Name: analysis of chromosome segregation, histone acetylation, and spindle morphology in horse oocytes
Uploaded: 2017-05-11T14:00:00
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저자들은 레이저 스캐닝 공 촛점 현미경 (LSCM) , Philippe Barrière 및 Thierry Blard의 매일 초음파 난소 스캐닝 및 hCG 주입에 대한 지원을 위해 Fabrice Vincent에게 감사드립니다. 이 작품은 부분적으로 &quot;Regione Sardegna and Regione Lombardia&quot;프로젝트 &quot;Ex Ovo Omnia&quot;(보조금 26096200에서 AML로)에 의해 지원되었습니다. &quot;L&#39; Oreal Italia per le Donne e la Scienza 2012&quot;Fellowship (2012 년 FF로 계약), FP7-PEOPLE-2011-CIG, 연구 집행 기관 (REA) &quot;Pro-Ovum&quot;(부여 번호 303640 - VL); 유럽 ​​사회 기금, 인적 자원 개발 부문 별 운영 프로그램 (2007-2013 년 계약 번호 : POSDRU / 89 / 1.5 / S / 62371 in IM)이 공동으로 후원하는 농업 및 수의학 박사 과정이있다. in vivo oocyte collection은 Français du Cheval et de l&#39; Equitation에 의해 지원되었습니다.

모든 절차는 동물 보호 및 사용위원회 CEEA Val de Loire Number 19에 의해 승인되었으며 실험실 동물의 관리 및 사용에 관한 지침에 따라 수행되었습니다. 1. 난 모세포 수집 및 생체 외 성숙 <ol><li> 오옴 픽업 <ol><li> 매일 성인 암말 집단에서 난소 난소의 직경을 초음파로 평가합니다. 난포가 33 mm 이상일 때, 정맥 정맥 상부에 1,500 IU의 인간 chorionic gonadotrophin (hCG)...

<ol>
	<li>Dellenbach, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transvaginal,+sonographically+controlled+ovarian+follicle+puncture+for+egg+retrieval.">Transvaginal, sonographically controlled ovarian follicle puncture for egg retrieval.</a> Lancet. 1 (8392), 1467 (1984).</li><li>Humaidan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+hyperstimulation+syndrome:+review+and+new+classification+criteria+for+reporting+in+clinical+trials.">Ovarian hyperstimulation syndrome: review and new classification criteria for reporting in clinical trials.</a> Hum Reprod. , (2016).</li><li>Pincus, G., Enzmann, E. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Comparative+Behavior+of+Mammalian+Eggs+in+Vivo+and+in+Vitro+:+I.+The+Activation+of+Ovarian+Eggs.">The Comparative Behavior of Mammalian Eggs in Vivo and in Vitro : I. The Activation of Ovarian Eggs.</a> J Exp Med. 62 (5), 665-675 (1935).</li><li>Emery, B. R., Wilcox, A. L., Aoki, V. W., Peterson, C. M., Carrell, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+oocyte+maturation+and+subsequent+delayed+fertilization+is+associated+with+increased+embryo+aneuploidy.">In vitro oocyte maturation and subsequent delayed fertilization is associated with increased embryo aneuploidy.</a> Fertil Steril. 84 (4), 1027-1029 (2005).</li><li>Nichols, S. M., Gierbolini, L., Gonzalez-Martinez, J. A., Bavister, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+in+vitro+maturation+and+age+on+oocyte+quality+in+the+rhesus+macaque+Macaca+mulatta.">Effects of in vitro maturation and age on oocyte quality in the rhesus macaque Macaca mulatta.</a> Fertil Steril. 93 (5), 1591-1600 (2010).</li><li>Requena, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+in-vitro+maturation+of+oocytes+on+aneuploidy+rate.">The impact of in-vitro maturation of oocytes on aneuploidy rate.</a> Reprod Biomed Online. 18 (6), 777-783 (2009).</li><li>Franciosi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+maturation+affects+chromosome+segregation,+spindle+morphology+and+acetylation+of+lysine+16+on+histone+H4+in+horse+oocytes.">In vitro maturation affects chromosome segregation, spindle morphology and acetylation of lysine 16 on histone H4 in horse oocytes.</a> Reprod Fertil Dev. , (2015).</li><li>Franciosi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+histone+H4+acetylation+during+in+vivo+versus+in+vitro+maturation+of+equine+oocytes.">Changes in histone H4 acetylation during in vivo versus in vitro maturation of equine oocytes.</a> Mol Hum Reprod. 18 (5), 243-252 (2012).</li><li>Choi, Y. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mare:+a+1000-pound+guinea+pig+for+study+of+the+ovulatory+follicular+wave+in+women.">The mare: a 1000-pound guinea pig for study of the ovulatory follicular wave in women.</a> Theriogenology. 77 (5), 818-828 (2012).</li><li>Chiang, T., Duncan, F. E., Schindler, K., Schultz, R. M., Lampson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+that+weakened+centromere+cohesion+is+a+leading+cause+of+age-related+aneuploidy+in+oocytes.">Evidence that weakened centromere cohesion is a leading cause of age-related aneuploidy in oocytes.</a> Curr Biol. 20 (17), 1522-1528 (2010).</li><li>Duncan, F. E., Chiang, T., Schultz, R. M., Lampson, M. 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H., Hochi, S., Braun, J., Sato, K., Oguri, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+maturation+of+equine+oocytes+collected+by+follicle+aspiration+and+by+the+slicing+of+ovaries.">In vitro maturation of equine oocytes collected by follicle aspiration and by the slicing of ovaries.</a> Theriogenology. 40 (5), 959-966 (1993).</li><li>Hassold, T., Hunt, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=To+err+(meiotically)+is+human:+the+genesis+of+human+aneuploidy.">To err (meiotically) is human: the genesis of human aneuploidy.</a> Nat Rev Genet. 2 (4), 280-291 (2001).</li><li>Akiyama, T., Nagata, M., Aoki, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inadequate+histone+deacetylation+during+oocyte+meiosis+causes+aneuploidy+and+embryo+death+in+mice.">Inadequate histone deacetylation during oocyte meiosis causes aneuploidy and embryo death in mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (19), 7339-7344 (2006).</li><li>Homer, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mad2+prevents+aneuploidy+and+premature+proteolysis+of+cyclin+B+and+securin+during+meiosis+I+in+mouse+oocytes.">Mad2 prevents aneuploidy and premature proteolysis of cyclin B and securin during meiosis I in mouse oocytes.</a> Genes Dev. 19 (2), 202-207 (2005).</li><li>Rambags, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Numerical+chromosomal+abnormalities+in+equine+embryos+produced+in+vivo+and+in+vitro.">Numerical chromosomal abnormalities in equine embryos produced in vivo and in vitro.</a> Mol Reprod Dev. 72 (1), 77-87 (2005).</li><li>Nabti, I., Marangos, P., Bormann, J., Kudo, N. R., Carroll, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-mode+regulation+of+the+APC/C+by+CDK1+and+MAPK+controls+meiosis+I+progression+and+fidelity.">Dual-mode regulation of the APC/C by CDK1 and MAPK controls meiosis I progression and fidelity.</a> J Cell Biol. 204 (6), 891-900 (2014).</li><li>Shomper, M., Lappa, C., FitzHarris, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetochore+microtubule+establishment+is+defective+in+oocytes+from+aged+mice.">Kinetochore microtubule establishment is defective in oocytes from aged mice.</a> Cell Cycle. 13 (7), 1171-1179 (2014).</li><li>Luzzo, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+fat+diet+induced+developmental+defects+in+the+mouse:+oocyte+meiotic+aneuploidy+and+fetal+growth+retardation/brain+defects.">High fat diet induced developmental defects in the mouse: oocyte meiotic aneuploidy and fetal growth retardation/brain defects.</a> PLoS One. 7 (11), e49217 (2012).</li><li>Ma, P., Schultz, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histone+deacetylase+2+(HDAC2)+regulates+chromosome+segregation+and+kinetochore+function+via+H4K16+deacetylation+during+oocyte+maturation+in+mouse.">Histone deacetylase 2 (HDAC2) regulates chromosome segregation and kinetochore function via H4K16 deacetylation during oocyte maturation in mouse.</a> PLoS Genet. 9 (3), e1003377 (2013).</li><li>Yang, F., Baumann, C., Viveiros, M. M., De La Fuente, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histone+hyperacetylation+during+meiosis+interferes+with+large-scale+chromatin+remodeling,+axial+chromatid+condensation+and+sister+chromatid+separation+in+the+mammalian+oocyte.">Histone hyperacetylation during meiosis interferes with large-scale chromatin remodeling, axial chromatid condensation and sister chromatid separation in the mammalian oocyte.</a> Int J Dev Biol. 56 (10-12), 889-899 (2012).</li><li>Luciano, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocytes+isolated+from+dairy+cows+with+reduced+ovarian+reserve+have+a+high+frequency+of+aneuploidy+and+alterations+in+the+localization+of+progesterone+receptor+membrane+component+1+and+aurora+kinase+B.">Oocytes isolated from dairy cows with reduced ovarian reserve have a high frequency of aneuploidy and alterations in the localization of progesterone receptor membrane component 1 and aurora kinase B.</a> Biol Reprod. 88 (3), 58 (2013).</li><li>Luciano, A. M., Lodde, V., Franciosi, F., Ceciliani, F., Peluso, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progesterone+receptor+membrane+component+1+expression+and+putative+function+in+bovine+oocyte+maturation,+fertilization,+and+early+embryonic+development.">Progesterone receptor membrane component 1 expression and putative function in bovine oocyte maturation, fertilization, and early embryonic development.</a> Reproduction. 140 (5), 663-672 (2010).</li><li>Terzaghi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PGRMC1+participates+in+late+events+of+bovine+granulosa+cells+mitosis+and+oocyte+meiosis.">PGRMC1 participates in late events of bovine granulosa cells mitosis and oocyte meiosis.</a> Cell Cycle. , 1-14 (2016).</li><li>Susor, A., Jansova, D., Anger, M., Kubelka, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translation+in+the+mammalian+oocyte+in+space+and+time.">Translation in the mammalian oocyte in space and time.</a> Cell Tissue Res. 363 (1), 69-84 (2016).</li><li>Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+analysis+of+translation+reveals+a+critical+role+for+deleted+in+azoospermia-like+(Dazl)+at+the+oocyte-to-zygote+transition.">Genome-wide analysis of translation reveals a critical role for deleted in azoospermia-like (Dazl) at the oocyte-to-zygote transition.</a> Genes Dev. 25 (7), 755-766 (2011).</li><li>Ma, J., Flemr, M., Strnad, H., Svoboda, P., Schultz, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternally+recruited+DCP1A+and+DCP2+contribute+to+messenger+RNA+degradation+during+oocyte+maturation+and+genome+activation+in+mouse.">Maternally recruited DCP1A and DCP2 contribute to messenger RNA degradation during oocyte maturation and genome activation in mouse.</a> Biol Reprod. 88 (1), 11 (2013).</li></ol>

비록 IVM이 20 년 이상 말에서 수행되었지만, 우리는 인간에게 제안 된 것처럼 난 모세포가 배아 이수 배체의 기원이 될 수 있는지 여부를 아직 모른다. 그 이유는 염색체 계수를위한 난 모세포의 준비가 상당한 표본 손실을 초래할 수 있기 때문일 것입니다. 이를 염두에두고 염색체 분리의 오류를 조사하는 데 사용 된 방법을 조사하여 말의 난 모세포에 적용 할 수있는 가장 적합한 기술을 찾아 냈?...

여성, 동반자 동물 및 멸종 위기에 처한 종의 불임 치료를 위해 광범위한 재현 기술이 개발되었습니다. 임상 환경에서 가장 보편적 인 절차 중 하나는 초음파 유도 질식 흡입, 난자 채집 (OPU) 1 에 의한 난소에서 난태 (metaphase) II (MII) 단계 난 모세포를 회수하는 것입니다. 이 난 모세포는 수용체 자궁에 이식 된 배아와 함께 시험 관내 (IVF)에서 수정된다. MII- 단계 (성숙한) 난 모세포는 외인성 생식선 자극 호르몬의 투여 후에 회수된다. 그러나이 치료법은 일부 환자에서 난소과 자극 증후군 (OHSS) 2 의 발병과 관련이 있습니다. 한 번 모낭에서 분리 된 자발적으로 감수 분열을 재개하기위한 완전히 성장한 미숙 난 모세포 (GV-stage)의 내재적 인 능력을 이용하여, 관리자없이 성숙한 난 모체를 얻을 수 있습니다gonadotropin 조율 3 . 이 과정은 난자 시험관 내 성숙 (IVM)이라고 불리우며 생식 기술을 돕는 데있어 덜 약물 지향적이고 덜 비싸며 환자 친화적 인 접근 방식을 의미합니다. 그러나 체외 에서 성숙 된 난 모세포 를 이용한 배아 발달의 성공은 일반적 으로 생체 내에서 성숙한 난 모세포보다 더 낮다. 가능한 설명은 체외에서 성숙한 난 모세포가 염색체 분리의 오류에 더 영향을 받고, 결과 배수체가 정상 배아 발생을 저해한다는 것이다. IVM 동안의 염색체 오 분류의 분자 적 기초를 이해하는 것은 궁극적으로이 기술의 잠재력을 밝혀 줄 것입니다. 이 정맥 에서 in vitro에서 성숙한 난 모세포의 형태 학적 및 생화학 적 특징을 생체 내 성숙과 비교하는 실험 접근법ed oocytes는 7 , 8에 기술되어 있다. 구체적으로, 미성숙 및 성숙 난 모세포의 OPU 및 미성숙 난 모세포의 IVM 절차는 실험 모델로서 성인 및 자연 사이클링 말을 사용하여 설명됩니다. 그런 다음 immunofluorescence 및 이미지 분석은 염색체 분리, 스핀들 형태 및 이러한 배우자의 히스톤 아세틸 화의 전체적인 패턴을 조사하는 데 사용됩니다. 마지막으로 mRNA 발현 분석을 위해 역전사 및 정량적 PCR 프로토콜을 설명합니다. 설치류 동물 모델과 비교하여 말은 유전자 조작을 허용하지 않으며 조작하기가 쉽지 않으며 값 비싼 유지 관리가 필요합니다. 그러나이 모델은 난 모세포 생리학과의 유사성으로 인해 난 모세포의 성숙에 대한 연구에 상당한 관심을 보이고있다 9 , 10 &lt;/ sup&gt;. 더욱이, 말에서 IVM-IVF의 신뢰할 수있는 프로토콜의 개발은 높은 유전 적 가치의 암말로부터의 새끼의 수를 증가시킬 수 있기 때문에 상당한 경제적 이익을 갖는다. 난 모세포 (oocytes), 특히 독성이있는 종에서 실험을 수행하는 데있어 한계 중 하나는 제한된 샘플 가용성입니다. 이 한계는 샘플 손실을 최소화하는 염색체 계수를 수행하기 위해 이전에 생쥐에서 개발 된 접근법을 말 난 모세포 13 , 14 로 조정하여 여기서 극복되었습니다 (다른 가능한 기술과의 비교에 대한 설명 참조). 또한, 트리플 형광 얼룩 프로토콜은 동일한 샘플에 대한 여러 분석을 수행하기 위해 최적화되었으며, q - PCR 분석은 2 oocytes의 수영장에서만 수행되었습니다. 전반적으로, 본 연구는 형태 학적 및 생화학 적으로 cha낮은 샘플 가용성으로 인해 연구하기가 극히 어려운 세포 유형 인 말 oocyte를 괴롭 히고 있습니다. 그러나, 그것은 생식 생물학 및 monovulatory 종족의 불임에 대한 우리의 지식을 확장 할 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="802">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:369px;">ultrasound probe</td>
			<td style="width:159px;">Aloka</td>
			<td style="width:113px;">UST-5820-7,5</td>
			<td style="width:161px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">human chorionic gonadotrophin&#160;</td>
			<td>centravet</td>
			<td>CHO004</td>
			<td>1500unit/animal IV</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">detomidine</td>
			<td>centravet</td>
			<td>MED010</td>
			<td>9-15&#181;g/kg IV</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">butylscopolamine bromure&#160;</td>
			<td>centravet</td>
			<td>EST001</td>
			<td>0,2mg/kg IV</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">stereomicroscope</td>
			<td style="width:159px;">NIKON</td>
			<td style="width:113px;">SMZ-2B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">butorphanol</td>
			<td>centravet</td>
			<td>DOL003</td>
			<td>10&#181;g/kg IV</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">benzyl-penicillin</td>
			<td>centravet</td>
			<td>DEP203 IM</td>
			<td>15000UI/animal</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TCM199</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3769 10X1L</td>
			<td>powder for hepes-buffered TCM199</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hepes sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3784-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">heparin&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3149-10KU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">NaHCO3-buffered TCM199</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M2154-500ML</td>
			<td>liquid for IVM medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">epidermal growth factor</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E4127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">newborn calf serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N4762-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4-well dishes</td>
			<td>NUNCLON</td>
			<td>144444</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">incubator</td>
			<td>Heraeus</td>
			<td>BB6060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">monastrol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8515</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">hyaluronidase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">pronase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">polyvinyl alcohol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>341584</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">triton-X 100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">normal donkey serum&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">rabbit anti-Aurora B phospho-Thr232&#160;</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>636102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TRITC-conjugated donkey anti-rabbit IgG&#160;</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>711-025-152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vecta-Shield</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">YOPRO1</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>Y3603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">confocal laser scanning microscope&#160;</td>
			<td>LSM 780&#160;</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">confocal laser scanning microscope&#160;</td>
			<td>LSM 700&#160;</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ImageJ software</td>
			<td colspan="2">rsb.info. nih.gov/ij/download.html&#160;</td>
			<td>free resource</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">mouse anti-alpha-tubulin&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">rabbit anti-acH4K16</td>
			<td>Upstate Biotechnology</td>
			<td>07-329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AlexaFluor 488-coniugated donkey anti-mouse IgG</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A21202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4&#8217;,6-diamidino-2-phenylindole&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8417</td>
			<td>DAPI</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5417R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RNALater</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM7020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Luciferase RNA</td>
			<td>Promega</td>
			<td>L4561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PicoPure RNA Isolation Kit&#160;</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>12204-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">random hexamers&#160;</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>N8080127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">mouse Moloney leukaemia virus reverse transcriptase</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>28025013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SYBR green supermix&#160;</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1708880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">specific primers</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td>specific primers were designed using Primer3Plus software (free resource)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">thermal-cycler&#160;</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>MyiQ&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">mouse monoclonal anti-CENPA</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab13939</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">mouse monoclonal anti-Aurora B</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab3609</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of chromosome segregation, histone acetylation, and spindle morphology in horse oocytes

보조 생식 분야는 여성, 동반자 동물 및 멸종 위기 종의 불임 치료를 위해 개발되었습니다. 말의 보조 생식은 또한 스포츠 경력을 방해하지 않고 높은 수행자의 배아 생산을 허용하고 높은 유전 적 가치의 암말로부터 도태 한 새끼 수의 증가에 기여합니다. 본 원고는 난자 채취 (OPU)를 이용하여 말의 난소에서 미성숙 및 성숙 난 모세포를 채취하는 과정을 설명한다. 이 난 모세포는 마우스에서 이전에 개발 된 프로토콜을 적용하여 이수 배수 체의 발병률을 조사하는데 사용되었다. 특히, 중기 II 세포 (MII) 난 모세포의 염색체와 중심체 (centromeres)는 공 촛점 레이저 현미경 검사 후 순차적 초점 계획에서 형광으로 분류되고 계수되었다. 이 분석은 미성숙 난 모세포가 난포에서 채취 되고 생체 외에서 성숙되었을 때 이수 배수체 비율에서 더 높은 발병률을 나타냈다.생체 내. 특정 라이신 잔기에서 튜 불린 및 히스톤 4의 아세틸 화 형태에 대한 면역 염색 또한 감수 분열의 형태 및 히스톤 아세틸 화의 전체 패턴에서의 차이를 나타냈다. 마지막으로, 역전사 및 정량적 PCR (q-PCR)에 의해 히스톤 탈 아세틸 화 효소 (HDAC) 및 아세틸 트랜스퍼 라제 (HAT)를 코딩하는 mRNA의 발현을 조사 하였다. 시험 관내 및 생체 내에서 성숙한 난 모세포 사이 에서 전사 물의 상대적인 발현에 차이는 관찰되지 않았다. oocyte 성숙 동안 전사 활동의 일반적인 침묵과 일치하여 총 전사 양의 분석은 mRNA 안정성 또는 분해를 나타낼 수 있습니다. 따라서 이러한 결과는 다른 번역 및 번역 후 규정이 영향을받을 수 있음을 나타냅니다. 전반적으로,이 연구는 형태학 및 생화학 적으로 말의 난 모세포, cell 유형은 낮은 샘플 가용성으로 인해 연구하기 매우 어렵습니다. 그러나, 그것은 생식 생물학 및 monovulatory 종족에 불임에 대한 우리의 지식을 확장 할 수 있습니다.

이 실험에 대한 최초의 발견은 앞서 깊이있게 설명되었으며 본원에서 기술 된 프로토콜을 사용하여 얻을 수있는 결과의 예로서보고되었다. 성숙 비율 지배 모낭으로부터 OPU에 의해 회수 된 32 개의 COC 중 28 개 (88 %)가 MII 단계에 있었다. 크기가 5-25mm 인 모낭으로부터 수집 된 58 개의...

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Analysis of Chromosome Segregation, Histone Acetylation, and Spindle Morphology in Horse Oocytes

이 원고는 형태 학적 및 생화학 적으로 말의 난 모세포를 특성화하기위한 실험적 접근법을 기술한다. 특히, 본 연구는 초음파 유도 난자 채취 (OPU)에 의한 미성숙 및 성숙한 난 모세포를 수집하는 방법과 염색체 분리, 스핀들 형태, 전 세계 히스톤 아세틸 화 및 mRNA 발현을 조사하는 방법을 설명한다.

말의 난 모세포에서의 염색체 분리, 히스톤 아세틸 화 및 스핀들 형태의 분석

The field of assisted reproduction has been developed to treat infertility in women, companion animals, and endangered species. In the horse, assisted ...

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SCIENTISTS IN ACTION

Expression of Fluorescent Proteins in Branchiostoma lanceolatum by mRNA Injection into Unfertilized Oocytes

Expression of Fluorescent Proteins in Branchiostoma lanceolatum by mRNA Injection into Unfertilized Oocytes

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We report here a robust and efficient protocol for the expression of fluorescent proteins after mRNA injection into unfertilized oocytes of the ...

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