Name: mitoception: transferring isolated human msc mitochondria to glioblastoma stem cells
Uploaded: 2017-02-22T15:00:00
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हम एंड्रिया Parmeggiani (L2C और DIMNP, पेरिस), बेनोइट Charlot (आईईएस, पेरिस) के रूप में अच्छी तरह से धन्यवाद उपयोगी विचार विमर्श के लिए प्रयोगशाला के सदस्यों के रूप में, क्रिस्टोफ़ Duperray प्रदान करने के लिए FACS विश्लेषण, मोंटपेलियर रियो इमेजिंग सुविधा (एमआरआई) के साथ मदद के लिए FACS और confocal माइक्रोस्कोपी के लिए पर्याप्त माहौल। BNM LabEx Numev (सम्मेलन ANR-10-LabX -20) से स्नातक की फैलोशिप द्वारा समर्थित किया गया। एबी वारसॉ और यूरोपीय संघ के विश्वविद्यालय से स्नातक की फैलोशिप द्वारा समर्थित किया गया था (n ° POKL.04.01.02-00-221 / 12)। MLV वैज्ञानिक अनुसंधान के लिए राष्ट्रीय केन्द्र (CNRS) से एक कर्मचारी वैज्ञानिक है।

पहला दिन 1. mesenchymal स्टेम सेल की लेबलिंग (एमएससी) माइटोकॉन्ड्रिया (वैकल्पिक) <ol><li> दो दिन माइटोकॉन्ड्रिया तैयारी से पहले, एक 100 मिमी संस्कृति डिश में मानव MSCs बीज में 10 मिलीलीटर αMEM / FBS 10%, ताकि दिन 1 पर संस्?...

<ol>
	<li>Vafai, S. B., Mootha, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+disorders+as+windows+into+an+ancient+organelle.">Mitochondrial disorders as windows into an ancient organelle.</a> Nature. 491 (7424), 374-383 (2012).</li><li>Nunnari, J., Suomalainen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria:+in+sickness+and+in+health.">Mitochondria: in sickness and in health.</a> Cell. 148 (6), 1145-1159 (2012).</li><li>Chandel, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+as+signaling+organelles.">Mitochondria as signaling organelles.</a> BMC Biol. 12 (1), 34 (2014).</li><li>Schulze, A., Harris, A. 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V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+block+of+tunneling+nanotube+(TNT)+formation+inhibits+intercellular+organelle+transfer+between+PC12+cells.">Selective block of tunneling nanotube (TNT) formation inhibits intercellular organelle transfer between PC12 cells.</a> FEBS Lett. 583 (9), 1481-1488 (2009).</li><li>Gurke, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tunneling+nanotube+(TNT)-like+structures+facilitate+a+constitutive,+actomyosin-dependent+exchange+of+endocytic+organelles+between+normal+rat+kidney+cells.">Tunneling nanotube (TNT)-like structures facilitate a constitutive, actomyosin-dependent exchange of endocytic organelles between normal rat kidney cells.</a> Exp Cell Res. 314 (20), 3669-3683 (2008).</li><li>Vallabhaneni, K. 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Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-to-cell+cross-talk+between+mesenchymal+stem+cells+and+cardiomyocytes+in+co-culture.">Cell-to-cell cross-talk between mesenchymal stem cells and cardiomyocytes in co-culture.</a> J Cell Mol Med. 12 (5A), 1622-1631 (2008).</li><li>Acquistapace, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+mesenchymal+stem+cells+reprogram+adult+cardiomyocytes+toward+a+progenitor-like+state+through+partial+cell+fusion+and+mitochondria+transfer.">Human mesenchymal stem cells reprogram adult cardiomyocytes toward a progenitor-like state through partial cell fusion and mitochondria transfer.</a> Stem Cells. 29 (5), 812-824 (2011).</li><li>Hase, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M-Sec+promotes+membrane+nanotube+formation+by+interacting+with+Ral+and+the+exocyst+complex.">M-Sec promotes membrane nanotube formation by interacting with Ral and the exocyst complex.</a> Nat Cell Biol. 11 (12), 1427-1432 (2009).</li><li>Phinney, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells+use+extracellular+vesicles+to+outsource+mitophagy+and+shuttle+microRNAs.">Mesenchymal stem cells use extracellular vesicles to outsource mitophagy and shuttle microRNAs.</a> Nat Commun. 6, 8472 (2015).</li><li>Ahmad, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Miro1+regulates+intercellular+mitochondrial+transport+&amp;+enhances+mesenchymal+stem+cell+rescue+efficacy.">Miro1 regulates intercellular mitochondrial transport &amp; enhances mesenchymal stem cell rescue efficacy.</a> Embo J. 33 (9), 994-1010 (2014).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=iPSC-MSCs+with+High+Intrinsic+MIRO1+and+Sensitivity+to+TNF-a+Yield+Efficacious+Mitochondrial+Transfer+to+Rescue+Anthracycline-Induced+Cardiomyopathy.">iPSC-MSCs with High Intrinsic MIRO1 and Sensitivity to TNF-a Yield Efficacious Mitochondrial Transfer to Rescue Anthracycline-Induced Cardiomyopathy.</a> Stem Cell Reports. 7 (4), 749-763 (2016).</li><li>Takeda, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+intergeneric/interspecies+mitochondrial+injection;+parthenogenetic+development+of+bovine+oocytes+after+injection+of+mitochondria+derived+from+somatic+cells.">Influence of intergeneric/interspecies mitochondrial injection; parthenogenetic development of bovine oocytes after injection of mitochondria derived from somatic cells.</a> J Reprod Dev. 58 (3), 323-329 (2012).</li><li>Takeda, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+cytoplasm+or+mitochondria+derived+from+somatic+cells+affects+parthenogenetic+development+of+murine+oocytes.">Microinjection of cytoplasm or mitochondria derived from somatic cells affects parthenogenetic development of murine oocytes.</a> Biol Reprod. 72 (6), 1397-1404 (2005).</li><li>Van Blerkom, J., Sinclair, J., Davis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+transfer+between+oocytes:+potential+applications+of+mitochondrial+donation+and+the+issue+of+heteroplasmy.">Mitochondrial transfer between oocytes: potential applications of mitochondrial donation and the issue of heteroplasmy.</a> Hum Reprod. 13 (10), 2857-2868 (1998).</li><li>Ishikawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ROS-generating+mitochondrial+DNA+mutations+can+regulate+tumor+cell+metastasis.">ROS-generating mitochondrial DNA mutations can regulate tumor cell metastasis.</a> Science. 320 (5876), 661-664 (2008).</li><li>Kaipparettu, B. 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K., Sturk-Andreaggi, K., Irwin, J. A., Just, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+Sanger+strategy+for+human+mitochondrial+genome+sequencing.">A high-throughput Sanger strategy for human mitochondrial genome sequencing.</a> BMC Genomics. 14, 881 (2013).</li></ol>

अध्ययनों से पता चलता है कि कोशिकाओं की संख्या बढ़ रही माइटोकॉन्ड्रिया का आदान-प्रदान कर सकते हैं और इन माइटोकॉन्ड्रिया लक्ष्य सेल चयापचय और कार्यों पर गहरा प्रभाव पड़ता है। इसलिए, यह उपकरण गुरु को मा?...

माइटोकॉन्ड्रिया कोशिकाओं, जहां वे पोषक तत्व तेज में और साथ ही ऊर्जा और मेटाबोलाइट उत्पादन में एक केंद्रीय भूमिका निभाने में पाया अंगों कर रहे हैं। इन अंगों परिपत्र mitochondrial डीएनए (mtDNA), 16.6 केबी लंबे, कि इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला परिसरों, tRNAs और rRNAs 1 के प्रोटीन को कूटबद्ध होते हैं। इन अंगों की कार्यक्षमता सेल homeostasis और कई विकृतियों माइटोकॉन्ड्रिया में शिथिलता 1, 2, 3 के साथ संबद्ध किया गया है के लिए महत्वपूर्ण है। माइटोकॉन्ड्रिया स्थिति उदाहरण के लिए चिकित्सा 4, 5, 6, 7 को मेटास्टेसिस और प्रतिरोध के लिए परिणामों के साथ इस मामले में बाद में सूजन, संक्रामक रोगों और कैंसर से जोड़ा गया है। माइटोकॉन्ड्रिया की उल्लेखनीय क्षमता प्रदर्शित<html> &quot;दाता&quot; और &quot;लक्ष्य&quot; कोशिकाओं के बीच स्थानांतरित हो रही है। यह, इस तरह के ऊतकों की मरम्मत और एजेंटों के लिए प्रतिरोध के रूप में अन्य कार्यात्मक संशोधनों के साथ ही लक्ष्य कोशिकाओं के ऊर्जावान चयापचय में परिवर्तन करने के लिए सुराग के रूप में हाल ही में विभिन्न प्रयोगशालाओं 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 के द्वारा दिखाया 16। मानव mesenchymal स्टेम सेल (MSCs), cardiomyocytes, endothelial कोशिकाओं, फेफड़े वायुकोशीय उपकला कोशिकाओं, गुर्दे ट्यूबलर कोशिकाओं और कैंसर कोशिकाओं सहित लक्ष्य कोशिकाओं की एक विस्तृत विविधता के लिए माइटोकॉन्ड्रिया हस्तांतरण करने के लिए इस क्षमता को प्रदर्शित करने के लिए इन कोशिकाओं के कार्यात्मक संपत्तियों के संशोधनों के लिए अग्रणी 8,&gt; 9, 10, 12, 17, 18। माइटोकॉन्ड्रिया विनिमय अब ​​एक व्यापक रूप से इस्तेमाल व्यवस्था है कि विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं के एक नंबर के लिए एक दूसरे के साथ संवाद करने और उनके जैविक गुणों को संशोधित करने के लिए अनुमति देता है के रूप में प्रकट होता है। इस माइटोकॉन्ड्रिया विनिमय टनलिंग नैनोट्यूब (टीएनटी) के गठन के माध्यम से हो सकता है, connexin 43-युक्त अंतराल जंक्शनों 8 या एम-सेक / TNFaip2 और exocyst जटिल 19 शामिल हैं। वैकल्पिक रूप से, माइटोकॉन्ड्रिया हस्तांतरण भी डोमेन युक्त प्रोटीन 1 की मध्यस्थता microvesicles (ARMMs) 20 arrestin द्वारा मध्यस्थता होना दिखाया गया था। दिलचस्प बात यह है माइटोकॉन्ड्रिया हस्तांतरण की प्रभावकारिता रो GTPase 1 की अभिव्यक्ति दर MIRO1 21, iPSC- के बीच माइटोकॉन्ड्रिया हस्तांतरण efficacies में मतभेद को समझाने के लिए एक महत्वपूर्ण कारक से जुड़ा हुआ थाMSCs और वयस्क BM-MSCs 22। सेल करने वाली सेल माइटोकॉन्ड्रिया विनिमय के विषय में डेटा के इस धन के बावजूद, अपेक्षाकृत कम चयापचय और इस माइटोकॉन्ड्रिया हस्तांतरण के जैविक परिणाम के बारे में जाना जाता है। इसलिए, यह पूरी तरह से उचित उपकरण पूरी तरह से इस हस्तांतरण का जैविक प्रभाव का आकलन करने के लिए स्थापित वारंट। इन वर्षों में, कई तकनीकी दृष्टिकोण स्वीकर्ता कोशिकाओं को दाता से माइटोकॉन्ड्रिया हस्तांतरण करने के लिए प्रस्तावित किया गया है। इस transmitochondrial cybrids 26 उत्पन्न करने के लिए oocytes 23, 24, 25, सेल संलयन में माइटोकॉन्ड्रिया के प्रत्यक्ष इंजेक्शन भी शामिल है, 27 और, हाल ही में, photothermal का उपयोग कर अलग माइटोकॉन्ड्रिया के हस्तांतरण nanoblades 28। हम और दूसरों को पहले से पृथक mitochond की क्षमता का प्रदर्शन कियारिया, जीवित कोशिकाओं से भली भाँति जा के रूप में इन विट्रो और इन विवो दोनों में मनाया 29, 30, 31, तंत्र के माध्यम से macropinocytosis 32 को शामिल करने का प्रस्ताव रखा। हम आगे की एक विधि है, MitoCeption बुलाया विकसित की है, मात्रात्मक एमडीए MB-231 स्तन कैंसर कोशिका लाइन 31 के रूप में (पक्षपाती) के साथ उदाहरण, कोशिकाओं को लक्षित करने के लिए (MSCs से) पृथक माइटोकॉन्ड्रिया हस्तांतरण करने के लिए। इस प्रोटोकॉल ग्लियोब्लास्टोमा स्टेम कोशिकाओं को अलग-थलग मानव एमएससी माइटोकॉन्ड्रिया के हस्तांतरण (GSCs) के लिए यहां अनुकूलित किया गया था। ग्लयोब्लास्टोमा मस्तिष्क है कि तेजी से मुख्य रूप से ग्लियोब्लास्टोमा स्टेम सेल (GSC) ट्यूमर 33 के भीतर मौजूद होने के कारण उपचार के लिए प्रतिरोधी हो जाते हैं, के आक्रामक घातक ट्यूमर है। ये GSCs इन विट्रो में neurospheres के रूप में विकसित और जेनोग्राफ्ट मॉडल में ट्यूमर उत्पन्न करते हैं। ग्लियोब्लास्टोमा भीतर कैंसर कोशिकाओं हैके रूप में astrocytic ब्रेन ट्यूमर कोशिकाओं है कि जो माइटोकांड्रिया (साथ ही कैल्शियम और सेल नाभिक) के माध्यम से बढ़ाया microtubes, के माध्यम से आपस में पलायन कर सकते हैं, रेडियोथेरेपी के लिए प्रतिरोधी एस्ट्रोसाइटोमा नेटवर्क 34 में जिसके परिणामस्वरूप के लिए हाल ही में दिखाया क्षमता सेल करने वाली सेल कनेक्शन बनाने के लिए। ग्लयोब्लास्टोमा ट्यूमर microenvironment के भीतर कई विभिन्न कोशिकाओं भर्ती कर सकते हैं, MSCs 35, 36 सहित। हम पता चला कि MSCs coculture में GSCs साथ सेल सेल कनेक्शन बनाने और उनके माइटोकांड्रिया (नहीं दिखाया डेटा) है, जो GSC कार्यात्मक संपत्तियों को संशोधित करने की उम्मीद है हस्तांतरण कर सकते हैं। वर्तमान प्रोटोकॉल का वर्णन कैसे MitoCeption तकनीक उनके कार्यात्मक जैविक परिणाम को निर्धारित करने के उद्देश्य के साथ मानव MSCs से माइटोकॉन्ड्रिया, पृथक पहले से हस्तांतरण करने के लिए, मानव GSCs के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। Multipotent और अत्यधिक tumorigenic GB4 GSC लाइन 37 इस अध्ययन में इस्तेमाल किया गया था।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mitochondria Isolation Kit for Tissue&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>10579663</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2 Supplement (100X)</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>11520536</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 Supplement W/O VIT A (50X)</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>11500446</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS w/o Ca2+ w/o Mg2+</td>
			<td>&#160;Sigma</td>
			<td>H4385</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>poly Heme&#160;</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>P3932</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>aMEM w/o glutamine</td>
			<td>Ozyme</td>
			<td>BE12-169F</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12 without glutamine,&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>11540566</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine&#160;</td>
			<td>Invitrogen&#160;</td>
			<td>25030-024&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose&#160;</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>G7021</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insuline&#160;</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>I 1882&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Human&#160;bFGF&#160;</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>233-FB-025</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human EGF&#160;</td>
			<td>Peprotech&#160;</td>
			<td>AF-100-15&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3149&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>2382</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsine Inhibitor&#160;</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>T9003</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>SIGMA&#160;</td>
			<td>10104159001</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsine 0.25% /EDTA 1 mM</td>
			<td>Invitrogen&#160;</td>
			<td>25200056</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Gibco&#160;</td>
			<td>15090-046</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease inhibitors EDTA free</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>4693159001</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ciprofloxacine&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>17850-5G-F</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fungine&#160;</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>ant-fn-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fungizone&#160;</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>15290018</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamycin</td>
			<td>Euromedex</td>
			<td>EU0410</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;MitoTracker Green FM</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>M7514</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;MitoTracker Red CMXRos</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>&#160;M7512</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MitoTracker Deep Red FM</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>&#160;M22426&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;CellTracker Green CMFDA</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>C7025</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;CellTracker Blue CMF2HC</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>C12881</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RIPA</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-24948</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FluoroDish Sterile Culture Dish</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>FD35-100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemacytometer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>267110</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS tubes</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>2,523,749</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS apparatus</td>
			<td>Gallios&#160;</td>
			<td>&#160;3L 10C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC FAST START DNA MASTER PLUS&#160;</td>
			<td>Roche</td>
			<td>3515885001</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mitoception: transferring isolated human msc mitochondria to glioblastoma stem cells

माइटोकॉन्ड्रिया कोशिका चयापचय, ऊर्जा उत्पादन और apoptosis के नियंत्रण के लिए एक केंद्रीय भूमिका निभाते हैं। अपर्याप्त mitochondrial समारोह बहुत ही विविध रोगों के लिए जिम्मेदार पाया गया है, मस्तिष्क संबंधी विकृतियों से कैंसर को लेकर। दिलचस्प बात यह है माइटोकॉन्ड्रिया हाल ही में क्षमता प्रदर्शित करने के लिए दिखाया गया है प्रकार की कोशिकाओं के बीच, मानव mesenchymal स्टेम सेल (एमएससी) से कैंसर की कोशिकाओं को coculture की स्थिति में, चयापचय और कार्यात्मक परिणामों के साथ माइटोकॉन्ड्रिया प्राप्तकर्ता कोशिकाओं के लिए हस्तांतरित किया जा विशेष रूप से, आगे बढ़ाने के मौजूदा ब्याज इन अंगों के जैविक गुणों के लिए। लक्ष्य कोशिकाओं में स्थानांतरित एमएससी माइटोकॉन्ड्रिया के प्रभाव का मूल्यांकन इस तरह के सेल सेल बातचीत के जैविक परिणाम समझने के लिए प्राथमिक महत्व का है। MitoCeption यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल लक्ष्य कोशिकाओं को दाता कोशिकाओं से पहले से पृथक माइटोकॉन्ड्रिया के हस्तांतरण की अनुमति देता है, एमएससी माइटोकॉन्ड्रिया का उपयोग करऔर glioblastoma स्टेम सेल (GSC) एक मॉडल प्रणाली के रूप में। इस प्रोटोकॉल पहले से MSCs से माइटोकॉन्ड्रिया, पृथक हस्तांतरण करने के लिए, एमडीए MB-231 कैंसर की कोशिकाओं को पक्षपाती करने के लिए इस्तेमाल किया गया है। इस माइटोकॉन्ड्रिया ट्रांसफर प्रोटोकॉल GSCs कि इन विट्रो में neurospheres के रूप में बढ़ के विशिष्ट ख़ासियत पेश करने के लिए यहाँ अनुकूलित है। पृथक माइटोकॉन्ड्रिया के हस्तांतरण के माइटोकॉन्ड्रिया महत्वपूर्ण रंगों का उपयोग कर प्रतिदीप्ति सक्रिय सेल छँटाई (FACS) और confocal इमेजिंग द्वारा पीछा किया जा सकता है। अलग haplotypes (SNPs) के साथ माइटोकॉन्ड्रिया दाता और लक्ष्य कोशिकाओं का उपयोग भी लक्ष्य कोशिकाओं में अपने परिपत्र mitochondrial डीएनए (mtDNA) की एकाग्रता के आधार पर स्थानांतरित कर माइटोकॉन्ड्रिया का पता लगाने के लिए अनुमति देता है। एक बार जब प्रोटोकॉल इन मानदंडों के साथ मान्य किया गया है, कोशिकाओं का तबादला माइटोकॉन्ड्रिया को शरण देने आगे इस तरह के सेल चयापचय, लचीलापन, प्रसार और उपचार के लिए प्रतिक्रिया के रूप में जैविक गुणों पर बहिर्जात माइटोकॉन्ड्रिया के प्रभाव को निर्धारित करने के लिए विश्लेषण किया जा सकता है।

Mesenchymal स्टेम सेल (एमएससी) और MitoCeption द्वारा लक्षित ग्लियोब्लास्टोमा स्टेम सेल (GSC) को उनके स्थानांतरण से माइटोकॉन्ड्रिया के अलगाव की रूपरेखा प्रक्रियात्मक कदम चित्र 1 में दिखाया गया है। GSCs ...

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MitoCeption: Transferring Isolated Human MSC Mitochondria to Glioblastoma Stem Cells

इधर, एक प्रोटोकॉल (MitoCeption) GSC चयापचय और कार्यों पर उनके जैविक प्रभाव का अध्ययन करने के लक्ष्य के साथ, माइटोकॉन्ड्रिया, मानव mesenchymal स्टेम सेल (एमएससी) से अलग-थलग हस्तांतरण करने के लिए ग्लियोब्लास्टोमा स्टेम सेल (GSC) को प्रस्तुत किया है। इसी तरह की एक प्रोटोकॉल अन्य प्रकार की कोशिकाओं के बीच माइटोकॉन्ड्रिया हस्तांतरण करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।

MitoCeption: ग्लयोब्लास्टोमा स्टेम कोशिकाओं के स्थानांतरण अलग मानव एमएससी माइटोकॉन्ड्रिया

Mitochondria play a central role for cell metabolism, energy production and control of apoptosis. Inadequate mitochondrial function has been found ...

Research

JoVE Journal

Biology

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मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं (ते) के प्रचार - प्रसार

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मानव तंत्रिका स्टेम सेल की गिनती

Knowledge of the exact number of viable cells in a given volume of a cell suspension is required for many routine tissue culture manipulations, such as ...

Passaging Human Neural Stem Cells

मानव तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं passaging

The ability to manipulate human neural stem/precursor cells (hNSPCs) in vitro provides a means to investigate their utility as cell transplants for ...

Immunocytochemistry: Human Neural Stem Cells

Immunocytochemistry: मानव तंत्रिका स्टेम सेल

Immunocytochemistry is a very powerful and fairly straightforward method for determining the presence, subcellular localization, and relative abundance of ...

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं से chromatin immunoprecipitation

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

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Mitochondria के खमीर कक्ष से शोधन

Mitochondria are the main site of ATP production during aerobic metabolism in eukaryotic non-photosynthetic cells1. These complex organelles also play ...

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मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं को ठंड और विगलन

Since James Thomson et al developed a technique in 1998 to isolate and grow hES in culture, freezing cells for later use and thawing and expanding cells ...

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के Oligodendrocyte व्यापारियों में भेदभाव

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...

Transfecting and Nucleofecting Human Induced Pluripotent Stem Cells

मानव प्रेरित pluripotent स्टेम सेल Transfecting और Nucleofecting

Genetic modification is continuing to be an essential tool in studying stem cell biology and in setting forth potential clinical applications of human ...

Multi-parameter Measurement of the Permeability Transition Pore Opening in Isolated Mouse Heart Mitochondria

पारगम्यता संक्रमण ताकना खोलने की पृथक माउस Mitochondria हार्ट में मल्टी पैरामीटर मापन

The mitochondrial permeability transition pore (mtPTP) is a non specific channel that forms in the inner mitochondrial membrane to transport solutes with ...