Name: avian semen collection by cloacal massage and isolation of dna from sperm
Uploaded: 2018-02-05T12:30:00
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Nous remercions aide précoce avec massage cloacal, Jose Noguera et Jeffrey Kittilson pour laboratoire appuyer. Ce travail a été soutenu par un prix de ND EPSCoR FAR0022429 à BJH. Frais de publication ont été généreusement financés par le département des Sciences biologiques de NDSU.

Ce protocole comporte des sujets animaux vertébrés et a été approuvé par l’animalier institutionnel et utilisation Comité (IACUC) à North Dakota State University.
1. prélèvement d’une espèce d’oiseau à l’aide de massage cloacale
NOTE : Cloacale massage est une technique de collection de sperme efficace seulement des oiseaux actifs sexuellement, mais peut être réalisée avec succès à l’extérieur de la saison de reproduction dans les situation...

<ol>
	<li>Briskie, J. V., Montgomerie, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm+size+and+sperm+competition+in+birds.">Sperm size and sperm competition in birds.</a> Proc. R. Soc. B. 247, 89-95 (1992).</li><li>Monaghan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomeres+and+life+histories:+the+long+and+the+short+of+it.">Telomeres and life histories: the long and the short of it.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 1206, 130-142 (2010).</li><li>Carrell, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetics+of+the+male+gamete.">Epigenetics of the male gamete.</a> Fertility and Sterility. 97 (2), 267-274 (2012).</li><li>Burrows, W. H., Quinn, J. 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Nous décrivons une méthode simple et fiable de collecte de sperme de petits et moyens oiseaux en état actif sexuellement et d’extraire l’ADN des spermatozoïdes aviaire.
Le protocole d’extraction d’ADN sperme décrit est modifié par rapport à un kit par souci de simplicité, mais a été affiné pour une utilisation sur sperme aviaire. Spermatozoïdes résistent à la lyse par extraction standard produits chimiques9,13, et...

Les oiseaux sont des sujets idéaux pour les études concernant la qualité du sperme et compétition1, sperme télomère dynamique2, épigénétique3et sujets similaires, car ils sont largement utilisés dans la recherche biologique et le sperme peut être dégustée facilement à l’aide de cloacale massage. Cloacale massage est une technique manuelle douce, non invasive pour recueillir le sperme des oiseaux4,5,6. Échantillons répétés peuvent être obtenus facilement et sans outils spéciaux sont nécessaires, rendant simple à effectuer dans le domaine ou le laboratoire. Bien que le massage cloacale a été utilisé pendant des décennies, il est difficile d’apprendre de l’écrit des descriptions disponibles. Cette publication est destinée à réduire le temps et l’incertitude impliqués dans l’apprentissage de massage cloacale.
Sperme collecté des oiseaux à l’aide de massage cloacale peut être utilisé immédiatement pour la motilité évaluation4,7 ou insémination artificielle8, ou congelé pour d’autres usages tels que l’imagerie avancée et l’extraction d’ADN. Des échantillons de sperme de passereaux sont petites mais contiennent le sperme dense. L’ADN est extrait en utilisant un kit d’extraction commerciale pour plus de simplicité, avec les adaptations pour surmonter les dispositifs de sécurité spécialisées de sperme9. Après extraction, télomères de sperme peuvent être mesurées à l’aide de qPCR10.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:572px;" width="573">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Microhematocrit capillary tubes</td>
			<td style="width:71px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:119px;">22-362566</td>
			<td style="width:167px;">Any supplier can be used. Smaller tubes may be more effective for collection of small semen samples, such as from very small passerine birds like chipping sparrow.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:71px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1x PBS</td>
			<td style="width:71px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for storing semen samples prior to DNA extraction.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">DL-Dithiothreitol</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D0632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Tris base</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10708976001</td>
			<td>Any supplier can be used.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">EDTA</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1233508</td>
			<td>Any supplier can be used.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">NaCl</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right" style="width:119px;">793566</td>
			<td>Any supplier can be used.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">SDS</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1614363</td>
			<td>Any supplier can be used.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">QIAamp DNA micro kit</td>
			<td style="width:71px;">Qiagen</td>
			<td align="right" style="width:119px;">56304</td>
			<td>Qiagen QIAamp DNA micro kit is recommended specifically. This DNA extraction protocol has been attempted with other commercial kits but with little success. The reasons for this are unknown to us.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

avian semen collection by cloacal massage and isolation of dna from sperm

Collecte de sperme peut être utile pour un large éventail d’applications, y compris les études portant sur la qualité du sperme, sperme télomère dynamique et épigénétique. Les oiseaux sont des sujets largement utilisés dans la recherche biologique et sont idéales pour les études portant sur des échantillons de sperme répétées. Cependant, peu de ressources est actuellement disponibles pour ceux qui souhaitent apprendre à collecter et à extraire l’ADN des spermatozoïdes aviaire. Nous décrivons ici cloacale massage, une technique manuelle douce, non invasive pour la collecte de sperme aviaire. Bien que cette technique est établie dans la littérature, il peut être difficile d’apprendre à partir des descriptions disponibles. Nous fournissons également des informations pour extraire l’ADN de sperme aviaire à l’aide d’un kit d’extraction commerciale sous réserve de modifications. Massage cloacale peut être utilisé facilement sur n’importe quel oiseau mâle petites à moyennes en état de se reproduire. Après la collecte, le sperme peut être utilisé immédiatement pour des dosages de motilité, ou congelé pour l’extraction d’ADN suivant le protocole décrit ci-après. Ce protocole d’extraction a été affinée pour les spermatozoïdes aviaire et a été utilisé avec succès sur des échantillons prélevés dans plusieurs espèces de passereaux (Passer domesticus, Spizella passerina, Haemorhous mexicanuset Turdus migratorius ) et un columbid (Columba livia).

Massage cloacale et ADN extraction en utilisant que le protocole décrit ont été effectué sur plusieurs espèces de passereaux et un columbid (tableau 1). La présence de spermatozoïdes dans le sperme prélèvements cloacaux massage a été confirmée en affichant une petite quantité des échantillons dilués sous un microscope composé au grossissement X 400 (Figure 3). Après que l’extraction d’ADN provenant d’échantillons de sp...

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Avian Semen Collection by Cloacal Massage and Isolation of DNA from Sperm

Ce protocole décrit cloacale massage, une technique non-invasive manuelle de collecte de sperme sur les oiseaux et l’extraction d’ADN de sperme aviaire à l’aide d’un kit d’extraction commerciale sous réserve de modifications.

Collecte de sperme aviaire Massage cloacale et l’isolement de l’ADN des spermatozoïdes par

Collection of semen may be useful for a wide range of applications including studies involving sperm quality, sperm telomere dynamics, and epigenetics. ...

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