Name: methods to study epithelial transport protein function and expression in native intestine and caco-2 cells grown in 3d
Uploaded: 2017-03-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Methods to Study Epithelial Transport Protein Function and Expression in Native Intestine and Caco-2 Cells Grown in 3D at JoVE.com

We thank Mr. Christopher Manzella, MD/PhD student in the RKG laboratory, for helping to edit and proofread our manuscript.

1. Studio di intestinale Trasportatori in un sistema di coltura 3D di Caco-2: 3D crescente Caco-2 colture cellulari su una miscela proteica Gelatinoso <ol><li> fattore di crescita Scongelare ridotto miscela proteica gelatinosa in ghiaccio per 8 h (o O / N) a 4 ° C. Una volta scongelato, fare 1 ml o 500 aliquote microlitri per l&#39;uso o conservare a -20 ° C per un uso successivo. </li><li> Il giorno della cultura, preraffreddare le piastre di coltura (per RNA e proteine ​​di estrazione) o diapositive Pompilius ...

<ol>
	<li>Simon-Assmann, P., Turck, N., Sidhoum-Jenny, M., Gradwohl, G., Kedinger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+models+of+intestinal+epithelial+cell+differentiation.">In vitro models of intestinal epithelial cell differentiation.</a> Cell Biol Toxicol. 23 (4), 241-256 (2007).</li><li>Shen, C., Meng, Q., Zhang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+of+3D+printed+insert+for+hanging+culture+of+Caco-2+cells.">Design of 3D printed insert for hanging culture of Caco-2 cells.</a> Biofabrication. 7 (1), 015003 (2014).</li><li>Jaffe, A. 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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+and+function+of+a+5-HT+transporter+in+crypt+epithelia+of+the+gastrointestinal+tract.">Localization and function of a 5-HT transporter in crypt epithelia of the gastrointestinal tract.</a> J Neurosci. 16 (7), 2352-2364 (1996).</li><li>Clarke, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+Ussing+chamber+studies+of+mouse+intestine.">A guide to Ussing chamber studies of mouse intestine.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 296 (6), G1151-G1166 (2009).</li><li>Debnath, J., Muthuswamy, S. K., Brugge, J. 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O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acyclovir+for+shingles.">Acyclovir for shingles.</a> Br Med J (Clin Res Ed. 295 (6603), 926-927 (1987).</li><li>Churchill, P. F., Churchill, S. A., Martin, M. V., Guengerich, F. 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P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=[The+aspects+of+the+problem+of+systemic+vasculitis+open+to+discussion]).">[The aspects of the problem of systemic vasculitis open to discussion]).</a> Ter Arkh. 61 (12), 102-106 (1989).</li><li>Derichs, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+current+measurement+for+diagnostic+classification+of+patients+with+questionable+cystic+fibrosis:+validation+and+reference+data.">Intestinal current measurement for diagnostic classification of patients with questionable cystic fibrosis: validation and reference data.</a> Thorax. 65 (7), 594-599 (2010).</li></ol>

Monostrati di cellule Caco-2 completamente differenziati sono stati ampiamente utilizzati come polarizzato monostrati epiteliali per studiare il trasporto intestinale 10, 11, 12, 13, 14, 15. Tuttavia, per imitare l&#39;organizzazione fisiologica delle cellule epiteliali intestinali, c&#39;è stato un considerevole interesse ...

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Arivarasu N. Anabazhagan
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Arivarasu N. Anbazhagan

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Erratum: Methods to Study Epithelial Transport Protein Function and Expression in Native Intestine and Caco-2 Cells Grown in 3D

L&#39;epitelio intestinale è dotato di varie proteine ​​di trasporto (canali, ATPasi, co-trasportatori e scambiatori) che eseguono numerose funzioni che vanno dal l&#39;assorbimento di nutrienti, elettroliti, e farmaci per la secrezione di fluido e ioni nel lume. proteine ​​di trasporto generano gradienti elettrochimici che permettono il movimento di ioni o molecole in modo vettoriale. Questo risultato è ottenuto dalle distribuzioni asimmetriche dei sistemi di trasporto nelle membrane apicale e basolaterale delle cellule epiteliali polarizzate. Inoltre, giunzioni strette, che Tether cellule epiteliali adiacenti, svolgono un ruolo importante in questo processo servendo come un ostacolo alla diffusione intramembrane di componenti tra i domini di membrana apicale e basolaterale. Sistemi modello appropriato che mimano queste caratteristiche dell&#39;intestino nativo (cioè polarità, la differenziazione e l&#39;integrità di giunzione a tenuta) sono fondamentali per lo studio della functionalità dei sistemi di trasporto epiteliali. Per quanto riguarda i modelli, le linee cellulari tipiche utilizzate attualmente nella ricerca sui trasporti epiteliale intestinale sono Caco-2, un modello di completamente differenziata, assorbenti piccole cellule epiteliali intestinali; e le cellule T84 o HT-29 subclones, modelli di grandi cellule epiteliali intestinali cripta di derivazione 1. Convenzionalmente, queste linee cellulari sono coltivate come monostrati in superfici in plastica o in inserti Transwell rivestiti. Trans pozzetti di coltura cellulare inserti in qualche misura assomigliano l&#39;ambiente in vivo consentendo cellule polarizzate per alimentare basolaterally. Tuttavia, una limitazione in sistemi di coltura 2D convenzionali è che le cellule sono costretti ad adattarsi ad una superficie artificiale, piatta e rigida. Pertanto, la complessità fisiologica degli epiteli nativa non è accuratamente riflette in un sistema 2D. Questa limitazione è stato superato con metodi per crescere le cellule in 3D in un microambiente specifico, ad esempio Mixtur proteina gelatinosae, contenente una varietà di componenti della matrice extracellulare 2, 3. Tuttavia, le colture in vitro non possono simulare la complessità dell&#39;epitelio intestinale, che ha più tipi di cellule e un&#39;architettura specifica regione nell&#39;intestino. Così, gli studi che utilizzano modelli di colture cellulari richiedono ulteriori convalida a livello intestinale nativo. Utilizzando la coltura cellulare in vitro 3D e della mucosa intestinale del mouse, descriviamo qui semplici metodi per studiare la regolazione del trasportatore della serotonina intestinale (SLC6A4, SERT). Il trasportatore SERT regola la disponibilità extracellulare di un ormone importante neurotrasmettitore, 5-idrossitriptamina (5-HT), mediante una rapida trasportandolo attraverso un Na + / Cl - processo -dipendente. SERT è un bersaglio noto di anti-depressivi e ha recentemente emerso come un nuovo bersaglio terapeutico di disturbi gastrointestinali, come diarrea e infiammazione intestinale.Metodi per indagare 5-HT uptake in cellule epiteliali intestinali sono stati precedentemente descritto. Ad esempio, Caco-2 cellule cresciute su supporti plastici o inserti permeabili hanno dimostrato di presentare fluoxetina sensibile 3 H-5-HT uptake in entrambi i domini apicali e basolaterale 4. La misurazione della funzione SERT in isolato pennello Border membrana vescicole (BBMVs) preparato da donatori di organi umani intestino tenue è stata descritta anche da noi 5. 3 uptake H-5-HT in BBVMs umani è dimostrata fluoxetina sensibili e Na + / Cl - -dipendente, ed espone la cinetica di saturazione con K m di 300 nM 5. Utilizzando metodi simili, abbiamo anche precedentemente misurato funzione SERT come 3 H-5-HT assorbimento nel topo BBMVs intestinali 6. Tuttavia, la preparazione di vescicole di membrana plasmatica puri richiede una grande quantità di mucosa tessuti. Altri metodi, come la radiogvisualizzazione raphic di 3 siti di assorbimento H-5-HT, hanno anche dimostrato in precedenza nella cavia e topo piccolo intestino 7. La camera di Ussing fornisce un sistema più fisiologico per misurare il trasporto di ioni, nutrienti e farmaci attraverso vari tessuti epiteliali. Il vantaggio principale della tecnica della camera Ussing è che permette la misurazione precisa dei parametri elettrici e di trasporto dei intatta, epitelio intestinale polarizzata. Inoltre, per ridurre al minimo l&#39;influenza del sistema neuromuscolare intrinseca, strippaggio seromuscular della mucosa intestinale può essere eseguita per studiare la regolazione dei trasportatori nell&#39;epitelio 8. Abbiamo dimostrato che cellule Caco-2 cresciute in 3D sulla proteina gelatinosa formano un lume cave che esprimono i marcatori apicale e basolaterale distinte. Queste cellule mostrano più alta espressione di SERT di 2D cellule Caco-2. I metodi per crescere le cellule in 3D e per perform immunostaining o RNA e proteine ​​di estrazione sono descritti. Inoltre, si descrivono i metodi per studiare la funzione del SERT e regolazione con il TGF-β1, una citochina pleiotropica, in piccola mucosa intestinale, utilizzando una tecnica di camera di Ussing.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10X PBS</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC&#174; HTB&#173;37&#8482;</td>
			<td>Cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X PBS</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Microsope for confocal Imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3[H]-5-HT&#160;</td>
			<td>LabtekII</td>
			<td>152453</td>
			<td>Culturing cells for microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-HT&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>70013-032</td>
			<td>Not a hazardous substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95%O2- 5%Co2 cylinder</td>
			<td>KPL</td>
			<td>71-00-27</td>
			<td>Not a hazardous substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar (for Agar plates)</td>
			<td>Fischer</td>
			<td>BP151-100</td>
			<td>Acute toxicity, Ora</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar (for electrode)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7126-1KG</td>
			<td>Not a hazardous substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa FluorPhalloidin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C3867-1VL</td>
			<td>Not a hazardous substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148-500G</td>
			<td>Harmful if swallowed or if inhaled</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>LifeTechnologies</td>
			<td>A12380</td>
			<td>Not a hazardous substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCo2 Cells</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8806-5G</td>
			<td>Not a hazardous substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell lysis Buffer&#160;</td>
			<td>Fischer</td>
			<td>BP337-100</td>
			<td>Not a hazardous substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chabered slides</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5886-1KG</td>
			<td>Not a hazardous substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen Type-1Solution</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S8045-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrodes</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S-0876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EMEM</td>
			<td>Gibco by Life Technologies</td>
			<td>25200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Fetal bovine serum</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356234</td>
			<td>Used as Extracellular matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoxetine</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Gentamicin</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2003</td>
			<td>Cell culture Media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycin</td>
			<td>Cell Signaling, Danvers, MA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes&#160;</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11836145001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Indomethacin</td>
			<td>Gibco by Life Technologies</td>
			<td>15070-063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2HPO4</td>
			<td>Gibco by Life Technologies</td>
			<td>15710-064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KOH</td>
			<td>Gibco by Life Technologies</td>
			<td>15630-080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-ascorbic acid&#160;</td>
			<td>Gibco by Life Technologies</td>
			<td>10082147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid scintillation counter&#160;</td>
			<td>Gibco by Life Technologies</td>
			<td>70013--032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM710 Meta</td>
			<td>Physiologic Instruments, San Diego, CA&#160;</td>
			<td>EM-CSYS-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mannitol</td>
			<td>Physiologic Instruments, San Diego, CA&#160;</td>
			<td>P2304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Physiologic Instruments, San Diego, CA&#160;</td>
			<td>VCC MC8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Physiologic Instruments, San Diego, CA&#160;</td>
			<td>DM MC6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multichannel Voltage/current Clamp</td>
			<td>Physiologic Instruments, San Diego, CA&#160;</td>
			<td>P2300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Physiologic Instruments, San Diego, CA&#160;</td>
			<td>P2023-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher Scientific, Hampton, NH</td>
			<td>BP1423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>S5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Goat Serum (10%)</td>
			<td>Fisher Scientific, Hampton, NH</td>
			<td>S233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>P288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen-Strp</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>C3881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein assay reagent</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>10420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase Inhibitor Cocktail</td>
			<td>MEDOX, Chicago, IL&#160;</td>
			<td>style G- 12300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA easy Mini kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>M4125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Channel Electrode Input Module&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>A92902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sliders for snapwell Chambers</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>H9523</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate (Na2HPO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>F132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium-Hydroxide (NaOH)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>T7039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TGF-&#946;1</td>
			<td>Perkin-Elmer,Waltham, MA</td>
			<td>NFT1167250UC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TritonX-100</td>
			<td>Packard Instruments, Downers Grove, IL</td>
			<td>B1600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>221473</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Bio Rad Laboratories, Hercules, CA</td>
			<td>5000006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ussing Chamber (chamber only)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>I7378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ussing Chamber Systems</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO</td>
			<td>A1296</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

methods to study epithelial transport protein function and expression in native intestine and caco-2 cells grown in 3d

L&#39;epitelio intestinale ha importanti funzioni di trasporto e di barriera che giocano un ruolo chiave nei normali funzioni fisiologiche dell&#39;organismo fornendo una barriera per particelle estranee. Impaired trasporto epiteliale (ioni, nutrienti, o farmaci) è stata associata a molte malattie e può avere conseguenze che si estendono al di là delle normali funzioni fisiologiche dei trasportatori, ad esempio influenzando l&#39;integrità epiteliale e microbioma intestinale. La comprensione della funzione e regolazione delle proteine ​​di trasporto è essenziale per lo sviluppo di migliori interventi terapeutici. La sfida più grande nello studio del trasporto epiteliale sta sviluppando un sistema modello adatto che ricapitola le caratteristiche importanti delle cellule epiteliali intestinali nativi. Diversi modelli in vitro di colture cellulari, come ad esempio Caco-2, T-84, e le cellule HT-29-Cl.19A sono tipicamente utilizzati nella ricerca sui trasporti epiteliale. Queste linee cellulari rappresentano un approccio riduzionista per modellare la postapithelium e sono stati utilizzati in molti studi meccanicistici, tra cui l&#39;esame delle interazioni epiteliali-microbica. Tuttavia, monostrati cellulari non riflettono accuratamente le interazioni cellula-cellula e il microambiente in vivo. Cellule coltivate in 3D hanno dimostrato essere promettente modelli per Studi permeabilità droga. Abbiamo dimostrato che cellule Caco-2 in 3D possono essere utilizzati per studiare trasportatori epiteliali. È inoltre importante che gli studi in cellule Caco-2 sono integrate con altri modelli per escludere effetti specifici di cellule e tener conto della complessità dell&#39;intestino nativo. Diversi metodi sono stati usati in precedenza per valutare la funzionalità dei trasportatori, come sac estroflesso e uptake in cellule epiteliali isolate o in vescicole di membrana plasmatica isolati. Prendendo in considerazione le sfide nel campo rispetto ai modelli e la misura della funzione di trasporto, dimostriamo qui un protocollo di crescere cellule Caco-2 in 3D e descrivere l&#39;uso di una camera di Ussing comeapproccio efficace per misurare il trasporto della serotonina, come ad esempio negli epiteli intestinali polarizzate intatti.

Immunocolorazione in 3D Caco-2 cisti è mostrato in Figura 1. Una immagine rappresentativa di un piano XY mostrando lume ben delimitate-in cisti 3D macchiato di falloidina actina è mostrata in figura 1A. Il lato rivolto verso il lume denota il lato apicale. Le cellule epiteliali in coltura in un risultato ambiente 3D in un robusto fenotipo epiteliale. Diversi Caco-2 cisti il giorno 12, quando actina e SERT sono stati co-macchiato, sono mostrati in <stro...

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Methods to Study Epithelial Transport Protein Function and Expression in Native Intestine and Caco-2 Cells Grown in 3D

Descriviamo semplici metodi per studiare la regolazione del trasportatore della serotonina intestinale funzione (SERT) e l&#39;espressione utilizzando una cella modello in vitro cultura di cellule Caco-2 cresciuto in 3D e un modello ex vivo di intestino di topo. Questi metodi sono applicabili allo studio di altri trasportatori epiteliali.

Metodi per studiare epiteliale Trasporti funzione delle proteine ​​e di espressione in nativo Intestino e Caco-2 cellule coltivate in 3D

The intestinal epithelium has important transport and barrier functions that play key roles in normal physiological functions of the body while providing ...

Research

JoVE Journal

Biology

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

La colorazione delle proteine ​​in gel con Coomassie G-250, senza solventi organici acido acetico e

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Ricerca

Biologia

Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants

Primario cellule epiteliali bronchiali umane Grown da espianti

Human bronchial epithelial cells are needed for cell models of disease and to investigate the effect of excipients and pharmacologic agents on the ...

Hi-C: A Method to Study the Three-dimensional Architecture of Genomes.

Hi-C: un metodo per studiare l&#39;architettura tridimensionale dei genomi.

The three-dimensional folding of chromosomes compartmentalizes the genome and and can bring distant functional elements, such as promoters and enhancers, ...

Chromatin Isolation by RNA Purification (ChIRP)

Chromatin Isolation by RNA Purification ChIRP

Isolamento di cromatina Purificazione RNA (disturbo)

Long noncoding RNAs are key regulators of chromatin states for important biological processes such as dosage compensation, imprinting, and developmental ...

Rapid Genetic Analysis of Epithelial-Mesenchymal Signaling During Hair Regeneration

Rapida analisi genetica di epitelio-mesenchimale segnalazione durante la rigenerazione dei capelli

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Induzione e Analisi dei epiteliale a Mesenchymal Transizione

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

Alta Risoluzione intero monte<em&gt; In Situ</em&gt; Ibridazione in embrioni di zebrafish per studiare l&#39;espressione genica e la funzione

This article focuses on whole-mount in situ hybridization (WISH) of zebrafish embryos. The WISH technology facilitates the assessment of gene expression ...

siRNA Screening to Identify Ubiquitin and Ubiquitin-like System Regulators of Biological Pathways in Cultured Mammalian Cells

siRNA screening per identificare ubiquitina e ubiquitina-come regolatori del sistema di percorsi biologici in cellule di mammifero coltivate

Post-translational modification of proteins with ubiquitin and ubiquitin-like molecules (UBLs) is emerging as a dynamic cellular signaling network that ...

Functional Reconstitution and Channel Activity Measurements of Purified Wildtype and Mutant CFTR Protein

Ricostituzione funzionale e attività Canale Misure di purificata di tipo selvatico e mutante CFTR proteine

The Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) is a unique channel-forming member of the ATP Binding Cassette (ABC) superfamily of ...

Using Caco-2 Cells to Study Lipid Transport by the Intestine

Utilizzando cellule Caco-2 allo Studio Lipid Trasporto dall&#39;intestino

Studies of dietary fat absorption are generally conducted by using an animal model equipped with a lymph cannula. Although this animal model is widely ...

Metodi per studiare epiteliale Trasporti funzione delle proteine ​​e di espressione in nativo Intestino e Caco-2 cellule coltivate in 3D

Metodi per studiare epiteliale Trasporti funzione delle proteine e di espressione in nativo Intestino e Caco-2 cellule coltivate in 3D