Name: dissection of larval zebrafish gonadal tissue
Uploaded: 2017-04-26T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue at JoVE.com

Wij danken C Zhang voor vissen zorg. Dit werk werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (31171074, 31371099 en 31571067 naar GP) en door de Pujiang Talent Project (09PJ1401900 aan GP).

Zebravis experimenten werden goedgekeurd door de Fudan University Institutional Animal Care en gebruik Comite. Zebravis zijn gerezen en gekweekt volgens standaardwerkwijzen 20. 1. Voorbereidingen <ol><li> Cultiveren 17 dpf en 25 dpf larvale zebravis <ol><li> Transfer 2 mannelijke en 2 vrouwelijke volwassen zebravissen (gezond, 3 tot 6 maanden oud, laboratorium AB-stam) tot een kruispunt tank in de late namiddag voor de kruising dag. Scheid de mannen en vrouwen met e...

<ol>
	<li>Wilson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wild+sex+in+zebrafish:+loss+of+the+natural+sex+determinant+in+domesticated+strains.">Wild sex in zebrafish: loss of the natural sex determinant in domesticated strains.</a> Genetics. 198 (3), 1291-1308 (2014).</li><li>Liew, W. C., Orban, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+sex:+a+complicated+affair.">Zebrafish sex: a complicated affair.</a> Genomics. 13 (2), 172-187 (2014).</li><li>Orban, L., Sreenivasan, R., Olsson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+and+winding+roads:+Testis+differentiation+in+zebrafish.">Long and winding roads: Testis differentiation in zebrafish.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 312 (1-2), 35-41 (2009).</li><li>Blaser, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transition+from+non-motile+behaviour+to+directed+migration+during+early+PGC+development+in+zebrafish.">Transition from non-motile behaviour to directed migration during early PGC development in zebrafish.</a> J. Cell Sci. 118, 4027-4038 (2005).</li><li>Wang, X. G., Orban, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-M&#252;llerian+hormone+and+11+&#946;-hydroxylase+show+reciprocal+expression+to+that+of+aromatase+in+the+transforming+gonad+of+zebrafish+males.">Anti-M&#252;llerian hormone and 11 &#946;-hydroxylase show reciprocal expression to that of aromatase in the transforming gonad of zebrafish males.</a> Dev. Dynam. 236 (5), 1329-1338 (2007).</li><li>Siegfried, K. R., N&#252;sslein-Volhard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germ+line+control+of+female+sex+determination+in+zebrafish.">Germ line control of female sex determination in zebrafish.</a> Dev. Biol. 324 (2), 277-287 (2008).</li><li>Uchida, D., Yamashita, M., Kitano, T., Iguchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+apoptosis+during+the+transition+from+ovary-like+tissue+to+testes+during+sex+differentiation+of+juvenile+zebrafish.">Oocyte apoptosis during the transition from ovary-like tissue to testes during sex differentiation of juvenile zebrafish.</a> J. Exp. Biol. 205 (Pt 6), 711-718 (2002).</li><li>Groh, K. J., Sch&#246;nenberger, R., Eggen, R. I. L., Segner, H., Suter, M. J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+protein+expression+in+zebrafish+during+gonad+differentiation+by+targeted+proteomics.">Analysis of protein expression in zebrafish during gonad differentiation by targeted proteomics.</a> Gen. Comp. Endocr. 193, 210-220 (2013).</li><li>Siegfried, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+search+of+determinants:+gene+expression+during+gonadal+sex+differentiation.">In search of determinants: gene expression during gonadal sex differentiation.</a> J. Fish Biol. 76 (8), 1879-1902 (2010).</li><li>Small, C. M., Carney, G. E., Mo, Q., Vannucci, M., Jones, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microarray+analysis+of+sex-+and+gonad-biased+gene+expression+in+the+zebrafish:+evidence+for+masculinization+of+the+transcriptome.">A microarray analysis of sex- and gonad-biased gene expression in the zebrafish: evidence for masculinization of the transcriptome.</a> BMC Genomics. 10, 579 (2009).</li><li>Chiang, E. F., Yan, Y. L., Guiguen, Y., Postlethwait, J., Chung, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+Cyp19+(P450+aromatase)+genes+on+duplicated+zebrafish+chromosomes+are+expressed+in+ovary+or+brain.">Two Cyp19 (P450 aromatase) genes on duplicated zebrafish chromosomes are expressed in ovary or brain.</a> Mol. Biol. Evol. 18 (4), 542-550 (2001).</li><li>Kishida, M., Callard, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+cytochrome+P450+aromatase+isoforms+in+zebrafish+(Danio+rerio)+brain+and+ovary+are+differentially+programmed+and+estrogen+regulated+during+early+development.">Distinct cytochrome P450 aromatase isoforms in zebrafish (Danio rerio) brain and ovary are differentially programmed and estrogen regulated during early development.</a> Endocrinology. 142 (2), 740-750 (2001).</li><li>Rodr&#237;guez-Mar&#237;, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+expression+pattern+of+zebrafish+anti-M&#252;llerian+hormone+(amh)+relative+to+sox9a,+sox9b,+and+cyp19a1a,+during+gonad+development.">Characterization and expression pattern of zebrafish anti-M&#252;llerian hormone (amh) relative to sox9a, sox9b, and cyp19a1a, during gonad development.</a> Gene Expr.Patterns. 5 (5), 655-667 (2005).</li><li>Krovel, A. V., Olsen, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+a+vas::EGFP+transgene+in+primordial+germ+cells+of+the+zebrafish.">Expression of a vas::EGFP transgene in primordial germ cells of the zebrafish.</a> Mech Dev. 116 (1-2), 141-150 (2002).</li><li>Krovel, A. V., Olsen, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+dimorphic+expression+pattern+of+a+splice+variant+of+zebrafish+vasa+during+gonadal+development.">Sexual dimorphic expression pattern of a splice variant of zebrafish vasa during gonadal development.</a> Dev. Biol. 271 (1), 190-197 (2004).</li><li>Tzung, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+depletion+of+primordial+germ+cells+in+zebrafish+promotes+testis+formation.">Early depletion of primordial germ cells in zebrafish promotes testis formation.</a> Stem Cell Reports. 4 (1), 61-73 (2015).</li><li>Hsiao, C., Tsai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+zebrafish+with+fluorescent+germ+cell:+a+useful+tool+to+visualize+germ+cell+proliferation+and+juvenile+hermaphroditism+in+vivo.">Transgenic zebrafish with fluorescent germ cell: a useful tool to visualize germ cell proliferation and juvenile hermaphroditism in vivo.</a> Dev. Biol. 262 (2), 313-323 (2003).</li><li>Jorgensen, A., Nielsen, J. E., Morthorst, J. E., Bjerregaard, P., Leffers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser+capture+microdissection+of+gonads+from+juvenile+zebrafish.">Laser capture microdissection of gonads from juvenile zebrafish.</a> Reprod Biol Endocrinol. 7, 97 (2009).</li><li>Chen, S., Zhang, H., Wang, F., Zhang, W., Peng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=nr0b1+(DAX1)+mutation+in+zebrafish+causes+female-to-male+sex+reversal+through+abnormal+gonadal+proliferation+and+differentiation.">nr0b1 (DAX1) mutation in zebrafish causes female-to-male sex reversal through abnormal gonadal proliferation and differentiation.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 433, 105-116 (2016).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book: A Guide for The Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>Liew, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polygenic+sex+determination+system+in+zebrafish.">Polygenic sex determination system in zebrafish.</a> PLoS One. 7 (4), e34397 (2012).</li><li>Parichy, D. M., Elizondo, M. R., Mills, M. G., Gordon, T. N., Engeszer, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+table+of+postembryonic+zebrafish+development:+staging+by+externally+visible+anatomy+of+the+living+fish.">Normal table of postembryonic zebrafish development: staging by externally visible anatomy of the living fish.</a> Dev Dyn. 238 (12), 2975-3015 (2009).</li><li>Gupta, T., Mullins, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+Organs+from+the+Adult+Zebrafish.">Dissection of Organs from the Adult Zebrafish.</a> J. Vis Exp. (37), (2010).</li><li>Arnaout, R., Reischauer, S., Stainier, D. Y. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+of+Adult+Zebrafish+Hearts+for+High-throughput+Applications.">Recovery of Adult Zebrafish Hearts for High-throughput Applications.</a> J. Vis Exp. (94), (2014).</li><li>Gerlach, G. F., Schrader, L. N., Wingert, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+the+Adult+Zebrafish+Kidney.">Dissection of the Adult Zebrafish Kidney.</a> J. Vis Exp. (54), (2011).</li><li>Yoon, C., Kawakami, K., Hopkins, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+vasa+homologue+RNA+is+localized+to+the+cleavage+planes+of+2-+and+4-cell-stage+embryos+and+is+expressed+in+the+primordial+germ+cells.">Zebrafish vasa homologue RNA is localized to the cleavage planes of 2- and 4-cell-stage embryos and is expressed in the primordial germ cells.</a> Development. 124 (16), 3157-3165 (1997).</li><li>Braat, A. K., Speksnijder, J. E., Zivkovic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germ+line+development+in+fishes.">Germ line development in fishes.</a> Int. J. Dev. Biol. 43 (7), 745-760 (1999).</li><li>Huang, H. Y., Ketting, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+zebrafish+gonads+for+RNA+isolation.">Isolation of zebrafish gonads for RNA isolation.</a> Methods Mol Biol. 1093, 183-194 (2014).</li></ol>

De zebravis is uitgegroeid tot een krachtig model en wordt veelvuldig gebruikt in de ontwikkeling en ziekte-gerelateerd onderzoek. De methoden voor het isoleren van organen bij volwassen zebravis, zoals hersenen, hart, gonade, en nieren, zijn goed gedocumenteerd 23, 24, 25. Als gevolg van de kleine omvang en dynamische herinrichting van de gonadale weefsels in het larvale zebravis, isolatie van gonadale weefsel is een uitdagend...

De belangrijkste vrouwelijke geslacht determinant in het wild levende zebravis chromosoom 4 is verloren of gewijzigd in de gedomesticeerde zebravis (dwz gemeenschappelijke lab stammen) 1. In plaats daarvan hebben ze een polygene geslachtsbepaling systeem vergezeld door omgevingsfactoren zoals temperatuur, hypoxie, voedselbeschikbaarheid en bevolkingsdichtheid. De gedetailleerde mechanismen van de zebravis sex ontwikkeling worden niet volledig begrepen. Fundamentele vragen zoals wanneer zebravis geslachtsbepaling optreedt, wat de primaire geslachtsbepaling signaal (s) is / zijn, en welke genen reguleren de eerste stap van gonade omzetting nog worden beantwoord 2, 3. In het proces van zebravis seks ontwikkeling, hebben een aantal belangrijke stadia erkend. In de vroege fase van ontwikkeling, uitgaande van 4 HPF (uur na bevruchting) primordiale kiemcellen (PGC) ondergaan specificatie, migratie en genitale ridgeproliferatie. PGC aantallen en onderlinge interacties tussen kiemcellen en somatische cellen zijn belangrijk voor differentiatie 4 gonaden. Op 13 dpf (dagen na de bevruchting), de geslachtsklieren zijn in de ongedifferentieerde fase. Uiterlijk op 17 dpf, de geslachtsklieren zich ontwikkelen tot bi-potentieel eierstokken in zowel de toekomstige vrouwen en mannen. De apoptose-afhankelijke overgang van de eierstok naar de testis beginnen bij 21 tot 25 dpf en kunnen gedurende een aantal weken. Met 35 dpf, heeft het geslacht van de gonaden bepaald en geslacht-specifieke productie van gameten gang in beide eierstokken en testes 5, 6, 7. Tot op heden hebben diverse kandidaat-genen en mechanismen van geslachtsbepaling voorgesteld. Proteoomanalyse en transcriptoom analyse hebben veel genen die seksueel dimorfe expressie en deze genen zijn gebruikt om geslachtsdifferentiatie studie in zebravis 8, </sup&gt; 9, 10. Bijvoorbeeld, in larvale zebravis, de cyp19a1a gen specifiek tot expressie gebracht in de eierstok maar niet in de testis 11, 12. Bovendien wordt AMH gen zwak tot expressie gebracht in de follikel granulosa cellen, maar sterk testis Sertoli cellen 13. Daarentegen wordt vasa gen continu tot expressie gebracht in de geslachtscellen van zowel vrouwelijke als mannelijke zebravis, waardoor het een geschikte gonade marker 14, 15. Onderzoeken gonadale genexpressieniveaus is cruciaal voor het moleculaire mechanisme van de geslachtsbepaling en differentiatie begrijpen name de bi-potentiaal eierstok fase 3, 9. De geringe omvang van larvale zebravis en dienovereenkomstig kleine gonaden compliceren de isolatie van gonadal weefsel voor verdere moleculaire analyse. Eerdere studies gebruikt ontleed gehele heupgebied tussen opercula en anale poriën 16. Dit preparaat hoewel bevattende geslachtsklieren, bestaat uit meerdere weefsels en organen. Als alternatief kunnen transgene dieren met gonaden-specifiek GFP expressie zoals vasa: EGFP werden voor gonaden weefsel isoleren door fluorescentie geactiveerde celsortering (FACS) en laser capture microdissectie 17, 18. Maar hun wijdverbreide toepassing is beperkt. We beschrijven hier een eenvoudige procedure om gonaden weefsel te isoleren van larvale zebravis 17 dpf en 25 dpf. We tonen de positie van de geslachtsklieren met betrekking tot andere organen en isoleer de morfologisch intact geslachtsklieren uit de omliggende weefsels. We de gonaden-specifieke genen zoals vasa en cyp19a1a tonen verder zijn sterk tot expressie gebracht in de geïsoleerde geslachtsklieren opzichte van de romp weefsel door kwantitatieve PCR (qPCR) analyse. Het huidige protocol maakt de identificatie, isolatie, zuivering en RNA-amplificatie van specifieke gonadale genen van larvale zebravis, waardoor verdere moleculaire analyse gonadale weefsel 19 mogelijk.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="975">
	<tbody>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Cell culture dish 100 mm</td>
			<td style="width:208px;">Corning</td>
			<td style="width:208px;">430167</td>
			<td style="width:351px;">For embryo incubation</td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:208px;">20 X EM</td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:351px;">For a 1 liter needed: add 17.5 g NaCl, 0.75 g KCl and 2.9 g CaCl.2H2O; then add 0.41 g KH2PO4, 0.412 g Na2HPO4 anhydrous and 4.9 g MgSO4. 7H2O.</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">1 X EM</td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:351px;">Dilute 20 X EM in distilled water</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">AGAROSE G-10</td>
			<td style="width:208px;">Gene</td>
			<td style="width:208px;">121985</td>
			<td style="width:351px;">For preparing the 2% agar plates&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Trizol Reagent</td>
			<td style="width:208px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:208px;">15596-026</td>
			<td style="width:351px;">For RNA isolation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Meter glass</td>
			<td style="width:208px;">Shen Bo</td>
			<td style="width:208px;">250 ml</td>
			<td style="width:351px;">For preparing the 2% agar plates&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Microwave Oven</td>
			<td style="width:208px;">Midea</td>
			<td style="width:208px;">M1-211A</td>
			<td style="width:351px;">For heating the AGAR</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">TWEEZER DUMONT#5INOX</td>
			<td style="width:208px;">World Precision Instrument</td>
			<td style="width:208px;">500341</td>
			<td style="width:351px;">For dissection</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Stereomicroscope</td>
			<td style="width:208px;">Motic</td>
			<td style="width:208px;">SMZ168</td>
			<td style="width:351px;">For dissection</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Pure water equipment</td>
			<td style="width:208px;">Millipore</td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:351px;"></td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:208px;">Ringer&#8217;s solution</td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:351px;">For a 1 liter needed: Add 6.78g NaCl, 0.22 g KCl, 0.26 g CaCl2 and 1.19 g Hepes; then fill to 1 L; Adjust pH to 7.2. Sterilize by filtration and keep in an autoclaved clear polycarbonate container.</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Transfer pipette</td>
			<td style="width:208px;">Samco</td>
			<td style="width:208px;">202, 204</td>
			<td style="width:351px;"></td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Metal bath</td>
			<td style="width:208px;">QiLinbeier</td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:351px;">Model GL-150</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Microscope</td>
			<td style="width:208px;">Leica&#160;</td>
			<td style="width:208px;">M205 FA</td>
			<td style="width:351px;">For photomicrograph</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:208px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:208px;">5417R</td>
			<td style="width:351px;"></td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Micro Scale RNA Isolation Kit&#160;</td>
			<td style="width:208px;">Ambion</td>
			<td style="width:208px;">AM1931</td>
			<td style="width:351px;">For RNA isolation from gonad tissues</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Dnase I&#160;</td>
			<td style="width:208px;">Sigma</td>
			<td style="width:208px;">AMPD1-1KT</td>
			<td style="width:351px;">For DNA digestion in the RNA solution&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit</td>
			<td style="width:208px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:208px;">#K1631</td>
			<td style="width:351px;">For&#160; first-strand cDNA synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Rnase H&#160;</td>
			<td style="width:208px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:208px;">#EN0202</td>
			<td style="width:351px;">For digesting the residual RNA in the cDNA solution.</td>
		</tr>
		<tr height="98">
			<td height="98" style="height:98px;width:208px;">SYBR Green Realtime PCR Master Mix</td>
			<td style="width:208px;">TOYOBO</td>
			<td style="width:208px;">QPK-201</td>
			<td style="width:351px;">This product is a Taq DNA polymerase-based 2 x master mix for real-time PCR and&#160; applicable for intercalation assay with SYBR Green I.</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Spectrophotometer</td>
			<td style="width:208px;">Ne Drop</td>
			<td style="width:208px;">OD-2000+</td>
			<td>Measuring the concentration of the total RNA</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Mastercycler</td>
			<td style="width:208px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:208px;">AG 22331 Hamburg</td>
			<td>gene expression profiling</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection of larval zebrafish gonadal tissue

Hoewel wild zebravis hebben een ZZ / ZW sex-bepalingssysteem werden geacclimatiseerd zebravis het geslacht chromosoom verloren. Ze maken gebruik van een polygene geslachtsbepaling systeem, waarbij meerdere genen verspreid over het genoom gezamenlijk het geslacht identiteit exemplaren bepalen. Momenteel is de genen die betrokken zijn bij het reguleren van gonade ontwikkeling en hoe ze werken blijven ongrijpbaar. Normaal gesproken, het isoleren van gonadale weefsel is de eerste stap om het geslacht ontwikkelingsprocessen te onderzoeken. Hier presenteren we een procedure om gonadale weefsel te isoleren van 17 dpf (dagen na de bevruchting) en 25 dpf zebravis larven. De geïsoleerde gonadale weefsel kan vervolgens worden onderzocht door morfologie en genexpressie profilering.

Dissecties van de geslachtsklieren werden uitgevoerd op AB stam larvale zebravis. Figuur 1 toont typische gonadale weefsel van larvale zebravis 17 dpf en 25 dpf. Eerst wordt de huid en de spieren van een zijde van de buik gesneden om de interne organen bloot. Na verwijdering van de massa van inwendige organen, de zwemblaas met de gonaden blijven in de kofferbak. De gonaden werd aan de ventrale zijde van zwemblaas (pijl in figuur ...

Watch this Scientific Journal Video about Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue at JoVE.com

Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue

Hier presenteren we een protocol voor het isoleren gonadale weefsel van larvale zebravis, die onderzoeken zebravis geslachtsdifferentiatie en het onderhoud vergemakkelijkt.

Dissectie van larvale zebravis Gonadale Tissue

Although wild zebrafish possess a ZZ/ZW sex-determination system, domesticated zebrafish have lost the sex chromosome. They utilize a polygenic sex ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Large-scale Zebrafish Embryonic Heart Dissection for Transcriptional Analysis

Grootschalige de zebravis embryonale Hart Dissection voor Transcriptionele Analyse

The zebrafish embryonic heart is composed of only a few hundred cells, representing only a small fraction of the entire embryo. Therefore, to prevent the ...

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

Live-Imaging van aangeboren immuunsysteem en preneoplastische cel interacties Met behulp van een Inducible Gal4 / UAS Expression System in larvale zebravis Skin

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Capturing Tissue Repair in Zebrafish Larvae with Time-lapse Brightfield Stereomicroscopy

Vastleggen van Tissue Repair in zebravis Larven met Time-lapse Helderveld stereomicroscopie

The zebrafish larval tail fin is ideal for studying tissue regeneration due to the simple architecture of the larval fin-fold, which comprises of two ...

Visualizing the Interrenal Steroidogenic Tissue and Its Vascular Microenvironment in Zebrafish

Het visualiseren van de Interrenal steroïdogene Tissue en haar Vasculaire Microenvironment in zebravis

This protocol introduces how to detect differentiated interrenal steroidogenic cells through a simple whole-mount enzymatic activity assay. Identifying ...

Dissection and Culture of Mouse Embryonic Kidney

Dissectie en Cultuur van Muis Embryonale Nier

The goal of this protocol is to describe a method for the dissection, isolation, and culture of mouse metanephric rudiments. 
During mammalian kidney ...

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Oprichting van larvale zebravis als Model van een dier te onderzoeken Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

Following Endocardial Tissue Movements via Cell Photoconversion in the Zebrafish Embryo

Volgende Endocardial weefsel mutaties via de cel Photoconversion in het Embryo van de zebravis

During embryogenesis, cells undergo dynamic changes in cell behavior, and deciphering the cellular logic behind these changes is a fundamental goal in the ...

Adult Zebrafish Injury Models to Study the Effects of Prednisolone in Regenerating Bone Tissue

Volwassen Zebrafish letsel modellen te bestuderen van de effecten van prednisolon in het herstel van botweefsel

Zebrafish are able to regenerate various organs, including appendages (fins) after amputation. This involves the regeneration of bone, which regrows ...

Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode

Electroretinogram opname in larvale Zebrafish met behulp van A roman kegel-vormig spons-tip elektrode

The zebrafish (Danio rerio) is commonly used as a vertebrate model in developmental studies and is particularly suitable for visual neuroscience. For ...

Quantifying Liver Size in Larval Zebrafish Using Brightfield Microscopy

Kwantificerende levergrootte bij larvale zebravissen met behulp van Brightfield Microscopie

In several transgenic zebrafish models of hepatocellular carcinoma (HCC), hepatomegaly can be observed during early larval stages. Quantifying larval ...