Name: induction of an inflammatory response in primary hepatocyte cultures from mice
Uploaded: 2017-03-10T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of an Inflammatory Response in Primary Hepatocyte Cultures from Mice at JoVE.com

Эта работа была поддержана NIH (R01HL128714 к CF) и (F31DK10236101 к КС) и Американской ассоциации сердца (CF и AG).

Все протоколы животных и экспериментальные процедуры были одобрены Animal Care и использование комитета Institutional (IACUC) из Университета Майами Миллер Школа медицины мимо. 1. Подготовка <ol><li> Подогрейте перфузии печени человека средств массовой информации и переваривания пече?...

<ol>
	<li>Silverstein, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+in+chronic+kidney+disease:+role+in+the+progression+of+renal+and+cardiovascular+disease.">Inflammation in chronic kidney disease: role in the progression of renal and cardiovascular disease.</a> Pediatr Nephro. 24 (8), 1445-1452 (2008).</li><li>Isakova, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+growth+factor+23+is+elevated+before+parathyroid+hormone+and+phosphate+in+chronic+kidney+disease.">Fibroblast growth factor 23 is elevated before parathyroid hormone and phosphate in chronic kidney disease.</a> Kidney Int. 79 (12), 1370-1378 (2011).</li><li>Faul, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FGF23+induces+left+ventricular+hypertrophy.">FGF23 induces left ventricular hypertrophy.</a> J Clin Invest. 121 (11), 4393-4408 (2011).</li><li>Guti&#233;rrez, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+growth+factor+23+and+mortality+among+patients+undergoing+hemodialysis.">Fibroblast growth factor 23 and mortality among patients undergoing hemodialysis.</a> N England J Med. 359 (6), 584-592 (2008).</li><li>Munoz Mendoza, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+growth+factor+23+and+Inflammation+in+CKD.">Fibroblast growth factor 23 and Inflammation in CKD.</a> Clin J Am Soc Nephrol. 7 (7), 1155-1162 (2012).</li><li>Hanks, L. J., Casazza, K., Judd, S. E., Jenny, N. S., Guti&#233;rrez, O. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Associations+of+Fibroblast+Growth+Factor-23+with+Markers+of+Inflammation,+Insulin+Resistance+and+Obesity+in+Adults.">Associations of Fibroblast Growth Factor-23 with Markers of Inflammation, Insulin Resistance and Obesity in Adults.</a> PLoS ONE. 10 (3), e0122885 (2015).</li><li>Singh, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+growth+factor+23+directly+targets+hepatocytes+to+promote+inflammation+in+chronic+kidney+disease.">Fibroblast growth factor 23 directly targets hepatocytes to promote inflammation in chronic kidney disease.</a> Kidney Int. , 1-12 (2016).</li><li>Howard, R. B., Christensen, A. K., Gibbs, F. A., Pesch, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+enzymatic+preparation+of+isolated+intact+parenchymal+cells+from+rat+liver.">The enzymatic preparation of isolated intact parenchymal cells from rat liver.</a> J Cell Biol. 35 (3), 675-684 (1967).</li><li>Moshage, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+interleukin-1,+interleukin-6+and+its+interrelationship+on+the+synthesis+of+serum+amyloid+A+and+C-reactive+protein+in+primary+cultures+of+adult+human+hepatocytes.">The effect of interleukin-1, interleukin-6 and its interrelationship on the synthesis of serum amyloid A and C-reactive protein in primary cultures of adult human hepatocytes.</a> Bioch Biophysi Res Commun. 155 (1), 112-117 (1988).</li><li>Soldatow, V. Y., LeCluyse, E. L., Griffith, L. G., Rusyn, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+models+for+liver+toxicity+testing.">In vitro models for liver toxicity testing.</a> Toxicol. Res. 2 (1), 23-39 (2013).</li><li>Lee, S. M. L., Schelcher, C., Demmel, M., Hauner, M., Thasler, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Human+Hepatocytes+by+a+Two-step+Collagenase+Perfusion+Procedure.">Isolation of Human Hepatocytes by a Two-step Collagenase Perfusion Procedure.</a> J Vis Exp. (79), (2013).</li><li>Kegel, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+for+Isolation+of+Primary+Human+Hepatocytes+and+Corresponding+Major+Populations+of+Non-parenchymal+Liver+Cells.">Protocol for Isolation of Primary Human Hepatocytes and Corresponding Major Populations of Non-parenchymal Liver Cells.</a> J Vis Exp. (109), (2016).</li><li>Moshage, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokines+and+the+hepatic+acute+phase+response.">Cytokines and the hepatic acute phase response.</a> J Pathol. 181 (3), 257-266 (1997).</li><li>Klaunig, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+liver+cell+culture.+I.+Hepatocyte+isolation.">Mouse liver cell culture. I. Hepatocyte isolation.</a> In vitro. 17 (10), 913-925 (1981).</li><li>Lu, Y. C., Yeh, W. C., Ohashi, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LPS/TLR4+signal+transduction+pathway.">LPS/TLR4 signal transduction pathway.</a> Cytokine. 42 (2), 145-151 (2008).</li><li>Schmidt-Arras, D., Rose-John, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-6+pathway+in+the+liver:+From+physiopathology+to+therapy.">IL-6 pathway in the liver: From physiopathology to therapy.</a> J Hepatol. 64 (6), 1403-1415 (2016).</li><li>Grabner, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Cardiac+Fibroblast+Growth+Factor+Receptor+4+Causes+Left+Ventricular+Hypertrophy.">Activation of Cardiac Fibroblast Growth Factor Receptor 4 Causes Left Ventricular Hypertrophy.</a> Cell Metab. 22 (6), 1020-1032 (2015).</li><li>Shulman, M., Nahmias, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+17,+Long-Term+Culture+and+Coculture+of+Primary+Rat+and+Human+Hepatocytes.">Chapter 17, Long-Term Culture and Coculture of Primary Rat and Human Hepatocytes.</a> Methods Mol Biol. 945, 287-302 (2012).</li></ol>

Разделительный первичных гепатоцитов у мышей является быстрым, недорогим и надежным инструментом для изучения воспалительных реакций бывших естественных условиях. Если выполнены правильно, результаты могут быть легко сгенерирована и воспроизведена в своевременной и экономиче...

Хроническая болезнь почек (ХБП) может быть определена как состояние острого и хронического воспаления 1. У больных с ХПН, уровни сывороточной phosphaturic фактора роста фибробластов 23 гормона (FGF23) постепенно повышаться с целью поддержания гомеостаза сывороточного фосфата 2. Повышенные уровни сыворотки FGF23 независимо друг от друга связаны с сердечно - сосудистой заболеваемости и смертности среди пациентов , которые начинают лечение гемодиализом 3, 4. Кроме того, некоторые клинические исследования показали сильную корреляцию между повышенными уровнями FGF23 и сывороточные уровни С-реактивного белка (CRP), интерлейкин-6 (IL-6) и фактор некроза опухоли альфа (ФНО) 5, 6. Кроме того, в экспериментальном исследовании, недавно мы показали, что FGF23 может нацелены непосредственно на гепатоциты и вызывают воспалительную реакцию путем увеличения CRP и IL-6 рroduction в печени 7. Следовательно, FGF23 может выступать в качестве циркулирующего фактора, который вносит свой вклад в системное воспаление в CKD. В начале 70 -х годов, первичные гепатоциты были выделены и изучены впервые 8. С тех пор первичные культивируемые клетки печени широко используются для изучения обмена веществ обработки, гормональной функции, метаболизм лекарств, токсичность, а также иммунитета и воспалительных реакций 9, 10. Предыдущие протоколы основном описывали ферментативную выделение первичных гепатоцитов из ткани печени человека 11, 12. В то время как отличной модели, это оставляет вне возможность изучить, как генетические манипуляции затрагивает сложные механизмы печеночная сигнализации, а также функциональные последствия при различных типах стимулов. Далее мы опишем выделение мышиных первичных гепатоцитов, Следует отметить, что эффект нескольких медиаторов печеночной реакции острой фазы, такие как липополисахарида (LPS), IL-6 и FGF23 могут быть проанализированы в легкой, быстрой и воспроизводимым способом 13. В данном случае мы приводим протокол для ферментативной изоляции гепатоцитов от взрослых мышей, и показано, что установленные индукторов воспалений, такие как LPS и IL-6, а также к новым медиаторов воспаления, таких как FGF23, может непосредственно стимулировать экспрессию и секрецию воспалительные цитокины, такие как CRP и IL-6 в культуре гепатоцитов.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="924">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:363px;">Consumables</td>
			<td style="width:283px;"></td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:103px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell Strainer 70 &#956;m Nylon cell strainer</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BD Insyte Autoguard</td>
			<td>BD</td>
			<td>381412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 mL Polypropylene Conical Tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100 6-inch Cotton Tipped Applicators&#160;</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>806-WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1cc U-100 Insulin Syringe 28 G 1/2</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>329420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tissue Culture Dish 100 x 20 mm Style</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6 well Cell Culture Cluster</td>
			<td>Costar</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5/0 Black Braided Surgical Silk (100 yards)</td>
			<td>LOOK</td>
			<td>SP115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Minipuls 3 Perfusion Pump</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F155007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hemacytometer Kits, Propper</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48300-474</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hemacytometer Cover Glasses, Propper</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48300-470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical Scissers - Sharp/Blunt</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14001-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;">Iris Scissors-ToughCut Straight</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14058-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;">Dumont SS-45 Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11203-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;">Student Tissue Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>991121-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acetic acid solution, 2.0 N</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>&#160;&#160;&#160; A8976-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane, USP 250 mL</td>
			<td>Piramal Healthcare</td>
			<td>&#160;&#160; 66794-013-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KetaVed 1000mg/10mL (100mg/mL)</td>
			<td>VEDCO</td>
			<td>&#160;&#160;&#160; 50989-161-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xylazine 100 mg/mL</td>
			<td>AnaSed Injection</td>
			<td>139-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Willams&#39; Medium E (1x)</td>
			<td>gibco</td>
			<td>12551-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Liver Perfusion Medium (1x)</td>
			<td>gibco</td>
			<td>17701-038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Liver Digest Medium (1x)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17703034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Primary Hepatocyte Thawing and Plating Supplements</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>CM3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Primary Hepatocyte Maintenance Supplements</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>CM4000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate Buffer Saline (PBS) pH 7.4</td>
			<td>ThermoFisher scientific</td>
			<td>10010031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagen Type 1</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypan Blue Solution</td>
			<td>VWR</td>
			<td>45000-717</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of an inflammatory response in primary hepatocyte cultures from mice

Печень играет решающую роль в регуляции системного воспаления. При хроническом заболевании почек, в частности, печень реагирует в ответ на уремический среды, окислительный стресс, эндотоксемии и уменьшением клиренса циркулирующих провоспалительных цитокинов, производя большое количество острой фазы реагентов. Экспериментальные инструменты для изучения воспаления и основная роль гепатоциты имеют решающее значение для понимания регулирования и вклад печеночных цитокинов в системной ответной реакции острой фазы и пролонгированное провоспалительных сценарий, особенно в сложной обстановке, таких как хроническое заболевание почек. Поскольку исследования сложных механизмов воспаления в естественных условиях остается сложной, ресурсоемкой и обычно требует использования трансгенных животных, первичные изолированные гепатоциты обеспечивают надежный инструмент , чтобы получить механистические идеи в печеночную реакции острой фазы. Так как этот метод в пробирке особенности умеренные затраты, высокая повторнои общие продуктивность технических знаний, первичные изолированных гепатоцитах также могут быть легко использованы в качестве скринингового подхода. Здесь мы опишем метод ферментативного основе для выделения первичных гепатоцитов мышиными, и мы описываем оценку воспалительного ответа в этих клетках с помощью ELISA и количественный ПЦР в реальном времени.

гистология Представительные световой микроскопии образы первичных выделенных и культивируемых клеток изображены на рисунке 1А. Иммуноцитохимическая анализ показывает, что изолированные гепатоциты высоко выражают альбумин ...

Watch this Scientific Journal Video about Induction of an Inflammatory Response in Primary Hepatocyte Cultures from Mice at JoVE.com

Induction of an Inflammatory Response in Primary Hepatocyte Cultures from Mice

Здесь мы покажем подход ферментативной для выделения первичных гепатоцитов от взрослых мышей, и мы опишем количественную оценку воспалительного ответа с использованием ELISA и ПЦР в реальном времени.

Стимуляция воспалительной реакции в первичной культурах гепатоцитов мышей

The liver plays a decisive role in the regulation of systemic inflammation. In chronic kidney disease in particular, the liver reacts in response to the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Индукция экспериментального аутоиммунного гипофизит в SJL Мыши

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

A Simple and Efficient Method to Isolate Macrophages from Mixed Primary Cultures of Adult Liver Cells

Простой и эффективный способ изолировать Макрофаги из смешанного первичных культурах клеток взрослого организма Печень

Kupffer cells are liver-specific resident macrophages and play an important role in the physiological and pathological functions of the liver1-3. Although ...

Generation of Organotypic Raft Cultures from Primary Human Keratinocytes

Генерация органотипической культур Плот из первичных кератиноцитов человека

The development of organotypic epithelial raft cultures has provided researchers with an efficient in vitro system that faithfully recapitulates ...

Primary Microglia Isolation from Mixed Glial Cell Cultures of Neonatal Rat Brain Tissue

Первичная изоляция Микроглия из смешанного глиальных клеточных культур из тканей новорожденных мозга крысы

Microglia account for approximately 12% of the  total cellular population in the mammalian brain. While neurons and astrocytes are considered  the major ...

Isolation and Intravenous Injection of Murine Bone Marrow Derived Monocytes

Выделение и внутривенное введение мышиных костного мозга моноцитов

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Индукционная мышиных воспаление кишечника с помощью приемных передачи эффекторных CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Высокая</sup&gt; Т-клеток в иммунодефицитных мышей

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Live Imaging of Antifungal Activity by Human Primary Neutrophils and Monocytes in Response to A. fumigatus

Live Imaging of Antifungal Activity by Human Primary Neutrophils and Monocytes in Response to A. fumigatus

Живая съемка противогрибковой активности на человеке первичных нейтрофилов и моноцитах в ответ на<em&gt; A. fumigatus</em

Aspergillus fumigatus is an opportunistic fungal pathogen causing invasive infections in immunocompromised hosts with a high case-fatality rate. Research ...

Screening Assays to Characterize Novel Endothelial Regulators Involved in the Inflammatory Response

Скрининг Assays характеризовать Роман эндотелиальной регуляторы, участвующих в воспалительной реакции

The endothelial layer is essential for maintaining homeostasis in the body by controlling many different functions. Regulation of the inflammatory ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Индукция паралич и зрительной системы травмы в мышей, специфические клетки T нейромиелит Optica Аквапорин аутоантиген-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

Приемная иммунотерапия клеток iNKT в глюкозе-6-фосфатной исофазе (G6PI)-индуцированной РА мышей

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...