Name: isolation and enrichment of liver progenitor subsets identified by a novel surface marker combination
Uploaded: 2017-02-18T14:00:00
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Este trabajo fue apoyado por el Premio Fundación Kovalevskaja Sofja Alexander von Humboldt para VLK.

Todos los procedimientos experimentales se llevaron a cabo con la aprobación de los comités de ética y cuidado de los animales de la Universidad de Homburg Medical Center. 1. Preparación de Materiales y búferes <ol><li> Recién preparar todos los tampones necesarios para la digestión del hígado utilizando componentes estériles y una campana laminar para evitar la contaminación bacteriana. </li><li> Preparar el tampón de colección (CB) mediante la mezcla de 49,5 ml de medio RPMI ...

<ol>
	<li>Dolle, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+isolation+of+liver+progenitor+cells+by+aldehyde+dehydrogenase+activity+in+naive+mice.">Successful isolation of liver progenitor cells by aldehyde dehydrogenase activity in naive mice.</a> Hepatology. 55 (2), 540-552 (2012).</li><li>Dolle, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+quest+for+liver+progenitor+cells:+a+practical+point+of+view.">The quest for liver progenitor cells: a practical point of view.</a> J Hepatol. 52 (1), 117-129 (2010).</li><li>Dorrell, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+markers+for+the+murine+oval+cell+response.">Surface markers for the murine oval cell response.</a> Hepatology. 48 (4), 1282-1291 (2008).</li><li>Gouw, A. S., Clouston, A. D., Theise, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ductular+reactions+in+human+liver:+diversity+at+the+interface.">Ductular reactions in human liver: diversity at the interface.</a> Hepatology. 54 (5), 1853-1863 (2011).</li><li>Tarlow, B. D., Finegold, M. J., Grompe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+tracing+of+Sox9++liver+progenitors+in+mouse+oval+cell+injury.">Clonal tracing of Sox9+ liver progenitors in mouse oval cell injury.</a> Hepatology. 60 (1), 278-289 (2014).</li><li>Shin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foxl1-Cre-marked+adult+hepatic+progenitors+have+clonogenic+and+bilineage+differentiation+potential.">Foxl1-Cre-marked adult hepatic progenitors have clonogenic and bilineage differentiation potential.</a> Genes Dev. 25 (11), 1185-1192 (2011).</li><li>Furuyama, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+cell+supply+from+a+Sox9-expressing+progenitor+zone+in+adult+liver,+exocrine+pancreas+and+intestine.">Continuous cell supply from a Sox9-expressing progenitor zone in adult liver, exocrine pancreas and intestine.</a> Nat Genet. 43 (1), 34-41 (2011).</li><li>Font-Burgada, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hybrid+Periportal+Hepatocytes+Regenerate+the+Injured+Liver+without+Giving+Rise+to+Cancer.">Hybrid Periportal Hepatocytes Regenerate the Injured Liver without Giving Rise to Cancer.</a> Cell. 162 (4), 766-779 (2015).</li><li>Kuramitsu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Failure+of+fibrotic+liver+regeneration+in+mice+is+linked+to+a+severe+fibrogenic+response+driven+by+hepatic+progenitor+cell+activation.">Failure of fibrotic liver regeneration in mice is linked to a severe fibrogenic response driven by hepatic progenitor cell activation.</a> Am J Pathol. 183 (1), 182-194 (2013).</li><li>Pritchard, M. T., Nagy, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+fibrosis+is+enhanced+and+accompanied+by+robust+oval+cell+activation+after+chronic+carbon+tetrachloride+administration+to+Egr-1-deficient+mice.">Hepatic fibrosis is enhanced and accompanied by robust oval cell activation after chronic carbon tetrachloride administration to Egr-1-deficient mice.</a> Am J Pathol. 176 (6), 2743-2752 (2010).</li><li>Spee, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+the+liver+progenitor+cell+niche+in+liver+diseases:+potential+involvement+of+Wnt+and+Notch+signalling.">Characterisation of the liver progenitor cell niche in liver diseases: potential involvement of Wnt and Notch signalling.</a> Gut. 59 (2), 247-257 (2010).</li><li>Eckert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Podoplanin+discriminates+distinct+stromal+cell+populations+and+a+novel+progenitor+subset+in+the+liver.">Podoplanin discriminates distinct stromal cell populations and a novel progenitor subset in the liver.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 310 (1), G1-G12 (2016).</li><li>Epting, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+antigen-1+is+necessary+for+cell-cycle+withdrawal+and+myoblast+differentiation+in+C2C12+cells.">Stem cell antigen-1 is necessary for cell-cycle withdrawal and myoblast differentiation in C2C12 cells.</a> J Cell Sci. 117 (Pt 25), 6185-6195 (2004).</li><li>Tirnitz-Parker, J. E., Tonkin, J. N., Knight, B., Olynyk, J. K., Yeoh, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+culture+and+immortalisation+of+hepatic+oval+cells+from+adult+mice+fed+a+choline-deficient,+ethionine-supplemented+diet.">Isolation, culture and immortalisation of hepatic oval cells from adult mice fed a choline-deficient, ethionine-supplemented diet.</a> Int J Biochem Cell Biol. 39 (12), 2226-2239 (2007).</li><li>Rountree, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+CD133-expressing+murine+liver+oval+cell+population+with+bilineage+potential.">A CD133-expressing murine liver oval cell population with bilineage potential.</a> Stem Cells. 25 (10), 2419-2429 (2007).</li><li>Rountree, C. B., Ding, W., Dang, H., Vankirk, C., Crooks, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+CD133++liver+stem+cells+for+clonal+expansion.">Isolation of CD133+ liver stem cells for clonal expansion.</a> J Vis Exp. (56), (2011).</li><li>Sidney, L. E., McIntosh, O. D., Hopkinson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+Change+and+Induction+of+Cytokeratin+Expression+During+In+Vitro+Culture+of+Corneal+Stromal+Cells.">Phenotypic Change and Induction of Cytokeratin Expression During In Vitro Culture of Corneal Stromal Cells.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (12), 7225-7235 (2015).</li><li>Hass, R., Kasper, C., Bohm, S., Jacobs, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+populations+and+sources+of+human+mesenchymal+stem+cells+(MSC):+A+comparison+of+adult+and+neonatal+tissue-derived+MSC.">Different populations and sources of human mesenchymal stem cells (MSC): A comparison of adult and neonatal tissue-derived MSC.</a> Cell Commun Signal. 9, 12 (2011).</li><li>Schmelzer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hepatic+stem+cells+from+fetal+and+postnatal+donors.">Human hepatic stem cells from fetal and postnatal donors.</a> J Exp Med. 204 (8), 1973-1987 (2007).</li></ol>

Inflamación del hígado y lesiones de diferentes orígenes desencadenan procesos regenerativos en el hígado que se acompañan de la expansión de células progenitoras y la activación 2, 3. Estas células progenitoras del hígado poseen características de las células madre y probablemente juegan un papel importante en el mecanismo patológico de varias enfermedades del hígado. La heterogeneidad de las células progenitoras hep?...

La regeneración hepática se asocia sobre todo con la capacidad de auto-renovación de los hepatocitos. Sin embargo, las lesiones crónicas del hígado se producen con la activación de células progenitoras y de expansión, que se han asociado con su capacidad de diferenciarse en hepatocitos y cholangiocytes 1, 2, 3, 4. Esto es especialmente relevante porque, durante las lesiones crónicas, la proliferación de hepatocitos no es eficaz. A pesar de múltiples estudios de rastreo genético dirigidas a células progenitoras, su papel en la regeneración del hígado sigue siendo controvertido 5, 6, 7, 8. Por otra parte, la activación de las células progenitoras se ha relacionado con una mayor respuesta fibrótica en el hígado, lo que plantea dudas sobre su papel exacto en lesiones 9, 10. La naturaleza heterogénea del compartimento de células progenitoras durante mucho tiempo ha sido sugerido por estudios de expresión génica que aislaron células progenitoras que expresan un solo marcador de la superficie celular mediante microdisección o métodos basados en la clasificación 1, 11. De hecho, recientemente, una nueva combinación de marcadores de superficie utilizando GP38 (podoplanin) inequívocamente vinculada marcadores individuales anteriores de células progenitoras a diversos subconjuntos 12. Es importante destacar que estos subconjuntos no sólo diferían en su expresión de marcadores de superficie, pero también mostraron alteraciones funcionales durante 12 lesiones. Múltiples modelos animales se han utilizado para investigar la activación de células progenitoras y la regeneración del hígado. Parece que los distintos tipos de lesiones promueven la activación de diferentes subconjuntos de células progenitoras 12. Esto podría explicar la phenotypic divergencia de la reacción ductular observada en humanos 4. Por lo tanto, los complejos análisis fenotípicos y funcionales de las células progenitoras son fundamentales para entender su papel en las lesiones y el verdadero significado de la reacción ductular en las enfermedades hepáticas. Además de combinaciones de marcadores de superficie, las diferencias cruciales en protocolos de aislamiento de células complican aún más las conclusiones basadas en estudios anteriores 2. Una cantidad sustancial de estudios abordaron el papel de las células progenitoras que difieren mucho en su protocolo de aislamiento (por ejemplo, la disociación de hígado (combinación de enzimas y la duración del proceso), de densidad media, y la velocidad de centrifugación) 2. Una técnica de aislamiento optimizado, proporcionando una mejor viabilidad de las poblaciones de células raras y reflexiva de la composición subconjunto, se ha desarrollado y publicado recientemente 12. El objetivo de este artículo es proporcionar una más detprotocolo ailed de este procedimiento de aislamiento de células del hígado y el análisis de subconjunto para permitir la reproducción correcta de la técnica. Además, el protocolo incluye una comparación con el método de aislamiento anterior para demostrar las diferencias en comparación con el nuevo protocolo.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>RPMI</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>21875-034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenol red free DMEM</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>31053-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10270-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase P</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>11249002001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse-I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>10104159001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17105041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysing Buffer</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A10492-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>14025-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2002</td>
			<td>Prepare 1 % stock solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 % BSA</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-091-376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>autoMACS Rinsing Solution</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-091-222</td>
			<td>add 0.5 % (v/v) BSA and store on ice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol-red free DMEM</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D1145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>counting Beads Count Bright</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>C36950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PI</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FcR Blocking Reagent</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-092-575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-CD31 MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-097-418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-CD45 MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-052-301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dead Cell Removal Kit</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-090-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Biotin MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-090-485</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD64 Purified</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>139302</td>
			<td>Dilution: 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD16/32 Purified</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>101302</td>
			<td>Dilution: 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 APC/Cy7</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>103116</td>
			<td>Dilution: 1:200, marks hematopoetic cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD31 Biotin</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>102504</td>
			<td>Dilution: 1:200, marks endothelial cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ASGPR1 Purified</td>
			<td>Bio-Techne</td>
			<td>AF2755-SP</td>
			<td>Dilution: 1:100, marks hepatocytes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Podoplanin APC</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>127410</td>
			<td>Dilution: 1:1400, marks progenior cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Podoplanin Biotin</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>127404</td>
			<td>Dilution: 1:1400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD133 PE</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-102-210</td>
			<td>use 3 &#181;l, marks progenitor cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD133 Biotin</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>141206</td>
			<td>Dilution: 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34 Biotin</td>
			<td>eBioScience</td>
			<td>13-0341-81</td>
			<td>Dilution: 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD90.2 Pacific Blue</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>140306</td>
			<td>Dilution: 1:800</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD157 PE</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>140203</td>
			<td>Dilution: 1:600</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EpCAM Brilliant Violet 421</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>118225</td>
			<td>Dilution: 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sca-1 Biotin</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-101-885</td>
			<td>use 10 &#181;l</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG2b, &#954; PE</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat IgG1 PE</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat IgG2b, &#954; APC/Cy7</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400624</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat IgG2a, &#954; Biotin</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat IgG2a, &#954; Brilliant Violet 421</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400535</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syrian Hamster IgG APC</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>402012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syrian Hamster IgG Biotin</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>402004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Goat IgG Control Purified</td>
			<td>Bio-Techne</td>
			<td>AB-108-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Goat IgG Alexa Fluor 488</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11055</td>
			<td>Dilution: 1:800</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin Alexa Fluor 405</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>S32351</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m Filter mesh</td>
			<td>A. Hartenstein</td>
			<td>PAS3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LS Column</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QuadroMACS separator</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-090-976</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACSQuant Analyzer 10</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-096-343</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoMACS Pro Separator</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-092-545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS AriaTMIII</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSDiva sofware</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene Round bottom tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rneasy plus mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74134</td>
			<td>RLT lysis buffer is included</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and enrichment of liver progenitor subsets identified by a novel surface marker combination

Durante lesiones crónicas del hígado, las células progenitoras se expanden en un proceso denominado reacción ductular, que también implica la aparición de infiltrado celular inflamatorio y la activación de las células epiteliales. La población de células progenitoras durante tales reacciones inflamatorias principalmente se ha investigado el uso de marcadores de superficie individuales, ya sea por análisis histológico o por técnicas basadas en citometría de flujo. Sin embargo, nuevos marcadores de superficie identificaron varios subconjuntos funcionalmente distintos dentro de la progenitora de hígado compartimento celular / vástago. El método presentado aquí describe el aislamiento y flujo detallado análisis de citometría de subconjuntos progenitoras utilizando combinaciones de marcadores de superficie novedoso. Por otra parte, se demuestra cómo los diferentes subconjuntos de células progenitoras pueden aislarse con los métodos basados ​​en la clasificación de alta pureza utilizando automatizado magnético y FACS. Es importante destacar que, novedosos y enzimática simplificada disociación del hígado permite el aislamiento de estas poblaciones de células raras con una alta viabilidadque es superior en comparación con otros métodos existentes. Esto es especialmente relevante para el estudio de más células progenitoras in vitro o para el aislamiento de ARN de alta calidad para analizar el perfil de expresión génica.

El procedimiento que aquí se presenta para la digestión del hígado usando una nueva mezcla de los resultados de las enzimas en una suspensión de una sola célula que contiene parénquima y células hepáticas no parenquimatosas (Figuras 1 y 2a). Después de la lisis ACK-de las células rojas de la sangre, el flujo directo análisis de citometría de la suspensión de célula única es posible (Figuras 1 y 2). La estr...

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Isolation and Enrichment of Liver Progenitor Subsets Identified by a Novel Surface Marker Combination

lesiones hepáticas están acompañados por la expansión de células progenitoras que representa una población heterogénea de células. clasificación Novel de este compartimento celular permite la distinción de varios subconjuntos. El método descrito aquí ilustra el flujo de análisis de citometría de alto aislamiento y pureza de varios subconjuntos que se pueden utilizar para más ensayos.

El aislamiento y enriquecimiento de hígado progenitoras subconjuntos identificados por una combinación de marcadores de superficie Novel

During chronic liver injuries, progenitor cells expand in a process called ductular reaction, which also entails the appearance of inflammatory cellular ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation and Enrichment of Human Adipose-derived Stromal Cells for Enhanced Osteogenesis

El aislamiento y enriquecimiento de Human adiposo derivado de células estromales de la osteogénesis mejorada

Bone marrow-derived mesenchymal stromal cells (BM-MSCs) are considered the gold standard for stem cell-based tissue engineering applications. However, the ...

Investigación

Biología del Desarrollo

Isolation of Neural Stem/Progenitor Cells from the Periventricular Region of the Adult Rat and Human Spinal Cord

Aislamiento de células neurales madre / progenitoras de la región periventricular de la rata de Adultos y de la médula espinal humana

Adult rat and human spinal cord neural stem/progenitor cells (NSPCs) cultured in growth factor-enriched medium allows for the proliferation of ...

Murine Dermal Fibroblast Isolation by FACS

Murino fibroblastos dérmicos aislamiento por FACS

Fibroblasts are the principle cell type responsible for secreting extracellular matrix and are a critical component of many organs and tissues. Fibroblast ...

Preparation of Rat Oligodendrocyte Progenitor Cultures and Quantification of Oligodendrogenesis Using Dual-infrared Fluorescence Scanning

Preparación de la rata progenitoras de oligodendrocitos culturas y cuantificación de Oligodendrogenesis Uso del análisis de fluorescencia de doble infrarrojo

Efficient oligodendrogenesis is the therapeutic goal of a number of areas of research including spinal cord injury, neonatal hypoxia, and demyelinating ...

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

Desarrollo de un Modelo de hígado fibrótico inducida por etanol en el pez cebra para el Estudio de células progenitoras mediada por la regeneración de hepatocitos

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading ...

Adenoviral Gene Therapy for Diabetic Keratopathy: Effects on Wound Healing and Stem Cell Marker Expression in Human Organ-cultured Corneas and Limbal Epithelial Cells

Terapia génica adenoviral para Diabetic Queratopatía: Efectos en la curación de heridas y Stem Cell expresión del marcador en córneas de órganos cultivados humanos y células epiteliales Limbal

The goal of this protocol is to describe molecular alterations in human diabetic corneas and demonstrate how they can be alleviated by adenoviral gene ...

Isolation of Endothelial Progenitor Cells from Human Umbilical Cord Blood

Aislamiento de células endoteliales progenitoras de la sangre de cordón Umbilical humano

The existence of endothelial progenitor cells (EPCs) in peripheral blood and its involvement in vasculogenesis was first reported by Ashara and ...

Partial Lobular Hepatectomy: A Surgical Model for Morphologic Liver Regeneration

Hepatectomía parcial lobulado: Un modelo quirúrgico para regeneración hepática morfológico

Morphological organ regeneration following acute tissue loss is common among lower vertebrates, but is rarely observed in mammalian postnatal life. Adult ...

Isolation, Culture, Characterization, and Differentiation of Human Muscle Progenitor Cells from the Skeletal Muscle Biopsy Procedure

Aislamiento, cultivo, caracterización y diferenciación de células progenitoras musculares humanas del procedimiento de biopsia muscular esquelética

The use of primary human tissue and cells is ideal for the investigation of biological and physiological processes such as the skeletal muscle ...

Isolation and Differentiation of Primary Myoblasts from Mouse Skeletal Muscle Explants

Aislamiento y diferenciación de los mioblastos primarios de los explantes musculares esqueléticos de ratón

Primary myoblasts are undifferentiated proliferating precursors of skeletal muscle. They can be cultured and studied as muscle precursors or induced to ...