Name: dissection of larval zebrafish gonadal tissue
Uploaded: 2017-04-26T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue at JoVE.com

אנו מודים C ג&#39;אנג לטיפול דגים. עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדע הטבע של סין (31171074, 31371099 ו 31571067 כדי GP) ועל ידי פרויקט Talent ופאג&#39;יאנג (09PJ1401900 כדי GP).

ניסויים הזברה אושרו על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים מוסדיים אוניברסיטת פודאן ושימוש. זברה הועלתה וגדלה על פי נהלים קבועים 20. 1. הכנות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טפחו 17 DPF ו 25 DPF דג הזברה הזחל <ol style=";tex...

<ol>
	<li>Wilson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wild+sex+in+zebrafish:+loss+of+the+natural+sex+determinant+in+domesticated+strains.">Wild sex in zebrafish: loss of the natural sex determinant in domesticated strains.</a> Genetics. 198 (3), 1291-1308 (2014).</li><li>Liew, W. C., Orban, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+sex:+a+complicated+affair.">Zebrafish sex: a complicated affair.</a> Genomics. 13 (2), 172-187 (2014).</li><li>Orban, L., Sreenivasan, R., Olsson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+and+winding+roads:+Testis+differentiation+in+zebrafish.">Long and winding roads: Testis differentiation in zebrafish.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 312 (1-2), 35-41 (2009).</li><li>Blaser, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transition+from+non-motile+behaviour+to+directed+migration+during+early+PGC+development+in+zebrafish.">Transition from non-motile behaviour to directed migration during early PGC development in zebrafish.</a> J. Cell Sci. 118, 4027-4038 (2005).</li><li>Wang, X. G., Orban, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-M&#252;llerian+hormone+and+11+&#946;-hydroxylase+show+reciprocal+expression+to+that+of+aromatase+in+the+transforming+gonad+of+zebrafish+males.">Anti-M&#252;llerian hormone and 11 &#946;-hydroxylase show reciprocal expression to that of aromatase in the transforming gonad of zebrafish males.</a> Dev. Dynam. 236 (5), 1329-1338 (2007).</li><li>Siegfried, K. R., N&#252;sslein-Volhard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germ+line+control+of+female+sex+determination+in+zebrafish.">Germ line control of female sex determination in zebrafish.</a> Dev. Biol. 324 (2), 277-287 (2008).</li><li>Uchida, D., Yamashita, M., Kitano, T., Iguchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+apoptosis+during+the+transition+from+ovary-like+tissue+to+testes+during+sex+differentiation+of+juvenile+zebrafish.">Oocyte apoptosis during the transition from ovary-like tissue to testes during sex differentiation of juvenile zebrafish.</a> J. Exp. Biol. 205 (Pt 6), 711-718 (2002).</li><li>Groh, K. J., Sch&#246;nenberger, R., Eggen, R. I. L., Segner, H., Suter, M. J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+protein+expression+in+zebrafish+during+gonad+differentiation+by+targeted+proteomics.">Analysis of protein expression in zebrafish during gonad differentiation by targeted proteomics.</a> Gen. Comp. Endocr. 193, 210-220 (2013).</li><li>Siegfried, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+search+of+determinants:+gene+expression+during+gonadal+sex+differentiation.">In search of determinants: gene expression during gonadal sex differentiation.</a> J. Fish Biol. 76 (8), 1879-1902 (2010).</li><li>Small, C. M., Carney, G. E., Mo, Q., Vannucci, M., Jones, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microarray+analysis+of+sex-+and+gonad-biased+gene+expression+in+the+zebrafish:+evidence+for+masculinization+of+the+transcriptome.">A microarray analysis of sex- and gonad-biased gene expression in the zebrafish: evidence for masculinization of the transcriptome.</a> BMC Genomics. 10, 579 (2009).</li><li>Chiang, E. F., Yan, Y. L., Guiguen, Y., Postlethwait, J., Chung, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+Cyp19+(P450+aromatase)+genes+on+duplicated+zebrafish+chromosomes+are+expressed+in+ovary+or+brain.">Two Cyp19 (P450 aromatase) genes on duplicated zebrafish chromosomes are expressed in ovary or brain.</a> Mol. Biol. Evol. 18 (4), 542-550 (2001).</li><li>Kishida, M., Callard, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+cytochrome+P450+aromatase+isoforms+in+zebrafish+(Danio+rerio)+brain+and+ovary+are+differentially+programmed+and+estrogen+regulated+during+early+development.">Distinct cytochrome P450 aromatase isoforms in zebrafish (Danio rerio) brain and ovary are differentially programmed and estrogen regulated during early development.</a> Endocrinology. 142 (2), 740-750 (2001).</li><li>Rodr&#237;guez-Mar&#237;, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+expression+pattern+of+zebrafish+anti-M&#252;llerian+hormone+(amh)+relative+to+sox9a,+sox9b,+and+cyp19a1a,+during+gonad+development.">Characterization and expression pattern of zebrafish anti-M&#252;llerian hormone (amh) relative to sox9a, sox9b, and cyp19a1a, during gonad development.</a> Gene Expr.Patterns. 5 (5), 655-667 (2005).</li><li>Krovel, A. V., Olsen, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+a+vas::EGFP+transgene+in+primordial+germ+cells+of+the+zebrafish.">Expression of a vas::EGFP transgene in primordial germ cells of the zebrafish.</a> Mech Dev. 116 (1-2), 141-150 (2002).</li><li>Krovel, A. V., Olsen, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+dimorphic+expression+pattern+of+a+splice+variant+of+zebrafish+vasa+during+gonadal+development.">Sexual dimorphic expression pattern of a splice variant of zebrafish vasa during gonadal development.</a> Dev. Biol. 271 (1), 190-197 (2004).</li><li>Tzung, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+depletion+of+primordial+germ+cells+in+zebrafish+promotes+testis+formation.">Early depletion of primordial germ cells in zebrafish promotes testis formation.</a> Stem Cell Reports. 4 (1), 61-73 (2015).</li><li>Hsiao, C., Tsai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+zebrafish+with+fluorescent+germ+cell:+a+useful+tool+to+visualize+germ+cell+proliferation+and+juvenile+hermaphroditism+in+vivo.">Transgenic zebrafish with fluorescent germ cell: a useful tool to visualize germ cell proliferation and juvenile hermaphroditism in vivo.</a> Dev. Biol. 262 (2), 313-323 (2003).</li><li>Jorgensen, A., Nielsen, J. E., Morthorst, J. E., Bjerregaard, P., Leffers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser+capture+microdissection+of+gonads+from+juvenile+zebrafish.">Laser capture microdissection of gonads from juvenile zebrafish.</a> Reprod Biol Endocrinol. 7, 97 (2009).</li><li>Chen, S., Zhang, H., Wang, F., Zhang, W., Peng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=nr0b1+(DAX1)+mutation+in+zebrafish+causes+female-to-male+sex+reversal+through+abnormal+gonadal+proliferation+and+differentiation.">nr0b1 (DAX1) mutation in zebrafish causes female-to-male sex reversal through abnormal gonadal proliferation and differentiation.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 433, 105-116 (2016).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book: A Guide for The Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>Liew, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polygenic+sex+determination+system+in+zebrafish.">Polygenic sex determination system in zebrafish.</a> PLoS One. 7 (4), e34397 (2012).</li><li>Parichy, D. M., Elizondo, M. R., Mills, M. G., Gordon, T. N., Engeszer, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+table+of+postembryonic+zebrafish+development:+staging+by+externally+visible+anatomy+of+the+living+fish.">Normal table of postembryonic zebrafish development: staging by externally visible anatomy of the living fish.</a> Dev Dyn. 238 (12), 2975-3015 (2009).</li><li>Gupta, T., Mullins, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+Organs+from+the+Adult+Zebrafish.">Dissection of Organs from the Adult Zebrafish.</a> J. Vis Exp. (37), (2010).</li><li>Arnaout, R., Reischauer, S., Stainier, D. Y. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+of+Adult+Zebrafish+Hearts+for+High-throughput+Applications.">Recovery of Adult Zebrafish Hearts for High-throughput Applications.</a> J. Vis Exp. (94), (2014).</li><li>Gerlach, G. F., Schrader, L. N., Wingert, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+the+Adult+Zebrafish+Kidney.">Dissection of the Adult Zebrafish Kidney.</a> J. Vis Exp. (54), (2011).</li><li>Yoon, C., Kawakami, K., Hopkins, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+vasa+homologue+RNA+is+localized+to+the+cleavage+planes+of+2-+and+4-cell-stage+embryos+and+is+expressed+in+the+primordial+germ+cells.">Zebrafish vasa homologue RNA is localized to the cleavage planes of 2- and 4-cell-stage embryos and is expressed in the primordial germ cells.</a> Development. 124 (16), 3157-3165 (1997).</li><li>Braat, A. K., Speksnijder, J. E., Zivkovic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germ+line+development+in+fishes.">Germ line development in fishes.</a> Int. J. Dev. Biol. 43 (7), 745-760 (1999).</li><li>Huang, H. Y., Ketting, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+zebrafish+gonads+for+RNA+isolation.">Isolation of zebrafish gonads for RNA isolation.</a> Methods Mol Biol. 1093, 183-194 (2014).</li></ol>

דג הזברה הפכה מודל עוצמה והוא משמש באופן נרחב בפיתוח ומחקר הקשורות למחלה. השיטות לבידוד איברי דג זברה מבוגרת כגון מוח, לב, בלוטת מין, ו בכליות, תועדו היטב 23, 24, 25. בשל גודלו הקטן שיפוץ דינמי של הרקמות האשכים של דג הזברה ?...

קובע המין הנשי המרכזי כרומוזום דג זברה פרא 4 אבד או שונה של דג הזברה המבויתת (זני מעבדה הנפוצים כלומר) 1. במקום זאת, יש להם מערכת קביעת הזוויג polygenic בליווי גורמים סביבתיים כגון טמפרטורה, היפוקסיה, זמינות המזון וצפיפות האוכלוסייה. המנגנונים המפורטים של התפתחות מין דג זברה אינם מובנים במלואם. שאלות יסוד כגון כאשר קביעת הזוויג דג זברה מתרחשת, מה אות קביעת המין העיקרית (ים) היא / הם, ואשר גנים להסדיר את הצעד הראשון של טרנספורמציה שַׁחֲלָה להישאר ייענה 2, 3. בתהליך פיתוח מין דג זברה, בכמה שלבים חשובים הוכרו. בשלב מוקדם של הפיתוח, החל 4 hpf (הפריה פוסט שעות)-תאי נבט בראשיתי (PGCs) עוברים המפרט, הגירה אל הרכס גניטלישִׂגשׂוּג. מספרים PGC ואינטראקציות גומלין בין תאי הנבט תאים סומטיים חשובים בידול שַׁחֲלָה 4. בשעה 13 DPF (הפריה פוסט ימים), בלוטות המין נמצאים בשלב מובחן. עד 17 DPF, בלוטות המין להתפתח דו-פוטנציאל שחלות הן נקבות וזכרים בעתיד. המעבר תלוי-אפופטוזיס מן השחלה אל האשכים מתחילים בגיל 21 כדי 25 DPF ועשוי להימשך מספר שבועות. עד 35 DPF, המין של בלוטת המין נקבע וייצור תא מין ספציפי מין מתנהל בשני השחלות ואשכים 5, 6, 7. נכון להיום, גנים ומנגנוני מועמד מגוונים של קביעת הזוויג הוצעו. פרוטאומיקה וניתוח transcriptomic הצליחו לבודד גנים רבים עם הביטוי דימורפית מינית גנים אלה נוצלו כדי ללמוד בידול מין דג הזברה 8, </sup&gt; 9, 10. לדוגמה, ב דג הזברה הזחל, הגן cyp19a1a מתבטא במיוחד בשחלה אך לא את האשך 11, 12. בנוסף, גן AMH מתבטא בחולשה בתאי granulosa הזקיק בשחלה, אבל מאוד בתאי testis Sertoli 13. לעומת זאת, הגן ושה מתבטא באופן רציף בתאי הרבייה של שני דג הזברה הנשית והגברית, מה שהופך אותו סמן שַׁחֲלָה מתאים 14, 15. חקירת רמות ביטוי הגנים האשכים הוא קריטי כדי להבין את המנגנון המולקולרי של קביעת הזוויג והבחנה במיוחד בשלב הדו-פוטנציאל השחלה 3, 9. עם זאת, גודלו הקטן של דג הזברה הזחל והאשכים קטנים בהתאמה לסבך את הבידוד של gonadal רקמות לניתוח מולקולרי נוסף. מחקרים קודמים השתמשו גזורים באזור תא מטען כולו בין opercula ואת הנקבוביות אנאליות 16. הכנה זו, למרות בלוטות מין המכיל, מורכבת של רקמות ואיברים מרובים. לחלופין, חיות טרנסגניות עם הביטוי GFP שַׁחֲלָה ספציפיים כגון ושה: EGFP שימשו לבידוד רקמת האשכים באמצעות תא מופעל הקרינה מיון (FACS) ו ללכוד לייזר דיסקציה מיקרו 17, 18. אבל היישום הנרחב שלהם מוגבל. כאן, אנו מתארים תהליך פשוט לבודד רקמת האשכים מן דג הזברה הזחל ב 17 DPF ו 25 DPF. אנחנו מדגימים את המיקום של בלוטות המין ביחס לאיברים אחרים ולבודד את בלוטות המין ללא פגע מורפולוגית הרקמות הסובבות. אנחנו מראים עוד את הגנים ספציפיים שַׁחֲלָה כגון ושה cyp19a1a מבוטאים מאוד בלוטות המין המבודדות לעומת רקמת תא המטען באמצעות PCR כמוני (ניתוח qPCR). הפרוטוקול הנוכחי מאפשר זיהוי, בידוד, טיהור RNA והגברה של גנים ספציפיים אשכים מן דג זברת זחל, ובכך מאפשר ניתוח מולקולרי הבא של רקמת אשכי 19.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="975">
	<tbody>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Cell culture dish 100 mm</td>
			<td style="width:208px;">Corning</td>
			<td style="width:208px;">430167</td>
			<td style="width:351px;">For embryo incubation</td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:208px;">20 X EM</td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:351px;">For a 1 liter needed: add 17.5 g NaCl, 0.75 g KCl and 2.9 g CaCl.2H2O; then add 0.41 g KH2PO4, 0.412 g Na2HPO4 anhydrous and 4.9 g MgSO4. 7H2O.</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">1 X EM</td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:351px;">Dilute 20 X EM in distilled water</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">AGAROSE G-10</td>
			<td style="width:208px;">Gene</td>
			<td style="width:208px;">121985</td>
			<td style="width:351px;">For preparing the 2% agar plates&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Trizol Reagent</td>
			<td style="width:208px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:208px;">15596-026</td>
			<td style="width:351px;">For RNA isolation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Meter glass</td>
			<td style="width:208px;">Shen Bo</td>
			<td style="width:208px;">250 ml</td>
			<td style="width:351px;">For preparing the 2% agar plates&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Microwave Oven</td>
			<td style="width:208px;">Midea</td>
			<td style="width:208px;">M1-211A</td>
			<td style="width:351px;">For heating the AGAR</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">TWEEZER DUMONT#5INOX</td>
			<td style="width:208px;">World Precision Instrument</td>
			<td style="width:208px;">500341</td>
			<td style="width:351px;">For dissection</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Stereomicroscope</td>
			<td style="width:208px;">Motic</td>
			<td style="width:208px;">SMZ168</td>
			<td style="width:351px;">For dissection</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Pure water equipment</td>
			<td style="width:208px;">Millipore</td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:351px;"></td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:208px;">Ringer&#8217;s solution</td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:351px;">For a 1 liter needed: Add 6.78g NaCl, 0.22 g KCl, 0.26 g CaCl2 and 1.19 g Hepes; then fill to 1 L; Adjust pH to 7.2. Sterilize by filtration and keep in an autoclaved clear polycarbonate container.</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Transfer pipette</td>
			<td style="width:208px;">Samco</td>
			<td style="width:208px;">202, 204</td>
			<td style="width:351px;"></td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Metal bath</td>
			<td style="width:208px;">QiLinbeier</td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:351px;">Model GL-150</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Microscope</td>
			<td style="width:208px;">Leica&#160;</td>
			<td style="width:208px;">M205 FA</td>
			<td style="width:351px;">For photomicrograph</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:208px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:208px;">5417R</td>
			<td style="width:351px;"></td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Micro Scale RNA Isolation Kit&#160;</td>
			<td style="width:208px;">Ambion</td>
			<td style="width:208px;">AM1931</td>
			<td style="width:351px;">For RNA isolation from gonad tissues</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Dnase I&#160;</td>
			<td style="width:208px;">Sigma</td>
			<td style="width:208px;">AMPD1-1KT</td>
			<td style="width:351px;">For DNA digestion in the RNA solution&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit</td>
			<td style="width:208px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:208px;">#K1631</td>
			<td style="width:351px;">For&#160; first-strand cDNA synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Rnase H&#160;</td>
			<td style="width:208px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:208px;">#EN0202</td>
			<td style="width:351px;">For digesting the residual RNA in the cDNA solution.</td>
		</tr>
		<tr height="98">
			<td height="98" style="height:98px;width:208px;">SYBR Green Realtime PCR Master Mix</td>
			<td style="width:208px;">TOYOBO</td>
			<td style="width:208px;">QPK-201</td>
			<td style="width:351px;">This product is a Taq DNA polymerase-based 2 x master mix for real-time PCR and&#160; applicable for intercalation assay with SYBR Green I.</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Spectrophotometer</td>
			<td style="width:208px;">Ne Drop</td>
			<td style="width:208px;">OD-2000+</td>
			<td>Measuring the concentration of the total RNA</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Mastercycler</td>
			<td style="width:208px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:208px;">AG 22331 Hamburg</td>
			<td>gene expression profiling</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection of larval zebrafish gonadal tissue

למרות דג זברה פרא להחזיק מערכת ZZ / ZW מין להגדרה, דג זברה מבוית אבדה את כרומוזום המין. הם מנצלים מערכת קביעת הזוויג polygenic, שבו מספר גנים מופצים ברחבי הגנום קולקטיבי לקבוע את זהותם המין של דגים בודדים. נכון לעכשיו, את הגנים מעורבים בויסות התפתחות בלוטת מין וכיצד הם פועלים להישאר חמקמקים. בדרך כלל, לבודד רקמת אשכים הוא הצעד הראשון כדי לבחון את התהליכים ההתפתחותיים מין. כאן, אנו מציגים הליך לבודד רקמת אשכים מן 17 DPF (הפריה פוסט ימים) ו 25 DPF זחלי דג זברה. רקמת האשכים המבודדת עשויה להיבחן לאחר מכן על ידי פרופיל ביטוי מורפולוגיה גן.

והניתוחים של בלוטות המין בוצעו על דג הזברה הזחל זן AB. איור 1 מציג רקמת האשכים טיפוסית של דג הזברה הזחל ב 17 DPF ו 25 DPF. ראשית, העור והשרירים של צד אחד של הבטן הוא חתכו לחשוף את האיברים הפנימיים. לאחר הסרת המסה של איברים פנימיים, בשלפוחית ​​...

Watch this Scientific Journal Video about Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue at JoVE.com

Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבידוד רקמת האשכים של דג הזברה הזחל, אשר יקל על חקירות של בידול מין דג הזברה ותחזוקה.

דיסקציה של רקמות הזחל דג הזברה האשכים

Although wild zebrafish possess a ZZ/ZW sex-determination system, domesticated zebrafish have lost the sex chromosome. They utilize a polygenic sex ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Large-scale Zebrafish Embryonic Heart Dissection for Transcriptional Analysis

בקנה מידה גדולה דג הזברה עוברי לב Dissection לניתוח תעתיק

The zebrafish embryonic heart is composed of only a few hundred cells, representing only a small fraction of the entire embryo. Therefore, to prevent the ...

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

הדמיה חיה של אינטראקציות תא של מערכת חיסון המולדת וPreneoplastic שימוש מערכת ביטוי / כטב&quot;מ העין מתנהלת Gal4 בעור הזחל דג הזברה

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Capturing Tissue Repair in Zebrafish Larvae with Time-lapse Brightfield Stereomicroscopy

לכידת תיקון רקמות דג הזברה זחלים עם הזמן לשגות Brightfield stereomicroscopy

The zebrafish larval tail fin is ideal for studying tissue regeneration due to the simple architecture of the larval fin-fold, which comprises of two ...

Visualizing the Interrenal Steroidogenic Tissue and Its Vascular Microenvironment in Zebrafish

לדמיין את רקמות Interrenal Steroidogenic ו microenvironment הדם שלה דג הזברה

This protocol introduces how to detect differentiated interrenal steroidogenic cells through a simple whole-mount enzymatic activity assay. Identifying ...

Dissection and Culture of Mouse Embryonic Kidney

דיספציה ותרבות של כליה עובריים עכבר

The goal of this protocol is to describe a method for the dissection, isolation, and culture of mouse metanephric rudiments. 
During mammalian kidney ...

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

הקמתה של הזחל דג זברה כמודל חיה כדי Investigate Trypanosoma cruzi תנועתיות Vivo ב

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

Following Endocardial Tissue Movements via Cell Photoconversion in the Zebrafish Embryo

הפרקים הבאים רקמה Endocardial ויה Photoconversion תאים של העובר דג זברה

During embryogenesis, cells undergo dynamic changes in cell behavior, and deciphering the cellular logic behind these changes is a fundamental goal in the ...

Adult Zebrafish Injury Models to Study the Effects of Prednisolone in Regenerating Bone Tissue

דג זברה בוגרת מודלים פציעה ללמוד את השפעות Prednisolone רגנרציה רקמת העצם

Zebrafish are able to regenerate various organs, including appendages (fins) after amputation. This involves the regeneration of bone, which regrows ...

Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode

הקלטת Electroretinogram דג זברה זחל באמצעות אלקטרודה ספוג-טיפ בצורת חרוט הרומן A

The zebrafish (Danio rerio) is commonly used as a vertebrate model in developmental studies and is particularly suitable for visual neuroscience. For ...

Quantifying Liver Size in Larval Zebrafish Using Brightfield Microscopy

בדיקת גודל הכבד בזחל זברה באמצעות מיקרוסקופ ברייטפילד

In several transgenic zebrafish models of hepatocellular carcinoma (HCC), hepatomegaly can be observed during early larval stages. Quantifying larval ...