Name: isolation of mouse endometrial epithelial and stromal cells for in vitro decidualization
Uploaded: 2017-03-02T13:00:00
Duration: 8 min 37 s
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इस काम के रिसर्च फाउंडेशन-फ़्लैंडर्स (FWO G.0856.13N) और यू लोवेन का अनुसंधान परिषद (ओटी / 13/113) से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया। KDC FWO बेल्जियम द्वारा वित्त पोषित है। एएच ओटी / 13/113 द्वारा वित्त पोषित है। हम confocal खुर्दबीन के उपयोग के लिए यू लोवेन (http://gbiomed.kuleuven.be/english/corefacilities/microscopy/cic/cic.htm) की सेल इमेजिंग कोर सुविधा का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं।

<ol>
	<li>Cummings, A. M., Yochim, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+the+uterus+in+preparation+for+gestation:+a+model+for+the+action+of+progesterone.">Differentiation of the uterus in preparation for gestation: a model for the action of progesterone.</a> J Theor Biol. 106 (3), 353-374 (1984).</li><li>Jabbour, H. N., Kelly, R. W., Fraser, H. M., Critchley, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocrine+regulation+of+menstruation.">Endocrine regulation of menstruation.</a> Endocr Rev. 27 (1), 17-46 (2006).</li><li>Wang, X., Matsumoto, H., Zhao, X., Das, S. K., Paria, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+signals+direct+the+formation+of+tight+junctional+permeability+barrier+in+the+decidualizing+stroma+during+embryo+implantation.">Embryonic signals direct the formation of tight junctional permeability barrier in the decidualizing stroma during embryo implantation.</a> J Cell Sci. 117 (Pt 1), 53-62 (2004).</li><li>Zygmunt, M., Herr, F., Munstedt, K., Lang, U., Liang, O. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+and+vasculogenesis+in+pregnancy.">Angiogenesis and vasculogenesis in pregnancy.</a> Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 110 Suppl 1, S10-S18 (2003).</li><li>Power, M. L., Schulkin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The evolution of the human placenta. , (2012).</li><li>Finn, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+initiation+of+the+decidual+cell+reaction+in+the+uterus+of+the+aged+mouse.">The initiation of the decidual cell reaction in the uterus of the aged mouse.</a> J Reprod Fertil. 11 (3), 423-428 (1966).</li><li>Grant, K. S., Wira, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+mouse+uterine+stromal+cells+on+epithelial+cell+transepithelial+resistance+(TER)+and+TNFalpha+and+TGFbeta+release+in+culture.">Effect of mouse uterine stromal cells on epithelial cell transepithelial resistance (TER) and TNFalpha and TGFbeta release in culture.</a> Biol Reprod. 69 (3), 1091-1098 (2003).</li><li>De Clercq, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+expression+of+transient+receptor+potential+channels+in+human+endometrial+stromal+cells+during+the+luteal+phase+of+the+menstrual+cycle.">Functional expression of transient receptor potential channels in human endometrial stromal cells during the luteal phase of the menstrual cycle.</a> Hum Reprod. 30 (6), 1421-1436 (2015).</li><li>Pieper, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+vimentin+expression+in+cultured+epithelial+cells.">Regulation of vimentin expression in cultured epithelial cells.</a> Eur J Biochem. 210 (2), 509-519 (1992).</li><li>Greaves, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+of+endometriosis+mimics+human+phenotype+and+reveals+insights+into+the+inflammatory+contribution+of+shed+endometrium.">A novel mouse model of endometriosis mimics human phenotype and reveals insights into the inflammatory contribution of shed endometrium.</a> Am J Pathol. 184 (7), 1930-1939 (2014).</li><li>Pierro, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal-epithelial+interactions+modulate+estrogen+responsiveness+in+normal+human+endometrium.">Stromal-epithelial interactions modulate estrogen responsiveness in normal human endometrium.</a> Biol Reprod. 64 (3), 831-838 (2001).</li><li>Kim, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progesterone-dependent+release+of+transforming+growth+factor-beta1+from+epithelial+cells+enhances+the+endometrial+decidualization+by+turning+on+the+Smad+signalling+in+stromal+cells.">Progesterone-dependent release of transforming growth factor-beta1 from epithelial cells enhances the endometrial decidualization by turning on the Smad signalling in stromal cells.</a> Mol Hum Reprod. 11 (11), 801-808 (2005).</li><li>Chen, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coculturing+human+endometrial+epithelial+cells+and+stromal+fibroblasts+alters+cell-specific+gene+expression+and+cytokine+production.">Coculturing human endometrial epithelial cells and stromal fibroblasts alters cell-specific gene expression and cytokine production.</a> Fertil Steril. 100 (4), 1132-1143 (2013).</li><li>Renaud, J., Martinoli, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+Insert+Co-culture+System+of+Two+Cellular+Types+in+the+Absence+of+Cell-Cell+Contact.">Development of an Insert Co-culture System of Two Cellular Types in the Absence of Cell-Cell Contact.</a> J Vis Exp. (113), (2016).</li><li>Arnold, J. T., Kaufman, D. G., Seppala, M., Lessey, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometrial+stromal+cells+regulate+epithelial+cell+growth+in+vitro:+a+new+co-culture+model.">Endometrial stromal cells regulate epithelial cell growth in vitro: a new co-culture model.</a> Hum Reprod. 16 (5), 836-845 (2001).</li><li>Park, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+well-defined+in+vitro+three-dimensional+culture+of+human+endometrium+and+its+applicability+to+endometrial+cancer+invasion.">A well-defined in vitro three-dimensional culture of human endometrium and its applicability to endometrial cancer invasion.</a> Cancer Lett. 195 (2), 185-192 (2003).</li></ol>

लेखकों के पास खुलासे के लिए कुछ भी नहीं है।

Decidualization दौर स्रावित decidual कोशिकाओं में एंडोमेट्रियल stromal कोशिकाओं की प्रोजेस्टेरोन निर्भर भेदभाव है। मानव में, इस प्रक्रिया को मासिक धर्म चक्र के luteal चरण के दौरान सहज होता है और नाड़ी कोशिकाओं के आसपास predecidua के लिए फार्म stromal कोशिकाओं में शुरू की है। हालांकि, मूषक, एक ब्लास्टोसिस्ट की उपस्थिति अनिवार्य decidualization प्रेरित करने के लिए है। तथ्य यह है कि decidualization केवल एंडोमेट्रियल उपकला कोशिकाओं के साथ संपर्क के बाद होता है तात्पर्य है कि महत्वपूर्ण कारकों में अंतर्निहित स्ट्रोमा में decidualization प्रेरित करने के लिए उपकला कोशिकाओं द्वारा स्रावित होते हैं। हालांकि decidualization प्रक्रिया की दीक्षा में इस अंतर को स्वीकार किया जाना चाहिए, तथ्य यह है कि मानव भ्रूण आरोपण decidualization पर और अधिक मजबूत हो जाता है पता चलता है कि इसी तरह के तंत्र को शामिल किया जा सकता है। इन विट्रो में सेल संस्कृतियों अक्सर decidualization की प्रक्रिया के दौरान विशिष्ट अणुओं के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं।फिर भी, उपलब्धता और मानव ऊतकों की राशि एकत्र किया जा सकता है कि अक्सर सीमित है और विविधताओं, जैसे, चक्र चरण, गर्भधारण की संख्या और endometriosis या ग्रंथिपेश्यर्बुदता तरह gynecological रोगों की उपस्थिति के साथ है। इन मुद्दों में से कई murine ऊतक का उपयोग करें कि आसानी से सुलभ और चक्र चरण स्वतंत्र है के द्वारा रोका जा सकता है। murine ऊतक का उपयोग करने का एक और मजबूत लाभ आनुवंशिक रूप से संशोधित मूषक उपयोग करने का अवसर और प्रयोगों की एक बड़ी संख्या सेटअप करने के लिए संभावना है। फिलहाल, कई अलग अलग अलगाव प्रोटोकॉल जानवरों की उम्र में उच्च परिवर्तनशीलता और उपयोग के क्षण में मद चरण में अवधि के साथ साहित्य में वर्णित किया गया है। इस अध्ययन stromal और उपकला कोशिकाओं के प्राथमिक एंडोमेट्रियल सह संस्कृतियों में जो लाभ अलगाव से पहले एस्ट्रोजन का एक दैनिक इंजेक्शन द्वारा एक मानकीकृत estrous चक्र के लिए लिया गया था के लिए एक नई विधि प्रस्तुत करता है। इसके अलावा, एस्ट्रोजन कश्मीर हैNown उपकला और stromal कोशिकाओं जो आगे अलगाव प्रति पैदावार बढ़ जाती है में प्रसार प्रेरित करने के लिए। अलगाव इस पत्र में वर्णित प्रोटोकॉल अनुदान एट अल के आधार पर किया गया था। 7, हालांकि, आगे अनुकूलन कदम उपज, पवित्रता, और अलग अलग सेल संस्कृतियों की व्यवहार्यता बढ़ाने के लिए शामिल किया गया है। सबसे पहले, HBSS हमेशा एंटीबायोटिक दवाओं के साथ सहारा लिया जाता था प्राथमिक संस्कृति के संक्रमण से बचने के लिए। MEEC के अलगाव के दौरान, एक तापमान रूपांतर किया गया था (37 डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट) पहली पाचन के दौरान उपकला कोशिकाओं की फसल बढ़ाने के लिए। इसके बाद, एक अतिरिक्त कदम FBS युक्त अपनी गतिविधि को बाधित करने के लिए मध्यम जोड़कर trypsin पाचन के बाद enzymatic गतिविधि गुस्सा करने के लिए शामिल किया गया था। इसके अलावा, MEECs एक फिल्टर जिनमें से जाल है जो आमतौर पर वर्णन किया गया है (100 माइक्रोन) के रूप में वे अक्सर समूहों और सेल शीट में आने से बड़ा था के माध्यम से पारित किए गए। इसके अलावा, stromal कोशिकाओं द्वारा संक्रमण एक ऐड के प्रदर्शन से कम हो गया थाitional कदम जिसमें MEECs और MESCs गुरुत्वाकर्षण अवसादन के आधार पर अलग हो गए थे। अंत में, MEECs, कांच coverslips के लिए कोशिकाओं की कुर्की बढ़ाने के लिए कोलेजन लेपित coverslips पर वरीयता प्राप्त थे के रूप में यह स्पष्ट हो गया कि uncoated या पीएलएल लेपित गिलास coverslips के लिए लगाव अपर्याप्त था। MESCs के अलगाव के दौरान, कोलैजिनेज़ (1 मिलीग्राम / एमएल) के पाचन में सुधार करने के लिए सहारा लिया जाता था। इसके अलावा, इस कदम पाचन दो प्रतियों में प्रदर्शन किया गया था शेष MEECs के संक्रमण से बचने के लिए। इन सभी अतिरिक्त कदम समरूप सेल आबादी के शुद्ध और व्यवहार्य संस्कृतियों में हुई। सेल की आबादी की शुद्धता immunostaining और QRT- पीसीआर एक stromal मार्कर और एक उपकला मार्कर के रूप में के रूप में cytokeratin vimentin उपयोग कर के साथ मूल्यांकन किया गया था। जाहिर है, vimentin और cytokeratin के एक विपरीत अभिव्यक्ति पैटर्न MEEC और mESC में मनाया गया। हालांकि, यह देखा जा सकता है कि vimentin और cytokeratin के रिश्तेदार mRNA अभिव्यक्ति MEEC संस्कृतियों में समान है। Similगिरफ्तारी के परिणाम, अन्य अनुसंधान समूहों द्वारा प्रकाशित कर रहे हैं जो संस्कृति के अधिग्रहण vimentin अभिव्यक्ति 9 में उपकला कोशिकाओं में। अधिक महत्वपूर्ण vimentin और cytokeratin के रूप में अलग सेल आबादी के immunohistological stainings में मनाया गया के बीच प्रोटीन अभिव्यक्ति में अंतर है। डबल immunostaining से पता चला कि EECS cytokeratin के लिए सकारात्मक थे और ईएससी vimentin के लिए सकारात्मक थे। Immunostaining में इन मार्कर के उपयोग की स्थापना की एक विधि है और standardly प्रकार के 10 सेल का संकेत किया। हालांकि अनुसंधान के एक बहुत mESC की decidualization पर प्रदर्शन किया गया है, यह संभव है कि इस मॉडल में उपकला कोशिकाओं की उपस्थिति decidualization के परिणाम बदल सकता है। सबसे पहले, यह दिखाया गया है कि अगर MEEC mESC-वातानुकूलित माध्यम की उपस्थिति में या एक सह-संस्कृति की स्थापना में एक monolayer करने के लिए विकसित, monolayer एक बेहतर उपकला कोशिका transepithelial विद्युत प्रतिरोध (है कितीर), mESC 7 से स्रावित कारकों से उत्पन्न। इसके अलावा, Pierro एट अल। 11 सबूत है कि उपकला प्रसार, 17β-estradiol से प्रभावित है, stromal कोशिकाओं से स्रावित कारकों द्वारा मध्यस्थता किया जा सकता है प्रदान की है, और वैकल्पिक रूप से, उपकला कोशिकाओं कारक है कि stromal decidualization 12, 13 मिलाना जारी कर सकते हैं। कुल मिलाकर, यह स्पष्ट है कि उपकला-stromal सह संस्कृति वातावरण एक अधिक शारीरिक स्थिति है कि पैराक्राइन संपर्क और संचार के लिए अनुमति देता है प्रदान करता है। एक डालने के सह संस्कृति प्रणाली का उपयोग करते हुए दो विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं संवर्धन की विधि पहले 14, 15 में वर्णित किया गया और murine प्राथमिक कोशिकाओं के उपयोग के लिए अनुकूलित किया गया था। decidualization के लिए एक पढ़ने के लिए बाहर के रूप में प्रोलैक्टिन mRNA स्तर का पता लगाने के द्वारा, वर्णित तकनीक उपलब्ध है और अनुमति देने के decidualization के लिए एक बहुत प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य पढ़ने के लिए बाहर हैजिससे decidualization दौरान उपकला-stromal संबंध का अध्ययन है। पैराक्राइन MEEC से मध्यस्थता संकेतों stromal कोशिकाओं में decidualization की हद तक बदल सकता है। इसके अलावा, मॉडल सीधे stromal कोशिकाओं को प्रभावित किए बिना उपकला पक्ष के विशिष्ट मॉडुलन के लिए अनुमति देता है। इसलिए, MEEC और mESC के इस सह संस्कृति हार्मोन, साइटोकिन्स, stromal decidualization पर एक पढ़ने के लिए बाहर के साथ उपकला कोशिकाओं पर आदि के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए एक उत्तम साधन प्रदान करता है। इस प्रणाली सह संस्कृति का एक अन्य लाभ यह है कि शोधकर्ताओं ने ट्रांसजेनिक जानवरों से अलग कक्षों का उपयोग करके या तो उपकला या stromal डिब्बे में decidualization-प्रक्रिया में एक विशिष्ट प्रोटीन की संलिप्तता की जांच करने की अनुमति देता है। इसके अलावा, इस तकनीक को ब्लास्टोसिस्ट आसंजन की जांच करने का मूल्यांकन करने के लिए है कि क्या एक ब्लास्टोसिस्ट की उपस्थिति में उपकला कोशिकाओं द्वारा स्रावित पैराक्राइन कारकों अंतर्निहित stromal की decidualization प्रेरित करने के लिए पर्याप्त हैं बहुत उपयोगी हो जाएगाकोशिकाओं। trophoblast आक्रमण में एक महत्वपूर्ण कदम बाह्य मैट्रिक्स गिरावट है, जो एंजाइमों की कार्रवाई से मध्यस्थता है के लिए सहसंबद्ध। प्रस्तावित तकनीक ब्लास्टोसिस्ट, उपकला कोशिकाओं और समर्थन स्ट्रोमा के बीच परस्पर बात की जांच करने के लिए इन विट्रो मॉडल के रूप में लागू किया जा सकता है। हालांकि, इस समय थोड़ा उपकला कोशिकाओं के रूप में जो अच्छी तरह से ग्रंथियों के रूप में हो सकता है ल्यूमिनल की उत्पत्ति के बारे में जाना जाता है। इसलिए, उपकला कोशिकाओं के आनुवंशिक और आणविक प्रोफ़ाइल के आगे लक्षण वर्णन आवश्यक है। इसके अलावा, वर्णित विधि उपकला कोशिकाओं के ध्रुवीकरण के बारे में उपलब्ध ज्ञान में सीमित है। फिलहाल, उपकला कोशिकाओं के ध्रुवीकरण खाते में नहीं लिया गया था। हालांकि, झिल्ली प्रोटीन की अभिव्यक्ति में मतभेद शिखर और बेसल झिल्ली में वर्णित हैं। उपकला परत के अनुचित ध्रुवीकरण epitheli के बीच पैराक्राइन बातचीत पर असर हो सकता हैअल और stromal कोशिकाओं। हालांकि, तरीकों ध्रुवीकृत उपकला कोशिकाओं वर्णित किया गया है प्राप्त करने के लिए और वर्णित तकनीक 15, 16 में शामिल किया जा सकता है। कुल मिलाकर, वर्णित प्रोटोकॉल एक तकनीक को सफलतापूर्वक माउस एंडोमेट्रियल उपकला और stromal कोशिकाओं के प्राथमिक सेल संस्कृतियों की स्थापना का प्रस्ताव है। इस तकनीक को शुद्ध सेल संस्कृतियों में यह परिणाम के रूप में QRT- पीसीआर द्वारा की पुष्टि की और vimentin और cytokeratin के immunostaining। अंत में, एक उपकला और stromal सह संस्कृति पेश किया गया था कि decidualization प्रक्रिया में या तो MEEC और / या mESC द्वारा मध्यस्थता पैराक्राइन संकेतों की जांच के लिए अनुमति देता है।

मानव अंतर्गर्भाशयकला गर्भाशय की भीतरी परत है और संभव गर्भधारण के लिए एक तैयारी के रूप में टूटने और मरम्मत की मासिक चक्र से होकर गुजरती है। यह गर्भाशय लुमेन और अंतर्निहित स्ट्रोमा जो डिम्बग्रंथि हार्मोन एस्ट्रोजन और प्रोजेस्ट्रोन के उतार चढ़ाव के अनुसार मोटाई में बदलता अस्तर उपकला कोशिकाओं की एक परत के होते हैं। Luteal चरण के दौरान, postovulatory प्रोजेस्टेरोन उछाल बड़े, गोल decidual कोशिकाओं में एंडोमेट्रियल stromal कोशिकाओं के भेदभाव, एक प्रक्रिया decidualization 1, 2 बुलाया प्रेरित करेगा। मानव में, इस घटना predecidua फार्म के लिए सहज होता है, लेकिन भ्रूण आरोपण पर और अधिक स्पष्ट हो जाता है। decidualization का एक कार्यात्मक परिणाम यह है कि गर्भाशय क्षणिक भ्रूण आरोपण के लिए ग्रहणशील हो जाता है। इस अंतराल &#39;आरोपण की खिड़की&#39; के रूप में चिह्नित है। भ्रूण आरोपण के प्रारंभिक काल, decidualized ई के दौरानndometrial stromal दाखिल भ्रूण कोशिकाओं के आसपास भ्रूण 3 के लिए हानिकारक पदार्थों के पारित होने को रोकने के लिए एक बाधा प्रदान करेगा। गर्भावस्था के दौरान, इस पत्या विकासशील भ्रूण के लिए पोषक तत्वों प्रदान करेगा पहले गर्भनाल जगह ले ली है, और बाद में नाल 4 की मातृ हिस्सा बनेगी। नैतिक और व्यावहारिक दृष्टिकोण decidualization की प्रक्रिया की जांच करने के लिए मानव अध्ययन के डिजाइन की सीमा और पशु मॉडल के उपयोग के लिए प्रेरित किया है। Hemochorial गर्भनाल समूह का सदस्य होने के नाते, मूषक के अंतर्गर्भाशयकला भी decidualization गर्भनाल 5 के लिए पहले से गुजरना होगा। मूषक में, हालांकि, decidualization प्रक्रिया की दीक्षा गर्भाशय लुमेन में ब्लास्टोसिस्ट की उपस्थिति पर निर्भर करता है, यह दर्शाता है कि एक अतिरिक्त प्रोत्साहन decidual प्रतिक्रियाओं 6 को गति प्रदान करने के लिए आवश्यक है। यह वीं के बीच एक जटिल संचार का अर्थब्लास्टोसिस्ट के साथ सीधा संपर्क है कि ई एंडोमेट्रियल उपकला कोशिकाओं, और अंतर्निहित stromal कोशिकाओं। फिर भी, decidualization कृत्रिम रूप से यांत्रिक scratching या एक hormonally primed गर्भाशय में तेल की टपकाना के रूप में उत्तेजनाओं का उपयोग कर प्रेरित किया जा सकता है। हालांकि vivo अध्ययन में कृत्रिम decidualization मॉडल का उपयोग decidualization की जटिल प्रक्रिया सिगनल, यंत्रवत में गहराई से अध्ययन, जैसे हमारे अंतर्दृष्टि में सुधार करने के लिए हमें की अनुमति दी है, उपकला और stromal कोशिकाओं के बीच संचार अपरिहार्य की जांच, सीमित हैं। इसलिए, इन विट्रो decidualization पढ़ाई के महत्वपूर्ण रास्ते में हेरफेर और मौलिक प्रक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। यह अंत करने के लिए, प्राथमिक एंडोमेट्रियल stromal सेल संस्कृतियों मानव या कृंतक अंतर्गर्भाशयकला से स्थापित किया जा सकता है। मूषक रोजगार आनुवंशिक रूप से संशोधित जानवरों के इस्तेमाल decidualization प्रक्रिया के दौरान ब्याज की एक विशेष प्रोटीन की भूमिका की जांच करने के लिए सहमति। हालांकि, अपरिपक्व, prepuberTy चूहों अक्सर, estrous चक्र की जटिलताओं से बचने के लिए, जबकि अन्य मामलों में ग्रीवा estrous चक्र है, जो संस्कृतियों में एक विविधता में परिणाम के सभी चरणों से एकत्र कर रहे हैं क्रम में उपयोग किया जाता है। इसके अलावा, decidualization की प्रक्रिया संवर्धन के माध्यम के लिए अलग प्रोटोकॉल, जैसे, में अध्ययन किया गया है (मैं) सप्लीमेंट हार्मोन (एस्ट्रोजन, प्रोजेस्ट्रोन या चक्रीय adenosine monophosphate (शिविर)) द्वारा अथवा (ii) में चूहों से decidual कोशिकाओं के अलगाव (छद्म) गर्भावस्था, जो प्लग जाँच और vasectomized पुरुषों के लिए अतिरिक्त जरूरत को मांग के 4.5 दिन। इन सीमाओं विट्रो decidualization में अध्ययन करने के लिए एक मानकीकृत विधि की आवश्यकता प्रदर्शित करता है। इस अध्ययन में, एक शारीरिक मॉडल वयस्क से शुरू करने में इन विट्रो decidualization जांच करने के लिए, गैर (छद्म) गर्भवती चूहों प्रस्तुत किया जाएगा। इस विधि में, 17β-estradiol (E2) के दैनिक इंजेक्शन एंडोमेट्रियल कोशिकाओं के प्रसार को प्रेरित करेगा, समरूप और पी के एक वृद्धि की उपज है, जिसके परिणामस्वरूपUre सेल आबादी। इसके अलावा, एक coculturing प्रणाली के उपयोग उपकला-stromal crosstalk और विभिन्न स्तरों पर decidualization की प्रक्रिया में हेरफेर करने की क्षमता के अध्ययन की अनुमति देता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>ThinCert Tissue culture insert for 24 well plates; 1 &#181;m pore size; transparant</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>662610</td>
			<td>Inserts are also provided for other multiwell plates and/or other pore sizes. Other suppliers: Merck Millipore. 
			https://shop.gbo.com/en/row/articles/catalogue/article/0110_0110_0090_0030/13408/&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc Cell culture treated 24 well plates</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>142475</td>
			<td> http://www.thermofisher.com/order/catalog/product/142475&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-Bromoadenosine 3&#8242;,5&#8242;-cyclic monophosphate sodium salt</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>B7880</td>
			<td>Prepare a stock solution of 100 mM in Milli Q water. Store aliquots at -20 &#176;C. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/b7880?lang=en&#38;region=BE&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medroxyprogesterone 17-acetate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M1629</td>
			<td>Prepare a stock solution of 250 &#181;M in ethanol. Store aliquots at -20 &#176;C. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/m1629?lang=en&#38;region=BE&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arachis oil</td>
			<td>Supermarket</td>
			<td></td>
			<td>Standard cooking arachis oil that can be found in every supermarket is used </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrestoBlue cell viability reagent</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A13261</td>
			<td> https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/A13261?ICID=cvc-prestoblue-c1t1&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS 1x, no calcium, no magnesium, no phenol red</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14175-046</td>
			<td>Store in fridge as long as possible. Use cold HBSS+ during the protocol. https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/14175046&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>17-&#946; Estradiol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E8875</td>
			<td>Prepare a stock solution of 1mg/ml in EtOH before diluting in arachis oil (1:1000). http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/e8875?lang=en&#38;region=BE&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell medium filter Stericup, 0.22 &#181;m, polyethersulfone, 500 mL, radio-sterilized</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>SCGPU05RE</td>
			<td> http://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Stericup-GP%2C-0.22%C2%A0%C2%B5m%2C-polyethersulfone%2C-500%C2%A0mL%2C-radio-sterilized,MM_NF-SCGPU05RE&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (5,000 U/mL)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15070-063</td>
			<td> https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15070063?ICID=search-15070-063&#160;&#160;&#160;&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12, phenol red, L-glutamine, HEPES</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11330-032</td>
			<td> https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/11330057?ICID=search-11330-057&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, qualified, heat inactivated, E.U.-approved, South America Origin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10500-056</td>
			<td> https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/10500064?ICID=search-10500-064&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin B</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15290-018</td>
			<td> https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15290018?ICID=search-15290-018&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin (50mg/ml)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15750-037</td>
			<td> https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15750037?ICID=search-15750-037&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, low glucose, pyruvate, no glutamine, no phenol red</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D5921</td>
			<td> http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/d5921?lang=en&#38;region=BE&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCDB-105</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M6395</td>
			<td>Dilute in Milli Q water, adjust pH to 7 with NaOH and filter before use. Store in the dark. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/m6395?lang=en&#38;region=BE&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>I1882</td>
			<td> http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/i1882?lang=en&#38;region=BE&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips, glass, 18 mm &#216;</td>
			<td>Glaswarenfabrik Karl Hecht</td>
			<td>1001/18</td>
			<td> http://www.hecht-assistent.de/187/?L=1&#38;tx_rmproducts_pi1[g]=937&#38;tx_rmproducts_pi1[p]=3504&#38;tx_rmproducts_pi1[v]=20088&#38;cHash=abd12065683fe74b00eaa5e562824d06&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P2636</td>
			<td> http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/p2636?lang=en&#38;region=BE&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type IA from Clostridium histolyticum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C2674</td>
			<td> http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/c2674?lang=en&#38;region=BE&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-094</td>
			<td> https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/14190094?ICID=search-14190-094&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T7409</td>
			<td> http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t7409?lang=en&#38;region=BE&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.05%), phenol red</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25300-054</td>
			<td>Warm to room temperature before use. https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/25300054?ICID=search-25300-054&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer, 40 &#181;m mesh, disposable</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td> https://www.fishersci.com/shop/products/falcon-cell-strainers-4/p-48680&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer, 100 &#181;m mesh, disposable</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352360</td>
			<td> https://www.fishersci.com/shop/products/falcon-cell-strainers-4/p-48680&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex-GP Syringe Filter Unit, 0.22&#160;&#181;m, polyethersulfone, 33&#160;mm, gamma sterilized</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>SLGP033RS</td>
			<td> https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Millex-GP-Syringe-Filter-Unit%2C-0.22%C2%A0%C2%B5m%2C-polyethersulfone%2C-33%C2%A0mm%2C-gamma-sterilized,MM_NF-SLGP033RS?bd=1&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic acid (glacial) 100%</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1.00063</td>
			<td> https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Acetic-acid-%28glacial%29-100%25,MDA_CHEM-100063&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen I</td>
			<td>Corning&#160;</td>
			<td>354236</td>
			<td>From rat tail. https://catalog2.corning.com/LifeSciences/en-BR/Shopping/ProductDetails.aspx?categoryname=&#38;productid=354236%28Lifesciences%29#&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pancreatin from porcine pancreas</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P3292</td>
			<td> http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/p3292?lang=en&#38;region=BE&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm Tissue Culture Dishes, Polystyrene, Sterile</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>353001</td>
			<td> https://us.vwr.com/store/catalog/product.jsp?product_id=4675630&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute AnalaR NORMAPUR ACS, Reag. Ph. Eur. analytical reagent</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>20821296</td>
			<td> https://uk.vwr.com/store/catalog/product.jsp?catalog_number=20821.310DP&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>monoclonal rabbit anti-human vimentin (D21H3)&#160;</td>
			<td>Cell Signalling Tech</td>
			<td>#5741</td>
			<td>use 1/500. http://www.cellsignal.com/products/primary-antibodies/vimentin-d21h3-xp-rabbit-mab/5741 </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>monoclonal mouse anti-human pan cytokeratin&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C2562</td>
			<td>use 1/1000. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/c2562?lang=en&#38;region=BE&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde Solution, 4% in PBS</td>
			<td>Affymetrix</td>
			<td>19943</td>
			<td> http://www.affymetrix.com/catalog/130621/USB/Paraformaldehyde+Solution+4+percent+in+PBS#1_1&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>X100</td>
			<td> http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/SIAL/X100?lang=en&#38;region=BE&#38;gclid=Cj0KEQjwhN-6BRCJsePgxru9iIwBEiQAI8rq879lESeuIU4N4AEQRLNEXj4f8z65KkD-q8Xr35sQDRgaAp-k8P8HAQ&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G9023</td>
			<td> http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/g9023?lang=en&#38;region=BE&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A-11034</td>
			<td> http://www.thermofisher.com/order/genome-database/searchResults?query=488&#38;resultPage=1&#38;resultsPerPage=15&#38;autocomplete=&#38;searchMode=keyword&#38;productTypeSelect=antibody&#38;targetTypeSelect=antibody_secondary&#38;species=ltechall&#38;keyword=488#filters=genericsort2:\%22Capra%20hircus\%22;;generic6:^\%22Oryctolagus%20cuniculus\%22$;;conjugates:^\%22Alexa%20Fluor&#38;reg;%20488\%22$;; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-mouse Alexa Fluor 594</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A-11032</td>
			<td> http://www.thermofisher.com/order/genome-database/searchResults?query=594&#38;resultPage=1&#38;resultsPerPage=15&#38;autocomplete=&#38;priorSearchTerms=&#38;searchMode=keyword&#38;productTypeSelect=antibody&#38;targetTypeSelect=antibody_secondary&#38;species=ltechall&#38;keyword=594#filters=genericsort2:\%22Capra%20hircus\%22;;generic6:^\%22Mus%20musculus\%22$;;&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD mounting medium with DAPI</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1200</td>
			<td> http://vectorlabs.com/vectashield-mounting-medium-with-dapi.html&#160; </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS, with calcium and magnesium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14040174</td>
			<td> https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/14040133&#160; </td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of mouse endometrial epithelial and stromal cells for in vitro decidualization

Decidualization एक प्रोजेस्टेरोन निर्भर एंडोमेट्रियल stromal कोशिकाओं के भेदभाव प्रक्रिया है और सफल भ्रूण आरोपण के लिए एक शर्त है। हालांकि कई प्रयासों decidualization की अंतर्निहित तंत्र प्रकट करने के लिए बनाया गया है, उपकला कोशिकाओं है कि भ्रूण और अंतर्निहित stromal कोशिकाओं के साथ संपर्क में हैं के बीच सटीक संकेतन समझ खराब रहता है। इसलिए, एक ही रास्ता है कि खाते में दोनों उपकला और stromal कोशिकाओं लेता decidualization की आणविक विवरण के बारे में हमारे ज्ञान में सुधार सकता है में decidualization पढ़ रही है। इस प्रयोजन के लिए कृत्रिम decidualization के vivo मॉडल में physiologically सबसे अधिक प्रासंगिक हैं; हालांकि, कहनेवाला संचार के हेरफेर सीमित है। वर्तमान में, एंडोमेट्रियल stromal कोशिकाओं की इन विट्रो संस्कृतियों में कई संकेतन अणुओं द्वारा decidualization के मॉडुलन जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा रहा है। पारंपरिक, मानव या माउस एंडोमेट्रियल stromal कोशिकाओं रहे हैंउपयोग किया गया। बहरहाल, मानव नमूनों की उपलब्धता बहुत बार सीमित है। इसके अलावा, murine ऊतकों के उपयोग के संवर्धन की विधि में विविधता के साथ साथ है। इस अध्ययन में शुद्ध एंडोमेट्रियल उपकला सेल (ईईसी) और stromal सेल (ईएससी) संस्कृतियों वयस्क बरकरार लगातार तीन दिनों के लिए एस्ट्रोजन के साथ इलाज चूहों का उपयोग कर प्राप्त करने के लिए एक मान्य है और मानकीकृत विधि प्रस्तुत करता है। प्रोटोकॉल उपज, व्यवहार्यता, और कोशिकाओं की शुद्धता में सुधार करने के लिए अनुकूलित है और आगे ईईसी और ईएससी के एक coculture में decidualization का अध्ययन करने के क्रम में बढ़ाया गया था। यह मॉडल decidualization में दोनों प्रकार की कोशिकाओं के महत्व को फायदा उठाने के लिए और महत्वपूर्ण संकेत कहनेवाला संचार के दौरान ईईसी या ईएससी द्वारा स्रावित अणुओं के योगदान का मूल्यांकन करने के लिए उपयुक्त हो सकता है।

प्रोटोकॉल के जनरल अवलोकन चित्रा 1 ए प्रोटोकॉल की एक सामान्य अवलोकन दिखाता है। लगातार तीन दिनों के लिए E2 (100 एनजी) के एक दैनिक इंजेक्शन जानवरों सिंक्रनाइज़ और estrous चक्र के चरण के मानकीकरण के लिए इस्तेमाल किया गया था। estrous चक्र योनि lavages द्वारा मूल्यांकन किया जा सकता है और proestrus, मद, diestrus, और metestrus चरण में बांटा गया है। चक्र चरण पानी से धोना में desquamated कोशिकाओं है, जो हार्मोनल परिवर्तन के अधीन हैं के अनुपात के अनुसार नामित किया जा सकता है। एस्ट्रोजन का स्तर बढ़ने जानवरों मद चरण के लिए तैयार कर देगा। इस चरण में आसानी से विशेष रूप से श्रृंगित उपकला कोशिकाओं की उपस्थिति और ल्यूकोसाइट्स की अनुपस्थिति (चित्रा 1 बी) द्वारा पता लगाया जा सकता है। 4 दिन, जानवरों है कि मद चरण में हैं की ग्रीवा एकत्र कर रहे हैं और MEEC और mESC अलग कर रहे हैं (चित्रा 1 सी)। Decidualization गएक 5 डी के एक ऊष्मायन अवधि के दौरान 0.5 मिमी शिविर और 1 माइक्रोन 2% FBS के माध्यम के लिए एमपीए जोड़कर प्रेरित किया जा। MEEC और mESC संस्कृतियों की गुणवत्ता नियंत्रण प्राथमिक सेल संस्कृतियों की पवित्रता vimentin और cytokeratin अभिव्यक्ति में अंतर द्वारा मूल्यांकन किया जा सकता है। Vimentin एक मध्यवर्ती रेशा कि mesenchymal कोशिकाओं में व्यक्त किया जाता है, इसलिए एंडोमेट्रियल stromal कोशिकाओं में है। Cytokeratin एक मध्यवर्ती रेशा उपकला ऊतक के cytoskeleton में पाया जाता है। चित्रा 2A चलता vimentin और MEEC और mESC में cytokeratin के mRNA अभिव्यक्ति के स्तर QRT- पीसीआर का उपयोग कर का आकलन किया। Vimentin स्तरों MEEC में mESC में उच्च और निम्न हैं (2.2x उच्च, पी &lt;0.001), cytokeratin स्तरों mESC में MEEC में उच्च और कम कर रहे हैं, जबकि (36x उच्च, पी &lt;0.001)। एक vimentin / cytokeratin डबल धुंधला प्रदर्शन किया गया था और संकेत दिया कि stromal कोशिकाओं जबकि epit vimentin का इजहारhelial कोशिकाओं cytokeratin व्यक्त (चित्रा 2 बी, सी)। प्राथमिक एंटीबॉडी के अभाव immunostaining (चित्रा 2 डी, ई) के लिए एक नकारात्मक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था। ये immunohistological stainings बताते हैं कि दोनों एंडोमेट्रियल सेल संस्कृतियों (MEEC और mESC) अप करने के लिए 90% की एक पवित्रता है। MEEC / mESC cocultures में Decidualization अलगाव के बाद, माउस एंडोमेट्रियल और stromal कोशिकाओं एंडोमेट्रियल पर्यावरण नकल करने के लिए एक सह संस्कृति प्रणाली में वरीयता प्राप्त थे। जब तक उपकला कोशिकाओं (800 Teer मूल्यों - 1,000 / अच्छी तरह से) सेल संस्कृति डालने में एक monolayer का गठन कोशिकाओं सुसंस्कृत थे, और stromal कोशिकाओं एक उप मिला हुआ राज्य पर पहुंच गया। Decidualization 0.5 मिमी शिविर के आवेदन और 1 माइक्रोन एमपीए के साथ stromal कोशिकाओं में प्रेरित किया गया था। ऊष्मायन के पांच दिनों के बाद, प्रोलैक्टिन mRNA स्तर decid के लिए एक संकेत के रूप QRT- पीसीआर द्वारा stromal कोशिकाओं में मूल्यांकन किया गयाualization (चित्रा 3 ए)। प्रोलैक्टिन स्तर को अत्यधिक कोशिकाओं नियंत्रण मध्यम (पी &lt;0.01) के साथ incubated कोशिकाओं में हार्मोन के अधीन है और nondetectable में व्यक्त किया गया। चूंकि उपकला कोशिकाओं सेल संस्कृति आवेषण के अंदर कल्पना करने के लिए मेहनत कर रहे हैं, एक व्यवहार्यता परख पांच दिन ऊष्मायन अवधि (चित्रा 3 बी) के तुरंत बाद किया गया था। सामान्य मध्यम विकास और एक व्यवहार्यता अभिकर्मक का एक मिश्रण कुओं को जोड़ा गया और कम से कम 8 की अवधि के लिए incubated था - 12 h। उज्ज्वल गुलाबी नीले रंग से रंग परिवर्तन व्यवहार्य उपकला कोशिकाओं की उपस्थिति का संकेत दिया। ध्यान दें कि रंग परिवर्तन तभी दिया जाएगा जब व्यवहार्य कोशिकाओं में मौजूद हैं। <img alt="आकृति 1" src="/files/ftp_upload/55168/55168fig1.jpg" /> चित्रा 1: प्रोटोकॉल का सिंहावलोकन। (ए) अलगाव प्रोटोकॉल की योजना तीन से शुरूएस्ट्रोजन इंजेक्शन के लगातार दिन। 3 दिन, आवश्यक तैयारी के लिए तैयार रहना चाहिए। 4 दिन, मद चरण (स्टार ने संकेत दिया) मूल्यांकन किया जाता है एक योनि पानी से धोना प्रदर्शन से। MESC और MEEC अलग पाचन चरणों का उपयोग कर अलग कर रहे हैं। 6 दिन पर, या जब कोशिकाओं मिला हुआ हैं, decidualization सह संस्कृति प्रणाली में मध्यम और पांच दिन के एक ऊष्मायन अवधि (- 11 दिन 6) शिविर और एमपीए जोड़कर प्रेरित किया जा सकता है। (बी) योनि पानी से धोना में श्रृंगित उपकला कोशिकाओं की उपस्थिति द्वारा विशेषता मद चरण के प्रतिनिधि तस्वीर (बढ़ाई 10X)। (सी) mESC और MEEC के प्रतिनिधि तस्वीर (बढ़ाई 20X, पैमाने पर पट्टी: 100 माइक्रोन)। <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55168/55168fig1large.jpg" target="_blank">यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।</a> <img alt="चित्र 2" src="/files/ftp_upload/55168/55168fig2.jpg" /> <stronजी&gt; चित्रा 2: immunostaining और मात्रात्मक MEEC और mESC में vimentin और Cytokeratin के लिए आरटी पीसीआर। (ए) vimentin और cytokeratin अभिव्यक्ति की मैसेंजर आरएनए स्तरों संस्कृतियों की पवित्रता को इंगित करने के लिए। आरएनए का स्तर अपेक्षाकृत गृह व्यवस्था जीन ACTB और TBP की ज्यामितीय मतलब करने के लिए मात्रा निर्धारित किया गया। डेटा ± SEM के मतलब के रूप में दिखाया गया है। MESC संस्कृतियों (बी) और MEEC संस्कृतियों (सी) पर vimentin / cytokeratin डबल धुंधला। बाएँ में सम्मिलित एक 63x बढ़ाई दृश्य दिखाता है। MESC (डी) और MEEC (ई) के लिए छोड़े गए प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ नकारात्मक नियंत्रण (स्केल पट्टी: 50 माइक्रोन)। ***: P &lt;कई परीक्षण के लिए Bonferroni सुधार के साथ दो तरह एनोवा के साथ 0,001। <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55168/55168fig2large.jpg" target="_blank">यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।</a> चित्रा 3: आरटी पीसीआर के माध्यम से Decidualization के मान्यकरण। (ए) mRNA stromal कोशिकाओं में प्रोलैक्टिन अभिव्यक्ति के स्तर decidualization मूल्यांकन करने के लिए। आरएनए का स्तर अपेक्षाकृत गृह व्यवस्था जीन PGK1 और TBP की ज्यामितीय मतलब करने के लिए मात्रा निर्धारित किया गया। नियंत्रण या decidual माध्यम में संवर्धित कोशिकाओं में गुना परिवर्तन ± SEM के मतलब के रूप में दिखाया गया है। (बी) से पहले (ऊपर) और बाद (नीचे) decidualization प्रोत्साहन stromal कोशिकाओं की निदर्शी तस्वीरें। सही पर डालने के एक decidualized stromal सेल के एक बढ़ाई दिखाता है। Decidualization multinucleated कोशिकाओं की उपस्थिति, काला तीर द्वारा संकेत के द्वारा होती है। (सी) परख के बाद डालने में उपकला सेल व्यवहार्यता के आकलन के प्रतिनिधि छवियाँ। चित्र व्यवहार्यता अभिकर्मक के प्रशासन (Prestoblue) (0 एच) और एफ के बाद तुरंत ले जाया गयाollowing सुबह (पर)। **: पी &lt;मान व्हिटनी यू परीक्षण के साथ 0.01। पर: रात भर। स्केल पट्टी: 100 माइक्रोन। <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55168/55168fig3large.jpg" target="_blank">यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।</a>

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Isolation of Mouse Endometrial Epithelial and Stromal Cells for In Vitro Decidualization

इस अध्ययन से अलगाव और प्राथमिक माउस एंडोमेट्रियल stromal और उपकला कोशिकाओं की संस्कृति है, जो एक coculture प्रणाली में इस्तेमाल किया जा सकता है इन विट्रो decidualization में अध्ययन करने के लिए एक मानकीकृत और मान्य विधि प्रस्तुत करता है।

माउस के लिए एंडोमेट्रियल उपकला और stromal कोशिकाओं का अलगाव<em&gt; इन विट्रो</em&gt; Decidualization

Decidualization is a progesterone-dependent differentiation process of endometrial stromal cells and is a prerequisite for successful embryo implantation. ...

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