Name: avian semen collection by cloacal massage and isolation of dna from sperm
Uploaded: 2018-02-05T12:30:00
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Agradecemos a Jose Noguera de asistencia temprana con masaje cloacal, y Jeffrey Kittilson de laboratorio de apoyo. Este trabajo fue apoyado por un premio ND EPSCoR FAR0022429 BJH. Los costos de publicación generosamente fueron apoyados por el Departamento de ciencias biológicas de ganado.

Este protocolo implica sujetos animales vertebrados y ha sido aprobado por el institucional cuidado Animal y el Comité uso (IACUC) en Universidad de estado de Dakota del norte.
1. colección de semen de passerine pájaro mediante masaje cloacal
Nota: El masaje Cloacal es una técnica de colección de semen eficaz reproductivamente activa aves solamente, pero puede realizarse con éxito fuera de la temporada de cría en situaciones de cautiverio apropiadas. Actividad ...

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	<li>Briskie, J. V., Montgomerie, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm+size+and+sperm+competition+in+birds.">Sperm size and sperm competition in birds.</a> Proc. R. Soc. B. 247, 89-95 (1992).</li><li>Monaghan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomeres+and+life+histories:+the+long+and+the+short+of+it.">Telomeres and life histories: the long and the short of it.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 1206, 130-142 (2010).</li><li>Carrell, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetics+of+the+male+gamete.">Epigenetics of the male gamete.</a> Fertility and Sterility. 97 (2), 267-274 (2012).</li><li>Burrows, W. H., Quinn, J. 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Describimos un método simple y confiable para la recogida de semen de aves pequeñas y medianas en condición activa reproductivamente y extracción de ADN de esperma aviar.
El protocolo de extracción de ADN de semen descrita es modificado a partir de un kit para la simplicidad, pero fue refinado para el uso en semen aviar. Espermatozoides son resistentes a la lisis por productos químicos de extracción estándar9,13, y las muestras...

Las aves son sujetos ideales para estudios relacionados con la calidad del esperma y competencia1esperma telomere dinámica2, epigenética3y temas similares, como son ampliamente utilizados en la investigación biológica y esperma puede probarse fácilmente usando cloacal masaje. Masaje cloacal es una técnica manual suave, no invasiva para la recogida de semen de aves4,5,6. Muestras repetidas pueden obtenerse fácilmente y herramientas especiales no se necesitan, lo que facilita llevar a cabo en el campo o en laboratorio. Aunque masaje cloacal ha estado en uso durante décadas, es difícil aprender de las descripciones por escrito disponible. Esta publicación se pretende reducir el tiempo y la incertidumbre implicados en el aprendizaje de masaje cloacal.
Semen de aves con masaje cloacal puede ser utilizada inmediatamente para movilidad evaluación4,7 o8de la inseminación artificial, o congelado para otros usos como proyección de imagen avanzada y extracción de ADN. Muestras de semen de las aves paseriformes son pequeñas pero contienen esperma densamente. Se extrajo ADN utilizando un kit comercial de extracción para la simplicidad, con modificaciones para superar las características de protección especializadas de esperma9. Después de la extracción, se pueden medir los telómeros de esperma utilizando qPCR10.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:572px;" width="573">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Microhematocrit capillary tubes</td>
			<td style="width:71px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:119px;">22-362566</td>
			<td style="width:167px;">Any supplier can be used. Smaller tubes may be more effective for collection of small semen samples, such as from very small passerine birds like chipping sparrow.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:71px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1x PBS</td>
			<td style="width:71px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for storing semen samples prior to DNA extraction.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">DL-Dithiothreitol</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D0632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Tris base</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10708976001</td>
			<td>Any supplier can be used.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">EDTA</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1233508</td>
			<td>Any supplier can be used.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">NaCl</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right" style="width:119px;">793566</td>
			<td>Any supplier can be used.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">SDS</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1614363</td>
			<td>Any supplier can be used.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">QIAamp DNA micro kit</td>
			<td style="width:71px;">Qiagen</td>
			<td align="right" style="width:119px;">56304</td>
			<td>Qiagen QIAamp DNA micro kit is recommended specifically. This DNA extraction protocol has been attempted with other commercial kits but with little success. The reasons for this are unknown to us.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

avian semen collection by cloacal massage and isolation of dna from sperm

Colección de semen puede ser útil para una amplia gama de aplicaciones, incluyendo estudios que involucran la calidad del esperma, esperma telomere dinámica y epigenética. Las aves son temas ampliamente utilizados en la investigación biológica y son ideales para estudios con muestras de esperma repetidas. Sin embargo, pocos recursos están disponibles para aquellos que deseen aprender a recoger y extraer ADN de esperma aviar. Aquí describimos cloacal masaje, una técnica manual suave, no invasiva para la recogida de esperma aviar. Aunque esta técnica se establece en la literatura, puede ser difícil de aprender de las descripciones disponibles. También ofrecemos información para la extracción de ADN de semen aviar utilizando un kit de extracción comercial con modificaciones. Masaje cloacal puede utilizarse fácilmente en cualquier pájaro macho tamaño pequeño a mediano en condición reproductiva. Después de colección, el semen puede ser utilizado inmediatamente para los ensayos de motilidad, o congelado para la extracción de ADN siguiendo el protocolo descrito en este documento. Este protocolo de extracción fue refinado aviar de los espermatozoides y se ha utilizado con éxito en muestras recogidas de varias especies de paseriformes (Passer domesticus, Spizella passerina, Haemorhous mexicanusy migratorius de Turdus ) y un columbid (Columba livia).

Cloacal de masaje y extracción de DNA usando que el protocolo descrito ha llevado a cabo en varias especies de passeriformes y uno columbid (tabla 1). La presencia de espermatozoides en las muestras de semen recogidas por masaje cloacal fue confirmada mediante la visualización de una pequeña cantidad de las muestras bajo un microscopio compuesto con 400 aumentos (figura 3). Después de extraer ADN de muestras de semen recogidas de gorrione...

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Avian Semen Collection by Cloacal Massage and Isolation of DNA from Sperm

Este protocolo describe cloacal masaje, una técnica manual no invasivo para la recogida de semen de aves y la extracción de ADN de esperma aviar utilizando un kit de extracción comercial con modificaciones.

Colección de Semen aviar por masaje Cloacal y el aislamiento de ADN de esperma

Collection of semen may be useful for a wide range of applications including studies involving sperm quality, sperm telomere dynamics, and epigenetics. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Harvesting Sperm and Artificial Insemination of Mice

Los espermatozoides de cosecha y la inseminación artificial de los ratones

Rodents of the genus Peromyscus (deer mice) are the most prevalent native North American mammals.  Peromyscus species are used in a wide range of research ...

Investigación

Biología

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El aislamiento de ADN genómico de colas de ratón

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Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

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Aislamiento y cultivo de células embrionarias progenitoras aviar valvular

Proper formation and function of embryonic heart valves is critical for developmental progression. The early embryonic heart is a U-shaped tube of ...

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Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

El aislamiento y la In vitro La activación de Caenorhabditis elegans El esperma

Males and hermaphrodites are the two naturally found sexual forms in the nematode C. elegans. The amoeboid sperm are produced by both males and ...

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Un método práctico y novela para extraer el ADN genómico de los kits de extracción de sangre para la Preservación Plasma Protein

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