Авторы благодарят доктора Джулию Mannheim, Уолтер Эрличманн, Рамона Штумма, FUNDA Cay, Дэниел Бакала, Марен ГАРАНТ, а также Натали Алтмайер за поддержку в ходе анализа экспериментов и данных. Эта работа была поддержана Вернер Сименс-Фонд, DFG через SFB685 (проект B6) и удачи (2309-0-0).

Меры предосторожности: При работе с радиоактивностью, хранить 64 Cu за 2 дюйма толщиной свинцовых кирпичей и использовать соответствующую защиту для всех судов , осуществляющих деятельность. Используйте соответствующие инструменты косвенно обращаться неэкранированных источнико...

<ol>
	<li>Cerri, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracarotid+Infusion+of+Mesenchymal+Stem+Cells+in+an+Animal+Model+of+Parkinson's+Disease,+Focusing+on+Cell+Distribution+and+Neuroprotective+and+Behavioral+Effects.">Intracarotid Infusion of Mesenchymal Stem Cells in an Animal Model of Parkinson's Disease, Focusing on Cell Distribution and Neuroprotective and Behavioral Effects.</a> Stem Cells Trans Med. 4 (9), 1073-1085 (2015).</li><li>Hasenbach, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+the+glioma+tropism+of+bone+marrow-derived+progenitor+cells+by+2-photon+laser+scanning+microscopy+and+positron+emission+tomography.">Monitoring the glioma tropism of bone marrow-derived progenitor cells by 2-photon laser scanning microscopy and positron emission tomography.</a> Neuro Oncol. 14 (4), 471-481 (2012).</li><li>Sood, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+of+18F-FDG-Labeled+Autologous+Bone+Marrow+&#8211;+Derived+Stem+Cells+in+Patients+With+Type+2+Diabetes+Mellitus.">Biodistribution of 18F-FDG-Labeled Autologous Bone Marrow &#8211; Derived Stem Cells in Patients With Type 2 Diabetes Mellitus.</a> Clin Nucl Med. 40 (9), 697-700 (2015).</li><li>Perez-Diez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD4+cells+can+be+more+efficient+at+tumor+rejection+than+CD8+cells.">CD4 cells can be more efficient at tumor rejection than CD8 cells.</a> Blood. 109 (12), 5346-5354 (2007).</li><li>Muranski, P., Restifo, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adoptive+immunotherapy+of+cancer+using+CD4++T+cells.">Adoptive immunotherapy of cancer using CD4+ T cells.</a> Curr. Opin. Immunol. 21 (2), 200-208 (2009).</li><li>Braumuller, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-helper-1-cell+cytokines+drive+cancer+into+senescence.">T-helper-1-cell cytokines drive cancer into senescence.</a> Nature. 494 (7437), 361-365 (2013).</li><li>Kochenderfer, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eradication+of+B-lineage+cells+and+regression+of+lymphoma+in+a+patient+treated+with+autologous+T+cells+genetically+engineered+to+recognize+CD19.">Eradication of B-lineage cells and regression of lymphoma in a patient treated with autologous T cells genetically engineered to recognize CD19.</a> Blood. 116 (20), 4099-4102 (2010).</li><li>Cherry, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundamentals+of+Positron+Emission+Tomography+and+Applications+in+Preclinical+Drug+Development.">Fundamentals of Positron Emission Tomography and Applications in Preclinical Drug Development.</a> J. Clin. Pharmacol. 41 (5), 482-491 (2001).</li><li>Tavar&#233;, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Effective+Immuno-PET+Imaging+Method+to+Monitor+CD8-Dependent+Responses+to+Immunotherapy.">An Effective Immuno-PET Imaging Method to Monitor CD8-Dependent Responses to Immunotherapy.</a> Cancer Res. 76 (1), 73-82 (2016).</li><li>Tavar&#233;, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+antibody+fragments+for+immuno-PET+imaging+of+endogenous+CD8++T+cells+in+vivo.">Engineered antibody fragments for immuno-PET imaging of endogenous CD8+ T cells in vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 111 (3), 1108-1113 (2014).</li><li>Dobrenkov, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+the+Efficacy+of+Adoptively+Transferred+Prostate+Cancer-Targeted+Human+T+Lymphocytes+with+PET+and+Bioluminescence+Imaging.">Monitoring the Efficacy of Adoptively Transferred Prostate Cancer-Targeted Human T Lymphocytes with PET and Bioluminescence Imaging.</a> J Nucl Med. 49 (7), 1162-1170 (2008).</li><li>Rini, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PET+with+FDG-labeled+Leukocytes+versus+Scintigraphy+with+111In-Oxine-labeled+Leukocytes+for+Detection+of+Infection.">PET with FDG-labeled Leukocytes versus Scintigraphy with 111In-Oxine-labeled Leukocytes for Detection of Infection.</a> Radiology. 238 (3), 978-987 (2006).</li><li>Ritchie, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+tracking+of+macrophage+activated+killer+cells+to+sites+of+metastatic+ovarian+carcinoma.">In vivo tracking of macrophage activated killer cells to sites of metastatic ovarian carcinoma.</a> Cancer Immunol. Immunother. 56 (2), 155-163 (2006).</li><li>Adonai, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+cell+labeling+with+64Cu-pyruvaldehyde-bis(N4-methylthiosemicarbazone)+for+imaging+cell+trafficking+in+mice+with+positron-emission+tomography.">Ex vivo cell labeling with 64Cu-pyruvaldehyde-bis(N4-methylthiosemicarbazone) for imaging cell trafficking in mice with positron-emission tomography.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (5), 3030-3035 (2002).</li><li>Huang, J., Lee, C. C. I., Sutcliffe, J. L., Cherry, S. R., Tarantal, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiolabeling+Rhesus+Monkey+CD34++Hematopoietic+and+Mesenchymal+Stem+Cells+with+64Cu-Pyruvaldehyde-Bis(N4-Methylthiosemicarbazone)+for+MicroPET+Imaging.">Radiolabeling Rhesus Monkey CD34+ Hematopoietic and Mesenchymal Stem Cells with 64Cu-Pyruvaldehyde-Bis(N4-Methylthiosemicarbazone) for MicroPET Imaging.</a> Mol. Imaging. 7 (1), (2008).</li><li>Griessinger, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Tracking+of+Th1+Cells+by+PET+Reveals+Quantitative+and+Temporal+Distribution+and+Specific+Homing+in+Lymphatic+Tissue.">In Vivo Tracking of Th1 Cells by PET Reveals Quantitative and Temporal Distribution and Specific Homing in Lymphatic Tissue.</a> J Nucl Med. 55 (2), 301-307 (2014).</li><li>Griessinger, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=64Cu+antibody-targeting+of+the+T-cell+receptor+and+subsequent+internalization+enables+in+vivo+tracking+of+lymphocytes+by+PET.">64Cu antibody-targeting of the T-cell receptor and subsequent internalization enables in vivo tracking of lymphocytes by PET.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 112 (4), 1161-1166 (2015).</li><li>McCarthy, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+production+of+high+specific+activity+64Cu+using+a+biomedical+cyclotron.">Efficient production of high specific activity 64Cu using a biomedical cyclotron.</a> Nucl. Med. Biol. 24 (1), 35-43 (1997).</li><li>Kalkhof, S., Sinz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chances+and+pitfalls+of+chemical+cross-linking+with+amine-reactive+N-hydroxysuccinimide+esters.">Chances and pitfalls of chemical cross-linking with amine-reactive N-hydroxysuccinimide esters.</a> Anal. Bioanal. Chem. 392 (1), 305-312 (2008).</li><li>Bedoya, S. K., Wilson, T. D., Collins, E. L., Lau, K., Larkin Iii, ., J, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Th17+Differentiation+of+Naive+CD4+T+Lymphocytes.">Isolation and Th17 Differentiation of Naive CD4 T Lymphocytes.</a> J Vis Exp. (79), e50765 (2013).</li><li>Flaherty, S., Reynolds, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Naive+CD4++T+Cell+Isolation+and+In+vitro+Differentiation+into+T+Cell+Subsets.">Mouse Naive CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets.</a> J Vis Exp. (98), e52739 (2015).</li><li>Judenhofer, M., Wiehr, S., Kukuk, D., Fischer, K., Pichler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+363.">Chapter 363.</a> Small Animal Imaging. Basics and Practical Guide. , 363-370 (2011).</li><li>Phelps, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> PET. Molecular Imaging and Its Biological Applications. , 93-101 (2004).</li><li>Wu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+and+Antimatter:+The+Resurgence+of+Immuno-PET.">Antibodies and Antimatter: The Resurgence of Immuno-PET.</a> JNM. 50 (1), 2-5 (2009).</li><li>Lewis, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+evaluation+of+pretargeted+64Cu+for+tumor+imaging+and+therapy.">In vivo evaluation of pretargeted 64Cu for tumor imaging and therapy.</a> J Nucl Med. 44 (8), 1284-1292 (2003).</li><li>Boswell, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+in+vivo+stability+of+copper-64-labeled+cross-bridged+and+conventional+tetraazamacrocyclic+complexes.">Comparative in vivo stability of copper-64-labeled cross-bridged and conventional tetraazamacrocyclic complexes.</a> J Med Chem. 47 (6), 1465-1474 (2004).</li><li>Ghosh, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+DOTA+and+NODAGA+as+chelators+for+(64)Cu-labeled+immunoconjugates.">Comparison of DOTA and NODAGA as chelators for (64)Cu-labeled immunoconjugates.</a> Nucl Med Biol. 42 (2), 177-183 (2015).</li><li>Johnson, T. E., Birky, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Health Physics and Radiological Health. , (2011).</li><li>Helmchen, F., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+tissue+two-photon+microscopy.">Deep tissue two-photon microscopy.</a> Nat Meth. 2 (12), 932-940 (2005).</li></ol>

Этот протокол представляет собой надежный и простой способ стабильно радиометки клетки для отслеживания ин виво с помощью ПЭТ. Используя этот метод, COVA-TH1 клетки, выделенные и расширена в пробирке от мышей - доноров, могут быть помечены радиоактивным изотопом 64 Cu-DOTA-KJ1-26-м...

Неинвазивная отслеживания клеток является универсальным инструментом для мониторинга функции клеток, миграции и самонаведения в естественных условиях. Недавние исследования отслеживания клетки были сосредоточены на мезенхимальных 1, 2 или костного мозга стволовых клеток , полученных 3 в контексте регенеративной медицины, аутологичных периферических белых кровяных клеток в воспалении или Т - лимфоцитов в приемными терапии клеток против рака 3, 4. Выяснение мест действия и основных биологических принципов клеточной терапии имеет огромное значение. CD8 + цитотоксических Т - лимфоцитов, методами генной инженерии антиген химерный рецептор (CAR) Т - клетки или опухолевые-лимфоциты (Tīls) широко рассматривается как золотой стандарт. Тем не менее, ассоциированные с опухолью антиген-специфические Th1 клетки оказались эффективной альтернативой вариант лечения 4, &lt;/ SUP&gt; 5, 6, 7. В качестве ключевых игроков в воспалении, орган-специфический аутоиммунных заболеваний (например, ревматоидный артрит или бронхиальная астма), и клеток , представляющих особого интереса в иммунотерапии рака, важно , чтобы охарактеризовать временные закономерности распределения и самонаводящиеся Th1 - клетки. Неинвазивные в естественных изображения с помощью ПЭТ представляет собой количественный, высокочувствительный метод 8 для изучения моделей миграции клеток, в естественных условиях ГСНЫ, и сайты действия Т - клеток и ответы во время воспаления, аллергии, инфекций или отторжения опухоли 9, 10, 11. Клинически, 111 В-Oxine используется для лейкоцитарной сцинтиграфии для дискриминации воспаления и инфекции 12, в то время как 2-дезокси-2- (18F) , фтор-D-глюкозы (18 F-ФДГ) обычно используется для отслеживания исследований клеток с помощью ПЭТ 3, 13. Одним из главных недостатков этого ПЭТ трассирующими, однако, короткий период полураспада радионуклида 18 F в 109,7 мин и низкой внутриклеточной стабильности , которая препятствует визуализации в более поздние моменты времени после усыновителя перенос клеток. Для более длительного срока в естественном условиях исследования отслеживания клеток путем ПЭТ, хотя и нестабильные в клетках, 64 Си-PTSM часто используются для обозначения неспецифический клетки 14, 15 с сведены к минимуму вредных воздействий на жизнеспособности Т - клеток и функции 16. Этот протокол описывает способ для дальнейшего уменьшения невыгодных воздействие на жизнеспособность и функции клеток с помощью Т-клеточного рецептора (TCR) -специфический радиоактивно меченый Mab. Во- первых, производство радиоизотопных 64 Cu, конъюгации с монАТ KJ1-26 с гое хелаторы DOTA, и последующее 64 Cu-радиоактивное показаны. На втором этапе, выделение и расширение COVA-TH1 клеток мышей - доноров DO11.10 и радиоактивной с 64 Cu-нагруженной DOTA-конъюгированного монАТ KJ1-26 (64 Cu-DOTA-KJ1-26) описаны подробно. Оценка поглощения ценностей и оттоком радиоактивности с дозой калибратора и гамма-подсчета, соответственно, а также оценка эффектов 64 Cu-радиомечения на жизнеспособность клеток с помощью трипанового синего и функциональности с IFN-gamma ELISA представлены , Для неинвазивной в естественных условиях отслеживания клетки, то извлечение из мышиной модели COVA-индуцированной острой DTHR дыхательных путей и изображений приобретения ПЭТ / КТ после приемных передачи клеток описаны. Кроме того, этот подход маркировки может быть передан в различные модели заболеваний, мышиные Т-клетки с различным ТКРОМ или общими клетками, представляющего интереса с мембраносвязанными рецепторами или экспрессией MarKERS , лежащий в основе непрерывного мембраны челночного 17.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="966">
	<tbody>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:292px;">HCl, Suprapur</td>
			<td style="width:227px;">Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td style="width:259px;">1.00318</td>
			<td style="width:189px;">64Cu production</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:292px;">Methanol, Suprapur</td>
			<td style="width:227px;">Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>1.06007</td>
			<td>64Cu production</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:292px;">Isopropanol, Suprapur</td>
			<td style="width:227px;">Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>1.0104</td>
			<td>64Cu production</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:292px;">Pt/Ir (90/10) plate</td>
			<td style="width:227px;">&#214;gussa</td>
			<td style="width:259px;">Custom made</td>
			<td>64Cu production</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:292px;">PEEK chamber</td>
			<td style="width:227px;">&#214;gussa</td>
			<td style="width:259px;">Custom made</td>
			<td>64Cu production</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:292px;">64Ni</td>
			<td style="width:227px;">Chemotrade</td>
			<td style="width:259px;"></td>
			<td>64Cu production</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:292px;">Polygram SIL G/UV 254 plate</td>
			<td style="width:227px;">Macherey-Nagel</td>
			<td style="width:259px;">805021</td>
			<td>64Cu production</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:292px;">Ion exchange column</td>
			<td style="width:227px;">BioRad</td>
			<td style="width:259px;">AG1-X8</td>
			<td>64Cu production</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Solid state target system for PETtrace</td>
			<td style="width:227px;">WKL</td>
			<td style="width:259px;">costum made</td>
			<td>64Cu production</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:292px;">64Cu work-up module</td>
			<td style="width:227px;">WKL</td>
			<td style="width:259px;">costum made</td>
			<td>64Cu production</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Dose calibrator</td>
			<td style="width:227px;">Capintec</td>
			<td style="width:259px;">CRC-25R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">PETtrace cyclotron</td>
			<td style="width:227px;">General Electric Medical Systems</td>
			<td style="width:259px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">DOTA-NHS</td>
			<td style="width:227px;">Macrocyclics</td>
			<td style="width:259px;">B-280</td>
			<td>DOTA-conjugation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Anti-cOVA-TCR antibody (KJ1-26)</td>
			<td style="width:227px;"></td>
			<td>Isolated from hybridoma cell culture</td>
			<td>DOTA-conjugation</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:292px;">Na2HPO4</td>
			<td style="width:227px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:259px;">71633</td>
			<td>DOTA-conjugation</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:292px;">H+ Chelex 100</td>
			<td style="width:227px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:259px;">C7901</td>
			<td>DOTA-conjugation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Amicon Ultra-15 filter unit</td>
			<td style="width:227px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:259px;">UFC910008</td>
			<td>DOTA-conjugation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Rotipuran ultrapure water</td>
			<td style="width:227px;">Carl Roth</td>
			<td style="width:259px;">HN68.3</td>
			<td>DOTA-conjugation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Ammonium acetate</td>
			<td style="width:227px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>32301</td>
			<td>DOTA-conjugation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">PBS</td>
			<td style="width:227px;">University Tuebingen</td>
			<td style="width:259px;"></td>
			<td>DOTA-conjugation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Micro Bio-spin P-6 column</td>
			<td style="width:227px;">Bio-Rad Laboratories</td>
			<td style="width:259px;">7326221</td>
			<td>DOTA-conjugation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Sodium citrate</td>
			<td style="width:227px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:259px;">71497</td>
			<td>DOTA-conjugation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Cyclone Plus PhosphorImager&#160;</td>
			<td style="width:227px;">Perkin-Elmer</td>
			<td>L2250116</td>
			<td>DOTA-conjugation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">DMEM</td>
			<td style="width:227px;">Merck Millipore</td>
			<td>102568</td>
			<td>ingredient for T cell medium&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">FCS</td>
			<td style="width:227px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:259px;">S0115/1004B</td>
			<td>ingredient for T cell medium&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Sodium pyruvate</td>
			<td style="width:227px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:259px;">L0473</td>
			<td>ingredient for T cell medium&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">MEM-amino acids</td>
			<td style="width:227px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:259px;">K0293</td>
			<td>ingredient for T cell medium&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">HEPES&#160;</td>
			<td style="width:227px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:259px;">L 1613</td>
			<td>ingredient for T cell medium&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">&#160;Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:227px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:259px;">A2212</td>
			<td>ingredient for T cell medium&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">0.05 mM 2-&#946;-mercaptoethanol</td>
			<td style="width:227px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:259px;">M3148</td>
			<td>ingredient for T cell medium&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">DO11.10 mice</td>
			<td style="width:227px;"></td>
			<td>in-house breeding</td>
			<td>TH1 cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">DPBS</td>
			<td style="width:227px;">Gibco</td>
			<td style="width:259px;">14190144</td>
			<td>TH1 cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Cell strainer 40 &#181;m&#160;</td>
			<td style="width:227px;">Corning</td>
			<td style="width:259px;">352340</td>
			<td>TH1 cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">ACK Lysing Buffer</td>
			<td style="width:227px;">Lonza</td>
			<td style="width:259px;">10-548E</td>
			<td>TH1 cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">CD4 MicroBeads, mouse</td>
			<td style="width:227px;">Miltenyi Biotech</td>
			<td style="width:259px;">130-097-145</td>
			<td>TH1 cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">QuadroMACS separator</td>
			<td style="width:227px;">Miltenyi Biotech</td>
			<td style="width:259px;">130-090-976</td>
			<td>TH1 cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">LS column</td>
			<td style="width:227px;">Miltenyi Biotech</td>
			<td style="width:259px;">130-042-401</td>
			<td>TH1 cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">anti-CD4 antibody (Gk1.5)</td>
			<td style="width:227px;"></td>
			<td>Isolated from hybridoma cell culture</td>
			<td>TH1 cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">anti-CD8 antibody (5367.2)</td>
			<td style="width:227px;"></td>
			<td>Isolated from hybridoma cell culture</td>
			<td>TH1 cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Anti-rat antibody (MAR18.5)</td>
			<td style="width:227px;"></td>
			<td>Isolated from hybridoma cell culture</td>
			<td>TH1 cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Rabbit complement MA</td>
			<td style="width:227px;">tebu-Bio</td>
			<td style="width:259px;">CL3221</td>
			<td>TH1 cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Anti-IL-4 antibody (11B11)</td>
			<td style="width:227px;"></td>
			<td>Isolated from hybridoma cell culture</td>
			<td>TH1 cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">cOVA 323-339-peptide&#160;</td>
			<td style="width:227px;">EMC-micro-collections</td>
			<td>Custom order</td>
			<td>TH1 cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">CPG1668-oligonucleotides</td>
			<td style="width:227px;">Eurofins MWG Operon</td>
			<td>Custom order</td>
			<td>TH1 cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">IL-2</td>
			<td style="width:227px;">Novartis</td>
			<td>65483-116-07</td>
			<td>TH1 cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">96-well plates</td>
			<td style="width:227px;">Greiner&#160;</td>
			<td>655180</td>
			<td>TH1 cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">24-well plates</td>
			<td style="width:227px;">Greiner&#160;</td>
			<td>662160</td>
			<td>TH1 cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">cell culture flask</td>
			<td style="width:227px;">Greiner&#160;</td>
			<td>660175</td>
			<td>TH1 cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">48-well plates</td>
			<td style="width:227px;">Greiner&#160;</td>
			<td>677 180</td>
			<td>cell labeling</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Gammacell 1000</td>
			<td style="width:227px;">Best Theratronics</td>
			<td>via inquiry&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Gulmay RT225</td>
			<td style="width:227px;">Gulmay</td>
			<td>via inquiry&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Trypan blue</td>
			<td style="width:227px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:259px;">L6323</td>
			<td>in vitro evaluation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Mouse IFN-&#947; ELISA</td>
			<td style="width:227px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:259px;">558258</td>
			<td>in vitro evaluation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">PE Annexin V Apoptosis Detection Kit&#160;</td>
			<td style="width:227px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:259px;">559763</td>
			<td>in vitro evaluation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Tube 5 ml</td>
			<td style="width:227px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:259px;">55.476</td>
			<td>in vitro evaluation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Round-bottom tubes&#160;</td>
			<td style="width:227px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:259px;">352008</td>
			<td>in vitro evaluation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Wizard &#947;-counter</td>
			<td style="width:227px;">Perkin-Elmer</td>
			<td>2480-0010</td>
			<td>in vitro evaluation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">ELISA Reader MultiscanEX</td>
			<td style="width:227px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>51118177</td>
			<td>in vitro evaluation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Microscope</td>
			<td style="width:227px;">Leica</td>
			<td>via inquiry&#160;</td>
			<td>in vitro evaluation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">BD LSRII&#160;</td>
			<td style="width:227px;">BD Biosciences</td>
			<td>via inquiry&#160;</td>
			<td>in vitro evaluation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">BALB/c mice</td>
			<td style="width:227px;">Charles River</td>
			<td style="width:259px;">028</td>
			<td>in vivo cell trafficking</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Aluminum gel</td>
			<td style="width:227px;">Serva Electrophoresis</td>
			<td style="width:259px;">12261.01</td>
			<td>in vivo cell trafficking</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Xylazine</td>
			<td style="width:227px;">Bayer HealthCare</td>
			<td>Ordered via University hospital</td>
			<td>in vivo cell trafficking</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Ketamine</td>
			<td style="width:227px;">Ratiopharm</td>
			<td>Ordered via University hospital</td>
			<td>in vivo cell trafficking</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:227px;">CP-Pharma</td>
			<td>Ordered via University hospital</td>
			<td>in vivo cell trafficking</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">30G needle</td>
			<td style="width:227px;">BD Biosciences</td>
			<td>304000</td>
			<td>in vivo cell trafficking</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Syringe</td>
			<td style="width:227px;">BD Biosciences</td>
			<td>11612491</td>
			<td>in vivo cell trafficking</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Capillaries 10 &#181;l</td>
			<td style="width:227px;">VWR</td>
			<td>612-2439</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Inveon PET scanner</td>
			<td style="width:227px;">Siemens Healthineers</td>
			<td style="width:259px;">no longer available</td>
			<td>in vivo cell trafficking, alternative companies: Bruker, Mediso&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Inveon SPECT/CT scanner</td>
			<td style="width:227px;">Siemens Healthineers</td>
			<td style="width:259px;">no longer available</td>
			<td>in vivo cell trafficking</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:292px;">Inveon Research Workplace</td>
			<td style="width:227px;">Siemens Healthineers</td>
			<td style="width:259px;"></td>
			<td>image analysis, alternative software: Pmod</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine lymphocyte labeling by 64cu-antibody receptor targeting for in vivo cell trafficking by pet/ct

Этот протокол иллюстрирует получение 64 Cu и хелатор конъюгацию / радиоактивную моноклональное антитела (монАТ) с последующим мышиной культурой лимфоцитов клеток и 64 Cu-антитело рецептором ориентации клеток. В пробирке оценки мечена и неинвазивные в естественных условиях отслеживания клетки в животной модели с воздуховодной гиперчувствительности замедленного типа реакции (DTHR) с помощью ПЭТ / КТ описаны. Более подробно, сопряжение с мАтом с хелатором 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксусной кислотой (DOTA) показано. После производства радиоактивного 64 Cu, радиомечения в DOTA-конъюгированных мАт описано. Далее, расширение куриного овальбумина (Cova) -специфические CD4 + интерферона (ИФН) -γ-продуцирующих Т - хелперы (Кова-TH1) и последующее введение радиоактивной клеток COVA-ТН1 изображены. Различные методы в пробирке представлены для оценки эфффекты из 64 Cu-радиомечения о клетках, таких как определение жизнеспособности клеток с помощью трипанового синих, окрашивания для апоптоза с аннексином V для проточной цитометрии, и оценка функциональности с помощью IFN-gamma иммуноферментного теста (ELISA) , Кроме того, определение радиоактивного поглощения в клетки и стабильность маркировки описаны в деталях. Этот протокол далее описывает, как выполнять исследование отслеживания клеток в животной модели для дыхательных путей DTHR и, следовательно, индукция COVA-индуцированных острого DHTR в дыхательных путях BALB / с мышеем включена. Наконец, надежная ПЭТ / КТ рабочего процесс, включая приобретение изображений, реконструкцию и анализ представлен. 64 Cu-антитело , воздействующий подход рецептора с последующей интернализацией рецепторов обеспечивает высокую специфичность и стабильность, снижение клеточной токсичность, а также низкие цены эффлюксных по сравнению с обычными ПЭТ-индикаторами для маркировки клеток, например , 64 Cu-pyruvaldehyde бис (N-4-methylthiosemicarbazone) (64 Cu-PTSM). И, наконец, наш подход позволяет неинвазивным в естественных условиях отслеживания клетки с помощью ПЭТ / КТ с оптимальным отношением сигнала к фону в течение 48 часов. Этот экспериментальный подход может быть переведен в различные моделях животных и типов клеток с мембраносвязанными рецепторами, которые усваиваются.

На рисунке 1 приведены маркировки COVA-TH1 клеток с 64 Cu-DOTA-KJ1-26-монАТом и опытно - конструкторской для в пробирке и в естественных условиях исследования описанного в данном протоколе. <img alt="Рисунок 1" src="/files/ftp_upload/55270/55...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo  Cell Trafficking by PET/CT at JoVE.com

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo  Cell Trafficking by PET/CT

После получения 64 Сu-модифицированного моноклонального антитела связывания с рецептором Т - клеток трансгенного мышея, Т - клетками являются радиоактивно метили в естественных условиях, анализировали на жизнеспособность, функциональность, стабильность маркировки и апоптоз, и адаптивно переносили в мышей с дыхательными путями гиперчувствительности замедленного типа реакцию для неинвазивного изображений с помощью позитронно-эмиссионной томографии / компьютерной томографии (ПЭТ / КТ).

Мышиные лимфоцит Этикетировочное по<sup&gt; 64</sup&gt; Си-антитело к рецептору Ориентация на<em&gt; В Vivo</em&gt; Cell Торговля ПЭТ / КТ

This protocol illustrates the production of 64Cu and the chelator conjugation/radiolabeling of a monoclonal antibody (mAb) followed by murine lymphocyte ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo Cell Trafficking by PET/CT

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

После Cell-судьба<em&gt; E. палочки</em&gt; После заражения фагом лямбда

The system comprising bacteriophage (phage) lambda and the bacterium E. coli has long served as a paradigm for cell-fate determination1,2. Following the ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Индукционная мышиных воспаление кишечника с помощью приемных передачи эффекторных CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Высокая</sup&gt; Т-клеток в иммунодефицитных мышей

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Лимфоцит Изоляция из человеческой кожи для фенотипического анализа и<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Культура клеток

Human skin has an important barrier function and contains various immune cells that contribute to tissue homeostasis and protection from pathogens. As the ...

Femur Window Chamber Model for In Vivo Cell Tracking in the Murine Bone Marrow

Femur Window Chamber Model for In Vivo Cell Tracking in the Murine Bone Marrow

Бедро Window камера Модель<em&gt; В Vivo</em&gt; Отслеживание Cell в мышиных костного мозга

Bone marrow is a complex organ that contains various hematopoietic and non-hematopoietic cells. These cells are involved in many biological processes, ...

Detection of Trypanosoma brucei Variant Surface Glycoprotein Switching by Magnetic Activated Cell Sorting and Flow Cytometry

Detection of Trypanosoma brucei Variant Surface Glycoprotein Switching by Magnetic Activated Cell Sorting and Flow Cytometry

обнаружение<em&gt; Trypanosoma brucei</em&gt; Вариант поверхности гликопротеин Переключение с помощью магнитных Активированный сортировки клеток и проточной цитометрии

Trypanosoma brucei, a protozoan parasite that causes both Human and Animal African Trypanosomiasis (known as sleeping sickness and nagana, respectively) ...

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

Обнаружение энтерогеморрагические Escherichia Coli колонизации в мышиных принимающей системой неинвазивные в Vivo биолюминесценции

Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) O157:H7, which is a foodborne pathogen that causesdiarrhea, hemorrhagic colitis (HS), and hemolytic uremic syndrome ...

Quantifying Human Monocyte Chemotaxis In Vitro and Murine Lymphocyte Trafficking In Vivo

Quantifying Human Monocyte Chemotaxis In Vitro and Murine Lymphocyte Trafficking In Vivo

Количественная оценка человека Моноцит хемотаксис в пробирке и мышиных лимфоцитов, торговля в естественных условиях

Chemotaxis is migration along a specific chemical gradient1. Chemokines are chemotactic cytokines that promote cellular trafficking with anatomic and ...

Analysis of 18FDG PET/CT Imaging as a Tool for Studying Mycobacterium tuberculosis Infection and Treatment in Non-human Primates

Analysis of 18FDG PET/CT Imaging as a Tool for Studying Mycobacterium tuberculosis Infection and Treatment in Non-human Primates

Анализ 18FDG ПЭТ/КТ изображений как инструмент для обучения микобактерии инфекции и лечение в Non-human приматов

Mycobacterium tuberculosis remains the number one infectious agent in the world today. With the emergence of antibiotic resistant strains, new clinically ...

Visualizing Intracellular SNARE Trafficking by Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy

Визуализация внутриклеточных SNARE людьми флуоресценции жизни изображений микроскопия

Soluble N-ethylmaleimide sensitive fusion protein (NSF) attachment protein receptor (SNARE) proteins are key for membrane trafficking, as they catalyze ...

Assessment of Lymphocyte Migration in an Ex Vivo Transmigration System

Оценка миграции лимфоцитов в системе трансмиграции Ex Vivo

Herein, we present an efficient method that can be executed with basic laboratory skills and materials to assess lymphocyte chemokinetic movement in an ex ...