Name: identification of erythromyeloid progenitors and their progeny in the mouse embryo by flow cytometry
Uploaded: 2017-07-17T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification Of Erythromyeloid Progenitors And Their Progeny In The Mouse Embryo By Flow Cytometry at JoVE.com

ويشكر المؤلفان البروفسور فريدريك جيسمان والبروفيسور كريستيان شولتز على المناقشات الثاقبة؛ الدكتور هانا غارنر للقراءة النقدية للمخطوطة، الدكتور كزافييه مونتاغوتيلي والدكتور جان جوبير وموظفي منشأة الحيوان معهد باستور لدعم مع تربية الفأر. وباسكال داردين، وفيتوت بوريكيت، باحث أمجين، لمساعدتهما التقنية. يتم تمويل البحوث في المختبر إغب من قبل معهد باستور، و نرس، سيركل فسر (فرم ومجموعة من البداية من معهد باستور و كونسورتيوم المعهد.يتم دعم لي من قبل الزمالة الدكتوراه من اتحاد ريفيف.

تم تنفيذ الإجراءات الحيوانية وفقا للجنة رعاية الحيوان المؤسسية المعتمدة واستخدامها من معهد باستور (سيتيا). 1. في أوتيرو نبض وصفها في Csf1r ميريكريمر روزا لسل-يف الأجنة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li ...

<ol>
	<li>Bertrand, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+pathways+to+mature+macrophages+in+the+early+mouse+yolk+sac.">Three pathways to mature macrophages in the early mouse yolk sac.</a> Blood. 106 (9), 3004-3011 (2005).</li><li>Palis, J., Robertson, S., Kennedy, M., Wall, C., Keller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+erythroid+and+myeloid+progenitors+in+the+yolk+sac+and+embryo+proper+of+the+mouse.">Development of erythroid and myeloid progenitors in the yolk sac and embryo proper of the mouse.</a> Development. 126 (22), 5073-5084 (1999).</li><li>Chen, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythroid/myeloid+progenitors+and+hematopoietic+stem+cells+originate+from+distinct+populations+of+endothelial+cells.">Erythroid/myeloid progenitors and hematopoietic stem cells originate from distinct populations of endothelial cells.</a> Cell Stem Cell. 9 (6), 541-552 (2011).</li><li>Frame, J. M., Fegan, K. H., Conway, S. J., McGrath, K. E., Palis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Definitive+Hematopoiesis+in+the+Yolk+Sac+Emerges+from+Wnt-Responsive+Hemogenic+Endothelium+Independently+of+Circulation+and+Arterial+Identity.">Definitive Hematopoiesis in the Yolk Sac Emerges from Wnt-Responsive Hemogenic Endothelium Independently of Circulation and Arterial Identity.</a> Stem Cells. , (2015).</li><li>Kieusseian, A., Brunetdela de la Grange, P., Burlen-Defranoux, O., Godin, I., Cumano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immature+hematopoietic+stem+cells+undergo+maturation+in+the+fetal+liver.">Immature hematopoietic stem cells undergo maturation in the fetal liver.</a> Development. 139 (19), 3521-3530 (2012).</li><li>Gomez Perdiguero, ., E, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-resident+macrophages+originate+from+yolk-sac-derived+erythro-myeloid+progenitors.">Tissue-resident macrophages originate from yolk-sac-derived erythro-myeloid progenitors.</a> Nature. 518 (7540), 547-551 (2015).</li><li>Hoeffel, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C-Myb(+)+erythro-myeloid+progenitor-derived+fetal+monocytes+give+rise+to+adult+tissue-resident+macrophages.">C-Myb(+) erythro-myeloid progenitor-derived fetal monocytes give rise to adult tissue-resident macrophages.</a> Immunity. 42 (4), 665-678 (2015).</li><li>Kierdorf, K., Prinz, M., Geissmann, F., Gomez Perdiguero, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+function+of+tissue+resident+macrophages+in+mice.">Development and function of tissue resident macrophages in mice.</a> Semin Immunol. 27 (6), 369-378 (2015).</li><li>Houssaint, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+the+mouse+hepatic+primordium.+II.+Extrinsic+origin+of+the+haemopoietic+cell+line.">Differentiation of the mouse hepatic primordium. II. Extrinsic origin of the haemopoietic cell line.</a> Cell Differ. 10 (5), 243-252 (1981).</li><li>Cumano, A., Godin, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+the+hematopoietic+system.">Ontogeny of the hematopoietic system.</a> Annu Rev Immunol. 25, 745-785 (2007).</li><li>McGrath, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+Sources+of+Hematopoietic+Progenitors+Emerge+before+HSCs+and+Provide+Functional+Blood+Cells+in+the+Mammalian+Embryo.">Distinct Sources of Hematopoietic Progenitors Emerge before HSCs and Provide Functional Blood Cells in the Mammalian Embryo.</a> Cell Rep. 11 (12), 1892-1904 (2015).</li><li>Schulz, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+lineage+of+myeloid+cells+independent+of+Myb+and+hematopoietic+stem+cells.">A lineage of myeloid cells independent of Myb and hematopoietic stem cells.</a> Science. 336 (6077), 86-90 (2012).</li><li>Chevalier, C., Nicolas, J. F., Petit, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+delivery+of+4-hydroxy-tamoxifen+for+clonal+and+polyclonal+labeling+of+cells+of+the+surface+ectoderm,+skin,+and+hair+follicle.">Preparation and delivery of 4-hydroxy-tamoxifen for clonal and polyclonal labeling of cells of the surface ectoderm, skin, and hair follicle.</a> Methods Mol Biol. 1195, 239-245 (2014).</li><li>Bertrand, J. Y., Giroux, S., Cumano, A., Godin, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+stem+cell+development+during+mouse+embryogenesis.">Hematopoietic stem cell development during mouse embryogenesis.</a> Methods Mol Med. 105, 273-288 (2005).</li><li>Bertrand, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+purified+intraembryonic+hematopoietic+stem+cells+as+a+tool+to+define+their+site+of+origin.">Characterization of purified intraembryonic hematopoietic stem cells as a tool to define their site of origin.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (1), 134-139 (2005).</li><li>Ginhoux, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+mapping+analysis+reveals+that+adult+microglia+derive+from+primitive+macrophages.">Fate mapping analysis reveals that adult microglia derive from primitive macrophages.</a> Science. 330 (6005), 841-845 (2010).</li><li>Nakamura, E., Nguyen, M. T., Mackem, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+tamoxifen-regulated+Cre+activity+in+mice+using+a+cartilage-specific+CreER(T)+to+assay+temporal+activity+windows+along+the+proximodistal+limb+skeleton.">Kinetics of tamoxifen-regulated Cre activity in mice using a cartilage-specific CreER(T) to assay temporal activity windows along the proximodistal limb skeleton.</a> Dev Dyn. 235 (9), 2603-2612 (2006).</li><li>Qian, B. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CCL2+recruits+inflammatory+monocytes+to+facilitate+breast-tumour+metastasis.">CCL2 recruits inflammatory monocytes to facilitate breast-tumour metastasis.</a> Nature. 475 (7355), 222-225 (2011).</li><li>Yona, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+mapping+reveals+origins+and+dynamics+of+monocytes+and+tissue+macrophages+under+homeostasis.">Fate mapping reveals origins and dynamics of monocytes and tissue macrophages under homeostasis.</a> Immunity. 38 (1), 79-91 (2013).</li><li>Sheng, J., Ruedl, C., Karjalainen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Most+Tissue-Resident+Macrophages+Except+Microglia+Are+Derived+from+Fetal+Hematopoietic+Stem+Cells.">Most Tissue-Resident Macrophages Except Microglia Are Derived from Fetal Hematopoietic Stem Cells.</a> Immunity. 43 (2), 382-393 (2015).</li></ol>

موجات مختلفة من الخلايا السلائف المكونة للدم تتداخل جزئيا ضمن إطار زمني قصير، الأمر الذي يجعل تحليل مساهمة كل موجة من تكون الدم التنموية لخلايا المناعة من الناحية الفنية صعبة للغاية. توفر نظم كري التي تحتوي على تاموكسيفين فرصة ل...

هناك عدة موجات متتالية ولكنها متداخلة من الأسلاف المكونة للدم أثناء التنمية التي لا تزال نسلها النخاعي في مرحلة البلوغ. أولا، تظهر الأسلاف &quot;البدائية&quot; غير المحايدة في كيس صفار الماوس 1 ، 2 بين E7.5-E8.25 وتؤدي إلى الضامة الجنينية دون أي وسيط أحادي. ما إذا كانت البلاعم المستمدة من الأسلاف البدائية تستمر في الدماغ البالغ كما تبقى الخلايا الدبقية الصغيرة موضوعا للتحقيق النشط. ثانيا، تنشأ السلائف الحمراء والنخاعية (إمبس) في كيس المحي في E8.5، أدخل مجرى الدم واستعمار الجنين. إمبس تخرج من كيس الصفار هيموجينيك إندوثيليوم في الانتقال البطانية إلى أن تكون المكونة لل رونكس 1 - 4 ، 3 . في حين يمكن إمب التفريق في الضامة داخل كيس الصفار، فإنها أيضا استعمار الكبد الجنين من يوم الجنينية (E) 9 5 و ديفيرنالتورم في كرات الدم الحمراء، الضخامة، الضامة، وحيدات الخلايا المحببة والخلايا البدينة 6 . الضامة التي تستمد من إمبس تحمل القدرة التكاثري في الأنسجة التنموية والكبار. ما إذا كانت الضامة المستمدة من إمب تجاوز مرحلة الوحيدات من التمايز لا تزال مثيرة للجدل كما هو معروف القليل جدا عن مسار التمايز 7 ، 8 . وأخيرا، تظهر الخلايا الجذعية المكونة للدم (هسس) في E10.5 داخل الجنين السليم من منطقة الشريان الأورطي-ميسونيفروس والهجرة إلى الكبد الجنين. يتم الكشف عن هسس مع القدرة على إعادة الإنتاج على المدى الطويل فقط بعد E11 (في 42 زوج مرحلة سوميت) 9 . هناك، فإنها توسع والتمييز من E12.5 حتى يبدأ تكون الدم النهائي للتحول إلى نخاع العظام، والذي يصبح الموقع السائد لإنتاج خلايا الدم لمدة حياة ما بعد الولادة 10 . ليرة سوريةوالتداخل الأسمى والزماني في الظهور، فضلا عن علامات المناعية المظهرية المشتركة قد عرقلت حتى الآن قدرتنا على التمييز بين المساهمات المحددة لهذه الموجات من الأسلاف المكونة للدم الجنينية. في حين يتم إنشاء كل من إمب و هسك بطريقة تعتمد على Runx1 والتعبير عن عامل النسخ ميب ومستقبل عامل النمو Csf1r (مستعمرة عامل مستقبلة 1 المستعمرة، المعروف أيضا باسم مستعمرة ماكروفيج مستعمرة عامل مستقبل) من بين أمور أخرى، يمكن تمييز إمبس من هسس من قبل افتقارهم إلى إمكانات اللمفاوية، سواء في المختبر وفي الجسم الحي ، وعدم وجود إمكانات إعادة تشكيل على المدى الطويل وعدم وجود تعبير السطح من علامة النسب سكا-1 11 . وهناك حاجة إلى نماذج رسم مصير الجينات لتوصيف الجنين البلاعم لأنها تسمح استهداف الأسلاف الجنينية في طريقة محددة الخلية والوقت المحدد. هنا نقدم بروتوكول رسم مصير المستخدمة في مختبرنا للتمييز بين النسب اثنينق من الضامة وجدت في معظم أنسجة الكبار: هسك المستمدة تسلل الضامة و هسك مستقلة البلاعم المقيمين. وقد عثرت البلاعم المقيمين الأنسجة إلى خلايا السلائف ميب مستقلة تعبر عن مستقبلات السيتوكين Csf1r 12 وتوجد في الجنين في E8.5-E10.5 باستخدام ثلاث استراتيجيات تكامل مصير تكميلية 6 . من أجل دراسة المحار كيس الدم من دون وضع علامات هس الجنين، ونحن نستخدم سلالة المعدلة وراثيا، Csf1r ميريكريمر ، معربا عن البروتين الانصهار محرض تاموكسيفين من &quot;تحسين&quot; ري ريكومبيناس واثنين من مستقبلات هرمون الاستروجين الماوس (مر-إكر-مر) تحت سيطرة المروج Csf1r. وبالتالي، فإن ريكومبيناس كري تكون نشطة في الخلايا csf1r-إكسبريسينغ خلال فترة زمنية محدودة. عندما تستخدم مع سلالة مراسل تحتوي على بروتين الفلورسنت المصب من لوكس-ستوب-لوكس كاسيت (Rosa26 لسل-إيف )، وسوف يؤدي إلى بيرمانفي وضع العلامات الوراثية للخلايا الموجودة في وقت الاستقراء ولكن أيضا من سلالة. الإدارة في E8.5 من شكل نشط من تاموكسيفين، 4-هدروكسيتاموكسيفين (أوه-تام)، والعلامات إمبس والبلاعم، دون وضع علامة على الكيس المحي غير مؤكدة &quot;بدائية&quot; الأسلاف أو هسس الجنين. وبالتالي، فقد ميزنا النمط المناعي من إمبس وذريتهم خلال التطور الجنيني، وكذلك تقييم مساهمة الضامة المستمدة الكيس المحي إلى برك بلعم الكبار. هناك حاجة إلى مزيد من العمل لتوصيف ما إذا كانت البدائية المستمدة السلف الأولية أيضا المسمى باستخدام هذا النهج، وما إذا كانت يمكن أن تسهم في برك بلعم الكبار.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>#5 Straight Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MC19/B Pascheff-Wolff Spring Scissors&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15371-92</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8.5 cm straight scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14090-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse Kit-PE (clone 2B8)</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>553355</td>
			<td>1/200 dilution in FACs Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD45.2 APC-Cy7 (clone 104)</td>
			<td>Sony</td>
			<td>1149120</td>
			<td>1/100 dilution in FACs Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse AA4.1-APC (CD93, clone AA4.1)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>17-5892</td>
			<td>1/100 dilution in FACs Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse Ter119 PerCP-Cy5.5 (clone Ter119)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>560512</td>
			<td>1/200 dilution in FACs Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse F4/80-BV421 (clone BM8)</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>123137</td>
			<td>1/100 dilution in FACs Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD11b PE-Cy7 (clone M1/70)</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>552850</td>
			<td>1/200 dilution in FACs Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD16/CD32 (Mouse BD Fc Block, clone 2.4G2)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>553142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS 1x</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>12559069</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>11570506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase D&#160;</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11088882001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deoxyribonuclease I</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4527-20KU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well tissue culture plate</td>
			<td>Dutscher Dominique</td>
			<td>353046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-well tissue culture plate</td>
			<td>Dutscher Dominique</td>
			<td>353224</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well tissue culture plate</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>11874235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 wells U-shape bottom tissue culture plate</td>
			<td>Dutscher Dominique</td>
			<td>353227</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Syringe Plastipak 2 mL&#160;</td>
			<td>Dutscher Dominique</td>
			<td>300185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon grid 100 &#181;m cell strainers</td>
			<td>Dutscher Dominique</td>
			<td>352360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon grid 70 &#181;m cell strainers</td>
			<td>Dutscher Dominique</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml Falcon tubes</td>
			<td>Dutscher Dominique</td>
			<td>352096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stericup GP Millipore filtration kit, 0.2 &#956;m</td>
			<td>Dutscher Dominique</td>
			<td>51246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7906-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(Z)-4-HYDROXYTAMOXIFEN 25mg</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H7904-25MG</td>
			<td>Special care should be taken when preparing and working with tamoxifen and its derivates. Always use appropriate personal protective equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3972</td>
			<td>Always use appropriate personal protective equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEG-35 castor oil (Kolliphor/Cremophor EL)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sunflower oil</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5007-250ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>24103-1L-R-D</td>
			<td>Always use appropriate personal protective equipment and use under the fumehood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E9884-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI, 1 ML (1 MG/ML IN WATER)</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>10116287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CytoFLEX S B2-R3-V4-Y4 flow cytometer</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>B75408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CytoFLEX Daily QC Fluorospheres</td>
			<td>Beckman Coulter&#160;</td>
			<td>B53230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VersaComp Antibody Capture Bead kit (2x5 mL)</td>
			<td>Beckman Coulter&#160;</td>
			<td>B22804</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FVB-Tg(Csf1r-cre/Esr1*)1Jwp/J</td>
			<td>The Jackson laboratory</td>
			<td>19098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B6.129X1-Gt(ROSA)26Sortm1(EYFP)Cos/J</td>
			<td>The Jackson laboratory</td>
			<td>6148</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of erythromyeloid progenitors and their progeny in the mouse embryo by flow cytometry

البلاعم هي البالعات المهنية من الذراع الفطرية للجهاز المناعي. في حالة مستقرة، وجدت الضامة سيسيل في الأنسجة الكبار حيث أنها بمثابة الحرس خط الجبهة من العدوى والتلف الأنسجة. في حين يتم تجديد الخلايا المناعية الأخرى باستمرار من الجذعية المكونة للدم والخلايا السلف (هسك) الموجودة في نخاع العظام، وقد ثبت أن النسب من الضامة، والمعروفة باسم الضامة المقيمين، أن تكون ذاتي الصيانة في الأنسجة دون مدخلات من هسكس نخاع العظم. ويتمثل هذا النسب من قبل الخلايا الدبقية الصغيرة في الدماغ، وخلايا كوبفر في الكبد وخلايا لانجرهانز في البشرة وغيرها. الأمعاء والقولون الصفيحة بروبريا هي أنسجة الكبار فقط خالية من هس مستقلة البلاعم المقيمين. وقد كشفت التحقيقات التي أجريت مؤخرا أن الضامة المقيمين تنشأ من خارج الجنينية كيس المحار الدم من السلف (ق) متميزة عن الخلايا الجذعية المكونة للدم الجنين (هسك). بين الكيس المحي نهائي تكون الدم، هأسلاف ثرومرويلويد (إمب) تؤدي إلى كل من خلايا الدم الحمراء والخلايا النخاعية، ولا سيما الضامة المقيم. يتم توليد إمب فقط داخل كيس المحار بين E8.5 و E10.5 أيام من التطور، وأنها تهاجر إلى الكبد الجنين في وقت مبكر من توصيل الدورة الدموية، حيث أنها توسيع والتمييز حتى E16.5 على الأقل. وتشمل سلالاتهم كريات الدم الحمراء، الضامة، العدلات والخلايا البدينة ولكن فقط الضامة المستمدة من إمب تستمر حتى سن البلوغ في الأنسجة. طبيعة عابرة من ظهور إمب والتداخل الزمني مع الجيل هسك يجعل من الصعب تحليل هذه الأسلاف. أنشأنا بروتوكول خرائط مصير تاموكسيفين محرض على أساس التعبير عن مستقبلات سيتوكين بلعم Csf1r المروج لتوصيف إمب والخلايا المستمدة إمب في الجسم الحي عن طريق التدفق الخلوي.

تم تحقيق رسم الخرائط الجينية الوراثية من قبل الإدارة في E8.5 من أوه-تام في Csf1r- مير-إكر-مر الإناث تزاوج مع الذكور الذين يحملون مراسل Rosa26-لسل-إيف. في وجود أوه-تام، استئصال كاسيت وقف يؤدي إلى التعبير الدائم عن يف في الخلايا معربا عن Csf1r . جمعنا اثنين من...

Watch this Scientific Journal Video about Identification Of Erythromyeloid Progenitors And Their Progeny In The Mouse Embryo By Flow Cytometry at JoVE.com

Identification Of Erythromyeloid Progenitors And Their Progeny In The Mouse Embryo By Flow Cytometry

في حين يتم تجنيد البلاعم تسلل باستمرار إلى أنسجة الكبار من السلائف تعميم، والبذور المقيمين البذور الأنسجة أثناء التنمية، حيث يتم الحفاظ عليها دون مزيد من المدخلات من الأسلاف. تم تحديد الأسلاف للبلاعم المقيمين مؤخرا. هنا، نقدم أساليب لتخطيط مصير الجينات من الأسلاف بلعم المقيمين.

تحديد أسلاف ريدثروميلويد وذريتهم في الجنين الماوس عن طريق التدفق الخلوي

Macrophages are professional phagocytes from the innate arm of the immune system. In steady-state, sessile macrophages are found in adult tissues where ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Characterization of Thymic Settling Progenitors in the Mouse Embryo Using In Vivo and In Vitro Assays

Characterization of Thymic Settling Progenitors in the Mouse Embryo Using In Vivo and In Vitro Assays

توصيف التوتة تسوية الأسلاف في جنين الفأر عن طريق<em&gt; في فيفو</em&gt; و<em&gt; في المختبر</em&gt; فحوصات

Characterizing thymic settling progenitors is important to understand the pre-thymic stages of T cell development, essential to devise strategies for T ...

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

فيفو السابقين الثقافة من بلعومي الأقواس لدراسة القلب والعضلات الأسلاف ومكانها المناسب

The pharyngeal mesoderm of developing embryos contributes to broad regions of head and heart musculature. We have developed a novel method to study head ...

Step-specific Sorting of Mouse Spermatids by Flow Cytometry

خطوة محددة الفرز ماوس Spermatids بواسطة التدفق الخلوي

The differentiation of mouse spermatids is one critical process for the production of a functional male gamete with an intact genome to be transmitted to ...

Isolating and Analyzing Cells of the Pancreas Mesenchyme by Flow Cytometry

عزل وتحليل خلايا البنكرياس اللحمة المتوسطة عن طريق التدفق الخلوي

The pancreas is comprised of epithelial cells that are required for food digestion and blood glucose regulation. Cells of the pancreas microenvironment, ...

A Standardized Approach for Multispecies Purification of Mammalian Male Germ Cells by Mechanical Tissue Dissociation and Flow Cytometry

نهج موحد لتنقية مولتبيسيسيز من الثدييات خلايا الجرثومية الذكور من الأنسجة الميكانيكية التفكك والتدفق الخلوي

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) has been one of the methods of choice to isolate enriched populations of mammalian testicular germ cells. ...

Bioengineering of Humanized Bone Marrow Microenvironments in Mouse and Their Visualization by Live Imaging

الهندسة الحيوية من أنسنة نخاع العظام ميكرونفيرونمنتس في الماوس والتصور من خلال التصوير لايف

Human hematopoietic stem cells (HSCs) reside in the bone marrow (BM) niche, an intricate, multifactorial network of components producing cytokines, growth ...

Shifting Zebrafish Lethal Skeletal Mutant Penetrance by Progeny Testing

تحويل الزرد الفتاكة Penetrance متحولة الهيكل العظمى بذرية اختبار

Zebrafish mutant phenotypes are often incompletely penetrant, only manifesting in some mutants. Interesting phenotypes that inconsistently appear can be ...

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

جيل بانكريتويدس التعبير عن الأنسولين خالية من السقالة، ثلاثي الأبعاد من الماوس المتكفل البنكرياس في المختبر

The pancreas is a complex organ composed of many different cell types that work together to regulate blood glucose homeostasis and digestion. These cell ...

Use of Hematopoietic Stem Cell Transplantation to Assess the Origin of Myelodysplastic Syndrome

استخدام زرع الخلايا الجذعية المكونة للدم لتقييم أصل متلازمة ميلوديسبلاستيك

Myelodysplastic syndromes (MDS) are a diverse group of hematopoietic stem cell disorders that are defined by ineffective hematopoiesis, peripheral blood ...

Real-time Live-cell Flow Cytometry to Investigate Calcium Influx, Pore Formation, and Phagocytosis by P2X7 Receptors in Adult Neural Progenitor Cells

في الوقت الحقيقي يعيش خلية تدفق الخلوي للتحقيق في تدفق الكالسيوم وتشكيل المسام والبلعمه من مستقبلات P2X7 في خلايا السلف العصبية الكبار

Live-cell flow cytometry is increasingly used among cell biologists to quantify biological processes in a living cell culture. This protocol describes a ...