Name: dissection of larval zebrafish gonadal tissue
Uploaded: 2017-04-26T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue at JoVE.com

Wir danken C Zhang für Fisch Pflege. Diese Arbeit wurde von der National Natural Science Foundation of China (31171074, 31371099 und 31571067 bis GP) und durch das Pujiang Talent Project (09PJ1401900 zu GP) unterstützt.

Zebrafisch-Experimente wurden von der Fudan University Institutional Animal Care und Use Committee genehmigt. Zebrafisch wurde angehoben und gezüchtet nach Standardverfahren 20. 1. Vorbereitungen <ol><li> Kultivieren 17 dpf und 25 dpf larvalen Zebrabärbling <ol><li> Transfer 2 männliche und 2 weibliche erwachsene Zebrabärbling (gesund, 3 bis 6 Monate alt, Labor AB-Stamm) an einer Kreuzung Tank am späten Nachmittag vor der Kreuzung Tag. Trennen Sie die Männchen...

<ol>
	<li>Wilson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wild+sex+in+zebrafish:+loss+of+the+natural+sex+determinant+in+domesticated+strains.">Wild sex in zebrafish: loss of the natural sex determinant in domesticated strains.</a> Genetics. 198 (3), 1291-1308 (2014).</li><li>Liew, W. C., Orban, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+sex:+a+complicated+affair.">Zebrafish sex: a complicated affair.</a> Genomics. 13 (2), 172-187 (2014).</li><li>Orban, L., Sreenivasan, R., Olsson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+and+winding+roads:+Testis+differentiation+in+zebrafish.">Long and winding roads: Testis differentiation in zebrafish.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 312 (1-2), 35-41 (2009).</li><li>Blaser, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transition+from+non-motile+behaviour+to+directed+migration+during+early+PGC+development+in+zebrafish.">Transition from non-motile behaviour to directed migration during early PGC development in zebrafish.</a> J. Cell Sci. 118, 4027-4038 (2005).</li><li>Wang, X. G., Orban, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-M&#252;llerian+hormone+and+11+&#946;-hydroxylase+show+reciprocal+expression+to+that+of+aromatase+in+the+transforming+gonad+of+zebrafish+males.">Anti-M&#252;llerian hormone and 11 &#946;-hydroxylase show reciprocal expression to that of aromatase in the transforming gonad of zebrafish males.</a> Dev. Dynam. 236 (5), 1329-1338 (2007).</li><li>Siegfried, K. R., N&#252;sslein-Volhard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germ+line+control+of+female+sex+determination+in+zebrafish.">Germ line control of female sex determination in zebrafish.</a> Dev. Biol. 324 (2), 277-287 (2008).</li><li>Uchida, D., Yamashita, M., Kitano, T., Iguchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+apoptosis+during+the+transition+from+ovary-like+tissue+to+testes+during+sex+differentiation+of+juvenile+zebrafish.">Oocyte apoptosis during the transition from ovary-like tissue to testes during sex differentiation of juvenile zebrafish.</a> J. Exp. Biol. 205 (Pt 6), 711-718 (2002).</li><li>Groh, K. J., Sch&#246;nenberger, R., Eggen, R. I. L., Segner, H., Suter, M. J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+protein+expression+in+zebrafish+during+gonad+differentiation+by+targeted+proteomics.">Analysis of protein expression in zebrafish during gonad differentiation by targeted proteomics.</a> Gen. Comp. Endocr. 193, 210-220 (2013).</li><li>Siegfried, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+search+of+determinants:+gene+expression+during+gonadal+sex+differentiation.">In search of determinants: gene expression during gonadal sex differentiation.</a> J. Fish Biol. 76 (8), 1879-1902 (2010).</li><li>Small, C. M., Carney, G. E., Mo, Q., Vannucci, M., Jones, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microarray+analysis+of+sex-+and+gonad-biased+gene+expression+in+the+zebrafish:+evidence+for+masculinization+of+the+transcriptome.">A microarray analysis of sex- and gonad-biased gene expression in the zebrafish: evidence for masculinization of the transcriptome.</a> BMC Genomics. 10, 579 (2009).</li><li>Chiang, E. F., Yan, Y. L., Guiguen, Y., Postlethwait, J., Chung, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+Cyp19+(P450+aromatase)+genes+on+duplicated+zebrafish+chromosomes+are+expressed+in+ovary+or+brain.">Two Cyp19 (P450 aromatase) genes on duplicated zebrafish chromosomes are expressed in ovary or brain.</a> Mol. Biol. Evol. 18 (4), 542-550 (2001).</li><li>Kishida, M., Callard, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+cytochrome+P450+aromatase+isoforms+in+zebrafish+(Danio+rerio)+brain+and+ovary+are+differentially+programmed+and+estrogen+regulated+during+early+development.">Distinct cytochrome P450 aromatase isoforms in zebrafish (Danio rerio) brain and ovary are differentially programmed and estrogen regulated during early development.</a> Endocrinology. 142 (2), 740-750 (2001).</li><li>Rodr&#237;guez-Mar&#237;, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+expression+pattern+of+zebrafish+anti-M&#252;llerian+hormone+(amh)+relative+to+sox9a,+sox9b,+and+cyp19a1a,+during+gonad+development.">Characterization and expression pattern of zebrafish anti-M&#252;llerian hormone (amh) relative to sox9a, sox9b, and cyp19a1a, during gonad development.</a> Gene Expr.Patterns. 5 (5), 655-667 (2005).</li><li>Krovel, A. V., Olsen, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+a+vas::EGFP+transgene+in+primordial+germ+cells+of+the+zebrafish.">Expression of a vas::EGFP transgene in primordial germ cells of the zebrafish.</a> Mech Dev. 116 (1-2), 141-150 (2002).</li><li>Krovel, A. V., Olsen, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+dimorphic+expression+pattern+of+a+splice+variant+of+zebrafish+vasa+during+gonadal+development.">Sexual dimorphic expression pattern of a splice variant of zebrafish vasa during gonadal development.</a> Dev. Biol. 271 (1), 190-197 (2004).</li><li>Tzung, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+depletion+of+primordial+germ+cells+in+zebrafish+promotes+testis+formation.">Early depletion of primordial germ cells in zebrafish promotes testis formation.</a> Stem Cell Reports. 4 (1), 61-73 (2015).</li><li>Hsiao, C., Tsai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+zebrafish+with+fluorescent+germ+cell:+a+useful+tool+to+visualize+germ+cell+proliferation+and+juvenile+hermaphroditism+in+vivo.">Transgenic zebrafish with fluorescent germ cell: a useful tool to visualize germ cell proliferation and juvenile hermaphroditism in vivo.</a> Dev. Biol. 262 (2), 313-323 (2003).</li><li>Jorgensen, A., Nielsen, J. E., Morthorst, J. E., Bjerregaard, P., Leffers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser+capture+microdissection+of+gonads+from+juvenile+zebrafish.">Laser capture microdissection of gonads from juvenile zebrafish.</a> Reprod Biol Endocrinol. 7, 97 (2009).</li><li>Chen, S., Zhang, H., Wang, F., Zhang, W., Peng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=nr0b1+(DAX1)+mutation+in+zebrafish+causes+female-to-male+sex+reversal+through+abnormal+gonadal+proliferation+and+differentiation.">nr0b1 (DAX1) mutation in zebrafish causes female-to-male sex reversal through abnormal gonadal proliferation and differentiation.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 433, 105-116 (2016).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book: A Guide for The Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>Liew, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polygenic+sex+determination+system+in+zebrafish.">Polygenic sex determination system in zebrafish.</a> PLoS One. 7 (4), e34397 (2012).</li><li>Parichy, D. M., Elizondo, M. R., Mills, M. G., Gordon, T. N., Engeszer, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+table+of+postembryonic+zebrafish+development:+staging+by+externally+visible+anatomy+of+the+living+fish.">Normal table of postembryonic zebrafish development: staging by externally visible anatomy of the living fish.</a> Dev Dyn. 238 (12), 2975-3015 (2009).</li><li>Gupta, T., Mullins, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+Organs+from+the+Adult+Zebrafish.">Dissection of Organs from the Adult Zebrafish.</a> J. Vis Exp. (37), (2010).</li><li>Arnaout, R., Reischauer, S., Stainier, D. Y. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+of+Adult+Zebrafish+Hearts+for+High-throughput+Applications.">Recovery of Adult Zebrafish Hearts for High-throughput Applications.</a> J. Vis Exp. (94), (2014).</li><li>Gerlach, G. F., Schrader, L. N., Wingert, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+the+Adult+Zebrafish+Kidney.">Dissection of the Adult Zebrafish Kidney.</a> J. Vis Exp. (54), (2011).</li><li>Yoon, C., Kawakami, K., Hopkins, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+vasa+homologue+RNA+is+localized+to+the+cleavage+planes+of+2-+and+4-cell-stage+embryos+and+is+expressed+in+the+primordial+germ+cells.">Zebrafish vasa homologue RNA is localized to the cleavage planes of 2- and 4-cell-stage embryos and is expressed in the primordial germ cells.</a> Development. 124 (16), 3157-3165 (1997).</li><li>Braat, A. K., Speksnijder, J. E., Zivkovic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germ+line+development+in+fishes.">Germ line development in fishes.</a> Int. J. Dev. Biol. 43 (7), 745-760 (1999).</li><li>Huang, H. Y., Ketting, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+zebrafish+gonads+for+RNA+isolation.">Isolation of zebrafish gonads for RNA isolation.</a> Methods Mol Biol. 1093, 183-194 (2014).</li></ol>

Der Zebrabärbling hat ein leistungsfähiges Modell worden und ist in der Entwicklung und krankheitsbezogenen Forschung intensiv genutzt. Die Verfahren zur Isolierung von Organen bei erwachsenen Zebrafisch wie Gehirn, Herz, Gonaden und Niere wurden gut dokumentiert , 23, 24, 25. Aufgrund der geringen Größe und dynamische Umgestaltung der Gonadengewebe im Larven Zebrabärbling, Isolierung von Gonadengewebe ist eine anspruchsvo...

Das wichtigste weibliche Geschlecht Determinante bei Wild Zebrabärbling Chromosom 4 in dem domestizierten Zebrabärbling (dh gemeinsame Laborstämme) 1 verloren oder verändert werden . Stattdessen haben sie eine polygene System Geschlechtsbestimmung durch Umweltfaktoren wie Temperatur begleitet, Hypoxie, Nahrungsverfügbarkeit und Bevölkerungsdichte. Die detaillierten Mechanismen der Zebrabärbling Geschlechtsentwicklung sind nicht vollständig verstanden. Grundsätzliche Fragen wie bei Zebrabärbling Geschlechtsbestimmung stattfindet, was das primäre Geschlechtsbestimmungssignal (s) ist / sind, und die Gene regulieren , der erste Schritt der Transformation Gonade bleibt 2 beantwortet werden, 3. Im Prozess der Zebrabärbling Geschlechtsentwicklung wurden mehrere wichtige Etappen anerkannt. In der frühen Phase der Entwicklung, ausgehend von 4 HPF (Stunden nach der Befruchtung) Ur-Keimzellen (PGC) unterzieht Spezifikation, die Migration zu Genitalleiste undProliferation. PGC Zahlen und gegenseitige Wechselwirkungen zwischen den Keimzellen und somatischen Zellen sind wichtig für die Gonade Differenzierung 4. Bei 13 dpf (Tage nach der Befruchtung), sind die Gonaden in dem undifferenzierten Stadium. Mit dem 17 dpf, entwickeln die Gonaden in bi-Potential Ovarien in beiden zukünftigen Frauen und Männern. Der Apoptose-abhängiger Übergang von Ovar zu Hoden bei 21 bis 25 dpf beginnen und für mehrere Wochen andauern kann. Von 35 dpf, hat das Geschlecht der Gonaden bestimmt worden , und geschlechtsspezifische Gameten Produktion ist im Gang in beiden Ovarien und Hoden 5, 6, 7. Bis heute diverse Kandidaten-Gene und Mechanismen der Geschlechtsbestimmung vorgeschlagen worden. Proteomics und Transkriptom - Analyse haben viele Gene mit geschlechtsdimorphischen Ausdruck und diese Gene wurden verwendet , um zu studieren Geschlechtsdifferenzierung in Zebrabärbling 8 isoliert, </sup&gt; 9, 10. Zum Beispiel in larvalen Zebrabärbling wird das cyp19a1a Gen im Ovar spezifisch exprimiert , nicht aber in den Hoden 11, 12. Zusätzlich wird AMH Gene schwach in den Ovarialfollikel Granulosa - Zellen exprimiert, aber stark in Testis Sertoli - Zellen 13. Im Gegensatz dazu wird vasa - Gen in den Keimzellen des weiblichen und männlichen Zebrafisches, so dass es eine geeignete Gonade Marker 14, 15 kontinuierlich ausgedrückt. Gonaden - Genexpressionsniveau zu untersuchen ist kritisch , den molekularen Mechanismus der Geschlechtsbestimmung und Differenzierung vor allem in der Bipotential-Ovar Stufe 3, 9 zu verstehen. Jedoch erschwert die geringe Größe der larvalen Zebrabärbling und entsprechend kleiner Gonaden die Isolierung von gonadal Gewebe für die weitere molekulare Analyse. Frühere Studien verwendet sezierten gesamten Rumpfbereich zwischen Opercula und anal Pore 16. Diese Zubereitung, obwohl enthält Gonaden, besteht aus mehreren Geweben und Organen. Alternativ können transgene Tiere mit GFP Gonade spezifische Expression, wie vasa: 17, 18 EGFP wurden Gonadengewebe Trennung über Fluoreszenz - aktivierte Zellsortierung (FACS) und Laser - Capture - Mikrodissektion verwendet. Aber ihre weit verbreitete Anwendung ist begrenzt. Hier beschreiben wir ein einfaches Verfahren Gonadengewebe von Larven Zebrabärbling zu isolieren, auf 17 dpf und 25 dpf. Wir zeigen die Lage der Gonaden mit Bezug auf andere Organe und zu isolieren, die morphologisch intakten Gonaden aus den umgebenden Geweben. Wir zeigen weiter die Gonade spezifische Gene wie vasa und cyp19a1a sind in den isolierten Gonaden hochexprimierten verglichen mit dem Stamm Gewebe durch quantitative PCR (qPCR-Analyse). Dieses Protokoll ermöglicht die Identifizierung, Isolierung, Reinigung und RNA - Amplifikation von Gonaden - spezifische Gene von larvalen Zebrabärbling, wodurch nachfolgende molekulare Analyse von Gonadengewebe 19 ermöglicht.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="975">
	<tbody>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Cell culture dish 100 mm</td>
			<td style="width:208px;">Corning</td>
			<td style="width:208px;">430167</td>
			<td style="width:351px;">For embryo incubation</td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:208px;">20 X EM</td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:351px;">For a 1 liter needed: add 17.5 g NaCl, 0.75 g KCl and 2.9 g CaCl.2H2O; then add 0.41 g KH2PO4, 0.412 g Na2HPO4 anhydrous and 4.9 g MgSO4. 7H2O.</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">1 X EM</td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:351px;">Dilute 20 X EM in distilled water</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">AGAROSE G-10</td>
			<td style="width:208px;">Gene</td>
			<td style="width:208px;">121985</td>
			<td style="width:351px;">For preparing the 2% agar plates&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Trizol Reagent</td>
			<td style="width:208px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:208px;">15596-026</td>
			<td style="width:351px;">For RNA isolation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Meter glass</td>
			<td style="width:208px;">Shen Bo</td>
			<td style="width:208px;">250 ml</td>
			<td style="width:351px;">For preparing the 2% agar plates&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Microwave Oven</td>
			<td style="width:208px;">Midea</td>
			<td style="width:208px;">M1-211A</td>
			<td style="width:351px;">For heating the AGAR</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">TWEEZER DUMONT#5INOX</td>
			<td style="width:208px;">World Precision Instrument</td>
			<td style="width:208px;">500341</td>
			<td style="width:351px;">For dissection</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Stereomicroscope</td>
			<td style="width:208px;">Motic</td>
			<td style="width:208px;">SMZ168</td>
			<td style="width:351px;">For dissection</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Pure water equipment</td>
			<td style="width:208px;">Millipore</td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:351px;"></td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:208px;">Ringer&#8217;s solution</td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:351px;">For a 1 liter needed: Add 6.78g NaCl, 0.22 g KCl, 0.26 g CaCl2 and 1.19 g Hepes; then fill to 1 L; Adjust pH to 7.2. Sterilize by filtration and keep in an autoclaved clear polycarbonate container.</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Transfer pipette</td>
			<td style="width:208px;">Samco</td>
			<td style="width:208px;">202, 204</td>
			<td style="width:351px;"></td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Metal bath</td>
			<td style="width:208px;">QiLinbeier</td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:351px;">Model GL-150</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Microscope</td>
			<td style="width:208px;">Leica&#160;</td>
			<td style="width:208px;">M205 FA</td>
			<td style="width:351px;">For photomicrograph</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:208px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:208px;">5417R</td>
			<td style="width:351px;"></td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Micro Scale RNA Isolation Kit&#160;</td>
			<td style="width:208px;">Ambion</td>
			<td style="width:208px;">AM1931</td>
			<td style="width:351px;">For RNA isolation from gonad tissues</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Dnase I&#160;</td>
			<td style="width:208px;">Sigma</td>
			<td style="width:208px;">AMPD1-1KT</td>
			<td style="width:351px;">For DNA digestion in the RNA solution&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit</td>
			<td style="width:208px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:208px;">#K1631</td>
			<td style="width:351px;">For&#160; first-strand cDNA synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Rnase H&#160;</td>
			<td style="width:208px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:208px;">#EN0202</td>
			<td style="width:351px;">For digesting the residual RNA in the cDNA solution.</td>
		</tr>
		<tr height="98">
			<td height="98" style="height:98px;width:208px;">SYBR Green Realtime PCR Master Mix</td>
			<td style="width:208px;">TOYOBO</td>
			<td style="width:208px;">QPK-201</td>
			<td style="width:351px;">This product is a Taq DNA polymerase-based 2 x master mix for real-time PCR and&#160; applicable for intercalation assay with SYBR Green I.</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Spectrophotometer</td>
			<td style="width:208px;">Ne Drop</td>
			<td style="width:208px;">OD-2000+</td>
			<td>Measuring the concentration of the total RNA</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Mastercycler</td>
			<td style="width:208px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:208px;">AG 22331 Hamburg</td>
			<td>gene expression profiling</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection of larval zebrafish gonadal tissue

Obwohl wilde Zebrafische ZZ / Z-Chromosom besitzen, haben domestizierten Zebrabärbling das Geschlechtschromosom verloren. Sie nutzen eine polygene Geschlechtsbestimmung System, in dem mehrere Gene verteilt über das gesamte Genom kollektiv die Geschlechtsidentitäten einzelner Fische bestimmen. Derzeit beteiligt sich die Gene Gonadenentwicklung bei der Regulierung und wie sie bleiben schwer arbeiten. Normalerweise Gonadengewebe zu isolieren, ist der erste Schritt der Geschlechtsentwicklungsprozesse zu untersuchen. Hier stellen wir ein Verfahren Gonadengewebe von 17 dpf (Tage nach der Befruchtung) und 25 dpf Zebrabärblingembryonen zu isolieren. Das isolierte Gonadengewebe kann anschließend durch Morphologie und Genexpressionsanalysen untersucht werden.

Dissektionen der Gonaden wurden auf AB-Stamm Larven Zebrabärbling durchgeführt. Abbildung 1 zeigt typischen Gonadengewebe larvaler Zebrabärbling bei 17 dpf und 25 dpf. Zuerst wird die Haut und Muskeln von einer Seite des Bauches geschnitten, um die inneren Organe zu belichten. die Masse der inneren Organe, bleibt die Schwimmblase zusammen mit den Gonaden im Kofferraum nach dem Entfernen. Die Gonaden wurde auf der ventralen Seite der Schwimmblase angebrach...

Watch this Scientific Journal Video about Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue at JoVE.com

Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue

Hier präsentieren wir ein Protokoll für Gonadengewebe der Larven Zebrabärbling Isolierung, die Untersuchungen von Zebrabärbling Geschlechtsdifferenzierung und Wartung erleichtert.

Dissection von Larval Zebrabärbling Gonadal Tissue

Although wild zebrafish possess a ZZ/ZW sex-determination system, domesticated zebrafish have lost the sex chromosome. They utilize a polygenic sex ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Large-scale Zebrafish Embryonic Heart Dissection for Transcriptional Analysis

Großzebrafisch Embryonale Herz Dissection für Transkriptionsanalyse

The zebrafish embryonic heart is composed of only a few hundred cells, representing only a small fraction of the entire embryo. Therefore, to prevent the ...

Forschung

Entwicklungsbiologie

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

Live-Imaging von angeborenen Immun und Präkanzeröse Zell-Interaktionen unter Verwendung eines induzierbaren Gal4 / UAS Expression System in Zebrafisch-Larven Haut

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Capturing Tissue Repair in Zebrafish Larvae with Time-lapse Brightfield Stereomicroscopy

Erfassen von Gewebereparatur in Zebrafisch-Larven mit Zeitrafferhellstereomikroskopie

The zebrafish larval tail fin is ideal for studying tissue regeneration due to the simple architecture of the larval fin-fold, which comprises of two ...

Visualizing the Interrenal Steroidogenic Tissue and Its Vascular Microenvironment in Zebrafish

Visualisierung der Interrenal- Steroidogenic Gewebe und seine Vascular Mikromilieu in Zebrabärbling

This protocol introduces how to detect differentiated interrenal steroidogenic cells through a simple whole-mount enzymatic activity assay. Identifying ...

Dissection and Culture of Mouse Embryonic Kidney

Dissektion und Kultur der Maus Embryonale Niere

The goal of this protocol is to describe a method for the dissection, isolation, and culture of mouse metanephric rudiments. 
During mammalian kidney ...

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Gründung der Larven Zebrafisch als Tier-Modell zu untersuchen Trypanosomen Trypanosoma Motilität In Vivo

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

Following Endocardial Tissue Movements via Cell Photoconversion in the Zebrafish Embryo

Folgenden endokardialen Gewebe Bewegungen über Zelle Ladungszustand des Zebrafish Embryos

During embryogenesis, cells undergo dynamic changes in cell behavior, and deciphering the cellular logic behind these changes is a fundamental goal in the ...

Adult Zebrafish Injury Models to Study the Effects of Prednisolone in Regenerating Bone Tissue

Erwachsenen Zebrafisch Verletzungen Modelle zur Untersuchung der Auswirkungen von Prednisolon bei der Regeneration von Knochengewebe

Zebrafish are able to regenerate various organs, including appendages (fins) after amputation. This involves the regeneration of bone, which regrows ...

Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode

Elektroretinogramm Aufnahme im Larvenstadium Zebrafisch mit A Roman kegelförmigen Schwamm-Tip Elektrode

The zebrafish (Danio rerio) is commonly used as a vertebrate model in developmental studies and is particularly suitable for visual neuroscience. For ...

Quantifying Liver Size in Larval Zebrafish Using Brightfield Microscopy

Quantifizierung der Lebergröße in Larval Zebrafischen mit Brightfield-Mikroskopie

In several transgenic zebrafish models of hepatocellular carcinoma (HCC), hepatomegaly can be observed during early larval stages. Quantifying larval ...