Name: isolation and enrichment of liver progenitor subsets identified by a novel surface marker combination
Uploaded: 2017-02-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Enrichment of Liver Progenitor Subsets Identified by a Novel Surface Marker Combination at JoVE.com

Detta arbete stöddes av Alexander von Humboldt-stiftelsen Sofja Kovalevskaja Award till VLK.

Alla experimentella procedurer utfördes med godkännande av etik och djurvårds kommittéer Homburg University Medical Center. 1. Framställning av material och buffertar <ol><li> Färskt förbereda alla buffertar som krävs för lever matsmältning med sterila komponenter och ett laminärt huva för att undvika bakteriell kontamination. </li><li> Förbereda uppsamlingsbuffert (CB) genom att blanda 49,5 ml RPMI-medium och 0,5 ml fetalt bovint serum (FBS; låg endotoxin, värmeinaktiverat)...

<ol>
	<li>Dolle, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+isolation+of+liver+progenitor+cells+by+aldehyde+dehydrogenase+activity+in+naive+mice.">Successful isolation of liver progenitor cells by aldehyde dehydrogenase activity in naive mice.</a> Hepatology. 55 (2), 540-552 (2012).</li><li>Dolle, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+quest+for+liver+progenitor+cells:+a+practical+point+of+view.">The quest for liver progenitor cells: a practical point of view.</a> J Hepatol. 52 (1), 117-129 (2010).</li><li>Dorrell, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+markers+for+the+murine+oval+cell+response.">Surface markers for the murine oval cell response.</a> Hepatology. 48 (4), 1282-1291 (2008).</li><li>Gouw, A. S., Clouston, A. D., Theise, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ductular+reactions+in+human+liver:+diversity+at+the+interface.">Ductular reactions in human liver: diversity at the interface.</a> Hepatology. 54 (5), 1853-1863 (2011).</li><li>Tarlow, B. D., Finegold, M. J., Grompe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+tracing+of+Sox9++liver+progenitors+in+mouse+oval+cell+injury.">Clonal tracing of Sox9+ liver progenitors in mouse oval cell injury.</a> Hepatology. 60 (1), 278-289 (2014).</li><li>Shin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foxl1-Cre-marked+adult+hepatic+progenitors+have+clonogenic+and+bilineage+differentiation+potential.">Foxl1-Cre-marked adult hepatic progenitors have clonogenic and bilineage differentiation potential.</a> Genes Dev. 25 (11), 1185-1192 (2011).</li><li>Furuyama, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+cell+supply+from+a+Sox9-expressing+progenitor+zone+in+adult+liver,+exocrine+pancreas+and+intestine.">Continuous cell supply from a Sox9-expressing progenitor zone in adult liver, exocrine pancreas and intestine.</a> Nat Genet. 43 (1), 34-41 (2011).</li><li>Font-Burgada, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hybrid+Periportal+Hepatocytes+Regenerate+the+Injured+Liver+without+Giving+Rise+to+Cancer.">Hybrid Periportal Hepatocytes Regenerate the Injured Liver without Giving Rise to Cancer.</a> Cell. 162 (4), 766-779 (2015).</li><li>Kuramitsu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Failure+of+fibrotic+liver+regeneration+in+mice+is+linked+to+a+severe+fibrogenic+response+driven+by+hepatic+progenitor+cell+activation.">Failure of fibrotic liver regeneration in mice is linked to a severe fibrogenic response driven by hepatic progenitor cell activation.</a> Am J Pathol. 183 (1), 182-194 (2013).</li><li>Pritchard, M. T., Nagy, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+fibrosis+is+enhanced+and+accompanied+by+robust+oval+cell+activation+after+chronic+carbon+tetrachloride+administration+to+Egr-1-deficient+mice.">Hepatic fibrosis is enhanced and accompanied by robust oval cell activation after chronic carbon tetrachloride administration to Egr-1-deficient mice.</a> Am J Pathol. 176 (6), 2743-2752 (2010).</li><li>Spee, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+the+liver+progenitor+cell+niche+in+liver+diseases:+potential+involvement+of+Wnt+and+Notch+signalling.">Characterisation of the liver progenitor cell niche in liver diseases: potential involvement of Wnt and Notch signalling.</a> Gut. 59 (2), 247-257 (2010).</li><li>Eckert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Podoplanin+discriminates+distinct+stromal+cell+populations+and+a+novel+progenitor+subset+in+the+liver.">Podoplanin discriminates distinct stromal cell populations and a novel progenitor subset in the liver.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 310 (1), G1-G12 (2016).</li><li>Epting, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+antigen-1+is+necessary+for+cell-cycle+withdrawal+and+myoblast+differentiation+in+C2C12+cells.">Stem cell antigen-1 is necessary for cell-cycle withdrawal and myoblast differentiation in C2C12 cells.</a> J Cell Sci. 117 (Pt 25), 6185-6195 (2004).</li><li>Tirnitz-Parker, J. E., Tonkin, J. N., Knight, B., Olynyk, J. K., Yeoh, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+culture+and+immortalisation+of+hepatic+oval+cells+from+adult+mice+fed+a+choline-deficient,+ethionine-supplemented+diet.">Isolation, culture and immortalisation of hepatic oval cells from adult mice fed a choline-deficient, ethionine-supplemented diet.</a> Int J Biochem Cell Biol. 39 (12), 2226-2239 (2007).</li><li>Rountree, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+CD133-expressing+murine+liver+oval+cell+population+with+bilineage+potential.">A CD133-expressing murine liver oval cell population with bilineage potential.</a> Stem Cells. 25 (10), 2419-2429 (2007).</li><li>Rountree, C. B., Ding, W., Dang, H., Vankirk, C., Crooks, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+CD133++liver+stem+cells+for+clonal+expansion.">Isolation of CD133+ liver stem cells for clonal expansion.</a> J Vis Exp. (56), (2011).</li><li>Sidney, L. E., McIntosh, O. D., Hopkinson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+Change+and+Induction+of+Cytokeratin+Expression+During+In+Vitro+Culture+of+Corneal+Stromal+Cells.">Phenotypic Change and Induction of Cytokeratin Expression During In Vitro Culture of Corneal Stromal Cells.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (12), 7225-7235 (2015).</li><li>Hass, R., Kasper, C., Bohm, S., Jacobs, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+populations+and+sources+of+human+mesenchymal+stem+cells+(MSC):+A+comparison+of+adult+and+neonatal+tissue-derived+MSC.">Different populations and sources of human mesenchymal stem cells (MSC): A comparison of adult and neonatal tissue-derived MSC.</a> Cell Commun Signal. 9, 12 (2011).</li><li>Schmelzer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hepatic+stem+cells+from+fetal+and+postnatal+donors.">Human hepatic stem cells from fetal and postnatal donors.</a> J Exp Med. 204 (8), 1973-1987 (2007).</li></ol>

Leverinflammation och skada av olika ursprung utlösa regenerativa processer i levern som åtföljs av stamcellsexpansion och aktivering 2, 3. Dessa lever progenitorceller besitter stamcellsegenskaper och sannolikt spelar en betydande roll i pathomechanism av olika leversjukdomar. De olikartade lever progenitorceller har länge föreslagits. Omprövningen av leverföregångargrupper med hjälp av en ny yta markör kombination av CD13...

Leverregenerering är oftast förknippad med självförnyelse kapacitet av hepatocyter. Icke desto mindre, kroniska leverskador inträffar med progenitor-cellaktivering och expansion, vilket har satts i samband med deras förmåga att differentiera till hepatocyter och cholangiocytes 1, 2, 3, 4. Detta är särskilt relevant, eftersom under kroniska skador, är inte effektiv hepatocytproliferation. Trots flera genetiska spårning studier inriktade på progenitorceller, är fortfarande kontroversiell 5, 6, 7, 8 deras roll i leverregenerering. Dessutom har aktiveringen av progenitorceller kopplats till ökad fibrotisk reaktion i levern, vilket väcker frågor om deras exakta roll under skador 9, 10. Den heterogena karaktären av stamcellstransplantation facket har länge föreslagits av genuttryck studier som isolerade stamceller som uttrycker en enda yta markör med hjälp av microdissection eller cellsortering-baserade metoder 1, 11. I själva verket nyligen en ny yta markör kombination med användning av gp38 (podoplanin) entydigt länkade tidigare enstaka markörer för stamceller till olika delmängder 12. Viktigt är dessa delmängder inte bara skilde i sin yta markör uttryck, men också uppvisade funktionella förändringar under skador 12. Flera djurmodeller har använts för att undersöka progenitor-cellaktivering och leverregenerering. Det verkar som om de olika typerna skade främjar aktiveringen av olika delmängder av progenitorceller 12. Detta kan förklara den phenotypic divergens av duktulära reaktion observerats hos människa 4. Således, de komplexa fenotypiska och funktionella analyser av stamceller är avgörande för att förstå deras roll i skador och den sanna betydelsen av duktulära reaktion i leversjukdomar. Förutom ytmarkör kombinationer, de avgörande skillnaderna i cellisoleringsprotokoll ytterligare komplicera de slutsatser baserade på tidigare studier 2. En betydande del av studier adresserade roll progenitorceller som kraftigt skiljer sig åt i sin isolering protokoll (t.ex. lever dissociation (enzym kombination och varaktighet av processen), densitet medium och centrifugeringsvarvtal) 2. En optimerad isoleringsteknik, vilket ger bättre lönsamhet för sällsynta cellpopulationer och reflekterande av delmängd sammansättning, har utvecklats och publicerats nyligen 12. Syftet med denna artikel är att ge en mer Detailed protokollet av detta levercellisoleringsförfarande och delmängdsanalys för att möjliggöra för en korrekt reproduktion av den teknik. Dessutom innehåller protokollet en jämförelse med föregående isolering metod för att påvisa skillnader jämfört med det nya protokollet.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>RPMI</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>21875-034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenol red free DMEM</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>31053-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10270-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase P</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>11249002001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse-I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>10104159001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17105041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysing Buffer</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A10492-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>14025-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2002</td>
			<td>Prepare 1 % stock solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 % BSA</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-091-376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>autoMACS Rinsing Solution</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-091-222</td>
			<td>add 0.5 % (v/v) BSA and store on ice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol-red free DMEM</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D1145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>counting Beads Count Bright</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>C36950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PI</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FcR Blocking Reagent</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-092-575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-CD31 MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-097-418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-CD45 MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-052-301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dead Cell Removal Kit</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-090-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Biotin MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-090-485</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD64 Purified</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>139302</td>
			<td>Dilution: 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD16/32 Purified</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>101302</td>
			<td>Dilution: 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 APC/Cy7</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>103116</td>
			<td>Dilution: 1:200, marks hematopoetic cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD31 Biotin</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>102504</td>
			<td>Dilution: 1:200, marks endothelial cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ASGPR1 Purified</td>
			<td>Bio-Techne</td>
			<td>AF2755-SP</td>
			<td>Dilution: 1:100, marks hepatocytes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Podoplanin APC</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>127410</td>
			<td>Dilution: 1:1400, marks progenior cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Podoplanin Biotin</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>127404</td>
			<td>Dilution: 1:1400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD133 PE</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-102-210</td>
			<td>use 3 &#181;l, marks progenitor cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD133 Biotin</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>141206</td>
			<td>Dilution: 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34 Biotin</td>
			<td>eBioScience</td>
			<td>13-0341-81</td>
			<td>Dilution: 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD90.2 Pacific Blue</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>140306</td>
			<td>Dilution: 1:800</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD157 PE</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>140203</td>
			<td>Dilution: 1:600</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EpCAM Brilliant Violet 421</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>118225</td>
			<td>Dilution: 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sca-1 Biotin</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-101-885</td>
			<td>use 10 &#181;l</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG2b, &#954; PE</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat IgG1 PE</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat IgG2b, &#954; APC/Cy7</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400624</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat IgG2a, &#954; Biotin</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat IgG2a, &#954; Brilliant Violet 421</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400535</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syrian Hamster IgG APC</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>402012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syrian Hamster IgG Biotin</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>402004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Goat IgG Control Purified</td>
			<td>Bio-Techne</td>
			<td>AB-108-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Goat IgG Alexa Fluor 488</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11055</td>
			<td>Dilution: 1:800</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin Alexa Fluor 405</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>S32351</td>
			<td>Dilution: 1:400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m Filter mesh</td>
			<td>A. Hartenstein</td>
			<td>PAS3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LS Column</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QuadroMACS separator</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-090-976</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACSQuant Analyzer 10</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-096-343</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoMACS Pro Separator</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-092-545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS AriaTMIII</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSDiva sofware</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene Round bottom tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rneasy plus mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74134</td>
			<td>RLT lysis buffer is included</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and enrichment of liver progenitor subsets identified by a novel surface marker combination

Under kroniska leverskador, progenitorceller expandera i en process som kallas duktulära reaktion, vilket också innebär uppkomsten av inflammatoriska cellulärt infiltrat och epitelceller aktivering. Stamfader cellpopulationen under sådana inflammatoriska reaktioner har mestadels undersökts med hjälp av enkla ytmarkörer, antingen genom histologisk analys eller genom flödescytometri-baserade tekniker. Men nya ytmarkörer identifierat olika funktionellt distinkta undergrupper inom leverstamfader / stamceller. Den metod som presenteras här beskriver isoleringen och detaljerade flödescytometrianalys av ursprungsgrupper som använder nya ytmarkör kombinationer. Dessutom visar den hur de olika progenitor cellundergrupper kan isoleras med hög renhet med användning av automatiserad magnetiska och FACS sortering-baserade metoder. Viktigare, nya och förenklad enzymatisk dissociering av levern möjliggör för isolering av dessa sällsynta cellpopulationer med en hög viabilitetsom är överlägsen i jämförelse med andra existerande metoder. Detta är särskilt relevant för ytterligare studera stamceller in vitro eller för att isolera hög kvalitet RNA för att analysera genuttryck profil.

Det förfarande som presenteras här för uppslutning av levern med användning av en ny blandning av enzymer resulterar i en enkelcellsuspension innehållande parenkymal och icke-parenkymala leverceller (fig 1 och 2a). Efter det att ACK-lyse av röda blodkroppar, är den direkta flödescytometrianalys av encelliga suspension möjliga (fig 1 och 2). Gating strategin innebär uteslutande av dubbletter och döda celler <st...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Enrichment of Liver Progenitor Subsets Identified by a Novel Surface Marker Combination at JoVE.com

Isolation and Enrichment of Liver Progenitor Subsets Identified by a Novel Surface Marker Combination

Leverskador åtföljs av stamcellsexpansion som representerar en heterogen cellpopulation. Nya klassificeringen av denna cellulära fack möjliggör särskiljande av flera undergrupper. Den metod som beskrivs här illustrerar den flödescytometrianalys och hög renhet isolering av olika underuppsättningar som kan användas för ytterligare analyser.

Isolering och anrikning av leverstamfader delmängder identifierade av en roman Surface Marker Kombination

During chronic liver injuries, progenitor cells expand in a process called ductular reaction, which also entails the appearance of inflammatory cellular ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation and Enrichment of Human Adipose-derived Stromal Cells for Enhanced Osteogenesis

Isolering och anrikning av humant Fett-stromala celler för Enhanced Osteogenesis

Bone marrow-derived mesenchymal stromal cells (BM-MSCs) are considered the gold standard for stem cell-based tissue engineering applications. However, the ...

Isolation of Neural Stem/Progenitor Cells from the Periventricular Region of the Adult Rat and Human Spinal Cord

Isolering av neurala stamceller / progenitorceller från periventrikulär regionen vuxen råtta och humant ryggmärgs

Adult rat and human spinal cord neural stem/progenitor cells (NSPCs) cultured in growth factor-enriched medium allows for the proliferation of ...

Murine Dermal Fibroblast Isolation by FACS

Murin Dermal Fibroblast Isolering av FACS

Fibroblasts are the principle cell type responsible for secreting extracellular matrix and are a critical component of many organs and tissues. Fibroblast ...

Preparation of Rat Oligodendrocyte Progenitor Cultures and Quantification of Oligodendrogenesis Using Dual-infrared Fluorescence Scanning

Framställning av råtta Oligodendrocyte gångar kulturer och kvantifiering av Oligodendrogenesis Med dubbla infraröd fluorescens Scanning

Efficient oligodendrogenesis is the therapeutic goal of a number of areas of research including spinal cord injury, neonatal hypoxia, and demyelinating ...

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

Utveckling av en etanol-inducerad Fibrotisk Lever modell i Zebrafish att studera stamceller-medierad Hepatocyte Regeneration

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading ...

Adenoviral Gene Therapy for Diabetic Keratopathy: Effects on Wound Healing and Stem Cell Marker Expression in Human Organ-cultured Corneas and Limbal Epithelial Cells

Adenoviral genterapi för Diabetic keratopati: Effekter på sårläkning och Stamcells Marker Expression in Human Organ-odlade hornhinnor och limbus epitelceller

The goal of this protocol is to describe molecular alterations in human diabetic corneas and demonstrate how they can be alleviated by adenoviral gene ...

Isolation of Endothelial Progenitor Cells from Human Umbilical Cord Blood

Isolering av Endothelial stamceller från mänskliga navelsträngsblod

The existence of endothelial progenitor cells (EPCs) in peripheral blood and its involvement in vasculogenesis was first reported by Ashara and ...

Partial Lobular Hepatectomy: A Surgical Model for Morphologic Liver Regeneration

Partiell lobulär Hepatectomy: En kirurgisk modell för Morphologic lever regenerering

Morphological organ regeneration following acute tissue loss is common among lower vertebrates, but is rarely observed in mammalian postnatal life. Adult ...

Isolation, Culture, Characterization, and Differentiation of Human Muscle Progenitor Cells from the Skeletal Muscle Biopsy Procedure

Isolering, kultur, karakterisering, och differentiering av humana muskelstamceller från skelettmuskulaturen biopsi förfarande

The use of primary human tissue and cells is ideal for the investigation of biological and physiological processes such as the skeletal muscle ...

Isolation and Differentiation of Primary Myoblasts from Mouse Skeletal Muscle Explants

Isolering och differentiering av primära myoblasts från mus skelettmuskel Explants

Primary myoblasts are undifferentiated proliferating precursors of skeletal muscle. They can be cultured and studied as muscle precursors or induced to ...