Name: dissection of larval zebrafish gonadal tissue
Uploaded: 2017-04-26T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue at JoVE.com

Agradecemos C Zhang para o cuidado de peixe. Este trabalho foi financiado pela National Science Foundation Natural da China (31171074, 31371099 e 31571067 para GP) e pelo Projeto Talentos Pujiang (09PJ1401900 para GP).

experiências peixe-zebra foram aprovados pelo Comitê Animal Care Institucional e Use da Universidade Fudan. Peixe-zebra foram levantadas e produzido de acordo com os procedimentos padrão 20. 1. Preparações <ol><li> Cultivar a 17 dpf e 25 dpf peixe-zebra larval <ol><li> Transferência 2 do sexo masculino e 2 do peixe-zebra adultos do sexo feminino (saudável, 3 a 6 meses de idade, a estirpe de laboratório AB) para um tanque de passagem no final da tarde do dia ...

<ol>
	<li>Wilson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wild+sex+in+zebrafish:+loss+of+the+natural+sex+determinant+in+domesticated+strains.">Wild sex in zebrafish: loss of the natural sex determinant in domesticated strains.</a> Genetics. 198 (3), 1291-1308 (2014).</li><li>Liew, W. C., Orban, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+sex:+a+complicated+affair.">Zebrafish sex: a complicated affair.</a> Genomics. 13 (2), 172-187 (2014).</li><li>Orban, L., Sreenivasan, R., Olsson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+and+winding+roads:+Testis+differentiation+in+zebrafish.">Long and winding roads: Testis differentiation in zebrafish.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 312 (1-2), 35-41 (2009).</li><li>Blaser, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transition+from+non-motile+behaviour+to+directed+migration+during+early+PGC+development+in+zebrafish.">Transition from non-motile behaviour to directed migration during early PGC development in zebrafish.</a> J. Cell Sci. 118, 4027-4038 (2005).</li><li>Wang, X. G., Orban, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-M&#252;llerian+hormone+and+11+&#946;-hydroxylase+show+reciprocal+expression+to+that+of+aromatase+in+the+transforming+gonad+of+zebrafish+males.">Anti-M&#252;llerian hormone and 11 &#946;-hydroxylase show reciprocal expression to that of aromatase in the transforming gonad of zebrafish males.</a> Dev. Dynam. 236 (5), 1329-1338 (2007).</li><li>Siegfried, K. R., N&#252;sslein-Volhard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germ+line+control+of+female+sex+determination+in+zebrafish.">Germ line control of female sex determination in zebrafish.</a> Dev. Biol. 324 (2), 277-287 (2008).</li><li>Uchida, D., Yamashita, M., Kitano, T., Iguchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+apoptosis+during+the+transition+from+ovary-like+tissue+to+testes+during+sex+differentiation+of+juvenile+zebrafish.">Oocyte apoptosis during the transition from ovary-like tissue to testes during sex differentiation of juvenile zebrafish.</a> J. Exp. Biol. 205 (Pt 6), 711-718 (2002).</li><li>Groh, K. J., Sch&#246;nenberger, R., Eggen, R. I. L., Segner, H., Suter, M. J. 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V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+cytochrome+P450+aromatase+isoforms+in+zebrafish+(Danio+rerio)+brain+and+ovary+are+differentially+programmed+and+estrogen+regulated+during+early+development.">Distinct cytochrome P450 aromatase isoforms in zebrafish (Danio rerio) brain and ovary are differentially programmed and estrogen regulated during early development.</a> Endocrinology. 142 (2), 740-750 (2001).</li><li>Rodr&#237;guez-Mar&#237;, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+expression+pattern+of+zebrafish+anti-M&#252;llerian+hormone+(amh)+relative+to+sox9a,+sox9b,+and+cyp19a1a,+during+gonad+development.">Characterization and expression pattern of zebrafish anti-M&#252;llerian hormone (amh) relative to sox9a, sox9b, and cyp19a1a, during gonad development.</a> Gene Expr.Patterns. 5 (5), 655-667 (2005).</li><li>Krovel, A. V., Olsen, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+a+vas::EGFP+transgene+in+primordial+germ+cells+of+the+zebrafish.">Expression of a vas::EGFP transgene in primordial germ cells of the zebrafish.</a> Mech Dev. 116 (1-2), 141-150 (2002).</li><li>Krovel, A. V., Olsen, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+dimorphic+expression+pattern+of+a+splice+variant+of+zebrafish+vasa+during+gonadal+development.">Sexual dimorphic expression pattern of a splice variant of zebrafish vasa during gonadal development.</a> Dev. Biol. 271 (1), 190-197 (2004).</li><li>Tzung, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+depletion+of+primordial+germ+cells+in+zebrafish+promotes+testis+formation.">Early depletion of primordial germ cells in zebrafish promotes testis formation.</a> Stem Cell Reports. 4 (1), 61-73 (2015).</li><li>Hsiao, C., Tsai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+zebrafish+with+fluorescent+germ+cell:+a+useful+tool+to+visualize+germ+cell+proliferation+and+juvenile+hermaphroditism+in+vivo.">Transgenic zebrafish with fluorescent germ cell: a useful tool to visualize germ cell proliferation and juvenile hermaphroditism in vivo.</a> Dev. Biol. 262 (2), 313-323 (2003).</li><li>Jorgensen, A., Nielsen, J. E., Morthorst, J. 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Endocrinol. 433, 105-116 (2016).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book: A Guide for The Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>Liew, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polygenic+sex+determination+system+in+zebrafish.">Polygenic sex determination system in zebrafish.</a> PLoS One. 7 (4), e34397 (2012).</li><li>Parichy, D. M., Elizondo, M. R., Mills, M. G., Gordon, T. N., Engeszer, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+table+of+postembryonic+zebrafish+development:+staging+by+externally+visible+anatomy+of+the+living+fish.">Normal table of postembryonic zebrafish development: staging by externally visible anatomy of the living fish.</a> Dev Dyn. 238 (12), 2975-3015 (2009).</li><li>Gupta, T., Mullins, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+Organs+from+the+Adult+Zebrafish.">Dissection of Organs from the Adult Zebrafish.</a> J. Vis Exp. (37), (2010).</li><li>Arnaout, R., Reischauer, S., Stainier, D. Y. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+of+Adult+Zebrafish+Hearts+for+High-throughput+Applications.">Recovery of Adult Zebrafish Hearts for High-throughput Applications.</a> J. Vis Exp. (94), (2014).</li><li>Gerlach, G. F., Schrader, L. N., Wingert, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+the+Adult+Zebrafish+Kidney.">Dissection of the Adult Zebrafish Kidney.</a> J. Vis Exp. (54), (2011).</li><li>Yoon, C., Kawakami, K., Hopkins, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+vasa+homologue+RNA+is+localized+to+the+cleavage+planes+of+2-+and+4-cell-stage+embryos+and+is+expressed+in+the+primordial+germ+cells.">Zebrafish vasa homologue RNA is localized to the cleavage planes of 2- and 4-cell-stage embryos and is expressed in the primordial germ cells.</a> Development. 124 (16), 3157-3165 (1997).</li><li>Braat, A. K., Speksnijder, J. E., Zivkovic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germ+line+development+in+fishes.">Germ line development in fishes.</a> Int. J. Dev. Biol. 43 (7), 745-760 (1999).</li><li>Huang, H. Y., Ketting, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+zebrafish+gonads+for+RNA+isolation.">Isolation of zebrafish gonads for RNA isolation.</a> Methods Mol Biol. 1093, 183-194 (2014).</li></ol>

O peixe-zebra tornou-se um modelo poderoso e é amplamente utilizado no desenvolvimento e investigação relacionada com a doença. Os métodos para o isolamento de órgãos no peixe-zebra adulto, tais como tumores do cérebro, coração, gônadas e rim, foram bem documentados 23, 24, 25. Devido ao pequeno tamanho e remodelação dinâmica dos tecidos gonadais no peixe-zebra larval, o isolamento de tecido gonadal é uma tarefa ...

O principal determinante do sexo feminino em selvagem cromossoma peixe-zebra 4 for perdido ou modificado no peixe-zebra domesticado (por exemplo estirpes de laboratório comuns) 1. Em vez disso, eles têm um sistema de determinação do sexo poligénica acompanhados por factores ambientais tais como a temperatura, a hipoxia, a disponibilidade de alimentos e densidade populacional. As modalidades específicas do desenvolvimento sexual peixe-zebra não são totalmente compreendidos. As questões fundamentais, tais como quando a determinação do sexo do peixe-zebra ocorre, o que o sinal de determinação do sexo primário (s) é / são, e que os genes regulam o primeiro passo de transformação das gónadas permanecem sem resposta 2, 3. No processo de desenvolvimento sexual peixe-zebra, várias etapas importantes foram reconhecidos. Na fase inicial de desenvolvimento, a partir de 4 HPF (horas após a fertilização) células germinativas primordiais (PGCs) submeter a especificação, a migração para e crista genitalproliferação. Números PGC e interacções recíprocas entre as células germinativas e células somáticas são importantes para a diferenciação gonadal 4. Aos 13 dpf (dias após a fertilização), as gónadas estão em fase indiferenciada. Por 17 dpf, as gônadas desenvolver em bi-potenciais ovários em ambos os sexos futuras. A transição dependente de apoptose a partir de ovário de testículo começam em 21 a 25 dpf e pode continuar durante várias semanas. Por 35 dpf, o sexo da gónada foi determinada e a produção de gâmetas específicos do sexo está em curso em ambos os ovários e de testículos de 5, 6, 7. Até à data, diversos genes e os mecanismos de determinação do sexo candidatos têm sido propostos. Proteomics e análise do transcriptoma isolaram muitos genes com expressão dimorfismo sexual e estes genes foram utilizados para estudar diferenciação sexual em peixes-zebra 8, </sup&gt; 9, 10. Por exemplo, no peixe-zebra larval, o gene cyp19a1a é especificamente expresso no ovário mas não no testículo 11, 12. Além disso, o gene AMH é fracamente expressa nas células da granulosa de folículos do ovário, mas fortemente em células de Sertoli de testículos 13. Em contraste, o gene de vasa é continuamente expressa nas células germinativas de ambos peixe-zebra macho e fêmea, tornando-o um marcador adequado gonadal 14, 15. Investigar os níveis de expressão do gene gonadais é fundamental para compreender o mecanismo molecular de determinação e diferenciação sexual, especialmente na fase de ovário bi-potencial 3, 9. No entanto, o pequeno tamanho do peixe-zebra larval e, correspondentemente, pequenas gónadas complicam o isolamento da gónadal tecido para outras análises moleculares. Estudos anteriores usados dissecado região do tronco inteiro entre o opercula e poros anal 16. Esta preparação, embora contendo gónadas, consiste em vários tecidos e órgãos. Em alternativa, os animais transgénicos com expressão da GFP específica para-gonadal, tais como vasa: EGFP foram usadas para o isolamento de tecido gonadal através de células activadas por fluorescência (FACS) e captura de laser de micro-dissecção 17, 18. Mas a sua aplicação generalizada é limitado. Aqui, descrevemos um procedimento simples para isolar o tecido gonadal dos peixes-zebra larval em 17 dpf e 25 dpf. Nós demonstramos a posição das gónadas no que diz respeito a outros órgãos e isolar as gónadas morfologicamente intactas a partir dos tecidos circundantes. Mostramos ainda mais os genes específicos de gónadas, tais como vasos e cyp19a1a são altamente expresso nas gônadas isolado em comparação com o tecido do tronco por meio de PCR quantitativa (qPCR) análise. O presente protocolo permite a identificação, o isolamento, a purificação de ARN e amplificação de genes específicos gonadais de peixe-zebra larval, permitindo assim a análise molecular subsequente de tecido gonadal 19.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="975">
	<tbody>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Cell culture dish 100 mm</td>
			<td style="width:208px;">Corning</td>
			<td style="width:208px;">430167</td>
			<td style="width:351px;">For embryo incubation</td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:208px;">20 X EM</td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:351px;">For a 1 liter needed: add 17.5 g NaCl, 0.75 g KCl and 2.9 g CaCl.2H2O; then add 0.41 g KH2PO4, 0.412 g Na2HPO4 anhydrous and 4.9 g MgSO4. 7H2O.</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">1 X EM</td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:351px;">Dilute 20 X EM in distilled water</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">AGAROSE G-10</td>
			<td style="width:208px;">Gene</td>
			<td style="width:208px;">121985</td>
			<td style="width:351px;">For preparing the 2% agar plates&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Trizol Reagent</td>
			<td style="width:208px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:208px;">15596-026</td>
			<td style="width:351px;">For RNA isolation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Meter glass</td>
			<td style="width:208px;">Shen Bo</td>
			<td style="width:208px;">250 ml</td>
			<td style="width:351px;">For preparing the 2% agar plates&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Microwave Oven</td>
			<td style="width:208px;">Midea</td>
			<td style="width:208px;">M1-211A</td>
			<td style="width:351px;">For heating the AGAR</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">TWEEZER DUMONT#5INOX</td>
			<td style="width:208px;">World Precision Instrument</td>
			<td style="width:208px;">500341</td>
			<td style="width:351px;">For dissection</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Stereomicroscope</td>
			<td style="width:208px;">Motic</td>
			<td style="width:208px;">SMZ168</td>
			<td style="width:351px;">For dissection</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Pure water equipment</td>
			<td style="width:208px;">Millipore</td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:351px;"></td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:208px;">Ringer&#8217;s solution</td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:351px;">For a 1 liter needed: Add 6.78g NaCl, 0.22 g KCl, 0.26 g CaCl2 and 1.19 g Hepes; then fill to 1 L; Adjust pH to 7.2. Sterilize by filtration and keep in an autoclaved clear polycarbonate container.</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Transfer pipette</td>
			<td style="width:208px;">Samco</td>
			<td style="width:208px;">202, 204</td>
			<td style="width:351px;"></td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Metal bath</td>
			<td style="width:208px;">QiLinbeier</td>
			<td style="width:208px;"></td>
			<td style="width:351px;">Model GL-150</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Microscope</td>
			<td style="width:208px;">Leica&#160;</td>
			<td style="width:208px;">M205 FA</td>
			<td style="width:351px;">For photomicrograph</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:208px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:208px;">5417R</td>
			<td style="width:351px;"></td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Micro Scale RNA Isolation Kit&#160;</td>
			<td style="width:208px;">Ambion</td>
			<td style="width:208px;">AM1931</td>
			<td style="width:351px;">For RNA isolation from gonad tissues</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Dnase I&#160;</td>
			<td style="width:208px;">Sigma</td>
			<td style="width:208px;">AMPD1-1KT</td>
			<td style="width:351px;">For DNA digestion in the RNA solution&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit</td>
			<td style="width:208px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:208px;">#K1631</td>
			<td style="width:351px;">For&#160; first-strand cDNA synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Rnase H&#160;</td>
			<td style="width:208px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:208px;">#EN0202</td>
			<td style="width:351px;">For digesting the residual RNA in the cDNA solution.</td>
		</tr>
		<tr height="98">
			<td height="98" style="height:98px;width:208px;">SYBR Green Realtime PCR Master Mix</td>
			<td style="width:208px;">TOYOBO</td>
			<td style="width:208px;">QPK-201</td>
			<td style="width:351px;">This product is a Taq DNA polymerase-based 2 x master mix for real-time PCR and&#160; applicable for intercalation assay with SYBR Green I.</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Spectrophotometer</td>
			<td style="width:208px;">Ne Drop</td>
			<td style="width:208px;">OD-2000+</td>
			<td>Measuring the concentration of the total RNA</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:208px;">Mastercycler</td>
			<td style="width:208px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:208px;">AG 22331 Hamburg</td>
			<td>gene expression profiling</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection of larval zebrafish gonadal tissue

Embora peixe-zebra selvagem possuem um / ZW sistema de determinação do sexo ZZ, peixe-zebra domesticados perderam do cromossoma sexual. Eles utilizam um sistema de determinação do sexo poligénica, onde vários genes distribuídos ao longo do genoma determinar colectivamente as identidades do sexo de cada peixe. Atualmente, os genes envolvidos na regulação do desenvolvimento das gônadas e como eles funcionam ainda imperceptíveis. Normalmente, o isolamento de tecido gonadal é o primeiro passo para examinar os processos de desenvolvimento sexuais. Aqui, nós apresentamos um processo para isolar tecido gonadal de 17 dpf (dias após a fertilização) e 25 dpf larvas de peixe-zebra. O tecido gonadal isolado pode ser posteriormente examinada por morfologia e a expressão do gene de perfis.

Dissecções das gónadas foram realizadas na AB strain peixe-zebra larval. A Figura 1 mostra tecido gonadal típico de peixe-zebra de larvas no 17 dpf e 25 dpf. Em primeiro lugar, a pele e os músculos de um lado do abdômen é cortado para expor os órgãos internos. Depois de retirar a massa dos órgãos internos, a bexiga natatória, juntamente com a gônada permanecer no tronco. O gonadal foi ligado ao lado ventral da bexiga natatória (seta na <strong ...

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Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue

Aqui, apresentamos um protocolo para isolamento de tecido gonadal dos peixes-zebra larval, o que irá facilitar as investigações de diferenciação sexual peixe-zebra e manutenção.

Dissecção de larval Zebrafish gonadal Tissue

Although wild zebrafish possess a ZZ/ZW sex-determination system, domesticated zebrafish have lost the sex chromosome. They utilize a polygenic sex ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Large-scale Zebrafish Embryonic Heart Dissection for Transcriptional Analysis

Em larga escala Zebrafish Embryonic Coração de dissecação para a análise transcricional

The zebrafish embryonic heart is composed of only a few hundred cells, representing only a small fraction of the entire embryo. Therefore, to prevent the ...

Biologia do Desenvolvimento

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

Imageamento ao vivo de interações celulares imunes inatas e pré-neoplásicas usando um sistema de indução de expressão Gal4/UAS em pele larval de peixe-zebra

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Capturing Tissue Repair in Zebrafish Larvae with Time-lapse Brightfield Stereomicroscopy

Captura de Reparo de Tecidos em Zebrafish larvas com a Time-lapse Brightfield lupa estereoscópica

The zebrafish larval tail fin is ideal for studying tissue regeneration due to the simple architecture of the larval fin-fold, which comprises of two ...

Visualizing the Interrenal Steroidogenic Tissue and Its Vascular Microenvironment in Zebrafish

Visualizando o Tissue interrenais Steroidogenic e sua Vascular Microenvironment em Zebrafish

This protocol introduces how to detect differentiated interrenal steroidogenic cells through a simple whole-mount enzymatic activity assay. Identifying ...

Dissection and Culture of Mouse Embryonic Kidney

Dissecção e cultura do rim embrionário do rato

The goal of this protocol is to describe a method for the dissection, isolation, and culture of mouse metanephric rudiments. 
During mammalian kidney ...

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Estabelecimento de Zebrafish Larval como um modelo Animal para investigar Trypanosoma cruzi motilidade In Vivo

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

Following Endocardial Tissue Movements via Cell Photoconversion in the Zebrafish Embryo

Seguindo os movimentos de tecido endocárdico através de célula Photoconversion no embrião Zebrafish

During embryogenesis, cells undergo dynamic changes in cell behavior, and deciphering the cellular logic behind these changes is a fundamental goal in the ...

Adult Zebrafish Injury Models to Study the Effects of Prednisolone in Regenerating Bone Tissue

Modelos de lesão adulto Zebrafish para estudar os efeitos de prednisolona na regeneração de tecido ósseo

Zebrafish are able to regenerate various organs, including appendages (fins) after amputation. This involves the regeneration of bone, which regrows ...

Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode

Electroretinogram gravação no Zebrafish Larval usando eletrodo de esponja-ponta em forma de Cone de romance A

The zebrafish (Danio rerio) is commonly used as a vertebrate model in developmental studies and is particularly suitable for visual neuroscience. For ...

Quantifying Liver Size in Larval Zebrafish Using Brightfield Microscopy

Quantificando o tamanho do fígado em zebrafish larval usando microscopia de campo brilhante

In several transgenic zebrafish models of hepatocellular carcinoma (HCC), hepatomegaly can be observed during early larval stages. Quantifying larval ...