Name: methods to study epithelial transport protein function and expression in native intestine and caco-2 cells grown in 3d
Uploaded: 2017-03-16T13:00:00
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We thank Mr. Christopher Manzella, MD/PhD student in the RKG laboratory, for helping to edit and proofread our manuscript.

एक पतला प्रोटीन मिश्रण पर बढ़ रहा है 3 डी Caco-2 सेल संस्कृति: Caco -2 के एक 3 डी संस्कृति प्रणाली में आंतों ट्रांसपोर्टरों के 1. अध्ययन <ol><li> पिघलना वृद्धि कारक (या हे / एन) 8 घंटे के लिए बर्फ पर कम पतला प्रोटीन मिश्रण 4 ...

<ol>
	<li>Simon-Assmann, P., Turck, N., Sidhoum-Jenny, M., Gradwohl, G., Kedinger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+models+of+intestinal+epithelial+cell+differentiation.">In vitro models of intestinal epithelial cell differentiation.</a> Cell Biol Toxicol. 23 (4), 241-256 (2007).</li><li>Shen, C., Meng, Q., Zhang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+of+3D+printed+insert+for+hanging+culture+of+Caco-2+cells.">Design of 3D printed insert for hanging culture of Caco-2 cells.</a> Biofabrication. 7 (1), 015003 (2014).</li><li>Jaffe, A. B., Kaji, N., Durgan, J., Hall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cdc42+controls+spindle+orientation+to+position+the+apical+surface+during+epithelial+morphogenesis.">Cdc42 controls spindle orientation to position the apical surface during epithelial morphogenesis.</a> J Cell Biol. 183 (4), 625-633 (2008).</li><li>Martel, F., Monteiro, R., Lemos, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uptake+of+serotonin+at+the+apical+and+basolateral+membranes+of+human+intestinal+epithelial+(Caco-2)+cells+occurs+through+the+neuronal+serotonin+transporter+(SERT).">Uptake of serotonin at the apical and basolateral membranes of human intestinal epithelial (Caco-2) cells occurs through the neuronal serotonin transporter (SERT).</a> J Pharmacol Exp Ther. 306 (1), 355-362 (2003).</li><li>Gill, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Function,+expression,+and+characterization+of+the+serotonin+transporter+in+the+native+human+intestine.">Function, expression, and characterization of the serotonin transporter in the native human intestine.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 294 (1), G254-G262 (2008).</li><li>Esmaili, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enteropathogenic+Escherichia+coli+infection+inhibits+intestinal+serotonin+transporter+function+and+expression.">Enteropathogenic Escherichia coli infection inhibits intestinal serotonin transporter function and expression.</a> Gastroenterology. 137 (6), 2074-2083 (2009).</li><li>Wade, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+and+function+of+a+5-HT+transporter+in+crypt+epithelia+of+the+gastrointestinal+tract.">Localization and function of a 5-HT transporter in crypt epithelia of the gastrointestinal tract.</a> J Neurosci. 16 (7), 2352-2364 (1996).</li><li>Clarke, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+Ussing+chamber+studies+of+mouse+intestine.">A guide to Ussing chamber studies of mouse intestine.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 296 (6), G1151-G1166 (2009).</li><li>Debnath, J., Muthuswamy, S. K., Brugge, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphogenesis+and+oncogenesis+of+MCF-10A+mammary+epithelial+acini+grown+in+three-dimensional+basement+membrane+cultures.">Morphogenesis and oncogenesis of MCF-10A mammary epithelial acini grown in three-dimensional basement membrane cultures.</a> Methods. 30 (3), 256-268 (2003).</li><li>Vedeler, A., Pryme, I. F., Hesketh, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+induces+changes+in+the+subcellular+distribution+of+actin+and+5'-nucleotidase.">Insulin induces changes in the subcellular distribution of actin and 5'-nucleotidase.</a> Mol Cell Biochem. 108 (1), 67-74 (1991).</li><li>Botvinkin, A. D., Selimov, M. A., Zgurskaia, G. N., Kulikov, L. G., Aksenova, T. 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O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acyclovir+for+shingles.">Acyclovir for shingles.</a> Br Med J (Clin Res Ed. 295 (6603), 926-927 (1987).</li><li>Churchill, P. F., Churchill, S. A., Martin, M. V., Guengerich, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+rat+liver+cytochrome+P-450UT-H+cDNA+clone+and+comparison+of+mRNA+levels+with+catalytic+activity.">Characterization of a rat liver cytochrome P-450UT-H cDNA clone and comparison of mRNA levels with catalytic activity.</a> Mol Pharmacol. 31 (2), 152-158 (1987).</li><li>Steiner, M., Tateishi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+transport+of+calcium+in+human+platelets.">Distribution and transport of calcium in human platelets.</a> Biochim Biophys Acta. 367 (2), 232-246 (1974).</li><li>McClelland, M., Nelson, M., Cantor, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+Mbo+II+methylase+(GAAGmA)+from+Moraxella+bovis:+site+specific+cleavage+of+DNA+at+nine+and+ten+base+pair+sequences.">Purification of Mbo II methylase (GAAGmA) from Moraxella bovis: site specific cleavage of DNA at nine and ten base pair sequences.</a> Nucleic Acids Res. 13 (20), 7171-7182 (1985).</li><li>Chatterjee, I. s. h. i. t. a., K, A., Gill, R. a. v. i. n. d. e. r. . K., Alrefai, W. a. d. d. a. h. . A., Dudeja, P. r. a. d. e. e. p. . 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P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=[The+aspects+of+the+problem+of+systemic+vasculitis+open+to+discussion]).">[The aspects of the problem of systemic vasculitis open to discussion]).</a> Ter Arkh. 61 (12), 102-106 (1989).</li><li>Derichs, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+current+measurement+for+diagnostic+classification+of+patients+with+questionable+cystic+fibrosis:+validation+and+reference+data.">Intestinal current measurement for diagnostic classification of patients with questionable cystic fibrosis: validation and reference data.</a> Thorax. 65 (7), 594-599 (2010).</li></ol>

पूरी तरह से विभेदित Caco -2 सेल monolayers बड़े पैमाने पर इस्तेमाल किया गया है उपकला monolayers ध्रुवीकरण के रूप में आंतों परिवहन 10, 11, 12, 13, 14, 15 अध्?...

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Arivarasu N. Anabazhagan
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Arivarasu N. Anbazhagan

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Erratum: Methods to Study Epithelial Transport Protein Function and Expression in Native Intestine and Caco-2 Cells Grown in 3D

आंतों उपकला लुमेन में तरल पदार्थ का स्राव और आयनों के लिए विभिन्न परिवहन प्रोटीन (चैनलों, ATPases, सह-ट्रांसपोर्टरों और एक्सचेंजर्स) है कि पोषक तत्वों, इलेक्ट्रोलाइट्स के अवशोषण से लेकर कई कार्य करते हैं, और दवाओं के साथ सुसज्जित है। परिवहन प्रोटीन विद्युत ढ़ाल कि एक vectorial ढंग से आयनों या अणुओं के आंदोलन की अनुमति उत्पन्न करते हैं। यह ध्रुवीकृत उपकला कोशिकाओं के शिखर और basolateral झिल्ली में परिवहन व्यवस्था की विषम वितरण द्वारा हासिल की है। इसके अलावा, तंग जंक्शनों, जो आसन्न उपकला कोशिकाओं तार, शिखर और basolateral झिल्ली डोमेन के बीच घटकों के intramembrane प्रसार के लिए एक बाधा के रूप में सेवारत द्वारा इस प्रक्रिया में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। उपयुक्त मॉडल सिस्टम मूल निवासी आंत के लिए इन विशिष्ट सुविधाओं नकल उतार (यानी polarity, भेदभाव, और तंग जंक्शन अखंडता) समारोह के अध्ययन के लिए महत्वपूर्ण हैंउपकला परिवहन व्यवस्था की nality। मॉडल के लिए सम्मान के साथ, ठेठ सेल आंतों उपकला परिवहन अनुसंधान के क्षेत्र में वर्तमान में इस्तेमाल किया लाइनों, Caco -2, पूरी तरह से विभेदित की एक मॉडल हैं छोटे आंतों उपकला कोशिकाओं अवशोषण; और T84 कोशिकाओं या HT-29 subclones, तहखाना व्युत्पन्न बड़ी आंतों उपकला कोशिकाओं 1 की मॉडल। पारंपरिक, इन सेल लाइनों प्लास्टिक की सतहों में monolayers के रूप में या लेपित transwell सम्मिलित में बड़े हो रहे हैं। ट्रांस-अच्छी तरह से कुछ हद तक सेल संस्कृति सम्मिलित ध्रुवीकृत कोशिकाओं basolaterally को खिलाने के लिए अनुमति देकर इन विवो पर्यावरण जैसे लगते हैं। हालांकि, पारंपरिक 2 डी संस्कृति प्रणालियों में एक सीमा है कि कोशिकाओं को एक, कृत्रिम फ्लैट, और कठोर सतह के लिए अनुकूल करने के लिए मजबूर हैं। इस प्रकार, देशी epithelia के शारीरिक जटिलता सही रूप में एक 2 डी प्रणाली में परिलक्षित नहीं है। यह सीमा एक विशिष्ट microenvironment में 3 डी में कोशिकाओं को विकसित करने के तरीकों, इस तरह पतला प्रोटीन mixtur रूप से पार कर दिया गया हैई, बाह्य मैट्रिक्स घटकों 2, 3 की एक किस्म से युक्त। फिर भी, इन विट्रो संस्कृतियों आंतों उपकला, जो अनेक प्रकार की कोशिकाओं और आंत में क्षेत्र विशेष वास्तुकला है की जटिलता अनुकरण नहीं कर सकते। इस प्रकार, सेल संस्कृति मॉडल का उपयोग अध्ययन मूल निवासी आंत में आगे सत्यापन की आवश्यकता है। इन विट्रो 3 डी सेल संस्कृति और माउस आंत्र म्यूकोसा का उपयोग करना, हम यहाँ आंतों सेरोटोनिन ट्रांसपोर्टर (SLC6A4, SERT) के विनियमन का अध्ययन करने के लिए सरल विधियों का वर्णन। निर्भर प्रक्रिया - SERT ट्रांसपोर्टर तेजी से एक ना + / सीएल के माध्यम से यह परिवहन के द्वारा, एक महत्वपूर्ण हार्मोन और न्यूरोट्रांसमीटर, 5 hydroxytryptamine (5 हिंदुस्तान टाइम्स) के बाह्य उपलब्धता को नियंत्रित करता है। SERT विरोधी अवसाद का एक ज्ञात लक्ष्य है और हाल ही में ऐसे दस्त और आंतों में सूजन के रूप में सैनिक विकारों, के एक उपन्यास चिकित्सीय लक्ष्य के रूप में उभरा है।तरीके आंतों उपकला कोशिकाओं में 5 हिंदुस्तान टाइम्स तेज पहले से वर्णित किया गया है जांच करने के लिए। उदाहरण के लिए, Caco-2 कोशिकाओं प्लास्टिक का समर्थन करता है या पारगम्य सम्मिलित करता है पर हो दोनों शिखर और basolateral डोमेन 4 में Fluoxetine के प्रति संवेदनशील 3 एच-5-एचटी तेज प्रदर्शन करने के लिए दिखाया गया है। मानव अंग दाता छोटी आंतों से तैयार पृथक ब्रश सीमा झिल्ली पुटिकाओं (BBMVs) में SERT समारोह का माप भी हमें 5 से वर्णित किया गया है। 3 मानव BBVMs में एच-5-HT तेज Fluoxetine के प्रति संवेदनशील हैं और ना + / सीएल होना दिखाया गया था - निर्भर है, और यह 300 के एक कश्मीर मीटर एनएम 5 के साथ संतृप्ति कैनेटीक्स प्रदर्शन किया। इसी तरह के तरीकों का उपयोग, हम भी पहले से SERT समारोह माउस आंतों BBMVs 6 में 3 एच-5-एचटी तेज के रूप में मापा जाता है। हालांकि, शुद्ध प्लाज्मा झिल्ली पुटिकाओं की तैयारी ऊतक म्यूकोसा की एक बड़ी राशि की आवश्यकता है। ऐसे radiog के रूप में अन्य तरीकों,3 एच-5-एचटी तेज साइटों की raphic दृश्य, भी गिनी पिग और चूहे छोटी आंतों 7 में पहले से दिखाया गया है। Ussing चैम्बर आयनों, पोषक तत्वों, और विभिन्न उपकला ऊतकों भर में दवाओं के परिवहन को मापने के लिए एक अधिक शारीरिक प्रणाली प्रदान करता है। Ussing चैम्बर तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि इसे बरकरार, ध्रुवीकृत आंतों उपकला की बिजली और परिवहन मानकों के सटीक माप के लिए सक्षम बनाता है। इसके अलावा, आंतरिक neuromuscular प्रणाली के प्रभाव को कम करने के लिए, आंत्र mucosa की seromuscular स्ट्रिपिंग उपकला 8 में ट्रांसपोर्टरों के विनियमन की जांच करने के लिए किया जा सकता है। हम जानते हैं कि Caco-2 कोशिकाओं पतला प्रोटीन पर 3 डी में उगाई अलग शिखर और basolateral मार्करों व्यक्त एक खोखले लुमेन फार्म का प्रदर्शन। इन कोशिकाओं को 2 डी Caco -2 कोशिकाओं की तुलना में SERT की उच्च अभिव्यक्ति दिखा। 3 डी तरीके कोशिकाओं को विकसित करने के लिए और पीई के लिएrform immunostaining या शाही सेना और प्रोटीन निकासी वर्णित हैं। इसके अलावा, हम एक ussing चैम्बर तकनीक का उपयोग करके छोटे आंत्र mucosa में TGF-β1, एक pleiotropic साइटोकाइन, द्वारा SERT समारोह और विनियमन का अध्ययन करने के तरीकों का वर्णन है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10X PBS</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC&#174; HTB&#173;37&#8482;</td>
			<td>Cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X PBS</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Microsope for confocal Imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3[H]-5-HT&#160;</td>
			<td>LabtekII</td>
			<td>152453</td>
			<td>Culturing cells for microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-HT&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>70013-032</td>
			<td>Not a hazardous substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95%O2- 5%Co2 cylinder</td>
			<td>KPL</td>
			<td>71-00-27</td>
			<td>Not a hazardous substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar (for Agar plates)</td>
			<td>Fischer</td>
			<td>BP151-100</td>
			<td>Acute toxicity, Ora</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar (for electrode)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7126-1KG</td>
			<td>Not a hazardous substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa FluorPhalloidin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C3867-1VL</td>
			<td>Not a hazardous substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148-500G</td>
			<td>Harmful if swallowed or if inhaled</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>LifeTechnologies</td>
			<td>A12380</td>
			<td>Not a hazardous substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCo2 Cells</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8806-5G</td>
			<td>Not a hazardous substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell lysis Buffer&#160;</td>
			<td>Fischer</td>
			<td>BP337-100</td>
			<td>Not a hazardous substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chabered slides</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5886-1KG</td>
			<td>Not a hazardous substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen Type-1Solution</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S8045-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrodes</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S-0876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EMEM</td>
			<td>Gibco by Life Technologies</td>
			<td>25200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Fetal bovine serum</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356234</td>
			<td>Used as Extracellular matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoxetine</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Gentamicin</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2003</td>
			<td>Cell culture Media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycin</td>
			<td>Cell Signaling, Danvers, MA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes&#160;</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11836145001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Indomethacin</td>
			<td>Gibco by Life Technologies</td>
			<td>15070-063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2HPO4</td>
			<td>Gibco by Life Technologies</td>
			<td>15710-064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KOH</td>
			<td>Gibco by Life Technologies</td>
			<td>15630-080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-ascorbic acid&#160;</td>
			<td>Gibco by Life Technologies</td>
			<td>10082147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid scintillation counter&#160;</td>
			<td>Gibco by Life Technologies</td>
			<td>70013--032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM710 Meta</td>
			<td>Physiologic Instruments, San Diego, CA&#160;</td>
			<td>EM-CSYS-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mannitol</td>
			<td>Physiologic Instruments, San Diego, CA&#160;</td>
			<td>P2304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Physiologic Instruments, San Diego, CA&#160;</td>
			<td>VCC MC8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Physiologic Instruments, San Diego, CA&#160;</td>
			<td>DM MC6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multichannel Voltage/current Clamp</td>
			<td>Physiologic Instruments, San Diego, CA&#160;</td>
			<td>P2300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Physiologic Instruments, San Diego, CA&#160;</td>
			<td>P2023-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher Scientific, Hampton, NH</td>
			<td>BP1423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>S5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Goat Serum (10%)</td>
			<td>Fisher Scientific, Hampton, NH</td>
			<td>S233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>P288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen-Strp</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>C3881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein assay reagent</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>10420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase Inhibitor Cocktail</td>
			<td>MEDOX, Chicago, IL&#160;</td>
			<td>style G- 12300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA easy Mini kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>M4125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Channel Electrode Input Module&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>A92902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sliders for snapwell Chambers</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>H9523</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate (Na2HPO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>F132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium-Hydroxide (NaOH)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>T7039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TGF-&#946;1</td>
			<td>Perkin-Elmer,Waltham, MA</td>
			<td>NFT1167250UC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TritonX-100</td>
			<td>Packard Instruments, Downers Grove, IL</td>
			<td>B1600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>221473</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Bio Rad Laboratories, Hercules, CA</td>
			<td>5000006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ussing Chamber (chamber only)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>I7378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ussing Chamber Systems</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>A1296</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

methods to study epithelial transport protein function and expression in native intestine and caco-2 cells grown in 3d

आंतों उपकला महत्वपूर्ण परिवहन और बाधा कार्य करता है कि शरीर के सामान्य शारीरिक कार्यों में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं, जबकि विदेशी कणों के लिए एक बाधा प्रदान करते हैं। बिगड़ा उपकला परिवहन (आयन, पोषक तत्व, या ड्रग्स) कई रोगों के साथ संबद्ध किया गया है और परिणाम है कि उपकला अखंडता और पेट Microbiome को प्रभावित करने से इस तरह के रूप ट्रांसपोर्टरों, के सामान्य शारीरिक कार्यों से परे का विस्तार हो सकता है। समारोह और परिवहन प्रोटीन के विनियमन को समझना उपचारात्मक उपायों में सुधार के विकास के लिए महत्वपूर्ण है। उपकला परिवहन के अध्ययन में सबसे बड़ी चुनौती एक उपयुक्त मॉडल प्रणाली है कि देशी आंतों उपकला कोशिकाओं की महत्वपूर्ण सुविधाओं का स्मरण दिलाता है विकसित कर रहा है। ऐसे Caco -2, टी -84 और HT-29-Cl.19A कोशिकाओं के रूप में कई इन विट्रो सेल संस्कृति मॉडल, आम तौर पर उपकला परिवहन अनुसंधान के क्षेत्र में उपयोग किया जाता है। ये सेल लाइनों ई मॉडलिंग करने के लिए एक दृष्टिकोण का प्रतिनिधित्व न्यूनीकारकpithelium और उपकला माइक्रोबियल बातचीत की उनकी परीक्षा सहित कई यंत्रवत अध्ययनों में इस्तेमाल किया गया है। हालांकि, सेल monolayers सही सेल सेल बातचीत और इन विवो microenvironment को प्रतिबिंबित नहीं करते। 3 डी में विकसित कोशिकाओं दवा पारगम्यता अध्ययन के लिए मॉडल का वादा किया जा करने के लिए दिखाया गया है। हम बताते हैं कि 3 डी में Caco-2 कोशिकाओं उपकला ट्रांसपोर्टरों का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। यह भी महत्वपूर्ण है कि Caco-2 कोशिकाओं में अध्ययन के अन्य मॉडलों के साथ पूरित कर रहे हैं सेल विशिष्ट प्रभाव बाहर शासन करने के लिए और खाते में मूल निवासी आंत की जटिलता लेने के लिए। कई तरीकों पहले ऐसे everted थैली और पृथक उपकला कोशिकाओं में या अलग-थलग प्लाज्मा झिल्ली पुटिकाओं में तेज के रूप में ट्रांसपोर्टरों, की कार्यक्षमता का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है। मॉडल के लिए सम्मान और परिवहन समारोह की माप के साथ क्षेत्र में चुनौतियों को ध्यान में ले रहा है, हम यहाँ एक प्रोटोकॉल 3 डी में Caco -2 कोशिकाओं के विकास और एक के रूप में एक ussing चैम्बर के उपयोग का वर्णन करने के लिए प्रदर्शनप्रभावी दृष्टिकोण ऐसे बरकरार ध्रुवीकृत आंतों epithelia में के रूप में सेरोटोनिन परिवहन, मापने के लिए।

3 डी Caco -2 अल्सर में Immunostaining चित्र 1 में दिखाया गया है। 3 डी पुटी phalloidin actin के साथ दाग में अच्छी तरह से सीमांकन लुमेन दिखा एक XY विमान के एक प्रतिनिधि छवि चित्रा 1 ए में दिखाया गया है। पक्ष लु?...

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Methods to Study Epithelial Transport Protein Function and Expression in Native Intestine and Caco-2 Cells Grown in 3D

हम इन विट्रो सेल संस्कृति Caco-2 कोशिकाओं के 3 डी में उगाई मॉडल और माउस आंतों के एक पूर्व vivo मॉडल का उपयोग आंतों सेरोटोनिन ट्रांसपोर्टर (SERT) समारोह और अभिव्यक्ति के नियमन का अध्ययन करने के लिए सरल विधियों का वर्णन। इन विधियों अन्य उपकला ट्रांसपोर्टरों के अध्ययन के लिए लागू कर रहे हैं।

तरीके उपकला परिवहन प्रोटीन समारोह और अभिव्यक्ति का अध्ययन करने के लिए मूल निवासी आंत और Caco-2 कोशिकाओं में 3 डी में बढ़ी

The intestinal epithelium has important transport and barrier functions that play key roles in normal physiological functions of the body while providing ...

Research

JoVE Journal

Biology

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

कार्बनिक सॉल्वेंट और एसिटिक एसिड के बिना जी 250 Coomassie के साथ जैल में प्रोटीन की धुंधला

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants

प्राथमिक मानव ब्रोन्कियल उपकला Explants से विकसित कोशिकाओं

Human bronchial epithelial cells are needed for cell models of disease and to investigate the effect of excipients and pharmacologic agents on the ...

Hi-C: A Method to Study the Three-dimensional Architecture of Genomes.

हाय-C: विधि अध्ययन जीनोम के तीन आयामी वास्तुकला.

The three-dimensional folding of chromosomes compartmentalizes the genome and and can bring distant functional elements, such as promoters and enhancers, ...

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Long noncoding RNAs are key regulators of chromatin states for important biological processes such as dosage compensation, imprinting, and developmental ...

Rapid Genetic Analysis of Epithelial-Mesenchymal Signaling During Hair Regeneration

बाल उत्थान के दौरान तेजी से उपकला-mesenchymal संकेतन की आनुवांशिक विश्लेषण

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Mesenchymal संक्रमण के लिए प्रेरण और उपकला का विश्लेषण

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

उच्च संकल्प पूरा पर्वत<em&gt; स्वस्थानी</emजीन एक्सप्रेशन और समारोह का अध्ययन करने के Zebrafish भ्रूण भीतर&gt; संकरण

This article focuses on whole-mount in situ hybridization (WISH) of zebrafish embryos. The WISH technology facilitates the assessment of gene expression ...

siRNA Screening to Identify Ubiquitin and Ubiquitin-like System Regulators of Biological Pathways in Cultured Mammalian Cells

संवर्धित स्तनधारी कोशिकाओं में जैविक रास्ते की Ubiquitin और ubiquitin की तरह सिस्टम नियामकों की पहचान siRNA स्क्रीनिंग

Post-translational modification of proteins with ubiquitin and ubiquitin-like molecules (UBLs) is emerging as a dynamic cellular signaling network that ...

Functional Reconstitution and Channel Activity Measurements of Purified Wildtype and Mutant CFTR Protein

शुद्ध wildtype और उत्परिवर्ती CFTR प्रोटीन के कार्यात्मक पुनर्गठन और चैनल गतिविधि माप

The Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) is a unique channel-forming member of the ATP Binding Cassette (ABC) superfamily of ...

Using Caco-2 Cells to Study Lipid Transport by the Intestine

आंत से लिपिड परिवहन अध्ययन करने के लिए Caco-2 कोशिकाओं का उपयोग

Studies of dietary fat absorption are generally conducted by using an animal model equipped with a lymph cannula. Although this animal model is widely ...