लेखकों की स्थापना और अंतर स्कैनिंग कैलोरीमीटर, Sasmit देशमुख और वेबस्टर Magcalas अपनी चर्चा के लिए पर प्रशिक्षण में उनकी भूमिका के लिए यूसुफ मैनसिनी (जीई हेल्थकेयर के साथ पूर्व), पावेल Czudec, थॉमस केज (Malvern उपकरण लिमिटेड) के लिए बहुत आभारी हैं।

1. साधन शुरू हुआ <ol><li> अंतर स्कैनिंग कैलोरीमीटर पर स्विच और कोशिकाओं में दबाव बढ़ाने के नमूने के उबलते को दबाने के लिए के रूप में अच्छी तरह से गठन ऊंचा तापमान पर बुलबुले को रोकने के। यह आमतौर पर इस प्रणाली में नाइट्रोजन की आपूर्ति के द्वारा हासिल की है। </li><li> सेल (जैसे, टैंटलम, सोना, प्लेटिनम, आदि) के गठन सामग्री पर निर्भर करता है, सेल को नुकसान पहुँचाए से बचने के लिए निर्माता की सिफारिश दबाव के अनुसार नाइट्रोजन गैस की आपूर्ति के दबाव को समायोजित। उदाहरण के लिए, इस प्रक्रिया को विकसित करने के लिए इस्तेमाल साधन के लिए 45 साई को नाइट्रोजन गैस की आपूर्ति का दबाव है, और दबाव 80 साई ऊपर सेल नुकसान हो सकता है निर्धारित किया है। </li><li> सुनिश्चित करें कि सभी सफाई एजेंट जलाशयों आवश्यक मात्रा को भर रहे हैं। सफाई की आवश्यकता एजेंटों साबुन और पानी से धोने और प्रत्येक नमूना चलाने के बाद क्रमश: सेल साफ करने के लिए शामिल हैं। </li><li> नमूना पकड़े डिब्बे के तापमान सेटएक उचित मूल्य, अधिमानतः 5 डिग्री सेल्सियस, नमूना प्रयोग करने से पहले की अखंडता को बनाए रखने के लिए। </li></ol> 2. नमूना तैयार <ol><li> बफर कि प्रयोग के लिए संदर्भ के रूप में इस्तेमाल किया जाएगा के खिलाफ नमूना Dialyze। वैकल्पिक रूप से, क्षालन बफर प्रोटीन शुद्धि (यानी स्तंभ क्षालन) के अंतिम चरण में एकत्र किया जा सकता है। </li><li> ऐसे Kjedahl विधि 33 या लौरी विधि 34 के रूप में सबसे उपयुक्त प्रोटीन एकाग्रता दृढ़ संकल्प विधि का उपयोग प्रोटीन के नमूने की एकाग्रता का निर्धारण। परिणामों का उद्देश्य तुलना के लिए, इसी अध्ययन के भीतर लगातार एक ही विधि का उपयोग करें। आवश्यक एकाग्रता रेंज साधन के मॉडल के आधार पर भिन्न हो सकते हैं। 1 मिलीग्राम / एमएल - इस प्रोटोकॉल में प्रयुक्त साधन के लिए, बेहतर काम कर सीमा 0.5 है। </li><li> शून्य में नमूना और संदर्भ बफर सूक्ष्मबुद्बुद कि मात्रा inaccur पैदा कर सकता है छुटकारा पाने के लिए देगासacy। यह कदम नए कैलोरीमीटर मॉडल के लिए छोड़ दिया जा सकता है। </li><li> एक लामिना का प्रवाह biocontainment कैबिनेट में एक micropipette और बाँझ सुझावों का प्रयोग, 96 अच्छी तरह से साधन के साथ संगत प्लेटों में जोड़े में नमूने और उनके संबंधित बफर लोड। बफर बफर और क्रमश: पानी स्कैन के लिए पानी के साथ पहले दो पिछले दो जोड़े के बफर के साथ कुओं के जोड़े और भरें। बफर बफर स्कैन साधन माप (इंस्ट्रूमेंटेशन त्रुटि के यानी आकलन) नमूना करने के साथ ही एक आधारभूत स्थापित प्रायर की उपयुक्तता का सत्यापन करें, कोशिकाओं को साफ करने के लिए, जबकि पानी स्कैन चलाए जा रहे हैं। </li><li> एक सील फिल्म के साथ 96 अच्छी तरह से थाली कवर, और यह सुनिश्चित करें कि कुओं को ठीक से जैव सुरक्षा कैबिनेट से बाहर प्लेट लेने के नमूना संक्रमण से बचने के लिए पहले सील कर रहे हैं। </li><li> उचित अभिविन्यास में नमूना पकड़े डिब्बे में थाली रखें। </li></ol> 3. प्रायोगिक पैरामीटर सेटअप नोट: मैं पर निर्भर करता हैnstrumentation, नमूने सेल में लोड किया जा सकता है या तो स्वयं एक सिरिंज का उपयोग कर, या स्वचालित रूप से एक autosampler का उपयोग कर। इस मामले (यानी एक औद्योगिक सेटिंग) में, एक autosampler समय बचाने के लिए प्रयोग किया जाता है। <ol><li> अधिग्रहण सॉफ्टवेयर का उपयोग करना, आदेश प्लेट धारा 2.4 के अनुसार भरी हुई थी में नमूना जानकारी दर्ज करें। यदि उपलब्ध सांद्रता दर्ज करें, अन्यथा, डेटा विश्लेषण (धारा 4.2) से पहले विश्लेषण सॉफ्टवेयर में एकाग्रता मूल्यों दर्ज करें। </li><li> विकल्प है कि हर नमूना स्कैन, जो कई पानी से कुल्ला कदम से पालन किया जाना चाहिए कोई डिटर्जेंट अवशेषों की कोशिकाओं में छोड़ दिया जाता है सुनिश्चित करने के लिए पहले साबुन के साथ कोशिकाओं की सफाई सुनिश्चित करता है का चयन करें। </li><li> 20 डिग्री सेल्सियस के लिए प्रयोग के शुरू तापमान सेट, लेकिन इस नमूने के पूर्व ज्ञान के आधार पर भिन्न हो सकते हैं। नाम से जाना जाता प्रोटीन के लिए, पूर्व निर्धारित शुरू तापमान, इस्तेमाल किया जा सकता है, जबकि एक कम शुरू तापमान अज्ञात नमूने के लिए लागू किया जा सकता है। </li><li> अंतिम तापमान सेटप्रयोग के, जैसे 100 डिग्री सेल्सियस। अंतिम तापमान नमूना के पूर्व ज्ञान के आधार पर भिन्न हो सकते हैं। </li><li> प्रयोग की दर स्कैन, जैसे 60 डिग्री सेल्सियस / घंटा है जो ठेठ दर स्कैन सेट करें। हालांकि, दर स्कैन नमूना के पूर्व ज्ञान के आधार पर जैसे 90 डिग्री सेल्सियस / घंटा या 120 डिग्री सेल्सियस / ज भिन्न हो सकते हैं। यह खुलासा के कैनेटीक्स का आकलन करने के लिए अलग-अलग दरों पर स्कैन अज्ञात नमूनों को स्कैन करने की सलाह दी जाती है। </li><li> Rescan नमूने थर्मल खुलासा के उलटने की जांच करने के लिए। एक प्रोटीन का खुलासा प्रतिवर्ती माना जाता है अगर तापीय धारिता दूसरे स्कैन के लिए प्राप्त पहले स्कैन के लिए तापीय धारिता मूल्य कम से कम 80% है। </li><li> कैलोरीमीटर की कोशिकाओं की अखंडता की रक्षा करने के लिए 10 डिग्री सेल्सियस के बाद प्रयोग थर्मोस्टेट सेट करें। </li><li> सत्यापित करें कि प्रयोग सेटअप मानकों प्रयोग क्रियान्वित करने से पहले सही हैं। यदि सब कुछ जगह में है, प्रयोग शुरू करते हैं। </li></ol> 4. डेटा एकalysis <ol><li> प्रयोग से कच्चे डेटा पुनः प्राप्त करने और विश्लेषण के लिए एक समय में एक नमूना चयन करें। घटाना संदर्भ स्कैन, यानी बफर, नमूना स्कैन से। नोट: संदर्भ घटाव डीएससी उपकरणों के नए मॉडल द्वारा स्वचालित रूप से किया जाता है। </li><li> नमूना एकाग्रता मान दर्ज करता है, तो यह धारा 3.1 के अनुसार छोड़ा गया था। </li><li> फ़िट और जो खुलासा पर पानी के लिए हाइड्रोफोबिक समूहों के जोखिम के कारण होता है प्रोटीन की मुड़ा और सामने आया राज्यों की गर्मी क्षमताओं में मतभेद के लिए खाते में प्राप्त कर लिया thermogram से आधारभूत घटाना। रैखिक या घन वक्र ढाले नमूना के लिए डीएससी प्रोफ़ाइल के आकार के आधार पर लागू किया जा सकता है। स्थिरता के लिए, फिटिंग का एक ही प्रकार के एक अध्ययन, जैसे वास्तविक समय स्थिरता अध्ययन के दौरान इस्तेमाल किया जा रहा है। यह कदम वक्र पर कार्रवाई करने के चोटी के एकीकरण के संक्रमण की तापीय धारिता प्राप्त करने के लिए आवश्यक है। </li><li> गैर रेखीय कम से कम वर्ग फिट का उपयोग कर चोटी एकीकरण को पूरा करें। उत्पाद के आधार परज्ञान को लागू दो राज्य या गैर-दो राज्य के मॉडल। दो राज्य मॉडल एकल सहकारी थर्मल बदलाव के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, और प्रोटीन के लिए अज्ञात, गैर दो राज्य मॉडल लागू जब तक आगे उत्पाद ज्ञान उपलब्ध है। यदि लागू हो, उपकरण के सॉफ्टवेयर के चलने का वक्र ढाले समारोह का उपयोग कर जब तक ची-वर्ग मूल्य लगातार बना रहता है ढाले वक्र समायोजित करें। </li><li> प्राप्त परिणामों के संक्रमण तापमान (टीएम), उष्मापन तापीय धारिता (ΔH), और नमूने के van&#39;t हॉफ तापीय धारिता (ΔH VH) के मध्य के लिए मूल्यों को दिखाएगा। </li></ol>

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D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+modules+of+the+vaccinia+virus+complement+control+protein+are+not+in+extensive+contact.">Central modules of the vaccinia virus complement control protein are not in extensive contact.</a> Biochem. J. 344 (1), 167-175 (1999).</li><li>Freire, E., Sch&#214;n, A., Hutchins, B. M., Brown, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+denaturation+as+a+tool+in+the+formulation+optimization+of+biologics.">Chemical denaturation as a tool in the formulation optimization of biologics.</a> Drug disc today. 18 (19), 1007-1013 (2013).</li><li>Wen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+differential+scanning+calorimetry+for+thermal+stability+analysis+of+proteins:+qualification+of+DSC.">Applications of differential scanning calorimetry for thermal stability analysis of proteins: qualification of DSC.</a> J. Pharm. Sci. 101 (3), 955-964 (2012).</li></ol>

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इस प्रक्रिया को सफलतापूर्वक स्थिरता और उत्पाद तुलनीयता के अध्ययन के 21 सहित विभिन्न लक्षण वर्णन परीक्षण संकुल, में शामिल किया गया है। वास्तविक समय स्थिरता अध्ययन में, डीएससी टी मीटर पर नजर रखने के लिए, साथ ही समय के साथ एफ बायोलॉजिक्स के एक अनुमान उनकी शेल्फ जीवन का निर्धारण करने के लिए प्रयोग किया जाता है। साथ उत्पाद तुलनीयता करने का संबंध है, यह प्रक्रिया और सुविधा परिवर्तन के प्रभाव के रूप में अच्छी तरह से उत्पादित लॉट के संरचनात्मक रचना पर कुंजी विनिर्माण कदम के प्रभाव का आकलन करने के लिए प्रयोग किया जाता है। यह आमतौर पर एक संदर्भ उत्पाद है कि आदर्श उत्पाद के रूप में नामित किया गया है करने के लिए उत्पादन बहुत की ΔH के प्रत्यक्ष तुलना शामिल है। इसके अलावा, DSC उत्पाद तैयार करने के अध्ययनों से 37 के लिए एक उपयोगी विश्लेषणात्मक उपकरण साबित हो गया है। विभिन्न बफ़र्स में और अलग सांद्रता में एक प्रोटीन की टी एम सूत्रीकरण कि सबसे करने के लिए स्थिरता proffers निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकताप्रोटीन। इस विधि और उसके परिणामों की निष्पक्षता की विश्वसनीयता सुनिश्चित करने के लिए, यह एक ही अध्ययन (जैसे, वैक्सीन तैयार करने अध्ययन) के भीतर चलाने के लिए रन से लगातार परीक्षण मानकों को बनाए रखने के लिए महत्वपूर्ण है। हालांकि, प्रक्रिया विभिन्न प्रोटीन के भौतिक गुणों में मतभेद को समायोजित करने के लिए संशोधित किया जा सकता है। एक संशोधन का एक उदाहरण है कि बनाया जा सकता प्रयोग 38, 39 की स्कैनिंग दर में फेरबदल किया गया है। प्रोटीन है कि गठन के समुच्चय से ग्रस्त थे जब गरम एक तेजी से स्कैनिंग दर पर जांच की गई है (जैसे, 120 डिग्री सेल्सियस / एच) थर्मल संक्रमण प्रोफ़ाइल के समुच्चय के योगदान कैलोरीमीटर की केशिकाओं clogging के रूप में से बचने के लिए भी है। यह ध्यान देने योग्य है कि स्कैनिंग की दर एक डीएससी प्रयोग 38 के परिणाम को प्रभावित कर सकते हैं लायक है। थर्मल संक्रमण चोटी के विस्तार कुछ समर्थक में स्कैनिंग की दरों में वृद्धि के साथ देखा गया हैteins; हालांकि, टी एम काफी लगातार 38 बने रहे। इसके अलावा, नमूना तैयार करने के लिए डायलिसिस और degassing कदम भी सही परिणाम 31 के लिए बहुत महत्वपूर्ण हैं। डायलिसिस सुनिश्चित करता है कि नमूना और बफर की संरचना में फर्क सिर्फ इतना प्रोटीन होता है; इस प्रकार, सभी अतिरिक्त गर्मी नमूना द्वारा अवशोषित प्रोटीन की गर्मी क्षमता के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है। के रूप में thermodynamic पैरामीटर के एक्सट्रपलेशन मानता है कि खुलासा घटना निरंतर मात्रा और दबाव 31 के तहत हो रहा है degassing, सटीक मात्रा विश्लेषण करता है। इस धारणा के लगातार दबाव भाग प्रक्रिया की धारा 1.1 के अनुसार इस प्रणाली के नाइट्रोजन दबाव से हिसाब है। इस तरह के परिपत्र Dichroism (सीडी) और प्रतिदीप्ति spectroscopies के रूप में प्रोटीन रचना की स्थिरता का निर्धारण करने के अन्य तरीकों की तुलना में, डीएससी एक कॉम में लाभ के एक नंबर प्रदान करता हैलागत और समय की बचत सहित तौर पर वाणिज्यिक सेटिंग। सबसे पहले, एक अंतर स्कैनिंग कैलोरीमीटर के समोष्ण डिजाइन सीडी और प्रतिदीप्ति spectroscopies 6 के लिए उपकरण के साथ माप की तुलना में बेहतर तापमान परिशुद्धता के साथ थर्मल स्थिरता की माप के लिए अनुमति देता है। दूसरे, सीडी के विपरीत, डीएससी डेटा की सटीकता नहीं प्रोटीन 39, 40 के helicity पर निर्भर है; हालांकि, सीडी माध्यमिक संरचना है, जो डीएससी 41 के लिए मानार्थ होगा के खुलासा के बारे में अतिरिक्त जानकारी प्रदान करता है। इसके अतिरिक्त, डीएससी प्रणाली के दबाव नमूना उबलते के बिना एक व्यापक तापमान रेंज के साथ परीक्षण के लिए अनुमति देता है; इस प्रकार, प्रोटीन की एक विस्तृत श्रृंखला डीएससी द्वारा परीक्षण किया जा सकता है। डीएससी एक अपेक्षाकृत तेजी से और सीधा बायोलॉजिक्स के थर्मल स्थिरता का निर्धारण करने के लिए दृष्टिकोण है, यह सीमाओं के बिना नहीं है। सबसे पहले, आधारलाइन घटाव कदम कच्चे डेटा विश्लेषण में मानव विसंगति के कुछ फार्म का परिचय; इस प्रकार, परिणाम में बदलाव के विभिन्न उपयोगकर्ताओं के बीच मनाया जा सकता है। दूसरा, अंतर स्कैनिंग calorimeters न्यूनतम एकाग्रता की सीमा जो थोक विनिर्माण पैमाने पर प्राप्त करने के लिए मुश्किल हो सकता है। तीसरा, अपरिवर्तनीय थर्मल विकृतीकरण के ΔH निरपेक्ष नहीं है; जो अर्थ है कि ली गई ΔG (प्रोटीन स्थिरता का सूचक) समान स्थितियों में गुमराह किया जा सकता है। इसके अलावा, विधि शुद्ध नमूने के लिए सबसे अच्छा काम करता है। अशुद्धियों की उपस्थिति या तो टी मीटर में बदलाव का कारण हो सकता है अगर वहाँ जांच के तहत प्रोटीन, या नए थर्मल संक्रमण की उपस्थिति के साथ एक बातचीत है अगर कोई बातचीत है। किसी भी मामले में thermograms पर इन अतिरिक्त सुविधाओं को गलत तरीके से नमूने के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है, इस प्रकार परिणामों की व्याख्या को प्रभावित। इन सीमाओं के बावजूद, डीएससी एक विश्वसनीय तरीका है कि वें के बारे में विस्तृत जानकारी प्रदान कर सकते thermodynamic रहता हैई प्रोटीन प्रक्रिया खुलासा अगर ठीक से 42 लागू किया है। अंत में, डीएससी टीका उत्पादों और उनके मध्यवर्ती के लिए एक गठनात्मक readout उपकरण के रूप में काफी लाभ प्रदान करता है। दो मापदंडों, टी एम और ΔH, एक ही उत्पाद की बहुत सारी की एक सरणी के लिए एकत्र एक अनुभवजन्य आधारभूत है कि इस प्रक्रिया में परिवर्तन, निर्माण, और तृतीयक संरचना पर भंडारण की स्थिति और प्रोटीन की स्थिरता के प्रभाव की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और हो सकता है वायरल एंटीजन 21, 43।

अंतर स्कैनिंग उष्मामिति (डीएससी) एक प्रयोगात्मक विधि है कि सीधे नियंत्रित तापमान परिवर्तन 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 के दौरान एक संदर्भ के लिए एक नमूना रिश्तेदार में हो रही गर्मी ऊर्जा तेज में अंतर की गणना करता है , 10, 11, 12। एक अंतर स्कैनिंग कैलोरीमीटर में किए गए, विधि एक नमूना सेल और एक संदर्भ सेल एक साथ, जबकि हूबहू समय 2, 13 से अधिक दोनों कोशिकाओं के तापमान में वृद्धि में गर्मी ऊर्जा को शुरू करना शामिल है,14। नमूना और संदर्भ की संरचना में अंतर के कारण, ऊर्जा के विभिन्न राशि कोशिकाओं 2, 12, 13 के तापमान को बढ़ाने के लिए आवश्यक हो जाएगा। इस प्रकार, कोशिकाओं के तापमान के बीच अंतर के लिए क्षतिपूर्ति करने के लिए आवश्यक ऊर्जा की अतिरिक्त राशि मापा जाता है और सीधे नमूना 1, 3 की विशिष्ट thermodynamic के गुणों के लिए सहसंबद्ध। 1960 के दशक में, एम जे ओ &#39;नील और Perkin एल्मर का ई वाटसन ठोस सामग्री 2, 3, 4 की गर्मी प्रवाह को मापने के लिए पहली अंतर स्कैनिंग कैलोरीमीटर विकसित की है। समानांतर में, पीएल Privalov और भौतिकी संस्थान के डॉ Monaseldze ईएल जॉर्जिया के गणराज्य (पूर्व सोवियत संघ) एक अद्वितीय अंतर adiabatic कैलोरीमीटर कि के लिए इस्तेमाल किया जा सकता बनायाआर जैव रासायनिक अनुसंधान 5, 6। इसके बाद, भौतिकी संस्थान, जॉर्जिया के गणराज्य में Andronikashvili की टीम, ऐसे रेशेदार और गोलाकार प्रोटीन, डीएनए, आरएनए और डीएससी 7, 8, 9 का उपयोग कर के रूप में biomolecules की गर्मी क्षमता की सूचना दी। Sturtevant 10, 11, 12, 13 Brandts, और Privalov 14, 15, 16 के नेतृत्व में कई टीमों प्रोटीन खुलासा के thermodynamic विवरण की जांच करने के सिद्धांत और डीएससी के व्यावहारिक अनुप्रयोगों के विकास पर ध्यान केंद्रित किया। ऐसे फगेस, क्लोरोप्लास्ट, फॉस्फोलिपिड तरल क्रिस्टल, और मांस प्रोटीन के रूप में बड़े supramolecular संरचनाओं का अध्ययन करने में डीएससी के मूल्य भी 17 सूचित किया गया है </<html> sup&gt;, 18, 19, 20। डीएससी अब, biomolecules के थर्मल स्थिरता के मूल्यांकन के लिए दवा अनुसंधान और विकास में आम हो गया है, विशेष रूप से प्रोटीन 1, 21, 22। यह ज्यादातर संवेदनशीलता और प्रयोग 23, 24 से बाहर ले जाने के लिए इस्तेमाल किया इंस्ट्रूमेंटेशन के स्वचालन के मामले में प्रगति के कारण है। इधर, डीएससी प्रयोग, अर्थात्, तापमान के एक समारोह के रूप में दाढ़ गर्मी क्षमता के अंतिम परिणाम, निम्नलिखित thermodynamic के मापदंडों का अनुमान किया जाता है (ΔS गर्मी क्षमता (ΔCp), तापीय धारिता (ΔH), एन्ट्रापी में परिवर्तन () और गिब्स मुक्त ऊर्जा (ΔG)) नीचे समीकरण का उपयोग: eq1.jpg &quot;/&gt; (1) <img alt="2 समीकरण" src="/files/ftp_upload/55262/55262eq2.jpg" /> (2) <img alt="3 समीकरण" src="/files/ftp_upload/55262/55262eq3.jpg" /> (3) <img alt="4 समीकरण" src="/files/ftp_upload/55262/55262eq4.jpg" /> (4) <img alt="5 समीकरण" src="/files/ftp_upload/55262/55262eq5.jpg" /> (5) कहाँ सी.पी. गर्मी क्षमता मापा जाता है; क्यू परीक्षण सामग्री में गर्मी प्रवाह है; 0 टी और टी क्रमश: 22, 25 संक्रमण के प्रारंभिक और अंतिम तापमान हैं। यह भी ध्यान देने योग्य बात है कि समीकरणों से ऊपर एकल डोमेन प्रोटीन है कि दो राज्य के संक्रमण और प्रतिवर्ती थर्मल खुलासा 22 गुजरना कर सकते हैं करने के लिए आवेदन के लायक है। और अधिक जटिल प्रोटीन (जैसे, गैर-दो राज्य प्रोटीन, और oligomers) का विश्लेषण जएवेन्यू Friere एट अल द्वारा सूचना दी गई। 26; जॉनसन एट अल। 27; और Kasimova एट अल। 28। एक प्रोटीन दो राज्य के संक्रमण से होकर गुजरती है या थर्मल विकृतीकरण के दौरान मध्यवर्ती रूपों यह निर्धारित करने के लिए, प्रयोगात्मक निकाली गई तापीय धारिता (ΔH, के रूप में भी उष्मापन तापीय धारिता ΔH काल कहा जाता है) तापीय धारिता van&#39;t हॉफ समीकरण भी कम दिया (का उपयोग ली गई की तुलना में है van&#39;t हॉफ तापीय धारिता के रूप में भेजा, ΔH VH): <img alt="समीकरण 6" src="/files/ftp_upload/55262/55262eq6.jpg" /> (6) जहां टी एम संक्रमण के मध्य तापमान, आर आदर्श गैस निरंतर (1.987 कैलोरी मोल -1 कश्मीर -1) है और वाई सामने आया राज्य 16, 29 में प्रोटीन की आबादी का अंश है। अगरΔH VH ΔH काल के बराबर है; या ΔH VH / ΔH काल 1 के बराबर है, तो प्रोटीन एक &quot;सभी या कोई नहीं&quot; संक्रमण (यानी दो-राज्य संक्रमण) 16, 25, 29 से होकर गुजरती है। हालांकि, अगर ΔH VH ΔH काल से भी कम है; या ΔH VH / ΔH काल कम से कम 1 प्रोटीन एक गैर-दो राज्य संक्रमण 16, 25, 29 से गुज़रता है। ΔH VH / ΔH काल के अनुपात से भी प्रोटीन संरचना है कि एक thermodynamic सहकारी इकाई या डोमेन के रूप में 26 के अनुपात में पिघला देता है से मेल खाती है। ΔG और ΔH के रूप में इस तरह के ऊपर उल्लेख किया thermodynamic के मापदंडों के प्रोटीन के थर्मल स्थिरता, बायोलॉजिक्स सहित के बारे में उपयोगी जानकारी प्रदान<html> 30। हालांकि, जोर दिया है, इस प्रकाशन में टी मी और ΔH पर रखा जाएगा के रूप में वे इस प्रोटोकॉल के लिए सूचना मान रहे हैं। टी एम संक्रमण, जहां मुड़ा और प्रोटीन के सामने आया राज्यों संतुलन पर हैं (यानी, ΔG = 0), 25, 31 के मध्य बिंदु तापमान है। उच्च एक प्रोटीन की टी एम, उच्च अपने थर्मल स्थिरता 31। ΔH बनाम तापमान ग्राफ (भी thermogram के रूप में जाना जाता है) गर्मी क्षमता के शिखर (एस) के तहत क्षेत्र से मेल खाती है डीएससी प्रयोग 16, 25 के अंत में उत्पन्न। यह ऊर्जा प्रोटीन denature करने के लिए और एक प्रोटीन तैयार करने में सक्रिय अंश (एफ) एक अनुमान लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता जरूरी है (यानी, एक नमूने में सक्रिय रचना के साथ प्रोटीन के अनुपात में) निम्न समीकरण का उपयोग: jove_content &quot;&gt; <img alt="समीकरण 7" src="/files/ftp_upload/55262/55262eq7.jpg" /> (7) कहाँ ΔH प्रोटीन नमूने की प्रयोगात्मक निकाली गई तापीय धारिता है और क्यू तापीय धारिता एक अच्छी तरह से विशेषता संदर्भ या मानकीकृत प्रोटीन 22 के लिए चुना गया है। एफ एक के आकलन तनाव की स्थिति के तहत उत्पादों की वास्तविक समय की निगरानी स्थिरता के साथ ही स्थिरता अध्ययन करने के रूप में आईसीएच दिशा निर्देशों 32 द्वारा अपेक्षित के लिए महत्वपूर्ण है। ΔH की तुलना भी एक प्रोटीन 31 के तृतीयक संरचना रचना की सघनता के बारे में जानकारी प्रदान करता है। इस प्रोटोकॉल एक औद्योगिक सेटिंग में प्रोटीन की थर्मल स्थिरता का आकलन करने के लिए एक प्रक्रिया का विवरण और बड़े पैमाने पर टीके के निर्माण के लिए इस्तेमाल किया गया है। यह एक स्वचालित अंतर स्कैनिंग कैलोरीमीटर कि प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम एफ उत्पन्न का उपयोग कर विकसित किया गया थाया 300 माइक्रोग्राम / एमएल के रूप में के रूप में कम प्रोटीन सांद्रता।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1375">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:331px;">Differential Scanning Calorimeter</td>
			<td style="width:188px;">Malvern Instruments Ltd</td>
			<td style="width:119px;">28428948 (Via GE Healthcare)</td>
			<td style="width:739px;">Has an autosampler for automated dispensing of samples into the cell to reduce human effort and errors.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Contrad 100</td>
			<td style="width:188px;">Decon Laboratories Inc</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1504</td>
			<td>Dilute with water to 20% before use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">500&#181;L Polypropylene round bottom 96 well plate</td>
			<td>Canadian Life Science</td>
			<td>ML072100</td>
			<td>Equivalent plates from other suppliers (e.g., VW) can also be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">MicroCal ThermoVac&#160;</td>
			<td style="width:188px;">Malvern Instruments Ltd</td>
			<td style="width:119px;">N/Ap</td>
			<td>provided with the Cap VP DSC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Biosafety cabinet&#160;</td>
			<td style="width:188px;">Labconco</td>
			<td style="width:119px;">Logic+ - A2</td>
			<td>biocontainment laminar flow cabinet for sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Slide-A-Lyzer dialysis cassette</td>
			<td style="width:188px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">66810 or 66380</td>
			<td>to equilibrate the sample and buffer</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

differential scanning calorimetry &#8212; a method for assessing the thermal stability and conformation of protein antigen

अंतर स्कैनिंग उष्मामिति (डीएससी) एक विश्लेषणात्मक तकनीक है कि तापमान के एक समारोह के रूप में नमूने की दाढ़ गर्मी क्षमता को मापता है। प्रोटीन के नमूने के मामले में, डीएससी प्रोफाइल थर्मल स्थिरता के बारे में जानकारी प्रदान करते हैं, और कुछ हद तक एक संरचनात्मक &quot;&quot; फिंगरप्रिंट कि संरचनात्मक रचना का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है के रूप में कार्य करता है। (; टी एम पिघलने के तापमान) और ऊर्जा बातचीत तृतीयक संरचना स्थिर बाधित करने की आवश्यकता है, प्रोटीन की (तापीय धारिता ΔH) यह एक अंतर स्कैनिंग कैलोरीमीटर कि थर्मल संक्रमण तापमान उपायों का उपयोग किया जाता है। तुलना योगों के साथ ही उत्पादन बहुत सारे के बीच बना रहे हैं, और व्युत्पन्न मूल्यों में मतभेद थर्मल स्थिरता और संरचनात्मक रचना में मतभेद का संकेत मिलता है। स्थिरता के अध्ययन के लिए एक औद्योगिक सेटिंग में डीएससी के उपयोग को दर्शाता हुआ तथा प्रमुख विनिर्माण कदम निगरानी डेटा इस समर्थक की प्रभावशीलता के सबूत के रूप में प्रदान की जाती हैंtocol। प्रोटीन रचना के थर्मल स्थिरता का आकलन करने के लिए अन्य तरीकों की तुलना में, डीएससी, लागत प्रभावी है कुछ नमूना तैयार कदम की आवश्यकता है, और यह भी प्रोटीन खुलासा प्रक्रिया की पूरी thermodynamic प्रोफ़ाइल प्रदान करता है।

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Differential Scanning Calorimetry ÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã‚Â A Method for Assessing the Thermal Stability and Conformation of Protein Antigen

अंतर स्कैनिंग उष्मामिति थर्मल संक्रमण तापमान (एस) और कुल गर्मी ऊर्जा एक प्रोटीन denature के लिए आवश्यक उपाय। प्राप्त परिणामों के टीके योगों में प्रोटीन एंटीजन के थर्मल स्थिरता का आकलन करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं।

अंतर स्कैनिंग उष्मामिति - थर्मल स्थिरता और प्रोटीन एंटीजन की रचना का आकलन के लिए एक विधि

Differential scanning calorimetry (DSC) is an analytical technique that measures the molar heat capacity of samples as a function of temperature. In the ...

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Differential Scanning Calorimetry &#8212; A Method for Assessing the Thermal Stability and Conformation of Protein Antigen

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