Name: a versatile mounting method for long term imaging of zebrafish development
Uploaded: 2017-01-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Versatile Mounting Method for Long Term Imaging of Zebrafish Development at JoVE.com

Estelle Hirsinger: Core funding from the Institut Pasteur and Agence Nationale de la Recherche (ANR-10-BLAN-121801 DEVPROCESS). Estelle Hirsinger is from the Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS). Benjamin Steventon was funded by the Agence Nationale de la Recherche (ANR- 10-BLAN-121801 DEVPROCESS), then a Roux fellowship (Institut Pasteur) then an AFM-Te&#769;le&#769;thon fellowship (number 16829). He is now supported by a Wellcome Trust/Royal Society Sir Henry Dale Fellowship.

1. समाधान की तैयारी और खींच लिया गिलास सुई <ol><li> 20 मिमी Tris पीएच 8.8 में 4 मिलीग्राम / एमएल Tricaine (3 अमीनो benzoic एसिड एथिल एस्टर, यह भी कहा जाता एथिल 3-aminobenzoate) के एक 25x शेयर समाधान करें और लाने कि समाधान पीएच पर है 7. 4 एमएल और दु?...

<ol>
	<li>Graeden, E., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Imaging+of+the+Zebrafish+Embryonic+Brain+by+Confocal+Microscopy.">Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy.</a> J Vis Exp. (26), e1-e2 (2009).</li><li>Delaune, E. A., Fran&#231;ois, P., Shih, N. P., Amacher, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-Cell-Resolution+Imaging+of+the+Impact+of+Notch+Signaling+and+Mitosis+on+Segmentation+Clock+Dynamics.">Single-Cell-Resolution Imaging of the Impact of Notch Signaling and Mitosis on Segmentation Clock Dynamics.</a> Dev Cell. 23 (5), 995-1005 (2012).</li><li>Lawton, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulated+tissue+fluidity+steers+zebrafish+body+elongation.">Regulated tissue fluidity steers zebrafish body elongation.</a> Development. 140 (3), 573-582 (2013).</li><li>Dray, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-Fibronectin+Interactions+Propel+Vertebrate+Trunk+Elongation+via+Tissue+Mechanics.">Cell-Fibronectin Interactions Propel Vertebrate Trunk Elongation via Tissue Mechanics.</a> Curr Biol. 23 (14), 1335-1341 (2013).</li><li>Steventon, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Species+tailoured+contribution+of+volumetric+growth+and+tissue+convergence+to+posterior+body+elongation+in+vertebrates.">Species tailoured contribution of volumetric growth and tissue convergence to posterior body elongation in vertebrates.</a> Development. 143, 1732-1741 (2016).</li><li>Attili, S., Hughes, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaesthetic+Tricaine+Acts+Preferentially+on+Neural+Voltage-Gated+Sodium+Channels+and+Fails+to+Block+Directly+Evoked+Muscle+Contraction.">Anaesthetic Tricaine Acts Preferentially on Neural Voltage-Gated Sodium Channels and Fails to Block Directly Evoked Muscle Contraction.</a> PLoS ONE. 9 (8), 103751-103756 (2014).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book, 5th Edition; A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2007).</li><li>Schr&#246;ter, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+zebrafish+somitogenesis.">Dynamics of zebrafish somitogenesis.</a> Dev Dyn. 237 (3), 545-553 (2008).</li><li>Megason, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+toto+imaging+of+embryogenesis+with+confocal+time-lapse+microscopy.">In toto imaging of embryogenesis with confocal time-lapse microscopy.</a> Methods Mol Biol (Clifton, N.J.). 546, 317-332 (2009).</li><li>Sugiyama, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Illuminating+cell-cycle+progression+in+the+developing+zebrafish+embryo.">Illuminating cell-cycle progression in the developing zebrafish embryo.</a> PNAS. 106 (49), 20812-20817 (2009).</li></ol>

इस बढ़ते तकनीक के लिए सक्षम बनाता भ्रूण माइक्रोस्कोप और अधिक से अधिक लंबी अवधि के समय चूक इमेजिंग प्रयोगों कई लंबाई पैमाने पर पीछे शरीर बढ़ाव निम्नलिखित के उद्देश्य के लिए स्थानांतरण के दौरान अभी भी ?...

पोस्टीरियर शरीर बढ़ाव जिसके द्वारा भ्रूण शरीर धुरी के एक बड़े हिस्से के रूप में फैली भ्रूण के विकास में एक अनिवार्य प्रक्रिया है। यह एक जटिल प्रक्रिया है जिसके द्वारा मॉर्फ़ोजेनेटिक कई सेल व्यवहार coordinately कार्य व्यक्ति के ऊतकों के स्तर पर morphogenesis उत्पन्न करने का एक उदाहरण है। ये अंतर ऊतक विकृतियों फिर एक साथ कार्य पूरे ढांचे के स्तर पर पीछे शरीर के बढ़ाव उत्पन्न करते हैं। समझ कैसे इन प्रक्रियाओं को नियंत्रित और विकास के दौरान समन्वय कर रहे हैं, हम (अणु, कोशिकाओं, सेल आबादी और ऊतकों के स्तर पर यानी) कई पैमानों पर इन प्रक्रियाओं का पालन करने में सक्षम होना चाहिए और पूरे ढांचे के morphogenesis के लिए सीधे इस से संबद्ध करने की । Zebrafish भ्रूण अच्छी तरह से लिव लिए अनुकूल दृष्टिकोण के रूप में उनके ऑप्टिकल पारदर्शिता और छोटे आकार के न्यूनतम इनवेसिव इमेजिंग प्रकाश के आवेदन के लिए अनुमति देता है इमेजिंग पीछे शरीर बढ़ाव के लिए आदर्श होते हैंई इमेजिंग। 1 इस हाल के प्रकाशनों की एक श्रृंखला है कि अणुओं के स्तर पर पीछे शरीर के विकास पर प्रकाश डाला है इसका सबूत दिया गया है, 2 एकल कक्षों, 3 और अंतर-ऊतक व्यवहार, 4 के रूप में अच्छी तरह से सेल की आबादी और पूरे अंग के स्तर पर। 5 ऐसे confocal, बहु photon माइक्रोस्कोपी और चयनात्मक विमान रोशनी माइक्रोस्कोपी (SPIM) के रूप में उन्नत इमेजिंग तकनीक के विकास की प्रक्रिया के दीर्घकालिक इमेजिंग में कमी आई प्रकाश विषाक्तता और तस्वीर विरंजन के प्रभाव के साथ सक्षम कर रहे हैं। लाइव नमूनों की बढ़ते के लिए मजबूत तकनीक तीन लक्ष्यों को प्राप्त करने के लिए आवश्यक हैं: 1) पर्याप्त समर्थन माइक्रोस्कोप के लिए और अधिग्रहण के दौरान स्थानांतरण के दौरान सही ओरिएंटेशन में नमूने बनाए रखने के लिए, 2) नमूना के आंदोलन की पर्याप्त स्वतंत्रता के परिणाम के लिए अनुमति देने के लिए अपनी सामान्य गतिविधियों को प्रभावित किए बिना पीछे शरीर क्षेत्रopment, और अंत में 3) बढ़ते विधि की चंचलता में एक निश्चित डिग्री विविध इमेजिंग सेट-अप पर इमेजिंग की अनुमति है। इस प्रोटोकॉल zebrafish डी rerio के विकास इमेजिंग के लिए एक बढ़ते तकनीक का परिचय। इस तकनीक के बढ़ते भ्रूण ऐसी है कि सिर और जर्दी थैली क्षेत्रों लगभग पूरी तरह से, agarose में शामिल किए गए हैं, जबकि बढ़ाना और सामान्य रूप से विकसित करने के पीछे शरीर क्षेत्र छोड़ने शामिल है। जैसे, यह भी विकासशील शरीर के अन्य क्षेत्रों के लिए लंबी अवधि के इमेजिंग agarose मानक प्रकाश इमेजिंग तकनीक के द्वारा इमेजिंग सक्षम बनाता है के लिए एक उपयुक्त तरीका है। इस प्रोटोकॉल, एक पार्श्व अभिविन्यास में भ्रूण के बढ़ते दर्शाता है, हालांकि यह भी वैकल्पिक झुकाव में भ्रूण माउंट करने के लिए संभव है। यह आगे, ईमानदार औंधा और ऊर्ध्वाधर प्रकाश चादर माइक्रोस्कोपी व्यवस्था के लिए विधि अनुकूल करने के लिए कैसे दिखाई देंगे।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="727">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">CONSUMABLES</td>
			<td style="width:236px;"></td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass-bottomed dishes</td>
			<td>Mattek</td>
			<td>P35-1.5-10-C</td>
			<td>35mm petri dish, 10mm microwell. No. 1.5 cover glass</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Capillaries for injection needles</td>
			<td>&#160;Sutter&#160;</td>
			<td>BF 120-94-10</td>
			<td>We use orosilicate glass with filament, OD 1.20 mm, ID 0.94 mm, length 10 cm. However, filament needles are not necessary and most injection standard needles should work.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro-scalpel</td>
			<td>Feather</td>
			<td>P-715</td>
			<td>Micro Feather disposable opthalmic scalpel with plastic handle</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pasteur Pipettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>230 mm long</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">REAGENTS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tricaine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Low-melting point agarose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EQUIPMENT</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fine forceps&#160;</td>
			<td>FINE SCIENCE TOOLS GMBH&#160;</td>
			<td>11252-30&#160;</td>
			<td>Dumont #5</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Needle puller&#160;</td>
			<td>Sutter&#160;</td>
			<td>P97</td>
			<td>Heating-filament needle puller</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Binocular dissecting microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>S8 Apo</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a versatile mounting method for long term imaging of zebrafish development

Zebrafish भ्रूण पहुंच और ऑप्टिकल पारदर्शिता के अपने आसानी के कारण जटिल morphogenetic प्रक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए एक आदर्श प्रायोगिक प्रणाली की पेशकश करते हैं। विशेष रूप से, पीछे शरीर बढ़ाव भ्रूण विकास है जिसके द्वारा कई ऊतक विकृतियों एक साथ कार्य शरीर धुरी के एक बड़े हिस्से के गठन को निर्देशित करने में एक आवश्यक प्रक्रिया है। आदेश में लंबी अवधि के समय चूक इमेजिंग द्वारा इस प्रक्रिया का पालन करने के लिए यह एक बढ़ते तकनीक है कि पर्याप्त समर्थन माइक्रोस्कोप और अधिग्रहण करने के लिए स्थानांतरण के दौरान सही ओरिएंटेशन में नमूने बनाए रखने के लिए अनुमति देता है का उपयोग करने के लिए आवश्यक है। इसके अलावा, बढ़ते भी अपनी सामान्य विकास को प्रभावित किए बिना पीछे शरीर क्षेत्र के परिणाम के लिए आंदोलन की पर्याप्त स्वतंत्रता प्रदान करनी चाहिए। अंत में, वहाँ विविध इमेजिंग सेट-अप पर इमेजिंग अनुमति देने के लिए बढ़ते विधि की चंचलता में एक निश्चित डिग्री होना चाहिए। यहाँ, हम पीछे शरीर elongatio के विकास इमेजिंग के लिए एक बढ़ते तकनीक मौजूद हैn zebrafish डी rerio में। इस तकनीक को भ्रूण ऐसी है कि सिर और जर्दी थैली क्षेत्रों लगभग पूरी तरह से agarose में शामिल किए गए हैं बढ़ते, जबकि पीछे शरीर क्षेत्र से बाहर जा रही बढ़ाना और सामान्य रूप से विकसित करने के लिए शामिल है। हम दिखा देंगे कि यह कैसे, ईमानदार औंधा और ऊर्ध्वाधर प्रकाश चादर माइक्रोस्कोपी सेट-अप के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। इस प्रोटोकॉल के पीछे शरीर के लिए इमेजिंग के लिए भ्रूण बढ़ते पर केंद्रित है, यह आसानी से zebrafish विकास के कई पहलुओं का जीना इमेजिंग के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।

प्रोटोकॉल ऊपर उल्लिखित लंबी अवधि के समय चूक इमेजिंग के लिए zebrafish भ्रूण के बढ़ते के लिए एक बहुमुखी तकनीक का विवरण। इस का एक उदाहरण चित्रा 2A में और एनिमेटेड / वीडियो चित्र 1 में दिखा?...

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A Versatile Mounting Method for Long Term Imaging of Zebrafish Development

Here, we present a versatile mounting method that allows for the long-term time-lapse imaging of the posterior body development of live zebrafish embryos without perturbing normal development.

Zebrafish विकास की लॉन्ग टर्म इमेजिंग के लिए एक बहुमुखी बढ़ते विधि

Zebrafish embryos offer an ideal experimental system to study complex morphogenetic processes due to their ease of accessibility and optical transparency. ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Imaging Subcellular Structures in the Living Zebrafish Embryo

लिविंग zebrafish भ्रूण में subcellular संरचनाओं इमेजिंग

In vivo imaging provides unprecedented access to the dynamic behavior of cellular and subcellular structures in their natural context. Performing such ...

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

विश्लेषण<em&gt; Vivo</em&gt; सेल प्रवास zebrafish भ्रूण में सेल प्रत्यारोपण और समय चूक इमेजिंग का उपयोग कर

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration ...

Analysis of Zebrafish Kidney Development with Time-lapse Imaging Using a Dissecting Microscope Equipped for Optical Sectioning

समय चूक इमेजिंग एक विदारक माइक्रोस्कोप का उपयोग के साथ Zebrafish गुर्दे का विकास का विश्लेषण ऑप्टिकल सेक्शनिंग के लिए लैस

In order to understand organogenesis, the spatial and temporal alterations that occur during development of tissues need to be recorded. The method ...

A Submerged Filter Paper Sandwich for Long-term Ex Ovo Time-lapse Imaging of Early Chick Embryos

A Submerged Filter Paper Sandwich for Long-term Ex Ovo Time-lapse Imaging of Early Chick Embryos

लंबी अवधि के लिए एक जलमग्न फिल्टर पेपर सैंडविच<em&gt; पूर्व ओवो</em&gt; प्रारंभिक लड़की भ्रूण के समय चूक इमेजिंग

Due to its availability, low cost, flat geometry, and transparency, the ex ovo chick embryo has become a major vertebrate animal model for the study of ...

A Simple Chamber for Long-term Confocal Imaging of Root and Hypocotyl Development

रूट और हाइपोकॉटल विकास के दीर्घकालिक कन्फोकल इमेजिंग के लिए एक सरल चैंबर

Several aspects of plant development, such as lateral root morphogenesis, occur on time spans of several days. To study underlying cellular and ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

रहने वाले मेंढक और ज़ेबराफिश भ्रूण में हाइपोक्सिया का प्रेरण

Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

लंबे समय तक की लाइव इमेजिंग<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; नेत्र डिस्क

Live imaging provides the ability to continuously track dynamic cellular and developmental processes in real time. Drosophila larval imaginal discs have ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Organotypic संस्कृति विधि भ्रूण चिकन ऊतकों के विकास का अध्ययन करने के लिए

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

A Layered Mounting Method for Extended Time-Lapse Confocal Microscopy of Whole Zebrafish Embryos

पूरे ज़ेब्राफिश भ्रूण की विस्तारित समय-चूक कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी के लिए एक स्तरित बढ़ते विधि

Dynamics of development can be followed by confocal time-lapse microscopy of live transgenic zebrafish embryos expressing fluorescence in specific tissues ...