Name: conditional reprogramming of pediatric human esophageal epithelial cells for use in tissue engineering and disease investigation
Uploaded: 2017-03-22T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Conditional Reprogramming of Pediatric Human Esophageal Epithelial Cells for Use in Tissue Engineering and Disease Investigation at JoVE.com

We would like to acknowledge Connecticut Children's Medical Center Strategic Research Funding for supporting this work.

Esophageal biopsier ble oppnådd etter at informert samtykke er innhentet fra foreldre / foresatte til de pediatriske pasienter og i samsvar med Institutional Review Board (IRB # 13-094). 1. sterilisering Instrumenter og Gelatin Solution <ol><li> Autoclave tang, barberblad og saks før håndtering vev for å hindre forurensning. </li><li> For å gjøre 200 mL av 0,1% gelatin-oppløsning, kombinere 200 ml destillert vann med 0,2 g gelatin. Autoklav og avkjøle før bruk. </li></ol> 2. Coat...

<ol>
	<li>Clark, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Esophageal+atresia+and+tracheoesophageal+fistula.">Esophageal atresia and tracheoesophageal fistula.</a> Am Fam Physician. 59 (4), 910-920 (1999).</li><li>Soon, I. S., Butzner, J. D., Kaplan, G. G., deBruyn, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+and+prevalence+of+eosinophilic+esophagitis+in+children.">Incidence and prevalence of eosinophilic esophagitis in children.</a> J Pediatr Gastroenterol Nutr. 57 (1), 72-80 (2013).</li><li>Sj&#246;qvist, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+orthotopic+transplantation+of+a+tissue-engineered+oesophagus+in+rats.">Experimental orthotopic transplantation of a tissue-engineered oesophagus in rats.</a> Nat Commun. 5, 3562 (2014).</li><li>Saxena, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Esophagus+tissue+engineering:+designing+and+crafting+the+components+for+the+'hybrid+construct'+approach.">Esophagus tissue engineering: designing and crafting the components for the 'hybrid construct' approach.</a> Eur J Pediatr Surg. 24 (3), 246-262 (2014).</li><li>Saxena, A. K., Ainoedhofer, H., H&#246;llwarth, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+ovine+esophageal+epithelial+cells+and+in+vitro+esophagus+tissue+engineering.">Culture of ovine esophageal epithelial cells and in vitro esophagus tissue engineering.</a> Tissue Eng Part C Methods. 16 (1), 109-114 (2010).</li><li>Saxena, A. K., Kofler, K., Ainodhofer, H., Hollwarth, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Esophagus+tissue+engineering:+hybrid+approach+with+esophageal+epithelium+and+unidirectional+smooth+muscle+tissue+component+generation+in+vitro.">Esophagus tissue engineering: hybrid approach with esophageal epithelium and unidirectional smooth muscle tissue component generation in vitro.</a> J Gastrointest Surg. 13 (6), 1037-1043 (2009).</li><li>Macheiner, T., Kuess, A., Dye, J., Saxena, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+isolation+of+epithelial+cells+from+ovine+esophagus+for+tissue+engineering.">A novel method for isolation of epithelial cells from ovine esophagus for tissue engineering.</a> Biomed Mater Eng. 24 (2), 1457-1468 (2014).</li><li>Mishra, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significance+of+Mouse+Models+in+Dissecting+the+Mechanism+of+Human+Eosinophilic+Gastrointestinal+Diseases+(EGID).">Significance of Mouse Models in Dissecting the Mechanism of Human Eosinophilic Gastrointestinal Diseases (EGID).</a> J Gastroenterol Hepatol Res. 2 (11), 845-853 (2013).</li><li>Medvedev, S. P., Shevchenko, A. I., Zakian, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+Pluripotent+Stem+Cells:+Problems+and+Advantages+when+Applying+them+in+Regenerative+Medicine.">Induced Pluripotent Stem Cells: Problems and Advantages when Applying them in Regenerative Medicine.</a> Acta Naturae. 2 (2), 18-28 (2010).</li><li>Metallo, C. M., Azarin, S. M., Ji, L., de Pablo, J. J., Palecek, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+tissue+from+human+embryonic+stem+cells.">Engineering tissue from human embryonic stem cells.</a> J Cell Mol Med. 12 (3), 709-729 (2008).</li><li>Lee, H., Park, J., Forget, B. G., Gaines, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells+in+regenerative+medicine:+an+argument+for+continued+research+on+human+embryonic+stem+cells.">Induced pluripotent stem cells in regenerative medicine: an argument for continued research on human embryonic stem cells.</a> Regen Med. 4 (5), 759-769 (2009).</li><li>Ghaedi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+iPS+cell-derived+alveolar+epithelium+repopulates+lung+extracellular+matrix.">Human iPS cell-derived alveolar epithelium repopulates lung extracellular matrix.</a> J Clin Invest. 123 (11), 4950-4962 (2013).</li><li>Huang, S. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+generation+of+lung+and+airway+epithelial+cells+from+human+pluripotent+stem+cells.">Efficient generation of lung and airway epithelial cells from human pluripotent stem cells.</a> Nat Biotechnol. , (2013).</li><li>Ogaki, S., Morooka, M., Otera, K., Kume, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cost-effective+system+for+differentiation+of+intestinal+epithelium+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">A cost-effective system for differentiation of intestinal epithelium from human induced pluripotent stem cells.</a> Sci Rep. 5, 17297 (2015).</li><li>Ehrhardt, C., Kim, K. J., Lehr, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+human+alveolar+epithelial+cells.">Isolation and culture of human alveolar epithelial cells.</a> Methods Mol Med. 107, 207-216 (2005).</li><li>Zubeldia-Plazaola, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+methods+for+the+isolation+of+human+breast+epithelial+and+myoepithelial+cells.">Comparison of methods for the isolation of human breast epithelial and myoepithelial cells.</a> Front Cell Dev Biol. 3, 32 (2015).</li><li>Spurrier, R. G., Speer, A. L., Hou, X., El-Nachef, W. N., Grikscheit, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+and+human+tissue-engineered+esophagus+form+from+sufficient+stem/progenitor+cells+and+do+not+require+microdesigned+biomaterials.">Murine and human tissue-engineered esophagus form from sufficient stem/progenitor cells and do not require microdesigned biomaterials.</a> Tissue Eng Part A. 21 (5-6), 906-915 (2015).</li><li>Roche, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+a+purified+epithelial+cell+population+from+human+colon.">Isolation of a purified epithelial cell population from human colon.</a> Methods Mol Med. 50, 15-20 (2001).</li><li>Southgate, J., Hutton, K. A., Thomas, D. F., Trejdosiewicz, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+human+urothelial+cells+in+vitro:+proliferation+and+induction+of+stratification.">Normal human urothelial cells in vitro: proliferation and induction of stratification.</a> Lab Invest. 71 (4), 583-594 (1994).</li><li>Kalabis, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+mouse+and+human+esophageal+epithelial+cells+in+3D+organotypic+culture.">Isolation and characterization of mouse and human esophageal epithelial cells in 3D organotypic culture.</a> Nat Protoc. 7 (2), 235-246 (2012).</li><li>Geraghty, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+use+of+cell+lines+in+biomedical+research.">Guidelines for the use of cell lines in biomedical research.</a> Br J Cancer. 111 (6), 1021-1046 (2014).</li><li>Lodish, H., Berk, A., Zipursky, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Cell Biology. , (2000).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ROCK+inhibitor+and+feeder+cells+induce+the+conditional+reprogramming+of+epithelial+cells.">ROCK inhibitor and feeder cells induce the conditional reprogramming of epithelial cells.</a> Am J Pathol. 180 (2), 599-607 (2012).</li><li>Suprynowicz, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditionally+reprogrammed+cells+represent+a+stem-like+state+of+adult+epithelial+cells.">Conditionally reprogrammed cells represent a stem-like state of adult epithelial cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (49), 20035-20040 (2012).</li><li>Davis, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+retinal+pigment+epithelial+cell+line+that+retains+epithelial+characteristics+after+prolonged+culture.">A human retinal pigment epithelial cell line that retains epithelial characteristics after prolonged culture.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 36 (5), 955-964 (1995).</li><li>Carro, O. M., Evans, S. A., Leone, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+inflammation+on+the+proliferation+of+human+gingival+epithelial+cells+in+vitro.">Effect of inflammation on the proliferation of human gingival epithelial cells in vitro.</a> J Periodontol. 68 (11), 1070-1075 (1997).</li></ol>

De viktigste trinnene for å isolere og utvide esophageal epitelceller fra pasient biopsier er: 1) tilstrekkelig dissociating vevsprøver med minimal celledød; 2) sørge for ROCK inhibitor blir tilsatt til cellekulturmediet ved hver utskiftning av medium; 3) Ikke bruk flere mater celler enn anbefalt; 4) opprettholde en ren aseptisk kultur; og 5) passasje cellene like før nå samløpet. På grunn av de pasientrelaterte forskjeller i biopsiprøver innhentet for betinget omprogrammering, er d...

Esophageal tissue engineering og eosinofil øsofagitt (EoE) har vært fokus for forskning på mange laboratorier i løpet av det siste tiåret. Medfødte defekter, slik som esophageal atresi, er sett i omtrent 1 i 4000 levende fødte, noe som resulterer i mangelfull utvikling av spiserøret som fører til manglende evne til å spise en. Forekomsten og utbredelsen av EoE har vært på vei oppover helt siden identifikasjon av sykdom enhet i 1993. Forekomsten av EoE varierte 0,7 til 10/100 000 per person-år, og forekomsten varierte 0,2 til 43/100 000 2. En ny kirurgisk attraktiv metode for å behandle langt hull esophageal atresien består i å generere vev konstrukter for implantering utnytte pasientens egne celler. Disse cellene i forbindelse med syntetiske stillas vil generere et autologt konstruksjon som ikke krever immunundertrykkelse. Noen grupper har allerede begynt å undersøke osse stilk-lignende celler for øsofageal vevsteknologi 3, så vel som anvendelse av naturlige esophageal epitelceller for å re-populere mucosa 4 - 7. Sykdommer som er til stede i spiserøret av pediatriske pasienter er ofte vanskelig å diagnostisere eller studere uten intervensjon. Videre benytter dyremodeller eller in vitro udødeliggjort cellelinje modeller for barn sykdommer som EoE omfatter ikke den eksakte sykdom patogenesen eller pasientspesifikke åtte forskjeller. Derfor er evnen til å studere en pasients sykdomsprosess in vitro for å identifisere spesifikke sykdoms utløsende antigener, evaluere underliggende mekanismene og undersøke medikamentell behandling ville være nye og tilveie klinikere med informasjon som kan hjelpe til med pasientbehandling. Det har vært mange autologe eller pasient-spesifikke celletyper som har vært foreslått for bruk i tissue engineering og studere menneskelig sykdom patogenesen. Imidlertid er noen av disse celletyper er begrenset i deres evne til å generere nok celler av en spesifikk fenotype å pode en stor stillas eller utføre høy gjennomstrømning in vitro-studier. Bruken av pluripotent eller multipotente stamceller har vært tema for mye forskning diskusjon har imidlertid begrensninger og mangler for anvendelse av disse cellene er blitt godt beskrevet ni. Bruken av menneskelige embryonale stamceller er sterkt debattert og presenterer mange etiske problemstillinger. Viktigst er disse cellene danner teratomas, som er lik til en tumor, hvis de ikke er differensiert fra sin pluripotent tilstand forut for å levere dem til en levende vert 10. Videre vil bruk av embryonale stamceller ikke være pasientspesifikk og kan utløse en allogen respons og behovet for immunsuppresjon 10. Induserte pluripotente stamceller (iPSCs) er pluripotente celler som kanvære avledet fra en pasients egne celler. Somatiske celler, slik som hudceller, kan bli indusert til en pluripotent tilstand ved hjelp av en rekke integrerende og ikke-integrerende teknikker. Disse cellene deretter tjene som en pasient-spesifikke celle kilder for tissue engineering eller sykdom etterforskning. Integreringen av uønsket genetisk materiale inn i disse cellene er en bekymring mange har beskrevet og selv om sekvenser er helt fjernet iPSCs synes å bevare en epigenetisk &quot;minne&quot; mot celletype som de ble hentet 11. Disse cellene også vil danne teratomas in vivo hvis ikke differensiert før transplantasjon 11. Mange differensierings protokoller er blitt undersøkt med fokus på epitel-linjene 12, 13, 14, men det er meget viktig å merke seg at de celletyper som resulterer i enden av differensiering er ikke homogen og oare ha en brøkdel av den celletype av interesse. Dette resulterer i lavt utbytte og behovet for å rense den ønskede celletype. Selv iPSCs er en potensiell pasient-spesifikke celle kilde, til prosessen få en celle type interesse for enten tissue engineering eller sykdom etterforskning er svært ineffektiv. Humane epitelceller har blitt isolert fra et utvalg av både syke og ikke-sykt vev i menneskekroppen inkludert: lunge 15, bryst 16, 17 tynntarm, tykktarm 18, blære 19 og spiserøret 20. Det er viktig å merke seg at humane primære celler har et endelig antall av passasjer i hvilken fenotype opprettholdes 21, 22. Uheldigvis betyr dette at antall celler som er nødvendig for sykdom undersøkelse eller for såing en konstruert stillasetfor implantering kan ikke oppnås. Derfor er nye teknikker for å utvide pasientens celler samtidig opprettholde en epitelial fenotype. Betinget omprogrammering av normale og kreft epitelceller utnytte mater celler og ROCK inhibitor ble beskrevet i 2012 av Liu et al. 2 3. Denne teknikken ble brukt til å utvide kreft epitelceller hentet fra biopsi av prostata og brystkreft ved bruk av bestrålte feeder-celler, ROCK hemmer og betinget omprogrammering middels. Målet var å generere nok celler for in vitro-analyser for eksempel narkotika screening. Denne teknikken er i stand til å utvide epitelceller på ubestemt tid med &quot;omprogrammering&quot; disse cellene til en stilk eller progenitor-lignende tilstand, som er svært proliferativ. Det har vist seg at disse cellene er ikke-tumorgene og ikke har evnen til å danne teratomas 23, 24. Videre nokromosomavvik eller genetiske manipulasjoner var til stede etter aging disse cellene i kultur ved hjelp av denne teknikken 23, 24. Viktigst av disse cellene er bare i stand til å differensiere til den opprinnelige celletype av interesse. Derfor er denne teknikken har et stort reservoar av pasientspesifikke epitelceller for sykdom undersøkelse eller regenerering av vev uten behov for immortalisering. Innhenting av epitelvev fra et spesifikt organ for å studere sykdomsprosesser er ofte begrenset, og ikke alltid er mulig på grunn av pasient risiko. For de pasienter som lider av esophageal sykdom eller mangler, er endoskopisk biopsi henting en minimal invasiv metode for oppnåelse av epitelvev som kan bli dissosiert og betinget omprogrammeres for å tilveiebringe en ubegrenset kilde celle som er spesifikk for slimhinnene i den pasienten spiserøret. Dette gir da for in vitro-studierav epitelcellene til å evaluere sykdomsprosesser og skjerm for potensielle terapeutiske midler. En sykdom som kan ha stor nytte av denne tilnærmingen er Eosinofil Øsofagitt, som har blitt beskrevet som allergisk sykdom i spiserøret 8. Allergi tester samt terapeutiske tilnærminger kan vurderes in vitro ved hjelp av pasientens egne epitelceller og disse dataene kan deretter sendes ut på behandlende lege for å utvikle tilpassede behandlingsplaner. Teknikken med betinget omprogrammering i forbindelse med innhenting av endoskopiske biopsier fra pediatriske pasienter gir mulighet til å utvide normale esophageal epitelceller ubestemt tid fra en pasient. Denne cellekilde kan derfor bli slått sammen med naturlig eller syntetisk stillas for å tilveiebringe en pasientspesifikk kirurgisk alternativ for defekter, sykdom eller traumer. Å ha en ubestemt celle nummer vil hjelpe ingeniør esophageal konstruksjoner som besitter en helt reseededlumen med esophageal epitelceller for å bidra til å lette regenereringen av de gjenværende celletyper.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="843">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Primocin</td>
			<td style="width:172px;">InVivogen</td>
			<td style="width:119px;">ant-pm2</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Isopentane</td>
			<td style="width:172px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">277258-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Gelatin From Porcine Skin</td>
			<td style="width:172px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">G1890-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">DMEM</td>
			<td style="width:172px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">11965092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Cryomold</td>
			<td style="width:172px;">TissueTek</td>
			<td style="width:119px;">4565</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Cryomatrix OCT</td>
			<td style="width:172px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">6769006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">15ml Conical Tubes</td>
			<td style="width:172px;">Denville Scientific</td>
			<td style="width:119px;">C1017-p</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Complete Keratinocyte Serum Free Medium</td>
			<td style="width:172px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">10724011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Penicillin Streptomycin</td>
			<td style="width:172px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Glutamax</td>
			<td style="width:172px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Insulin Solution</td>
			<td style="width:172px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">I9278-5ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Human Epidermal Growth Factor (EGF)</td>
			<td style="width:172px;">Peprotech</td>
			<td style="width:119px;">AF-100-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">ROCK Inhibitor (Y-27632)</td>
			<td style="width:172px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">125410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">F-12 Medium&#160;</td>
			<td style="width:172px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">11765054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:172px;">Denville Scientific</td>
			<td style="width:119px;">FB5001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Dispase</td>
			<td style="width:172px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">17105041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">0.05% Trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:172px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">25300062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">0.25% Trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:172px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">25200072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">100mm Dishes</td>
			<td style="width:172px;">Denville Scientific</td>
			<td style="width:119px;">T1110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">150mm Dishes</td>
			<td style="width:172px;">Denville Scientific</td>
			<td>T1115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">50ml Conicals</td>
			<td style="width:172px;">Denville Scientific</td>
			<td style="width:119px;">&#160; C1062-9&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">Phosphate Buffered Saline Tablets</td>
			<td style="width:172px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP2944-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">5ml Pipettes</td>
			<td style="width:172px;">Fisher Scientific</td>
			<td>1367811D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">10ml Pipettes</td>
			<td style="width:172px;">Fisher Scientific</td>
			<td>1367811E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">25ml Pipettes</td>
			<td style="width:172px;">Fisher Scientific</td>
			<td>1367811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">9&#34; Pasteur Pipettes</td>
			<td style="width:172px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">13-678-20D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:385px;">NIH 3T3 Cells</td>
			<td style="width:172px;">ATCC</td>
			<td style="width:119px;">CRL1658</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

conditional reprogramming of pediatric human esophageal epithelial cells for use in tissue engineering and disease investigation

Identifying and expanding patient-specific cells in culture for use in tissue engineering and disease investigation can be very challenging. Utilizing various types of stem cells to derive cell types of interest is often costly, time consuming and highly inefficient. Furthermore, undesired cell types must be removed prior to using this cell source, which requires another step in the process. In order to obtain enough esophageal epithelial cells to engineer the lumen of an esophageal construct or to screen therapeutic approaches for treating esophageal disease, native esophageal epithelial cells must be expanded without altering their gene expression or phenotype. Conditional reprogramming of esophageal epithelial tissue offers a promising approach to expanding patient-specific esophageal epithelial cells. Furthermore, these cells do not need to be sorted or purified and will return to a mature epithelial state after removing them from conditional reprogramming culture. This technique has been described in many cancer screening studies and allows for indefinite expansion of these cells over multiple passages. The ability to perform esophageal screening assays would help revolutionize the treatment of pediatric esophageal diseases like eosinophilic esophagitis by identifying the trigger mechanism causing the patient's symptoms. For those patients who suffer from congenital defect, disease or injury of the esophagus, this cell source could be used as a means to seed a synthetic construct for implantation to repair or replace the affected region.

Et sammendrag av de viktigste trinnene i å isolere esophageal epitelceller fra pasient biopsier er oppsummert i figur 1. Kolonier av epitelceller vil dannes i løpet av ca. 4-5 dager, og vil bli omgitt av fibroblast feeder-celler (figur 2A). Ettersom disse koloniene utvide de vil fusjonere med andre kolonier for å danne større kolonier (figur 2B). Når kulturer har blitt 70% sammenflytende, de trenger å bli utvidet (Figur 2C)...

Watch this Scientific Journal Video about Conditional Reprogramming of Pediatric Human Esophageal Epithelial Cells for Use in Tissue Engineering and Disease Investigation at JoVE.com

Conditional Reprogramming of Pediatric Human Esophageal Epithelial Cells for Use in Tissue Engineering and Disease Investigation

Utvidelse av menneskelige pediatriske esophageal epitelceller benytter betinget omprogrammering gir etterforskere med en pasientspesifikk populasjon av celler som kan benyttes for prosjektering esophageal konstruksjoner for autolog implantasjon å behandle defekter eller skade og fungere som et reservoar for terapeutiske utvelgelsesassays.

Betinget Omprogrammering av Pediatric Menneskelig Esophageal Epitelceller for bruk i Tissue Engineering og sykdom Investigation

Identifying and expanding patient-specific cells in culture for use in tissue engineering and disease investigation can be very challenging. Utilizing ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

Horisontal helmontering: En romanbehandlings- og bildeprotokoll for tykke, tredimensjonale vev Tverrsnitt av huden

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Vurdering av skaden-indusert Senescence og i Vivo omprogrammering i skjelettmuskelen

Cellular senescence is a stress response that is characterized by a stable cellular growth arrest, which is important for many physiological and ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

Rask, rettet differensiering av netthinnens Pigment epitelceller fra menneskelige embryonale eller indusert Pluripotent stamceller

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Real-time Measurement of Epithelial Barrier Permeability in Human Intestinal Organoids

Sanntids måling av epitelial barriere permeabilitet i menneskelig Intestinal Organoids

Advances in 3D culture of intestinal tissues obtained through biopsy or generated from pluripotent stem cells via directed differentiation, have resulted ...

A Simplified and Efficient Method to Isolate Primary Human Keratinocytes from Adult Skin Tissue

En forenklet og effektiv metode å isolere primære menneskelige keratinocytter fra voksen hud vev

Primary human keratinocytes isolated from fresh skin tissues and their expansion in vitro have been widely used for laboratory research and for clinical ...

Chemical Reversion of Conventional Human Pluripotent Stem Cells to a Na&#239;ve-like State with Improved Multilineage Differentiation Potency

Chemical Reversion of Conventional Human Pluripotent Stem Cells to a NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve-like State with Improved Multilineage Differentiation Potency

Kjemisk hjemfall til konvensjonelle menneskelige Pluripotent stamceller til en naiv-lignende tilstand med forbedret Multilineage differensiering styrke

Na&#239;ve human pluripotent stem cells (N-hPSC) with improved functionality may have a wide impact in regenerative medicine. The goal of this protocol is ...

Engineering Transplantation-suitable Retinal Pigment Epithelium Tissue Derived from Human Embryonic Stem Cells

Engineering transplantasjon-passer netthinnens Pigment epitel vev avledet fra menneskelige embryonale stamceller

Several pathological conditions of the eye affect the functionality and/or the survival of the retinal pigment epithelium (RPE). These include some forms ...

RNA-based Reprogramming of Human Primary Fibroblasts into Induced Pluripotent Stem Cells

RNA-baserte omprogrammering av menneskelig primære fibroblaster til indusert Pluripotent stamceller

Induced pluripotent stem cells (iPSCs) have proven to be a valuable tool to study human development and disease. Further advancing iPSCs as a regenerative ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

I Vitro generasjon av Somite derivater fra menneske indusert stamceller Pluripotent

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...