Name: conditional reprogramming of pediatric human esophageal epithelial cells for use in tissue engineering and disease investigation
Uploaded: 2017-03-22T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Conditional Reprogramming of Pediatric Human Esophageal Epithelial Cells for Use in Tissue Engineering and Disease Investigation at JoVE.com

We would like to acknowledge Connecticut Children's Medical Center Strategic Research Funding for supporting this work.

Slokdarm biopten werden verkregen na geïnformeerde toestemming werd verkregen van de ouders / verzorgers van de pediatrische patiënten en in overeenstemming met de institutionele Review Board (IRB # 13-094). 1. steriliseren van instrumenten en gelatine-oplossing <ol><li> Autoclaaf tang, scheermesjes en scharen voorafgaand aan de behandeling van weefsel om besmetting te voorkomen. </li><li> Tot 200 ml 0,1% gelatineoplossing te combineren 200 mL gedestilleerd water met 0,2 g gelatine. Autoclaaf en afkoelen voo...

<ol>
	<li>Clark, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Esophageal+atresia+and+tracheoesophageal+fistula.">Esophageal atresia and tracheoesophageal fistula.</a> Am Fam Physician. 59 (4), 910-920 (1999).</li><li>Soon, I. S., Butzner, J. D., Kaplan, G. G., deBruyn, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+and+prevalence+of+eosinophilic+esophagitis+in+children.">Incidence and prevalence of eosinophilic esophagitis in children.</a> J Pediatr Gastroenterol Nutr. 57 (1), 72-80 (2013).</li><li>Sj&#246;qvist, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+orthotopic+transplantation+of+a+tissue-engineered+oesophagus+in+rats.">Experimental orthotopic transplantation of a tissue-engineered oesophagus in rats.</a> Nat Commun. 5, 3562 (2014).</li><li>Saxena, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Esophagus+tissue+engineering:+designing+and+crafting+the+components+for+the+'hybrid+construct'+approach.">Esophagus tissue engineering: designing and crafting the components for the 'hybrid construct' approach.</a> Eur J Pediatr Surg. 24 (3), 246-262 (2014).</li><li>Saxena, A. K., Ainoedhofer, H., H&#246;llwarth, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+ovine+esophageal+epithelial+cells+and+in+vitro+esophagus+tissue+engineering.">Culture of ovine esophageal epithelial cells and in vitro esophagus tissue engineering.</a> Tissue Eng Part C Methods. 16 (1), 109-114 (2010).</li><li>Saxena, A. K., Kofler, K., Ainodhofer, H., Hollwarth, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Esophagus+tissue+engineering:+hybrid+approach+with+esophageal+epithelium+and+unidirectional+smooth+muscle+tissue+component+generation+in+vitro.">Esophagus tissue engineering: hybrid approach with esophageal epithelium and unidirectional smooth muscle tissue component generation in vitro.</a> J Gastrointest Surg. 13 (6), 1037-1043 (2009).</li><li>Macheiner, T., Kuess, A., Dye, J., Saxena, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+isolation+of+epithelial+cells+from+ovine+esophagus+for+tissue+engineering.">A novel method for isolation of epithelial cells from ovine esophagus for tissue engineering.</a> Biomed Mater Eng. 24 (2), 1457-1468 (2014).</li><li>Mishra, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significance+of+Mouse+Models+in+Dissecting+the+Mechanism+of+Human+Eosinophilic+Gastrointestinal+Diseases+(EGID).">Significance of Mouse Models in Dissecting the Mechanism of Human Eosinophilic Gastrointestinal Diseases (EGID).</a> J Gastroenterol Hepatol Res. 2 (11), 845-853 (2013).</li><li>Medvedev, S. P., Shevchenko, A. I., Zakian, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+Pluripotent+Stem+Cells:+Problems+and+Advantages+when+Applying+them+in+Regenerative+Medicine.">Induced Pluripotent Stem Cells: Problems and Advantages when Applying them in Regenerative Medicine.</a> Acta Naturae. 2 (2), 18-28 (2010).</li><li>Metallo, C. M., Azarin, S. M., Ji, L., de Pablo, J. J., Palecek, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+tissue+from+human+embryonic+stem+cells.">Engineering tissue from human embryonic stem cells.</a> J Cell Mol Med. 12 (3), 709-729 (2008).</li><li>Lee, H., Park, J., Forget, B. G., Gaines, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells+in+regenerative+medicine:+an+argument+for+continued+research+on+human+embryonic+stem+cells.">Induced pluripotent stem cells in regenerative medicine: an argument for continued research on human embryonic stem cells.</a> Regen Med. 4 (5), 759-769 (2009).</li><li>Ghaedi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+iPS+cell-derived+alveolar+epithelium+repopulates+lung+extracellular+matrix.">Human iPS cell-derived alveolar epithelium repopulates lung extracellular matrix.</a> J Clin Invest. 123 (11), 4950-4962 (2013).</li><li>Huang, S. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+generation+of+lung+and+airway+epithelial+cells+from+human+pluripotent+stem+cells.">Efficient generation of lung and airway epithelial cells from human pluripotent stem cells.</a> Nat Biotechnol. , (2013).</li><li>Ogaki, S., Morooka, M., Otera, K., Kume, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cost-effective+system+for+differentiation+of+intestinal+epithelium+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">A cost-effective system for differentiation of intestinal epithelium from human induced pluripotent stem cells.</a> Sci Rep. 5, 17297 (2015).</li><li>Ehrhardt, C., Kim, K. J., Lehr, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+human+alveolar+epithelial+cells.">Isolation and culture of human alveolar epithelial cells.</a> Methods Mol Med. 107, 207-216 (2005).</li><li>Zubeldia-Plazaola, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+methods+for+the+isolation+of+human+breast+epithelial+and+myoepithelial+cells.">Comparison of methods for the isolation of human breast epithelial and myoepithelial cells.</a> Front Cell Dev Biol. 3, 32 (2015).</li><li>Spurrier, R. G., Speer, A. L., Hou, X., El-Nachef, W. N., Grikscheit, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+and+human+tissue-engineered+esophagus+form+from+sufficient+stem/progenitor+cells+and+do+not+require+microdesigned+biomaterials.">Murine and human tissue-engineered esophagus form from sufficient stem/progenitor cells and do not require microdesigned biomaterials.</a> Tissue Eng Part A. 21 (5-6), 906-915 (2015).</li><li>Roche, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+a+purified+epithelial+cell+population+from+human+colon.">Isolation of a purified epithelial cell population from human colon.</a> Methods Mol Med. 50, 15-20 (2001).</li><li>Southgate, J., Hutton, K. A., Thomas, D. F., Trejdosiewicz, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+human+urothelial+cells+in+vitro:+proliferation+and+induction+of+stratification.">Normal human urothelial cells in vitro: proliferation and induction of stratification.</a> Lab Invest. 71 (4), 583-594 (1994).</li><li>Kalabis, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+mouse+and+human+esophageal+epithelial+cells+in+3D+organotypic+culture.">Isolation and characterization of mouse and human esophageal epithelial cells in 3D organotypic culture.</a> Nat Protoc. 7 (2), 235-246 (2012).</li><li>Geraghty, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+use+of+cell+lines+in+biomedical+research.">Guidelines for the use of cell lines in biomedical research.</a> Br J Cancer. 111 (6), 1021-1046 (2014).</li><li>Lodish, H., Berk, A., Zipursky, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Cell Biology. , (2000).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ROCK+inhibitor+and+feeder+cells+induce+the+conditional+reprogramming+of+epithelial+cells.">ROCK inhibitor and feeder cells induce the conditional reprogramming of epithelial cells.</a> Am J Pathol. 180 (2), 599-607 (2012).</li><li>Suprynowicz, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditionally+reprogrammed+cells+represent+a+stem-like+state+of+adult+epithelial+cells.">Conditionally reprogrammed cells represent a stem-like state of adult epithelial cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (49), 20035-20040 (2012).</li><li>Davis, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+retinal+pigment+epithelial+cell+line+that+retains+epithelial+characteristics+after+prolonged+culture.">A human retinal pigment epithelial cell line that retains epithelial characteristics after prolonged culture.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 36 (5), 955-964 (1995).</li><li>Carro, O. M., Evans, S. A., Leone, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+inflammation+on+the+proliferation+of+human+gingival+epithelial+cells+in+vitro.">Effect of inflammation on the proliferation of human gingival epithelial cells in vitro.</a> J Periodontol. 68 (11), 1070-1075 (1997).</li></ol>

De belangrijkste stappen om te isoleren en vergroten esophageal epitheelcellen van patiënt biopsies zijn: 1) voldoende dissociëren biopsie weefsel met minimale celdood; 2) zorgen ROCK inhibitor wordt toegevoegd aan het celkweekmedium bij elke mediumverversing; 3) Gebruik niet meer feeder-cellen dan aanbevolen; 4) handhaven van een schone aseptische cultuur; en 5) passage cellen vlak voor het bereiken van samenvloeiing. Door de patiënt verschillen in biopsie monsters verkregen voor voorwaa...

Slokdarmkanker tissue engineering en eosinofiele esophagitis (EoE) hebben de focus van het onderzoek in veel laboratoria de afgelopen tien jaar geweest. Aangeboren afwijkingen, zoals slokdarmatresie worden waargenomen bij ongeveer 1 op 4000 levendgeborenen, waardoor de onvolledige ontwikkeling van de slokdarm leidt tot het onvermogen om te eten 1. De incidentie en prevalentie van EoE hebben op de stijging sinds de identificatie van de ziekte entiteit 1993. De incidentie van EoE varieerde 0,7-10 / 100.000 per jaar en de prevalentie varieerde 0,2-43 / 100.000 2 geweest. Een aantrekkelijke nieuwe chirurgische benadering van de behandeling lange periode slokdarmatresie bestaat uit het genereren van weefselconstructen voor implantatie gebruikmaking eigen cellen van de patiënt. Deze cellen samen met synthetische steigers zullen autologe construct die geen immunosuppressie vereist genereren. Sommige groepen zijn al begonnen met het ons te onderzoekene van stamcellen-achtige cellen slokdarm weefselmanipulatie 3 en het gebruik van natieve slokdarm epitheelcellen aan het slijmvlies herbevolking 4-7. Ziekten die in de slokdarm van pediatrische patiënten zijn vaak moeilijk te diagnosticeren of te bestuderen zonder tussenkomst. Bovendien, met behulp van diermodellen of in vitro onsterfelijk gemaakte cellijn modellen voor pediatrische ziekten zoals EoE omvatten niet de exacte pathogenese van de ziekte of de patiënt specifieke 8 verschillen. Daarom is de mogelijkheid om ziekteproces een patiënt in vitro bestuderen teneinde specifieke ziekte triggering antigenen te identificeren, evalueren en onderliggende mechanismen te onderzoeken drugbehandelingen nieuw zouden zijn en een clinici informatie die kan helpen bij de behandeling van patiënten. Er zijn veel autologe of patiënt-specifieke celtypen die voor gebruik in tissu voorgesteld geweeste engineering en de studie van de menselijke ziekte pathogenese. Enkele van deze celtypen zijn beperkt in hun vermogen om voldoende cellen van een specifiek fenotype genereren een grote scaffold zaad of voer high throughput in vitro studies. Het gebruik van pluripotente of multipotente stamcellen is het onderwerp van veel onderzoek gediscussieerd echter beperkingen en tekortkomingen van het gebruik van deze cellen zijn goed beschreven 9. Het gebruik van menselijke embryonale stamcellen is zeer besproken en presenteert een groot aantal ethische kwesties. Belangrijker, deze cellen vormen teratomas, die vergelijkbaar met een tumor, als ze niet worden onderscheiden van hun pluripotente toestand voor het leveren ze in een levende gastheer 10. Bovendien zou het gebruik van embryonale stamcellen patiënt-specifiek en zou een allogene reactie en de noodzaak van immuunsuppressie 10 opwekken. Geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSCs) zijn pluripotente cellen die kunnenworden afgeleid uit eigen cellen van de patiënt. Somatische cellen, zoals huidcellen, kunnen worden geïnduceerd om een ​​pluripotente toestand met verschillende geïntegreerde als niet-geïntegreerde technieken. Deze cellen dienen dan als een patiënt-specifieke cel bronnen voor tissue engineering of de ziekte van onderzoek. De integratie van ongewenst genetisch materiaal in deze cellen is veel zorg omschreven en zelfs als sequenties volledig verwijderd lijken iPSCs een epigenetische &quot;memory&quot; naar het celtype waaruit ze zijn afgeleid 11 behouden. Deze cellen zullen teratomas vormen in vivo als niet vóór transplantatie 11 gedifferentieerd. Vele differentiatie protocollen zijn onderzocht gericht op epitheliale lijnen 12, 13, 14, echter, is het zeer belangrijk op te merken dat de celtypen verkregen eind differentiatie niet homogeen en only hebben een fractie van het celtype. Dit resulteert in een lage opbrengst en de noodzaak om het gewenste celtype te zuiveren. Hoewel iPSCs zijn een potentiële patiënt-specifieke cel bron, het proces voor het verkrijgen van een celtype van belang zijn voor beide tissue engineering of de ziekte van onderzoek is zeer inefficiënt. Menselijke epitheelcellen met succes geïsoleerd uit een verscheidenheid aan zowel zieke als niet-zieke weefsels in het menselijk lichaam met inbegrip van: 15 long-, borst- 16, 17 dunne darm, colon 18, blaas 19 en de slokdarm 20. Het is belangrijk op te merken dat de humane primaire cellen een eindig aantal passages waarin het fenotype wordt gehandhaafd 21, 22. Helaas betekent dit dat het aantal cellen nodig zijn voor ziekte onderzoek of zaaien een aangelegde scaffoldvoor implantatie niet wordt verkregen. Daarom zijn nieuwe technieken die nodig zijn om de patiënt cellen uit te breiden, terwijl nog steeds een epitheliale fenotype behoud. Voorwaardelijke herprogrammering van normale en kankercellen epitheelcellen gebruik te maken van feeder-cellen en ROCK-remmer werd in 2012 beschreven door Liu et al. 2 3. Deze techniek werd gebruikt om kankercellen epitheelcellen verkregen uit biopsieën van prostaatkanker en borstkanker gebruikt bestraalde voedingscellen, ROCK inhibitor en voorwaardelijke herprogrammering medium breiden. Het doel was om voldoende cellen voor in vitro assays zoals drugs screenen. Deze techniek kan uitbreiden epitheelcellen onbeperkt door &quot;herprogrammering&quot; deze cellen een stam- of voorouder-achtige toestand, die zeer proliferatieve. Het is aangetoond dat deze cellen niet-tumorigene en hebben het vermogen om teratomas 23, 24 vormen bezitten. Bovendien is er geenchromosomale abnormaliteiten of genetische manipulaties waren aanwezig na passage van deze cellen in kweek deze techniek 23, 24. Belangrijker, deze cellen zijn alleen in staat te differentiëren in de natieve celtype plaats. Daarom biedt deze techniek een groot reservoir van patiënt specifieke epitheelcellen voor ziekte onderzoek of weefselmanipulatie zonder de noodzaak voor immortalisatie. Verkrijgen epitheelweefsel van een specifiek orgaan om ziekteprocessen bestuderen vaak beperkt is en niet altijd mogelijk vanwege het risico patiënt. Voor die patiënten met oesofageale ziekte of gebreken, endoscopische biopsie retrieval is een minimaal invasieve benadering voor het verkrijgen van epitheelweefsel die kunnen worden gedissocieerd en voorwaardelijk geherprogrammeerd onbepaalde celbron die specifiek is voor het slijmvlies van de slokdarm van die patiënt. Dit zorgt dan voor in vitro studiesvan de epitheelcellen ziekteprocessen en onderzoeken op mogelijke therapeutische evalueren. Een ziekteproces die sterk kunnen profiteren van deze aanpak is eosinofiele oesofagitis, die is beschreven als allergische aandoening van de slokdarm 8. Allergietesten en therapeutische benaderingen kunnen in vitro worden geëvalueerd middels eigen epitheelcellen van de patiënt en deze informatie kan dan binnen de behandelend arts worden doorgegeven geïndividualiseerde behandelingen te ontwikkelen. De techniek van voorwaardelijke herprogrammering in samenhang met het verkrijgen endoscopische biopten van pediatrische patiënten biedt de mogelijkheid om normale slokdarm epitheelcellen onbeperkt uitbreiden van een patiënt. Deze cel bron kan dus samen worden samen met natuurlijke of synthetische steiger aan een patiënt-specifieke chirurgische optie voor gebreken, ziekte of trauma te bieden. Het hebben van een onbepaald aantal cellen zou helpen engineer oesofageale constructies die beschikken over een volledig reseededlumen met oesofageale epitheelcellen om te helpen regenereren van de overblijvende celtypen vergemakkelijken.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="843">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Primocin</td>
			<td style="width:172px;">InVivogen</td>
			<td style="width:119px;">ant-pm2</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Isopentane</td>
			<td style="width:172px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">277258-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Gelatin From Porcine Skin</td>
			<td style="width:172px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">G1890-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">DMEM</td>
			<td style="width:172px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">11965092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Cryomold</td>
			<td style="width:172px;">TissueTek</td>
			<td style="width:119px;">4565</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Cryomatrix OCT</td>
			<td style="width:172px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">6769006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">15ml Conical Tubes</td>
			<td style="width:172px;">Denville Scientific</td>
			<td style="width:119px;">C1017-p</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Complete Keratinocyte Serum Free Medium</td>
			<td style="width:172px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">10724011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Penicillin Streptomycin</td>
			<td style="width:172px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Glutamax</td>
			<td style="width:172px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Insulin Solution</td>
			<td style="width:172px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">I9278-5ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Human Epidermal Growth Factor (EGF)</td>
			<td style="width:172px;">Peprotech</td>
			<td style="width:119px;">AF-100-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">ROCK Inhibitor (Y-27632)</td>
			<td style="width:172px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">125410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">F-12 Medium&#160;</td>
			<td style="width:172px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">11765054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:172px;">Denville Scientific</td>
			<td style="width:119px;">FB5001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Dispase</td>
			<td style="width:172px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">17105041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">0.05% Trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:172px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">25300062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">0.25% Trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:172px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">25200072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">100mm Dishes</td>
			<td style="width:172px;">Denville Scientific</td>
			<td style="width:119px;">T1110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">150mm Dishes</td>
			<td style="width:172px;">Denville Scientific</td>
			<td>T1115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">50ml Conicals</td>
			<td style="width:172px;">Denville Scientific</td>
			<td style="width:119px;">&#160; C1062-9&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Phosphate Buffered Saline Tablets</td>
			<td style="width:172px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP2944-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">5ml Pipettes</td>
			<td style="width:172px;">Fisher Scientific</td>
			<td>1367811D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">10ml Pipettes</td>
			<td style="width:172px;">Fisher Scientific</td>
			<td>1367811E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">25ml Pipettes</td>
			<td style="width:172px;">Fisher Scientific</td>
			<td>1367811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">9&#34; Pasteur Pipettes</td>
			<td style="width:172px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">13-678-20D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">NIH 3T3 Cells</td>
			<td style="width:172px;">ATCC</td>
			<td style="width:119px;">CRL1658</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

conditional reprogramming of pediatric human esophageal epithelial cells for use in tissue engineering and disease investigation

Identifying and expanding patient-specific cells in culture for use in tissue engineering and disease investigation can be very challenging. Utilizing various types of stem cells to derive cell types of interest is often costly, time consuming and highly inefficient. Furthermore, undesired cell types must be removed prior to using this cell source, which requires another step in the process. In order to obtain enough esophageal epithelial cells to engineer the lumen of an esophageal construct or to screen therapeutic approaches for treating esophageal disease, native esophageal epithelial cells must be expanded without altering their gene expression or phenotype. Conditional reprogramming of esophageal epithelial tissue offers a promising approach to expanding patient-specific esophageal epithelial cells. Furthermore, these cells do not need to be sorted or purified and will return to a mature epithelial state after removing them from conditional reprogramming culture. This technique has been described in many cancer screening studies and allows for indefinite expansion of these cells over multiple passages. The ability to perform esophageal screening assays would help revolutionize the treatment of pediatric esophageal diseases like eosinophilic esophagitis by identifying the trigger mechanism causing the patient's symptoms. For those patients who suffer from congenital defect, disease or injury of the esophagus, this cell source could be used as a means to seed a synthetic construct for implantation to repair or replace the affected region.

Een overzicht van de belangrijkste stappen bij het isoleren esophageal epitheelcellen van patiënt biopsies wordt samengevat in figuur 1. Kolonies van epitheelcellen wordt gevormd in ongeveer 4-5 dagen en wordt omringd door fibroblast feeder-cellen (Figuur 2A). Aangezien deze kolonies uit te breiden zullen zij fuseren met andere kolonies tot grotere kolonies (figuur 2B) te vormen. Zodra de kweken 70% confluent zijn geworden, moeten ze wo...

Watch this Scientific Journal Video about Conditional Reprogramming of Pediatric Human Esophageal Epithelial Cells for Use in Tissue Engineering and Disease Investigation at JoVE.com

Conditional Reprogramming of Pediatric Human Esophageal Epithelial Cells for Use in Tissue Engineering and Disease Investigation

Uitbreiding van menselijke kinderen oesofageale epitheelcellen gebruikmaking voorwaardelijke herprogrammering biedt onderzoekers met een patiënt-specifieke populatie van cellen die kunnen worden gebruikt voor de engineering oesofageale constructen autologe implantatie defecten of letsel behandelen en dienen als een reservoir voor therapeutische screeningstesten.

Voorwaardelijke herprogrammeren van Pediatric Human slokdarmkanker epitheelcellen voor gebruik in Tissue Engineering and Disease Investigation

Identifying and expanding patient-specific cells in culture for use in tissue engineering and disease investigation can be very challenging. Utilizing ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

Horizontale gehele berging: Een nieuw verwerkings- en beeldprotocol voor dikke, driedimensionale weefsel dwarsdoorsneden van de huid

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluatie van schade-geïnduceerde senescentie en In Vivo herprogrammering in de skeletspieren

Cellular senescence is a stress response that is characterized by a stable cellular growth arrest, which is important for many physiological and ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

Snelle, gerichte differentiatie van de epitheliale cellen van de retinale Pigment van menselijke embryonale of geïnduceerde pluripotente stamcellen

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Real-time Measurement of Epithelial Barrier Permeability in Human Intestinal Organoids

Real-time meting van epitheliale barrière permeabiliteit in menselijke intestinale Organoids

Advances in 3D culture of intestinal tissues obtained through biopsy or generated from pluripotent stem cells via directed differentiation, have resulted ...

A Simplified and Efficient Method to Isolate Primary Human Keratinocytes from Adult Skin Tissue

Een vereenvoudigde en efficiënte methode om te isoleren van de primaire mens keratinocyten van volwassen huidweefsel

Primary human keratinocytes isolated from fresh skin tissues and their expansion in vitro have been widely used for laboratory research and for clinical ...

Chemical Reversion of Conventional Human Pluripotent Stem Cells to a Na&#239;ve-like State with Improved Multilineage Differentiation Potency

Chemical Reversion of Conventional Human Pluripotent Stem Cells to a NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve-like State with Improved Multilineage Differentiation Potency

Chemische terugkeer van conventionele menselijke pluripotente stamcellen naar een naïef-achtige toestand met verbeterde Multilineage differentiatie potentie

Na&#239;ve human pluripotent stem cells (N-hPSC) with improved functionality may have a wide impact in regenerative medicine. The goal of this protocol is ...

Engineering Transplantation-suitable Retinal Pigment Epithelium Tissue Derived from Human Embryonic Stem Cells

Transplantatie-geschikt retinale Pigment epitheel Tissue Engineering afgeleid van menselijke embryonale stamcellen

Several pathological conditions of the eye affect the functionality and/or the survival of the retinal pigment epithelium (RPE). These include some forms ...

RNA-based Reprogramming of Human Primary Fibroblasts into Induced Pluripotent Stem Cells

RNA gebaseerde herprogrammering van menselijke primaire fibroblasten in geïnduceerde pluripotente stamcellen

Induced pluripotent stem cells (iPSCs) have proven to be a valuable tool to study human development and disease. Further advancing iPSCs as a regenerative ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

In Vitro generatie van Somiet derivaten uit menselijk geïnduceerde pluripotente stamcellen-cellen

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...