Name: evaluation of intracellular location of reactive oxygen species in solea senegalensis spermatozoa
Uploaded: 2018-03-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of Intracellular Location of Reactive Oxygen Species in Solea Senegalensis Spermatozoa at JoVE.com

ونشكر أكواجاميتي FA 1205 تكلفة العمل. وأيد هذا العمل ماليا مشروع AGL201568330-C2-1-R (مينيكو/FEDER). ومولت فالكارسي زاي ديفيد دي المجلس العسكري قشتالة وليون (EDU1084/2012) والصندوق الاجتماعي الأوروبي. يعترف المؤلف الدكتورة أنا Riaza وستولت البحر مزرعة S.A. والدكتور باولينو دي باز، والدكتور إغناسيو مارتينيز مونتيرو وخوسيه رامون Guiérrez. ونشكر أيضا باولا فيرنانديز كولادو للفيديو.

ملاحظة: حضانة فلوروتشرومي والتحليل [كنفوكل] سوف تتخذ على الأقل 2-3 ح لعنصر تحكم وعينه معالجة. لا يتم تضمين معالجة البيانات في عملية الحساب هذه المرة. يمكن الاطلاع على المواد المطلوبة في الجدول للمواد. يمكن تطبيق هذا البروتوكول على المني الطازج أو cryopreserved. سمك سنغالية هو أنواع أ?...

<ol>
	<li>Amaral, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+functionality+and+chemical+compound+action+on+sperm+function.">Mitochondrial functionality and chemical compound action on sperm function.</a> Curr Med Chem. , (2016).</li><li>Morielli, T., O'Flaherty, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+impairs+function+and+increases+redox+protein+modifications+in+human+spermatozoa.">Oxidative stress impairs function and increases redox protein modifications in human spermatozoa.</a> Reproduction. 149 (1), 113-123 (2015).</li><li>G&#252;rler, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+cryopreservation+on+sperm+viability,+synthesis+of+reactive+oxygen+species,+and+DNA+damage+of+bovine+sperm.">Effects of cryopreservation on sperm viability, synthesis of reactive oxygen species, and DNA damage of bovine sperm.</a> Theriogenology. , (2016).</li><li>Zhu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitamin+E+Analogue+Improves+Rabbit+Sperm+Quality+during+the+Process+of+Cryopreservation+through+Its+Antioxidative+Action.">Vitamin E Analogue Improves Rabbit Sperm Quality during the Process of Cryopreservation through Its Antioxidative Action.</a> PLoS One. 10 (12), e0145383 (2015).</li><li>Fang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+ROS+production+through+mitochondria-targeted+antioxidant+and+mitochondrial+uncoupling+increases+post-thaw+sperm+viability+in+yellow+catfish.">Inhibition of ROS production through mitochondria-targeted antioxidant and mitochondrial uncoupling increases post-thaw sperm viability in yellow catfish.</a> Cryobiology. 69 (3), (2014).</li><li>Thomson, L. K., Fleming, S. D., Aitken, R. J., De Iuliis, G. N., Zieschang, J. A., Clark, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation-induced+human+sperm+DNA+damage+is+predominantly+mediated+by+oxidative+stress+rather+than+apoptosis.">Cryopreservation-induced human sperm DNA damage is predominantly mediated by oxidative stress rather than apoptosis.</a> Hum Reprod. 24 (9), 2061-2070 (2009).</li><li>Kim, S. H., Yu, D. H., Kim, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+cryopreservation+on+phosphatidylserine+translocation,+intracellular+hydrogen+peroxide,+and+DNA+integrity+in+canine+sperm.">Effects of cryopreservation on phosphatidylserine translocation, intracellular hydrogen peroxide, and DNA integrity in canine sperm.</a> Theriogenology. 73 (3), (2010).</li><li>Guthrie, H. D., Welch, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+reactive+oxygen+species+on+sperm+function.">Effects of reactive oxygen species on sperm function.</a> Theriogenology. 78 (8), 1700-1708 (2012).</li><li>Aitken, R. J., Jones, K. T., Robertson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+and+sperm+function--in+sickness+and+in+health.">Reactive oxygen species and sperm function--in sickness and in health.</a> J Androl. 33 (6), (2012).</li><li>Valcarce, D. G., Robles, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+captivity+and+cryopreservation+on+ROS+production+in+Solea+senegalensis+spermatozoa.">Effect of captivity and cryopreservation on ROS production in Solea senegalensis spermatozoa.</a> Reproduction. 152 (5), (2016).</li><li>Gibb, Z., Lambourne, S. R., Aitken, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+paradoxical+relationship+between+stallion+fertility+and+oxidative+stress.">The paradoxical relationship between stallion fertility and oxidative stress.</a> Biol Reprod. 91 (3), (2014).</li><li>Cabrita, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+enhancing+fish+sperm+quality+and+emerging+tools+for+sperm+analysis.">Factors enhancing fish sperm quality and emerging tools for sperm analysis.</a> Aquaculture. 432, 389-401 (2014).</li></ol>

فمن المعروف جيدا أن الميتوكوندريا هي العضيات الرئيسية لعدد الحيوانات المنوية الحركة والوظيفة. وتشارك هذه العضيات في الوقت نفسه مباشرة في إنتاج روس. من المثير للاهتمام، هناك حاجة المستويات التي تسيطر عليها من روس للحيوانات المنوية السليمة الدالة1. أظهرت العلاقات الإيجابية ب?...

ارتبط إنتاج الأنواع الأكسجين التفاعلية مع نوعية الحيوانات المنوية مؤخرا1. على الرغم من أن إنتاج روس في الميتوكوندريا يمكن أن يعتبر عملية فيزيولوجية طبيعية، الأكسدة بفائض في إنتاج روس سببا واضحا للضرر في المني على مختلف المستويات. في البشر، والأكسدة يرتبط بالعقم عند الذكور، تغيير حركية وقدرة على الخضوع تأهيلية2؛ في الثدييات، وقد تغير من سلامة الحمض النووي في عينات الحيوانات المنوية المجمدة ترتبط أيضا بتوليف ح2س23.
للواسمات تقنية شائعة للجينات المصرفية في تربية الأحياء المائية. هذه التكنولوجيا بأهمية خاصة في الأنواع مع مشاكل الإنجاب مثل سمك سنغالية. ويبين هذه الأنواع القيمة في السوق خلل الإنجابية في الأفراد المولودين في الأسر بسبب نقص في فترة الخطوبة. وهذه الحقيقة تجعل تجميد الحيوانات المنوية اللازمة لتوافر الحيوانات المنوية للاخصاب الاصطناعي. ومع ذلك، يمكن أن نعد مصدرا للأكسدة التي يمكن أن تكون ضارة للمني4 كما أفادت الدراسات أثر مفيد لمكملات مضادات الأكسدة. تثبيط روس عن طريق مضادات الأكسدة المتقدرية المستهدفة كان يقال أن مفيد لتجميد الحيوانات المنوية في سمك السلور الأصفر5.
ولذلك، مستويات روس في عينات الحيوانات المنوية من المهم أن نعرف، لا سيما بعد تجميد6،7 لأنه تم الاعتراف بهذه الجزيئات كعيب لبقاء الحيوانات المنوية والخصوبة8. وعلاوة على ذلك، دراسة توزيع روس داخل الخلية يمكن أن تكون حاسمة بالنسبة للاستدلال مستوى الأضرار المحتملة. على سبيل مثال، يمكن الافتراض بمستويات منخفضة من روس في الميتوكوندريا العادي ومتوافقة مع وظيفة الحيوانات المنوية، ولكن مستويات عالية من روس داخل النواة يمكن أن تكون مؤشرات تلف الحمض النووي المني. ح2س2 هو واحد من روس الأكثر أهمية التي يمكن إصدارها من الميتوكوندريا واختراق النواة لأنها جزيء صغير وأقل مقابل9. يمكن أن تكشف ديتشلوروفلوريسسين اسيتات (دكفه-دا) على وجه التحديد بيروكسيد داخل الخلايا التي تنبعث منها الفلورية الخضراء. ويرد في هذه المادة، بروتوكول مفصل لكشف ح2س2 التعريب داخل الخلايا في الحيوانات المنوية سنغالية سمك استخدام الفحص المجهري [كنفوكل].

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="790">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:351px;">2&#8242;,7&#8242;-Dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA)&#160;</td>
			<td style="width:155px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D6883</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4&#8242;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">CaCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1016&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Confocal Microscopy</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cover slips</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12-541B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMSO, Analytical Grade</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>W387520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Methanol, Analytical Grade</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MitoTrackerDeep Red&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>M22426</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microcentrifuge (refrigerated)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>75002441</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7653&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Neubauerchamber</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>BR717810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Slides</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10143562BEF</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of intracellular location of reactive oxygen species in solea senegalensis spermatozoa

الأكسدة أحد العوامل الهامة في انخفاض جودة الحيوانات المنوية. وضع بروتوكولات فعالة للكشف عن أنواع الأكسجين التفاعلية (روس) في المني ذو أهمية عالية في أي من الأنواع، ولكن هذه الأساليب نادراً ما تستخدم وحتى أقل في تيليوست. للواسمات هو تقنية مفيدة في تربية الأحياء المائية لأغراض مختلفة، بما في ذلك الجينات المصرفية وضمان توافر الحيوانات المنوية طوال السنة. تجميد/ذوبان إجراءات يمكن أن يسبب إنتاج روس وتلف خلايا الحيوانات المنوية. نظراً للضرر المستقبل أن فائض إنتاج روس يمكن أن يسبب في المني اعتماداً على الترجمة، هنا منهجية مفصلة للكشف عن ح2س2 وتقييم به التعريب داخل الخلايا عن طريق الفحص المجهري [كنفوكل] يتم توفيرها. ولهذا الغرض، تستخدم مزيجاً من فلوروتشروميس 3 (2 '، اسيتات 7'-ديتشلوروديهيدروفلوريسسين (دكفه-دا)، وصمة عار يعيش الميتوكوندريا و 4, 6-دياميدينو-2-فينيليندولي هيدروكلوريد (DAPI)) لتقييم التعريب المشارك من ح2س2 مع نويات المني أو الميتوكوندريا في عينات الحيوانات المنوية سينيجاليسيس سمك .

مجهر [كنفوكل] وسيلة مثالية لتقييم روس داخل الخلايا في الحيوانات المنوية تيليوست. مزيج فلوروتشروميس الثلاثة (DAPI، الميتوكوندريا وصمة عار ودكفه دا) المعروضة في هذه الدراسة (الشكل 1) يوفر الكثير من المعلومات المفيدة التي يمكن تطبيقها في البحوث الأساسية، ويمك?...

Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of Intracellular Location of Reactive Oxygen Species in Solea Senegalensis Spermatozoa at JoVE.com

Evaluation of Intracellular Location of Reactive Oxygen Species in Solea Senegalensis Spermatozoa

ويصف هذا البروتوكول منهجية مفصلة للكشف عن ح2س2 التعريب داخل المني سنغالية سمك استخدام حساسة فلوروتشرومي دا دكفه روس، وصمة عار الميتوكوندريا لايف الميتوكوندريا، و DAPI للنوى التصور، على التوالي. تم تصميم البروتوكول التي يتعين القيام بها داخل ح 2 مع المني أما طازجة أو المذابة.

تقييم موقع داخل الخلايا للأنواع الأكسجين التفاعلية في المني سنغالية سمك

Oxidative stress is one of the important factors in decreasing sperm quality. Developing efficient protocols for detecting reactive oxygen species (ROS) ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Evaluation of Intracellular Location of Reactive Oxygen Species in Solea Senegalensis Spermatozoa

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

وجه التفريق بين فروعه المكونة للدم البدائي والنهائي من الخلايا الجذعية Pluripotent البشرية

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

Bottlenose Dolphin (Tursiops truncatus) Spermatozoa: Collection, Cryopreservation, and Heterologous In Vitro Fertilization

Bottlenose Dolphin Tursiops truncatus Spermatozoa: Collection, Cryopreservation, and Heterologous In Vitro Fertilization

دلافين الدلفين (Tursiops truncatus) المني: جمع، ونعد، والإخصاب في الأنابيب مغايرة

The use of cryopreserved dolphin spermatozoa facilitates the exchange of genetic material between aquatic parks and makes spermatozoa accessible to ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

تشريح وتلطيخ إيممونوفلوريسسينت للفطر الجسم وعلم الخلايا العصبية في أدمغة البالغين melanogaster المورفولوجية

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

تقييم الضرر الناجم عن الشيخوخة و في فيفو إعادة برمجة في العضلات الهيكلية

Cellular senescence is a stress response that is characterized by a stable cellular growth arrest, which is important for many physiological and ...

Methods for Imaging Intracellular pH of the Follicle Stem Cell Lineage in Live Drosophila Ovarian Tissue

Methods for Imaging Intracellular pH of the Follicle Stem Cell Lineage in Live Drosophila Ovarian Tissue

أساليب للأس الهيدروجيني "التصوير داخل الخلايا" من "سلالة الخلايا الجذعية جريب" في "أنسجة المبيض" المورفولوجية لايف

Changes in intracellular pH (pHi) play important roles in the regulation of many cellular functions, including metabolism, proliferation, and ...

Immobilization of Caenorhabditis elegans to Analyze Intracellular Transport in Neurons

Immobilization of Caenorhabditis elegans to Analyze Intracellular Transport in Neurons

التثبيت من ايليجانس كاينورهابديتيس "تحليل النقل داخل الخلايا" في الخلايا العصبية

Axonal transport and intraflagellar transport (IFT) are essential for axon and cilia morphogenesis and function. Kinesin superfamily proteins and dynein ...

Live Cell Imaging of Chromosome Segregation During Mitosis

تصوير الخلايا الحية لفصل الكروموسومات أثناء الانقسام

Chromosomes must be reliably and uniformly segregated into daughter cells during mitotic cell division. Fidelity of chromosomal segregation is controlled ...

A Quantitative Measurement of Reactive Oxygen Species and Senescence-associated Secretory Phenotype in Normal Human Fibroblasts During Oncogene-induced Senescence

قياس كمي للأنواع الأكسجين التفاعلية والنمط الظاهري الافرازية المرتبطة بالشيخوخة في الخلايا الليفية البشرية العادية أثناء الشيخوخة التي يسببها السرطاني

Cellular senescence has been considered a state of irreversible growth arrest upon exhaustion of proliferative capacity or exposure to various stresses. ...

Confocal Live Imaging of Shoot Apical Meristems from Different Plant Species

[كنفوكل] تصوير مباشر من تبادل لإطلاق النار قمية الخلايا الإنشائية من الأنواع النباتية المختلفة

The shoot apical meristem (SAM) functions as a conserved stem cell reservoir and it generates almost all aboveground tissues during the postembryonic ...

Evaluation of Fertilization State by Tracing Sperm Nuclear Morphology in Arabidopsis Double Fertilization

Evaluation of Fertilization State by Tracing Sperm Nuclear Morphology in Arabidopsis Double Fertilization

تقييم حالة الإخصاب من خلال تتبع المورفولوجيا النووية للنطفو النووي للنطفو في الإخصاب المزدوج في أرابيدوبوسيس

Flowering plants have a unique sexual reproduction system called &#8216;double fertilization&#39;,&#160;in which each of the sperm cells precisely fuses ...