Name: preparation of horizontal slices of adult mouse retina for electrophysiological studies
Uploaded: 2017-01-27T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Horizontal Slices of Adult Mouse Retina for Electrophysiological Studies at JoVE.com

This work was supported by the Deutsche Forschungsgemeinschaft DFG FOR701 and FE464/11-1 to A.F. The authors want to acknowledge the excellent technical assistance of Andrea Nerz.

تم تنفيذ جميع الإجراءات وفقا للمبادئ التوجيهية لالتجارب على الحيوانات الصادرة عن جمهورية ألمانيا الاتحادية. ملاحظة: نظرا لأن أنسجة الشبكية ستكون خالية من الأكسجين خلال أجزاء طويلة من هذا الإجراء، وينبغي إجراء جميع الخطوات من ف?...

<ol>
	<li>DeVries, S. H., Li, W., Saszik, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel+processing+in+two+transmitter+microenvironments+at+the+cone+photoreceptor+synapse.">Parallel processing in two transmitter microenvironments at the cone photoreceptor synapse.</a> Neuron. 50, 735-748 (2006).</li><li>Jackman, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+synaptic+ribbon+in+transmitting+the+cone+light+response.">Role of the synaptic ribbon in transmitting the cone light response.</a> Nature Neuroscience. 12 (3), 303-310 (2009).</li><li>Rabl, K., Cadetti, L., Thoreson, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+exocytosis+is+faster+in+cones+than+in+rods.">Kinetics of exocytosis is faster in cones than in rods.</a> J. Neurosci. 25 (18), 4633-4640 (2005).</li><li>Singer, J. H., Lassov&#225;, L., Vardi, N., Diamond, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordinated+multivesicular+release+at+a+mammalian+ribbon+synapse.">Coordinated multivesicular release at a mammalian ribbon synapse.</a> Nature Neuroscience. 7 (8), 826-833 (2004).</li><li>Peichl, L., Gonz&#225;lez-Soriano, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+types+of+horizontal+cell+in+rodent+retinae:+a+comparison+of+rat,+mouse,+gerbil,+and+guinea+pig.">Morphological types of horizontal cell in rodent retinae: a comparison of rat, mouse, gerbil, and guinea pig.</a> Vis. Neurosci. 11, 501-517 (1994).</li><li>Ames, A., Nesbett, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+retina+as+an+experimental+model+of+the+central+nervous+system.">In vitro retina as an experimental model of the central nervous system.</a> J. Neurochem. 37 (4), 867-877 (1981).</li><li>Mathis, D. M., Furman, J. J., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+acute+hippocampal+slices+from+rats+and+transgenic+mice+for+the+study+of+synaptic+alterations+during+aging+and+amyloid+pathology.">Preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology.</a> J. Vis. Exp. (49), (2011).</li><li>Peichl, L., Sandmann, D., Boycott, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+anatomy+and+function+of+mammalian+horizontal+cells.">Comparative anatomy and function of mammalian horizontal cells.</a> Development of the Retina. , (1998).</li><li>Feigenspan, A., Babai, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+properties+of+spontaneous+excitatory+currents+and+encoding+of+light/dark+transitions+in+horizontal+cells+of+the+mouse+retina.">Functional properties of spontaneous excitatory currents and encoding of light/dark transitions in horizontal cells of the mouse retina.</a> Eur. J. Neurosci. 42 (9), 2615-2632 (2015).</li><li>Enoki, R., Jakobs, T. C., Koizumi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Horizontal+slice+preparation+of+the+retina.">Horizontal slice preparation of the retina.</a> J. Vis. Exp. (1), e108 (2006).</li><li>Babai, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+roles+of+complexin3+and+complexin4+at+mouse+photoreceptor+ribbon+synapses.">Functional roles of complexin3 and complexin4 at mouse photoreceptor ribbon synapses.</a> J. Neurosci. 36, 6651-6667 (2016).</li><li>Thoreson, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Horizontal+slices+of+mouse+retina+expose+horizontal+cells+and+their+properties+(Commentary+on+Feigenspan+&amp;+Babai).">Horizontal slices of mouse retina expose horizontal cells and their properties (Commentary on Feigenspan &amp; Babai).</a> Eur. J. Neurosci. 42 (9), 2613-2614 (2015).</li></ol>

<html> وعلى النقيض من شرائح عمودية، مورفولوجيا شجيري من الخلايا العصبية الموجهة شعاعيا مثل الخلايا الأفقية وخلايا عديم الاستطالات والحفاظ عليها جيدا. مقارنة الاستعدادات شبكية العين بأكملها، هذين النوعين من الخلايا يمكن الوصول إليها بسهولة لالميكروية ويمكن دراستها م?...

يتم ترميز المعلومات البصرية كنمط الديناميكي المكانية والزمانية لتفعيل مبصرة، والمشبك الشريط بين خلايا مستقبلة للضوء والخلايا العصبية من الدرجة الثانية قرر نقل المصب من المعلومات البصرية. إعداد شريحة الرأسي للشبكية الثدييات هو أداة قيمة للغاية لدراسة معالجة الإشارات في مسارات العمودي، أي بين خلايا مستقبلة للضوء والخلايا القطبين، وبين خلايا ثنائية القطب وبعض أنواع الخلايا عديم الاستطالات 1، 2، 3، 4. ومع ذلك، باجتزاء الرأسي يسبب دائما اقتطاع شديد في مجالات شجيري من العديد من الخلايا العصبية للشبكية، مما أدى إلى خسائر كبيرة في الاتصالات متشابك. خاصة في شبكية العين الخارجية، وتتأثر خلايا الأفقية بسبب حقول ممتدة تنتشر أفقيا على شجيري والنظم محطة محور عصبي 5. في رأسيوبالتالي انخفاض إعداد شريحة، ومدخلات متشابك من مئات المحطات مخروط مبصرة لالتشعبات خلية الأفقية على عدد قليل من الاتصالات متفرق. وهذا قد يكون كافيا لدراسة خصائص نقاط الاشتباك العصبي الفردية، ولكنها لا تمثل بأي حال من الأحوال قدرات معالجة الإشارات الكامنة وراء تفعيل متزامنة من نقاط الاشتباك العصبي مبصرة الشريط. لذا قمنا بتطوير إعداد شريحة الأفقي، مما يترك ما يقرب من جميع مبصرة مخروط مدخلات متشابك إلى التشعبات الخلية الأفقية سليمة وظيفية. الطائرة من يدير باجتزاء موازية لسطح شبكية العين، وقطع مثالي من خلال طبقة النووية الداخلية بين الخلايا الأفقية والخلايا عديم الاستطالات. وهكذا، شرائح أفقية من شبكية العين الخارجي يتم إنشاؤها تحتوي، على الموقع قبل المشبكي، المستقبلات الضوئية مع قطاعات الداخلية والخارجية وكذلك محطات متشابك، والخلايا الأفقية وخلايا القطبين على الموقع بعد المشبكي. هذا المستحضر يناسب جيدا رس التحقيق مدخلات متشابك منسقة في التشعبات الخلية الأفقية جميع مبصرات مخروط داخل مجالها شجيري. ومن ثم قد تكون مفيدة لفهم أفضل للعمل من المشبك مستقبلة للضوء الشريط، وهو أمر حاسم لنقل المعلومات البصرية من المصفوفة تفعيل مستقبلة للضوء في استجابة بعد المشبكي.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="627">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ames&#39; Medium</td>
			<td style="width:125px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">A1420</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium Bicarbonate</td>
			<td style="width:125px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Hepes</td>
			<td style="width:125px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Carbogen</td>
			<td style="width:125px;">Air Liquide</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Agarose</td>
			<td style="width:125px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">A9045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">35-mm petri dish (plastic)</td>
			<td style="width:125px;">Nunc Thermofisher</td>
			<td style="width:119px;">150318</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glass petri dish</td>
			<td style="width:125px;">Chemoline</td>
			<td style="width:119px;">50-1470-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:125px;">Dispensary university hospital</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Vibratome injector blade</td>
			<td style="width:125px;">Biosystems</td>
			<td style="width:119px;">39053250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vibratome</td>
			<td style="width:125px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">VT1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vibrocheck</td>
			<td style="width:125px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microwave</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Water bath</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Forceps</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">20-gauge needles</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Spring scissors</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Curved scalpel blades</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Stereo microscope</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Plastic Pasteur pipette</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glass Pasteur pipette</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of horizontal slices of adult mouse retina for electrophysiological studies

يتم وضع الاستعدادات شريحة رأسية أيضا لدراسة الدوائر ونقل الإشارات في الكبار شبكية الثدييات. الطائرة من باجتزاء في هذه الاستعدادات هي عمودي على سطح الشبكية، مما يجعلها مثالية لدراسة الخلايا العصبية الموجهة شعاعيا مثل خلايا مستقبلة للضوء والخلايا القطبين. ومع ذلك، فإن العرش شجيري كبيرة من الخلايا الأفقية، وخلايا عديم الاستطالات واسعة المجال، وخلايا العقدة هي في معظمها مبتورة، وترك انخفضت بشكل ملحوظ النشاط متشابك في هذه الخلايا. في حين أن خلايا العقدة والخلايا عديم الاستطالات المشردين يمكن دراستها في إعداد كله محمولة على شبكية العين، والخلايا الأفقية والخلايا عديم الاستطالات تقع في الطبقة النووية الداخلية يمكن الوصول إليها لأقطاب في أنسجة شبكية العين كلها سيئة فقط. لتحقيق أقصى قدر من سهولة الوصول وسلامة متشابك، وضعنا إعداد شريحة الأفقي للشبكية العين الماوس، ودرس نقل الإشارات في المشبك بين خلايا مستقبلة للضوء والأفقيالخلايا. باجتزاء الأفقي يسمح (1) التعرف البصري سهلة واضح لا لبس فيه من أجسام الخلايا الأفقية لاستهداف الكهربائي، و (2) الحفاظ على حقول شجيري الخلايا الأفقية الممتدة، كشرط أساسي لحالها وظيفية مخروط مدخلات متشابك إلى التشعبات الخلية الأفقية. الخلايا الأفقية من شرائح أفقية أظهرت النشاط متشابك منشط في الظلام، وأنها استجابت لإطلاع ومضات من الضوء مع الحد من الداخل النشاط متشابك الحالي وتقلص. تشير الأدلة Immunocytochemical أن ما يقرب من جميع المخاريط في مجال شجيري خلية الأفقية تضع نقاط الاشتباك العصبي مع التشعبات في الطرفية. لذلك مناسبة لإعداد شريحة الأفقي كذلك دراسة الخصائص الفسيولوجية للالخلايا العصبية للشبكية ممتدة أفقيا وكذلك نقل الإشارات الحسية والتكامل بين نقاط الاشتباك العصبي المحدد.

<html> في شرائح أفقية من شبكية العين الماوس، يمكن تحديد أجسام الخلايا الأفقية بسهولة وفقا لالتشكل فريدة من نوعها مع العديد من التشعبات الأولية الناشئة من المضلع خلايا الجسم (الشكل 1A). وكانت أجسام الخلايا الأفقية الموجودة بالقرب من سطح شريحة ي?...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Horizontal Slices of Adult Mouse Retina for Electrophysiological Studies at JoVE.com

Preparation of Horizontal Slices of Adult Mouse Retina for Electrophysiological Studies

وضعنا إعداد شريحة الأفقي للشبكية العين الكبار الثدييات مع الطائرة من باجتزاء موازية لسطح الشبكية. لم اقتطاع الحقول الجذعية من الخلايا العصبية للشبكية موجهة nonradially، والسماح للدراسة معالجة الإشارات مع تقنيات التصحيح، المشبك والتصوير.

إعداد شرائح أفقية من الكبار شبكية العين الفأر للدراسات الكهربية

Vertical slice preparations are well established to study circuitry and signal transmission in the adult mammalian retina. The plane of sectioning in ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Organotypic Culture of Full-thickness Adult Porcine Retina

عضوي النمط ثقافة كاملة ، سمك الشبكية خنزيري الكبار

There is a recognized demand for in vitro models that can replace or reduce animal experiments. Porcine retina has a similar neuronal structure to human ...

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

Electroporation في الجسم الحي من الشبكية ماوس النامية

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Electrophysiological Characterization of GFP-Expressing Cell Populations in the Intact Retina

توصيف بالسكان خلية كهربية من GFP - يعرب عن السليمة في الشبكية

Studying the physiological properties and synaptic connections of specific neurons in the intact tissue is a challenge for those cells that lack ...

Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Acute Slices of the Adult Mouse Forebrain

الوقت الفاصل بين التصوير للهجرة أرومة عصبية في شرائح الدماغ الأمامي الحاد للماوس الكبار

There is a substantial body of evidence indicating that new functional neurons are constitutively generated from an endogenous pool of neural stem cells ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

إعداد شرائح الحاد المنطقة Subventricular للتصوير الكالسيوم

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

تسجيلات الكهربية المزدوجة للSynaptically-استجابات Astroglial والخلايا العصبية في الحصين شرائح الحاد

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Improved Preparation and Preservation of Hippocampal Mouse Slices for a Very Stable and Reproducible Recording of Long-term Potentiation

تحسين إعداد والحفاظ على شرائح الحصين ماوس لتسجيل مستقرة جدا وقابلة للتكرار من التقوية بعيدة المدى

Long-term potentiation (LTP) is a type of synaptic plasticity characterized by an increase in synaptic strength and believed to be involved in memory ...

Electrophysiological Recording in the Brain of Intact Adult Zebrafish

تسجيل الكهربية في الدماغ سليمة من اسماك الزرد الكبار

Previously, electrophysiological studies in adult zebrafish have been limited to slice preparations or to eye cup preparations and electrorentinogram ...

Healthy Brain-pituitary Slices for Electrophysiological Investigations of Pituitary Cells in Teleost Fish

شرائح المخ--الغدة النخامية سليمة للتحقيقات الكهربية من خلايا الغدة النخامية في الأسماك تيليوست

Electrophysiological investigations of pituitary cells have been conducted in numerous vertebrate species, but very few in teleost fish. Among these, the ...

Assessment of Long-term Depression Induction in Adult Cerebellar Slices

تقييم الحث علي الاكتئاب علي المدى الطويل في شرائح البالغين المخيخار

Synaptic plasticity provides a mechanism for learning and memory. For cerebellar motor learning, long-term depression (LTD) of synaptic transmissions from ...