عن علامات نيون خلية على حدة. تصوير إينترافيتال يوفر طريقة غير الغازية للملاحظات ذات الدقة العالية في الحيوانات الحية باستخدام windows القابلة للغرس الممكن التصور مجهرية من العمليات من خلالها. هذا الأسلوب مفيد بشكل خاص دراسة العمليات الطولية.

إينترافيتال المجهري لاستخدام المفرج المرتبطة بورم متقدم الظهرية Skinfold الدوائر النافذة في الفئران المعدلة وراثيا نيون

Tumor and tumor vessel development, as well as tumor response to therapeutics, are highly dynamic biological processes. Histology provides static ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Quantifying Glomerular Permeability of Fluorescent Macromolecules Using 2-Photon Microscopy in Munich Wistar Rats

قياس نفاذية كبيبي الجزيئات نيون باستخدام المجهر 2 فوتون في ميونيخ فئران ويستار

Kidney  diseases involving urinary loss of large essential macromolecules, such as  serum albumin, have long been thought to be caused by alterations in ...

Intravital Video Microscopy Measurements of Retinal Blood Flow in Mice

Alterations in retinal blood flow can contribute to, or be a consequence of, ocular disease and visual dysfunction. Therefore, quantitation of altered ...

Construction of Vapor Chambers Used to Expose Mice to Alcohol During the Equivalent of all Three Trimesters of Human Development

بناء غرف بخار يستخدم لفضح الفئران إلى الكحول خلال ما يعادلها من جميع الأثلاث الثلاثة للتنمية البشرية

Exposure to alcohol during development can result in a constellation of morphological and behavioral abnormalities that are collectively known as Fetal ...

Ischemic Tissue Injury in the Dorsal Skinfold Chamber of the Mouse: A Skin Flap Model to Investigate Acute Persistent Ischemia

إصابة الأنسجة الدماغية في دائرة ثنية الجلد الظهري للماوس: A الجلد رفرف نموذج المعنية بالتحقيق في نقص التروية الحاد الثابتة

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are ...

Measuring Ascending Aortic Stiffness In Vivo in Mice Using Ultrasound

Measuring Ascending Aortic Stiffness In Vivo in Mice Using Ultrasound

قياس تصاعدي الأورطي تصلب<em&gt; في فيفو</em&gt; في الفئران باستخدام الموجات فوق الصوتية

We present a protocol for measuring in vivo aortic stiffness in mice using high-resolution ultrasound imaging. Aortic diameter is measured by ultrasound ...

Exergaming in Older People Living with HIV Improves Balance, Mobility and Ameliorates Some Aspects of Frailty

Exergaming في كبار السن الذين يعيشون مع فيروس نقص المناعة البشرية يحسن التوازن والتنقل وإلى التقليل بعض جوانب هشاشة

Approximately 1.2 million people in the United States live with HIV infection. Medical advancements have increased the life expectancy and this cohort is ...

Intravital Microscopy and Thrombus Induction in the Earlobe of a Hairless Mouse

حيوي داخلي المجهري والجلطة التعريفي في شحمة الأذن ماوس بلا شعر

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions ...

Advanced Imaging of Lung Homing Human Lymphocytes in an Experimental In Vivo Model of Allergic Inflammation Based on Light-sheet Microscopy

المتقدمة التصوير من الرئة صاروخ موجه الخلايا الليمفاوية البشرية في التجريبية في نموذج فيفو للالتهاب التحسسي استناداً إلى ورقة الخفيفة الميكروسكوب

Overwhelming tissue accumulation of highly activated immune cells represents a hallmark of various chronic inflammatory diseases and emerged as an ...

Quantitative Analysis of Cellular Composition in Advanced Atherosclerotic Lesions of Smooth Muscle Cell Lineage-Tracing Mice

التحليل الكمي لتكوينها الخلوي في الآفات تصلب الشرايين المتقدمة للعضلات الملساء خلية تتبع النسب الفئران

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel ...

Scratch Migration Assay and Dorsal Skinfold Chamber for In Vitro and In Vivo Analysis of Wound Healing

فحص الهجرة الصفر وغرفة الجلد السمرة لتحليل في المختبر وفي الجسم الحي للشفاء الجروح

Impaired cutaneous wound healing is a major concern for patients suffering from diabetes and for elderly people, and there is a need for an effective ...