Name: rearing ixodes scapularis, the black-legged tick: feeding immature stages on mice
Uploaded: 2017-05-08T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rearing Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice at JoVE.com

The authors acknowledge the help from the staff of Laboratory Animal Medicine, University of Nevada, Reno. MM received funding from Nevada INBRE.

Протокол (Номер-00682), описанный ниже, одобрен Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованием (IACUC) в Университете Невады Рено и соответствует принципам Университета штата Невада, комитета по этическим исследованиям животных Рено. Короче говоря, мышей анестезиров?...

<ol>
	<li>Gleim, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+associated+with+tick+bites+and+pathogen+prevalence+in+ticks+parasitizing+humans+in+Georgia,+USA.">Factors associated with tick bites and pathogen prevalence in ticks parasitizing humans in Georgia, USA.</a> Parasites &amp;amp; Vectors. 9 (125), 1-13 (2016).</li><li>Krober, T., Guerin, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+feeding+assays+for+hard+ticks.">In vitro feeding assays for hard ticks.</a> Trends Parasitol. 23 (9), 445-449 (2007).</li><li>Kuhnert, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+of+Hard+Ticks+In+Vitro:+New+Perspectives+for+Rearing+and+for+the+Identification+of+Systemic+Acaricides.">Feeding of Hard Ticks In Vitro: New Perspectives for Rearing and for the Identification of Systemic Acaricides.</a> ALTEX. 13 (2), 76-87 (1996).</li><li>Voigt, W. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+feeding+of+instars+of+the+ixodid+tick+Amblyomma+variegaturn+on+skin+membranes+and+its+application+to+the+transmission+of+Theileria+mutans+and+Cowdria+ruminantium.">In vitro feeding of instars of the ixodid tick Amblyomma variegaturn on skin membranes and its application to the transmission of Theileria mutans and Cowdria ruminantium.</a> Parasitol. 107, 257-263 (1993).</li><li>Gregson, J. D., Smith, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ticks.">Ticks.</a> Insect Colonization and Mass Production. , 49-72 (1966).</li><li>Sonenshine, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology of Ticks. 2, (1993).</li><li>Bouchard, K. R., Wikel, S. K., Marquaedt, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Care,+maintenance,+and+experimental+infestation+of+ticks+in+the+laboratory+setting.">Care, maintenance, and experimental infestation of ticks in the laboratory setting.</a> Biology of Disease Vectors. , 705-711 (2005).</li><li>Schumaker, T. S., Barros, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+cycle+of+Ornithodoros+(Alectorobius)+talaje.+(Acari:Argasidae)+in+laboratory.">Life cycle of Ornithodoros (Alectorobius) talaje. (Acari:Argasidae) in laboratory.</a> J Med Entomol. 32, 249-254 (1995).</li><li>Banks, C. W., Oliver, J. H., Hopla, C. E., Dotson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+life+cycle+of+Ixodes+woodi+(Acari:Ixodidae).">Laboratory life cycle of Ixodes woodi (Acari:Ixodidae).</a> J. Med. Entomol. 35, 177-179 (1998).</li><li>James, A. M., Oliver, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+and+host+preference+of+immature+Ixodes+dammini,I.scapularis,and+I.pacificus.(Acari:Ixodidae).">Feeding and host preference of immature Ixodes dammini,I.scapularis,and I.pacificus.(Acari:Ixodidae).</a> J. Med. Entomol. 27, 324-330 (1990).</li></ol>

Критические шаги в рамках Протокола Важно иметь несколько уровней мер безопасности при выращивании клещей, чтобы избежать случайного выхода. Использование липкой ленты и водяного рва имеет решающее значение для обеспечения безопасности. Важно держать анестезированную...

Клещи являются обязательными гематофагическими эктопаразитами позвоночных и распространены во всем мире. В Соединенных Штатах, по крайней мере, 11 видов клещей являются переносчиками патогенов, имеющих важное значение для общественного здоровья 1 . Ixodes scapularis ответственен за передачу нескольких патогенов, таких как возбудители болезни Лайма ( Borrelia burgdorferi ), рецидивирующая лихорадка ( B.miyamotoi), гранулоцитарный анаплазмоз человека ( Anaplasma phagocytophilum ) и бабезиоз (Babesia spp.). Несмотря на важность I. scapularis как вектор болезни, сбор этих паукообразных в изобилии из дикой природы для исследований в лаборатории не всегда возможен. Таким образом, производство здоровых лабораторных клещей имеет важное значение для изучения биологии клещей и клещевого патогенного взаимодействия. Жизненный цикл всех тяжелых клещей (семейство Ixodidae), включая I. scapularis, состоит из яйца и трех активныхЕ стадии: личинка, нимфа и взрослый. Каждая активная стадия питается позвоночным хозяином. Сложные взаимодействия, которые происходят между клещами и их хозяевами в течение нескольких дней прикрепления и кормления, почти невозможны для репликации с использованием искусственных фидеров, и вряд ли они обеспечат достаточное количество сытых клещей для массового выращивания 2 , 3 , 4 . Поэтому живые мыши и кролики чаще всего используются в качестве хозяев для выращивания незрелых (личинок и нимф) и зрелых стадий (взрослых) клещей, соответственно. Требование множественных хостов для кроветворения в течение каждой стадии развития усложняет клещевое разведение и требует значительных затрат времени и средств 5 , 6 , 7 . Большинство протоколов размножения клещей требуют удерживания мышей в клетке 7 или 8 в подвесной проволочной сетке или в цилиндрическом саGE таких размеров , что животное не может свободно перемещаться и жених себя 6, 9, 10. Эти цилиндрические клетки, которые затем переносили в обувной коробке клетку с проволочной сеткой. Напитавшиеся, отдельные клещи затем собирает из воды под ним. Тем не менее, этот метод приводит к обнажая кормили клещей воды , загрязненной мочой и калом , которые могут увеличить рост грибковой и тикают смертность 9. Кроме того, это увеличивает возможность клеща выхода из воды желоба, а также вызывает стресс у мышей. Чтобы обойти эти проблемы, мы здесь демонстрируем личиночное кормление клеща на мышах в течение пластик коробки типа одноразовых клеток. Этот метод позволяет нормальное поведение мышей, увеличивается напитавшихся восстановление тик, тик и уменьшает смертность вследствие загрязнения.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="865">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Puralube vet ointment</td>
			<td style="width:207px;">Amazon</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:323px;">Available from any Pet store or online store</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable mouse cage</td>
			<td>&#160;Innovive, San Diego, CA&#160;</td>
			<td>MV 2</td>
			<td>Set of bottom and lid</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">White Alpha dri bedding&#160;</td>
			<td>Lab Supply, Fort Worth, TX</td>
			<td>&#160;ALPHA-Dri&#8482;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rearing ixodes scapularis, the black-legged tick: feeding immature stages on mice

Ixodes scapularis , вектор болезни Лайма, является одним из наиболее важных переносчиков заболеваний в восточной и среднезападной части Соединенных Штатов. Этот вид представляет собой трёхмерный клещ, для которого требуется кровь из позвоночного хозяина для каждой стадии развития, а взрослым самкам требуется кровь для размножения. Клещи личинок прикрепляются к хозяину в течение 3 - 5 дней для кормления и высадки хозяина при полном насыщении. Эта зависимость от нескольких разных хостов и длительное время присоединения для нагрубания затрудняет выращивание клещей в лабораторных условиях. Тем не менее, чтобы понять биохимию клещей и клещевые патогенные взаимодействия, производство здоровых, лабораторно выращенных клещей очень важно. Здесь мы демонстрируем простой, рентабельный протокол для незрелого клещевого кормления на мышах. Мы модифицировали существующие протоколы для снижения стресса у мышей и увеличили успех клещей и выживаемость, используя одноразовые клетки без дна сетки, чтобы избежать контакта клещей wiЙ воды, загрязненной мочой мышей и фекалиями.

Мы модифицировали существующие протоколы Tick выращивания 6, 10 для улучшения эффективности кормления и снижение нагрузки на хосте мыши. Полученные результаты показывают, что стандартные садки коробки типа мышей хорошо подходят для клещ?...

Watch this Scientific Journal Video about Rearing Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice at JoVE.com

Rearing Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice

Производство здоровых лабораторными выращены клещи необходимо исследования по клещу биологии, и тик-патоген взаимодействий. Здесь мы демонстрируем простой протокол для незрелого кормления клеща, что является экономически эффективными и менее напряженным для мышей.

разведение<em&gt; Черноногий клещ,</em&gt; Черный ноги Tick: Кормление незрелых стадий на мышах

Ixodes scapularis, the vector of Lyme disease, is one of the most important disease vectors in the eastern and Midwestern United States. This species is a ...

The overall goal of this tick-feeding protocol is to improve the existing standards by increasing the survival of blood-fed ticks, while reducing the stress to the rodent host. In addition to simplifying tick colony rearing, this method provides an easier way of collecting number of blood-fed ticks in a single collection day, which is essential to answer key biological questions in macrobiology fields. The main advantage of this technique is that ticks are not exposed to water containing mouse excreta, thereby reducing tick mortality.In addition, ticks can be collected on a single day, and this reduces stress to the mouse. To house tick vials for counting, make a container that allows minimal escape. Stick double-sided tape all around the top edges of a plastic container.Then, fill the container with about two centimeters of water. Next, place another small box or dish centrally in the container, and fill it with about one centimeter of water, so it sinks and stays in position. Store vials of tick larvae or nymphs inside this box or dish.To count the ticks for an infestation, use a microscope and a fine paintbrush to remove larvae or nymphs from the vial. Transfer 50 larvae or 25 nymphs to a scintillation vial. As soon as a vial is fully loaded, cover it with nylon mesh or organdy cloth screen, and secure the cover with tight rubber bands.Designate a separate room to house mice infested with ticks. To prevent accidental tick escape, place a sticky mat or double-sided carpet tape outside the room, and place another mat inside the door of the room. First, prepare an area to handle the ticks near the mice.Use a white or light-colored workbench. Make a border of double-sided tape around the perimeter of the work area on the bench. Now, anesthetize a mouse with isoflurane.When ready, transfer the mouse to a heating pad covered with paper towels, and attach a nose cone to deliver isoflurane continuously. Check the level of anesthesia using a toe pinch. Adjust the anesthetic based on the breathing pattern.80 to 230 breaths per minute is normal. Reduce the isoflurane if the breathing is slower. Also, apply a petroleum-jelly-based ophthalmic ointment to the eyes.Now, take one vial of 50 larvae or 25 nymphs and, using a paintbrush, transfer the ticks to the mouse. Place the ticks under the fur on the head between the ears. After placing the last tick, keep the mouse anesthetized for 20 minutes, so the ticks can attach before the mouse tries to remove them.After 20 minutes, return the mouse to a new home cage with white bedding for improved tick visibility. Include some toys and provide ad lib access to water and food. Use disposable boxes with tight-fitting lids.Next, place the home cage within a larger rat or gerbil cage that has double-sided sticky tape around the upper internal edge of the walls. Then, fill the space between the cages with about three centimeters of water. Immature ticks will detach after three to six days of feeding.From day three and onward, check the cages and the surrounding water for engorged ticks on a daily basis. Collect the detached ticks using a paintbrush or soft forceps, and transfer them to clean scintillation vials capped with nylon mesh cloths secured with rubber bands. On day seven, anesthetize the mouse as before, and check for any remaining attached ticks.Also, thoroughly check the bedding, the food trough and the water. Then, euthanize the mouse and autoclave the disposable cages, bedding, water bottle and food trough to eliminate any remaining ticks. House the engorged ticks in a controlled incubator.Within 12 to 18 weeks, the ticks should molt. At least once a week, check the ticks under the microscope for mold. If any mold is detected, wash the surviving ticks with 70%ethanol for five minutes.Then, rinse the survivors in water and transfer them to a filter paper to dry. Once clean and dry, transfer the ticks to new, clean vials, and continue their life cycle. Most ticks climbed up the walls of the containers after feeding, and were easy to collect.Ticks rarely escaped the mouse cages. The white bedding provided a good contrast to detect fed ticks. During collections, most ticks detached by day four.A few waited until day five to release, and by day seven, no mouse was carrying any ticks. About 2/3 of ticks were able to attach and feed to engorgement. The mice all remained healthy and did not show any signs of discomfort.Once mastered, this method can provide hundreds of blood-fed ticks in a single collection day. While performing this procedure, it's important to remember to wear full PPE to prevent accidental tick attachment.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Rearing Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice

Methods for Rapid Transfer and Localization of Lyme Disease Pathogens Within the Tick Gut

Методы для быстрой передачи и локализации патогенов Болезнь Лайма В Tick Gut

Lyme disease is caused by infection with the spirochete pathogen Borrelia burgdorferi, which is maintained in nature by a tick-rodent infection cycle 1.  ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Слюна, слюнные железы, и гемолимфы Коллекция от иксодовых клещей Scapularis

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Feeding of Ticks on Animals for Transmission and Xenodiagnosis in Lyme Disease Research

Кормление клещей на животных для передачи и ксенодиагностика в Лайма исследования заболеваний

Transmission of the etiologic agent of Lyme disease, Borrelia burgdorferi, occurs by the  attachment and blood feeding of Ixodes species ticks on ...

Generation of Immature, Mature and Tolerogenic Dendritic Cells with Differing Metabolic Phenotypes

Поколение незрелые, зрелые и толерогенную дендритных клеток с отличающимися метаболический фенотипов

Immune response results from a complex interplay between the antigen non-specific innate immune system and the antigen specific adaptive immune system. ...

Development of a Hepatitis B Virus Reporter System to Monitor the Early Stages of the Replication Cycle

Разработка системы Вирус Reporter гепатита B для мониторинга на ранних стадиях цикла репликации

Currently, it is possible to construct recombinant forms of various viruses, such as human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) and hepatitis C virus (HCV), ...

Phenotypic Analysis of Rodent Malaria Parasite Asexual and Sexual Blood Stages and Mosquito Stages

Фенотипический анализ грызунов малярии паразита асексуальных и сексуальной крови этапов и комаров этапов

Recent advances in genetics and systems biology technologies have promoted our understanding of the biology of malaria parasites on the molecular level. ...

Generating Recombinant Avian Herpesvirus Vectors with CRISPR/Cas9 Gene Editing

Генерации векторов рекомбинантных птичьего герпеса с ТРИФОСФАТЫ/Cas9 гена редактирования

Herpesvirus of turkeys (HVT) is an ideal viral vector for the generation of recombinant vaccines against a number of avian diseases, such as avian ...

Cigarette Smoke Exposure in Mice using a Whole-Body Inhalation System

Воздействие сигаретного дыма у мышей с помощью системы вдыхания всего тела

Close to 14% of adults in the United States were reported to smoke cigarettes in 2018. The effects of cigarette smoke (CS) on lungs and cardiovascular ...

Feeding and Quantifying Animal-Derived Blood and Artificial Meals in Aedes aegypti Mosquitoes

Feeding and Quantifying Animal-Derived Blood and Artificial Meals in Aedes aegypti Mosquitoes

Кормление и количественная оценка крови и искусственного питания животных у комаров Aedes aegypti

Females of certain mosquito species can spread diseases while biting vertebrate hosts to obtain protein-rich blood meals required for egg development. In ...

Standard Membrane Feeding Assay for the Detection of Plasmodium falciparum Infection in Anopheles Mosquito Vectors

Standard Membrane Feeding Assay for the Detection of Plasmodium falciparum Infection in Anopheles Mosquito Vectors

Стандартный анализ мембранного питания для выявления инфекции Plasmodium falciparum у комаров-переносчиков Anopheles

Malaria remains one of the most devastating diseases worldwide and, to date, the African region is still responsible for 94% of all cases worldwide. This ...