Name: 3d magnetic stem cell aggregation and bioreactor maturation for cartilage regeneration
Uploaded: 2017-04-27T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about 3D Magnetic Stem Cell Aggregation and Bioreactor Maturation for Cartilage Regeneration at JoVE.com

המחברים מבקשים להודות QuinXell טכנולוגיות CellD, במיוחד לותר Grannemann ודומיניק Ghozlan עזרתם עם bioreactor. אנו מודים קתרין Le Visage, אשר סיפק לנו את הפיגומים פוליסכריד pullulan / dextran. עבודה זו נתמכה על ידי האיחוד האירופי (ERC-2014-Cog פרויקט מאטיס 648,779) ועל ידי AgenceNationalede la משוכלל ונדיר (ANR), צרפת (פרויקט MagStem ANR-11 SVSE5).

1. בניית התקנים מגנטיים הערה: המכשירים המשמשים זריעת תאים משתנים בהתאם ליישום (איור 1). כדי ליצור אגרגטים, מספר התאים מוגבל 2.5 × 10 5 / המצרפי, כך העצות המגנטיות חייבות להיות דקות מאוד (750 מיקרומטר קוטר). כדי לזרוע את פיגומ?...

<ol>
	<li>Naumova, A. V., Modo, M., Moore, A., Murry, C. E., Frank, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+imaging+in+regenerative+medicine.">Clinical imaging in regenerative medicine.</a> Nat Biotechnol. 32 (8), 804-818 (2014).</li><li>Edmundson, M., Thanh, N. T., Song, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticles+based+stem+cell+tracking+in+regenerative+medicine.">Nanoparticles based stem cell tracking in regenerative medicine.</a> Theranostics. 3 (8), 573-582 (2013).</li><li>Di Corato, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+cellular+MRI:+gadolinium+and+iron+oxide+nanoparticles+for+in-depth+dual-cell+imaging+of+engineered+tissue+constructs.">High-resolution cellular MRI: gadolinium and iron oxide nanoparticles for in-depth dual-cell imaging of engineered tissue constructs.</a> ACS Nano. 7 (9), 7500-7512 (2013).</li><li>Xu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+magnetic+assembly+of+microscale+hydrogels.">Three-dimensional magnetic assembly of microscale hydrogels.</a> Adv Mater. 23 (37), 4254-4260 (2011).</li><li>Kito, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=iPS+cell+sheets+created+by+a+novel+magnetite+tissue+engineering+method+for+reparative+angiogenesis.">iPS cell sheets created by a novel magnetite tissue engineering method for reparative angiogenesis.</a> Sci Rep. 3, 1418 (2013).</li><li>Mironov, V., Kasyanov, V., Markwald, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotechnology+in+vascular+tissue+engineering:+from+nanoscaffolding+towards+rapid+vessel+biofabrication.">Nanotechnology in vascular tissue engineering: from nanoscaffolding towards rapid vessel biofabrication.</a> Trends Biotechnol. 26 (6), 338-344 (2008).</li><li>Mattix, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Janus+magnetic+cellular+spheroids+for+vascular+tissue+engineering.">Janus magnetic cellular spheroids for vascular tissue engineering.</a> Biomaterials. 35 (3), 949-960 (2014).</li><li>Henstock, J., El Haj, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+mechanotransduction+in+therapeutic+MSCs:+can+remotely+controlled+magnetic+nanoparticles+regenerate+bones?.">Controlled mechanotransduction in therapeutic MSCs: can remotely controlled magnetic nanoparticles regenerate bones?.</a> Regen Med. 10 (4), 377-380 (2015).</li><li>Fayol, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+magnetic+forces+to+promote+stem+cell+aggregation+during+differentiation,+and+cartilage+tissue+modeling.">Use of magnetic forces to promote stem cell aggregation during differentiation, and cartilage tissue modeling.</a> Adv Mater. 25 (18), 2611-2616 (2013).</li><li>Bartlett, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+chondrocyte+implantation+versus+matrix-induced+autologous+chondrocyte+implantation+for+osteochondral+defects+of+the+knee:+a+prospective,+randomised+study.">Autologous chondrocyte implantation versus matrix-induced autologous chondrocyte implantation for osteochondral defects of the knee: a prospective, randomised study.</a> J Bone Joint Surg Br. 87 (5), 640-645 (2005).</li><li>Batty, L., Dance, S., Bajaj, S., Cole, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+chondrocyte+implantation:+an+overview+of+technique+and+outcomes.">Autologous chondrocyte implantation: an overview of technique and outcomes.</a> ANZ J Surg. 81, 18-25 (2011).</li><li>Song, L., Baksh, D., Tuan, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cell-based+cartilage+tissue+engineering:+cells,+scaffold+and+biology.">Mesenchymal stem cell-based cartilage tissue engineering: cells, scaffold and biology.</a> Cytotherapy. 6 (6), 596-601 (2004).</li><li>Boeuf, S., Richter, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chondrogenesis+of+mesenchymal+stem+cells:+role+of+tissue+source+and+inducing+factors.">Chondrogenesis of mesenchymal stem cells: role of tissue source and inducing factors.</a> Stem Cell Res Ther. 1 (4), 31 (2010).</li><li>Kock, L., van Donkelaar, C. C., Ito, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+engineering+of+functional+articular+cartilage:+the+current+status.">Tissue engineering of functional articular cartilage: the current status.</a> Cell Tissue Res. 347 (3), 613-627 (2012).</li><li>Schon, B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+high-throughput+microtissue+fabrication+process+for+3D+assembly+of+tissue+engineered+cartilage+constructs.">Validation of a high-throughput microtissue fabrication process for 3D assembly of tissue engineered cartilage constructs.</a> Cell Tissue Res. , (2012).</li><li>Robert, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+micro-manipulations+to+probe+the+local+physical+properties+of+porous+scaffolds+and+to+confine+stem+cells.">Magnetic micro-manipulations to probe the local physical properties of porous scaffolds and to confine stem cells.</a> Biomaterials. 31 (7), 1586-1595 (2010).</li><li>Luciani, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+chondrogenesis+within+scaffolds,+using+magnetic+stem+cell+confinement+and+bioreactor+maturation.">Successful chondrogenesis within scaffolds, using magnetic stem cell confinement and bioreactor maturation.</a> Acta Biomaterialia. 37, 101-110 (2016).</li><li>Wilhelm, C., Gazeau, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Universal+cell+labelling+with+anionic+magnetic+nanoparticles.">Universal cell labelling with anionic magnetic nanoparticles.</a> Biomaterials. 29 (22), 3161-3174 (2008).</li><li>Fayol, D., Luciani, N., Lartigue, L., Gazeau, F., Wilhelm, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Managing+magnetic+nanoparticle+aggregation+and+cellular+uptake:+a+precondition+for+efficient+stem-cell+differentiation+and+MRI+tracking.">Managing magnetic nanoparticle aggregation and cellular uptake: a precondition for efficient stem-cell differentiation and MRI tracking.</a> Adv Healthc Mater. 2 (2), 313-325 (2013).</li><li>Wilhelm, C., Gazeau, F., Bacri, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetophoresis+and+ferromagnetic+resonance+of+magnetically+labeled+cells.">Magnetophoresis and ferromagnetic resonance of magnetically labeled cells.</a> Eur Biophys J. 31 (2), 118-125 (2002).</li><li>Autissier, A., Le Visage, C., Pouzet, C., Chaubet, F., Letourneur, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fabrication+of+porous+polysaccharide-based+scaffolds+using+a+combined+freeze-drying/cross-linking+process.">Fabrication of porous polysaccharide-based scaffolds using a combined freeze-drying/cross-linking process.</a> Acta Biomater. 6 (9), 3640-3648 (2010).</li><li>Singh, N., Jenkins, G. J. S., Asadi, R., Doak, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+toxicity+of+superparamagnetic+iron+oxide+nanoparticles+(SPION).">Potential toxicity of superparamagnetic iron oxide nanoparticles (SPION).</a> Nano Reviews. 1, (2010).</li><li>Lee, J. H., Hur, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scaffold-free+formation+of+a+millimeter-scale+multicellular+spheroid+with+an+internal+cavity+from+magnetically+levitated+3T3+cells+that+ingested+iron+oxide-containing+microspheres.">Scaffold-free formation of a millimeter-scale multicellular spheroid with an internal cavity from magnetically levitated 3T3 cells that ingested iron oxide-containing microspheres.</a> Biotechnol Bioeng. 111 (5), 1038-1047 (2014).</li><li>Mattix, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+magnetic+cellular+spheroids+as+building+blocks+for+tissue+engineering.">Biological magnetic cellular spheroids as building blocks for tissue engineering.</a> Acta Biomaterialia. 10 (2), 623-629 (2014).</li><li>Mazuel, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Massive+Intracellular+Biodegradation+of+Iron+Oxide+Nanoparticles+Evidenced+Magnetically+at+Single-Endosome+and+Tissue+Levels.">Massive Intracellular Biodegradation of Iron Oxide Nanoparticles Evidenced Magnetically at Single-Endosome and Tissue Levels.</a> ACS Nano. 10 (8), 7627-7638 (2016).</li><li>Kim, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+generation+of+spheroids+using+magnetic+nanoparticles+for+three-dimensional+cell+culture.">High-throughput generation of spheroids using magnetic nanoparticles for three-dimensional cell culture.</a> Biomaterials. 34 (34), 8555-8563 (2013).</li><li>Shimizu, K., Ito, A., Honda, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+cell-seeding+into+3D+porous+scaffolds+by+use+of+magnetite+nanoparticles.">Enhanced cell-seeding into 3D porous scaffolds by use of magnetite nanoparticles.</a> J Biomed Mater Res B Appl Biomater. 77 (2), 265-272 (2006).</li><li>Sensenig, R., Sapir, Y., MacDonald, C., Cohen, S., Polyak, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+nanoparticle-based+approaches+to+locally+target+therapy+and+enhance+tissue+regeneration+in+vivo.">Magnetic nanoparticle-based approaches to locally target therapy and enhance tissue regeneration in vivo.</a> Nanomedicine (Lond). 7 (9), 1425-1442 (2012).</li><li>Waldman, S. D., Couto, D. C., Grynpas, M. D., Pilliar, R. M., Kandel, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-axial+mechanical+stimulation+of+tissue+engineered+cartilage:+review.">Multi-axial mechanical stimulation of tissue engineered cartilage: review.</a> Eur Cell Mater. 13, 66-74 (2007).</li><li>Takahashi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compressive+force+promotes+sox9,+type+II+collagen+and+aggrecan+and+inhibits+IL-1beta+expression+resulting+in+chondrogenesis+in+mouse+embryonic+limb+bud+mesenchymal+cells.">Compressive force promotes sox9, type II collagen and aggrecan and inhibits IL-1beta expression resulting in chondrogenesis in mouse embryonic limb bud mesenchymal cells.</a> J Cell Sci. 111 (14), 2067-2076 (1998).</li><li>Campbell, J. J., Lee, D. A., Bader, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+compressive+strain+influences+chondrogenic+gene+expression+in+human+mesenchymal+stem+cells.">Dynamic compressive strain influences chondrogenic gene expression in human mesenchymal stem cells.</a> Biorheology. 43, 455-470 (2006).</li><li>Vunjak-Novakovic, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioreactor+cultivation+conditions+modulate+the+composition+and+mechanical+properties+of+tissue-engineered+cartilage.">Bioreactor cultivation conditions modulate the composition and mechanical properties of tissue-engineered cartilage.</a> J Orthop Res. 17 (1), 130-138 (1999).</li></ol>

ראשית, בגלל הטכניקות שהוצגו כאן מסתמכים על ההפנמה של חלקיקים מגנטיים, נושא חשוב אחד הוא תוצאה של חלקיקים ברגע שהם למקם בתוך התאים. נכון חלקיקי ברזל עלולים לגרום לרעילויות פוטנציאל או יכולת בידול לקויה תלוי בגודל, הציפוי שלהם, וזמן חשיפה 19, <sup class="xref"...

חלקיקים מגנטיים משמשים כבר במרפאת בתור סוכנים בניגוד עבור דימות תהודה מגנטית (MRI), והיישומים הטיפוליים שלהם ולשמור על רחבה. לדוגמא, הוכח לאחרונה כי תאי שכותרתו ניתן להשפיע in vivo באמצעות שדה מגנטי חיצוני ויכולים להיות מופנים ו / או נשמרו אתר מוגדר של השתלה 1, 2, 3. ברפואת רגנרטיבית, הם יכולים לשמש כדי להנדס רקמות מאורגנות במבחנה 4, כוללים כלי דם ברקמה 5, 6, 7, 8 עצם, ואת סחוס 9. סחוס במפרק שקוע בסביבת avascular, עושה תיקונים של רכיבי מטריקס מוגבלים מאוד כאשר הנזקים להתרחש. מסיבה זו, research מתמקדת כרגע על ההנדסה של החלפות סחוס hyaline שניתן מושתלות באתר הפגם. על מנת לייצר תחליף עצמי, כמה קבוצות מחקר בוחנות את השימוש של כונדרוציטים אוטולוגי כמקור תא 10, 11, בעוד שאחרים מדגישים את היכולת של תאי גזע מזנכימיים (MSC) להתמיין chondrocytes 12, 13. במחקרים קודמים סכמו כאן, בחרנו MSC, כמו דגימת מח העצם שלהם היא פשוטה למדי ואינו דורשת את ההקרבה של כונדרוציטים בריאים, אשר עלולים לאבד פנוטיפ שלהם 14. מוקדם צעד חיוני כדי ליזום את בידול chondrogenic של תאי גזע הוא ההתעבות שלהם. אגרגטים תא נוצרים בדרך כלל באף אחת צנטריפוגה או micromass תרבות 15; עם זאת, שיטות התעבות האלה neither להציג את הפוטנציאל ליצור צבירי תאים בתוך פיגומים עבים ולא את הפוטנציאל לשלוט ההיתוך של אגרגטים. במאמר זה, אנו מתארים גישה חדשנית עיבוי בתאי גזע באמצעות תיוג MSC מגנטי משיכה מגנטית. טכניקה זו הוכחה כדי ליצור מבני 3D ללא פיגום באמצעות שילוב של אגרגטים אחד עם השני כדי להשיג רקמות סחוס בקנה מידת מילימטר 9. זריעת מגנטי של פיגומים עבים וגדולים גם אפשרה את האפשרות של הגדלת הגודל של הרקמות המהונדסות, עיצוב צורה יותר בקלות שימושית עבור השתלה, ולגוון את הפוטנציאל עבור יישומים קליניים תיקון סחוס. כאן, אנו בפירוט את הפרוטוקול עבור הזריעה המגנטית של MSC לתוך פיגומים נקבוביים מורכבים סוכרים טבעיים, pullulan, פולימרים, פיגומים השתמשו בעבר כדי להגביל תאי גזע 16, 17. בידול Chondrogenic היה finally המבוצעת bioreactor כדי להבטיח מזין רציף דיפוזיה גז לתוך ליבת המטריצה ​​של הפיגומים שנזרעו עם צפיפות גבוהה של תאים. מלבד מתן חומרים מזינים, גורמי גדילה chondrogenic, וגז אל התאים, bioreactor המוצעים גירוי מכני. בסך הכל, הטכנולוגיה המגנטית נהגה להגביל תאי גזע, בשילוב עם התבגרות דינמית bioreactor, יכולה לשפר בידול chondrogenic ניכרה.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Iron&#160; oxide (maghemite) nanoparticules ( &#947;-Fe2O3)</td>
			<td>PHENIX - University Paris 6</td>
			<td>Made and given by C. M&#233;nager</td>
			<td>Mean diameter of 8.1 nm and negative surface charge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polysaccharide Pullulan/Dextran scaffolds</td>
			<td>LIOAD - University Nantes</td>
			<td>Made and given by C. Le Visage</td>
			<td>Prepared from a 75:25 mixture of pullulan/dextran in alkaline conditions (10M NaOH). Porosity: 185-205&#181;m; Thickness: 7mm; Surface area: 1.8cm2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TisXell Regeneration System</td>
			<td>QuinXell Technologies</td>
			<td>QX900-002</td>
			<td>Biaxial bioreactor with 500 mL culture chamber&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cage for scaffolds: Histosette II M492&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>720-0909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesenchymal Stem Cell (MSC)</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>PT-2501</td>
			<td>Three independant batches have been used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MSCGM BulletKit medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>PT-3001</td>
			<td>For the complete medium, add the provided BulletKit (containing serum, glutamine and antibiotics) to the MSCGM medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM with Glutamax I</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>31966-021</td>
			<td>No sodium pyruvate, no HEPES</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI medium 1640, no Glutamine</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>31870-025</td>
			<td>No sodium pyruvate, no HEPES</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS w/o CaCl2 w/o MgCl2</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>14190-094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.05% Trypsin-EDTA (1x)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25300-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin (10.000U/mL)/Streptomicin (10.000&#181;g/mL)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ITS Premix Universal Culture Supplement (20x)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate solution 100mM</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S8636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic Acid 2-phosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8960</td>
			<td>Prepare the concentrated solution (25 mM) in distilled water extemporaneously</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Proline</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5607</td>
			<td>Prepare the 175 mM stock solution diluted in distilled water and store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4902</td>
			<td>Prepare the 1 mM stock solution diluted in Ethanol 100% and store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TGF-beta 3 protein 10&#181;g</td>
			<td>Interchim</td>
			<td>30R-AT028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tri-sodium citrate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>33615.268</td>
			<td>Prepare the 1M stock solution diluted in distilled water and store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pullulanase from Bacillus acidopullulyticus</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2986</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextranase from Chaetomium erraticum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D0443</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NucleoSpin RNA Extraction Kit</td>
			<td>Macherey-Nagel</td>
			<td>740955.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperScript II Reverse Transcriptase</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>18064-014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Random Primer - Hexamer&#160;</td>
			<td>Promega</td>
			<td>C1181</td>
			<td>500 &#181;g/mL: Use diluted 1/2 and put 1 &#181;L per sample</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant RNAsin ribonuclease inhibitor</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2511</td>
			<td>40 U/&#181;L: put 1 &#181;L per sample</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR nucleotide dNTP mix (10mM each)</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10842321</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SyBr Green PCR Master Mix</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>4368708</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Step One Plus Real-Time PCR System</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>4381792</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution 10% neutral buffered</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT5012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT solution</td>
			<td>VWR</td>
			<td>361603E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopentane</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M32631</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluidine blue O</td>
			<td>VWR</td>
			<td>1.15930.0025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20821.310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluene</td>
			<td>VWR</td>
			<td>1.08323.1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium Pertex</td>
			<td>Histolab</td>
			<td>840</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPLP0 Primer for qPCR</td>
			<td>Eurogentec</td>
			<td></td>
			<td>5&#39;-TGCATCAGTAC 
			CCCATTCTATCAT-3&#39; ; 
			5&#39;-AAGGTGTAATC 
			CGTCTCCACAGA-3&#39;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aggrecan Primer for qPCR</td>
			<td>Eurogentec</td>
			<td></td>
			<td>5&#39;-TCTACCGCTGCGAGGTGAT-3&#39; ; 3&#39;-TGTAATGGAACACGATGCCTTT-5&#39;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen II Primer for qPCR</td>
			<td>Eurogentec</td>
			<td></td>
			<td>5&#39;-ACTGGATTGACCCCAACCAA-3&#39; ; 3&#39;-TCCATGTTGCAGAAAACCTTCA-5&#39;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

3d magnetic stem cell aggregation and bioreactor maturation for cartilage regeneration

הנדסת סחוס עדיין מהווה אתגר בשל קשיים ביצירת שתל במבחנה תפקודית דומה רקמות הילידים. גישה בחנה לאחרונה לפיתוח תחליפים אוטולוגי כרוך הבידול של תאי גזע לתוך כונדרוציטים. כדי ליזום chondrogenesis זה, מידה של דחיסה של תאי הגזע נדרש; ומכאן, הראינו את הכדאיות של תאי עיבוי מגנטי, הוא בתוך פיגומים עבים פיגום ללא שימוש במקורות שדה מגנטיים מיניאטורי כמו משיכת תא. גישה מגנטית זה גם שמשה להנחות היתוך צבירה לבנות פיגום ללא, מאורגן, תלת ממדי (3D) רקמות כמה מילימטרים בגודלם. בנוסף בעל גודל משופר, הרקמה הנוצרת על-ידי היתוך מגנטי מונחה הציגה גידול משמעותי בביטוי של קולגן השנייה, ומגמה דומה נצפתה עבור ביטוי aggrecan. כמו סחוס הילידים היה נתון הכוחות tכובע השפיע מבנה 3D שלה, התבגרות דינמית גם בוצעה. Bioreactor המספק גירויים מכאניים שמש לתרבות הפיגומים המגנטיים הזורעים לאורך תקופה של 21 יום. התבגרות Bioreactor השתפרה במידה רבה chondrogenesis לתוך פיגומי cellularized; מטריקס שהושג בתנאים אלה היה עשיר קולגן השני aggrecan. עבודה זו מתארת ​​את הפוטנציאל החדשני של התעבות המגנטית של תאי גזע שכותרתו והתבגרות דינמית בתוך bioreactor לבידול chondrogenic משופר, הוא פיגומי פוליסכריד הפיגום ללא ובתוך.

ראשית, אגרגטים יכול להיווצר בנפרד באמצעות מיקרו-מגנטים על ידי הפקדת 2.5 × 10 5 תאי גזע שכותרתו (איור 2 א). אגרגטים יחידים אלה (~ 0.8 מ&quot;מ גודל) לאחר מכן ניתן התמזגו לתוך בזכות מבנים גדולים כדי היתוך רציף, מושרה מגנטי. למשל, ביום 8 של התבגרות chond...

Watch this Scientific Journal Video about 3D Magnetic Stem Cell Aggregation and Bioreactor Maturation for Cartilage Regeneration at JoVE.com

3D Magnetic Stem Cell Aggregation and Bioreactor Maturation for Cartilage Regeneration

Chondrogenesis מתאי גזע דורש כוונון עדין תנאי התרבות. כאן, אנו מציגים גישה מגנטית עבור עיבוי תאים, צעד חיוני ליזום chondrogenesis. בנוסף, אנו מראים כי התבגרות דינמית בתוך bioreactor חלה גירוי מכאני כדי המבנים הסלולר ומשפרת ייצור תאי מטריקס סחוסים.

צבירת Cell מגנטי גזע 3D והתבגרות Bioreactor להתחדשות סחוס

Cartilage engineering remains a challenge due to the difficulties in creating an in vitro functional implant similar to the native tissue. An approach ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Use of Human Perivascular Stem Cells for Bone Regeneration

שימוש בתאי גזע לשחזור עצם Perivascular

Human perivascular stem cells (PSCs) can be isolated in sufficient numbers from multiple tissues for purposes of skeletal tissue engineering1-3. PSCs are ...

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells (hESC) to Different Lineages

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells hESC to Different Lineages

אלגינט microcapsule כפלטפורמה 3D עבור ריבוי והתמיינות של בתאי גזע עובריים אנושיים (hESC) כדי שושלות שונות

Human embryonic stem cells (hESC) are emerging as an attractive alternative source for cell replacement therapy since they can be expanded in culture ...

Preparation of 3D Fibrin Scaffolds for Stem Cell Culture Applications

הכנת 3D הפיברין פיגומים יישומים סלולריים גזע תרבות

Stem cells are found in naturally occurring 3D microenvironments in vivo, which are often referred to as the stem cell niche 1. Culturing stem cells ...

Nonhuman Primate Lung Decellularization and Recellularization Using a Specialized Large-organ Bioreactor

There are an insufficient number of lungs available to meet current and future organ transplantation needs. Bioartificial tissue regeneration is an ...

Engineering 3D Cellularized Collagen Gels for Vascular Tissue Regeneration

הנדסת ג&#39;ל קולגן Cellularized 3D לשחזור רקמות וכלי דם

Synthetic materials are known to initiate clinical complications such as inflammation, stenosis, and infections when implanted as vascular substitutes. ...

3D Hydrogel Scaffolds for Articular Chondrocyte Culture and Cartilage Generation

3D Hydrogel פיגומים למפרקים הכונדרוציטים תרבות וסחוס דור

Human articular cartilage is highly susceptible to damage and has limited self-repair and regeneration potential. Cell-based strategies to engineer ...

Micropatterning and Assembly of 3D Microvessels

Micropatterning והרכבת 3D microvessels

In vitro platforms to study endothelial cells and vascular biology are largely limited to 2D endothelial cell culture, flow chambers with polymer or glass ...

Bioprinting of Cartilage and Skin Tissue Analogs Utilizing a Novel Passive Mixing Unit Technique for Bioink Precellularization

Bioprinting של הסחוס, תחליפי רקמת העור ניצול פסיבים הרומן ערבוב טכניקה יחידה עבור Bioink Precellularization

Bioprinting is a powerful technique for the rapid and reproducible fabrication of constructs for tissue engineering applications. In this study, both ...

Large-Scale, Automated Production of Adipose-Derived Stem Cell Spheroids for 3D Bioprinting

ייצור אוטומטי בקנה מידה גדול של כדורי תאי גזע שמקורם בשומן להדפסה ביולוגית תלת-ממדית

Adipose-derived stromal/stem cells (ASCs) are a subpopulation of cells found in the stromal vascular fraction of human subcutaneous adipose tissue ...

Imaging-Guided Bioreactor for Generating Bioengineered Airway Tissue

ביוריאקטור מונחה הדמיה ליצירת רקמת נתיב אוויר מהונדסת ביולוגית

Repeated injury to airway tissue can impair lung function and cause chronic lung disease, such as chronic obstructive pulmonary disease. Advances in ...