Name: avian semen collection by cloacal massage and isolation of dna from sperm
Uploaded: 2018-02-05T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Avian Semen Collection by Cloacal Massage and Isolation of DNA from Sperm at JoVE.com

Vi tackar Jose Noguera för tidig hjälp med Svabbprover massage, och Jeffrey Kittilson för lab stöd. Detta arbete stöds av en ND EPSCoR FAR0022429 award till BJH. Publikationen kostar var generöst stöds av NDSU Institutionen för biologiska vetenskaper.

Detta protokoll innebär vertebrate djur ämnen och har godkänts av den institutionella djur vård och användning kommittén (IACUC) vid North Dakota State University.
1. sperman samling från en tätting med hjälp av Svabbprover massage
Obs: Svabbprover massage är en effektiv sperma samling teknik på reproduktivt aktiva fåglar bara, men kan utföras framgångsrikt utanför häckningssäsongen i lämpliga fångenskap situationer. Reproduktiva aktivitet bör fast...

<ol>
	<li>Briskie, J. V., Montgomerie, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm+size+and+sperm+competition+in+birds.">Sperm size and sperm competition in birds.</a> Proc. R. Soc. B. 247, 89-95 (1992).</li><li>Monaghan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomeres+and+life+histories:+the+long+and+the+short+of+it.">Telomeres and life histories: the long and the short of it.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 1206, 130-142 (2010).</li><li>Carrell, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetics+of+the+male+gamete.">Epigenetics of the male gamete.</a> Fertility and Sterility. 97 (2), 267-274 (2012).</li><li>Burrows, W. H., Quinn, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+collection+of+spermatozoa+from+the+domestic+fowl+and+turkey.">The collection of spermatozoa from the domestic fowl and turkey.</a> Poultry Science. 16 (1), 19-24 (1937).</li><li>Wolfson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cloacal+protuberance:+a+means+for+determining+breeding+condition+in+live+male+birds.">The cloacal protuberance: a means for determining breeding condition in live male birds.</a> Bird-Banding. 23 (4), 159-165 (1952).</li><li>Kast, T. L., Ketterson, E. D., Nolan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+ejaculate+quality+in+dark-eyed+juncos+according+to+season,+stage+of+reproduction,+and+testosterone+treatment.">Variation in ejaculate quality in dark-eyed juncos according to season, stage of reproduction, and testosterone treatment.</a> The Auk. 115 (3), 684-693 (1998).</li><li>Helfenstein, F., Podevin, M., Richner, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm+morphology,+swimming+velocity,+and+longevity+in+the+house+sparrow+Passer+domesticus.">Sperm morphology, swimming velocity, and longevity in the house sparrow Passer domesticus.</a> Behav. Ecol. Sociobiol. 64, 557-565 (2010).</li><li>Purchase, C. F., Earle, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modifications+to+the+IMAGEJ+computer+assisted+sperm+analysis+plugin+greatly+improve+efficiency+and+fundamentally+alter+the+scope+of+attainable+data.">Modifications to the IMAGEJ computer assisted sperm analysis plugin greatly improve efficiency and fundamentally alter the scope of attainable data.</a> J. Appl. Icthyol. 28, 1013-1016 (2012).</li><li>Gill, P., Jeffreys, A. J., Werrett, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forensic+application+of+DNA+'fingerprints'.">Forensic application of DNA 'fingerprints'.</a> Nature. 318 (12), 577-579 (1985).</li><li>Criscuolo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+quantitative+PCR+assay+for+measurement+of+avian+telomeres.">Real-time quantitative PCR assay for measurement of avian telomeres.</a> J. Avian Biol. 40, 342-347 (2009).</li><li>Lovette, I. J., Fitzpatrick, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cornell Lab of Ornithology Handbook of Bird Biology, 3rd Edition. , (2016).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> QIAamp DNA Micro Handbook. , (2014).</li><li>Carter, K. L., Robertson, B. C., Kempenaers, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+differential+DNA+extraction+method+for+sperm+on+the+perivitelline+membrane+of+avian+eggs.">A differential DNA extraction method for sperm on the perivitelline membrane of avian eggs.</a> Mol. Ecol. 9, 2149-2154 (2000).</li><li>Birkhead, T. R., Buchanan, K. L., Devoogd, T. J., Pellatt, E. J., Catchpole, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Song,+sperm+quality+and+testes+asymmetry+in+the+sedge+warbler.">Song, sperm quality and testes asymmetry in the sedge warbler.</a> Anim. Behav. 53, 965-971 (1997).</li><li>L&#252;pold, S., Calhim, S., Immler, S., Birkhead, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm+morphology+and+sperm+velocity+in+passerine+birds.">Sperm morphology and sperm velocity in passerine birds.</a> Proc. R. Soc. B. 276, 1175-1181 (2009).</li><li>Samour, J. H., Smith, C. A., Moore, H. D., Markham, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Semen+collection+and+spermatozoa+characteristics+in+budgerigars+(Melopsittacus+undulates).">Semen collection and spermatozoa characteristics in budgerigars (Melopsittacus undulates).</a> Vet. Rec. 118, 397-399 (1986).</li><li>Stelzer, G., Crosta, L., B&#252;rkle, M., Krautwalt-Junghanns, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attempted+semen+collection+using+the+massage+technique+and+semen+analysis+in+various+psittacine+species.">Attempted semen collection using the massage technique and semen analysis in various psittacine species.</a> J. Avian Med. Surg. 19 (1), 7-13 (2005).</li></ol>

Vi beskriver en enkel och tillförlitlig metod för insamling av sperma från små och medelstora fåglar i reproduktivt aktivet villkorar och extrahera DNA från aviär spermier.
Protokollet beskrivs sperma DNA extraktion ändras från ett kit för enkelhet, men var raffinerad för användning på aviär sperma. Spermier är resistenta mot lys av standard utvinning kemikalier9,13, och sperma prov som tagits från tättingar är ganska...

Fåglar är idealisk ämnen för studier på spermiernas kvalitet och konkurrens1, spermier telomeren dynamics2, epigenetik3och liknande ämnen, som de används i biologisk forskning och spermier kan avsmakas enkelt använda Svabbprover massage. Svabbprover massage är en mild, icke-invasiv manuell teknik för insamling av sperma från fåglar4,5,6. Upprepade prover kan erhållas lätt och inga speciella verktyg behövs, gör det enkelt att utföra i fältet eller lab. Även om Svabbprover massage har varit i bruk i årtionden, är det svårt att lära från de tillgängliga skriftliga beskrivningar. Denna publikation är avsedd att minska tiden och osäkerhet involverad i lärande Svabbprover massage.
Sperma som samlats från fåglar med hjälp av Svabbprover massage kan användas omedelbart för motilitet bedömning4,7 eller artificiell insemination8eller fryst för andra användningsområden såsom avancerade imaging och DNA-extraktion. Sperman prover från tättingar är små men innehåller tätt packade spermier. DNA extraheras med en kommersiell utvinning kit för enkelhet, med ändringar att övervinna specialiserade skyddande funktioner i spermier9. Efter extraktion, kan spermier telomerer mätas med qPCR10.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:572px;" width="573">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Microhematocrit capillary tubes</td>
			<td style="width:71px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:119px;">22-362566</td>
			<td style="width:167px;">Any supplier can be used. Smaller tubes may be more effective for collection of small semen samples, such as from very small passerine birds like chipping sparrow.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:71px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1x PBS</td>
			<td style="width:71px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for storing semen samples prior to DNA extraction.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">DL-Dithiothreitol</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D0632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Tris base</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10708976001</td>
			<td>Any supplier can be used.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">EDTA</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1233508</td>
			<td>Any supplier can be used.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">NaCl</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right" style="width:119px;">793566</td>
			<td>Any supplier can be used.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">SDS</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1614363</td>
			<td>Any supplier can be used.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">QIAamp DNA micro kit</td>
			<td style="width:71px;">Qiagen</td>
			<td align="right" style="width:119px;">56304</td>
			<td>Qiagen QIAamp DNA micro kit is recommended specifically. This DNA extraction protocol has been attempted with other commercial kits but with little success. The reasons for this are unknown to us.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

avian semen collection by cloacal massage and isolation of dna from sperm

Insamling av sperma kan vara användbar för en rad tillämpningar, inklusive studier på spermiernas kvalitet, spermier telomeren dynamics och epigenetik. Fåglar är utbredda ämnen i biologisk forskning och är idealiska för studier med upprepad spermier prover. Dock är några resurser tillgängliga för dem som vill lära sig att samla in och extrahera DNA från aviär spermier. Här beskriver vi Svabbprover massage, en mild, icke-invasiv manuell teknik för att samla aviär spermier. Även om denna teknik är etablerad i litteraturen, kan det vara svårt att lära av de tillgängliga beskrivningarna. Vi tillhandahåller också information för att extrahera DNA från aviär sperma med en kommersiell utvinning kit med ändringar. Svabbprover massage kan lätt användas på alla små - till medelstora manliga fågel i reproduktiv skick. Efter insamling, sperman kan användas omedelbart för motilitet analyser eller fryst för DNA-extraktion som efter det protokoll som beskrivs häri. Denna utvinning protokollet raffinerade för aviär spermier och har med framgång använts på prover som tagits från flera tättingar arter (Passer domesticus, Spizella passerina, Haemorhous mexicanusoch Turdus migratorius ) och en columbid (Columba livia).

Svabbprover massage och DNA extraktion med hjälp av protokollet beskrivs har utförts på flera arter inom ordningen tättingar och en columbid (tabell 1). Närvaro av spermier i sperma prov som samlats av Svabbprover massage bekräftades genom att visa en liten mängd av de utspädda proverna under ett compound-Mikroskop vid 400 X förstoring (figur 3). Efter att extrahera DNA från sperma prover samlas in från gråsparvar med hjälp av pr...

Watch this Scientific Journal Video about Avian Semen Collection by Cloacal Massage and Isolation of DNA from Sperm at JoVE.com

Avian Semen Collection by Cloacal Massage and Isolation of DNA from Sperm

Det här protokollet beskriver Svabbprover massage, en icke-invasiv manuell teknik för insamling av sperma från fåglar och DNA-extraktion från aviär sperma med en kommersiell utvinning kit med ändringar.

Aviär seminstation av Svabbprover Massage och isolering av DNA från spermier

Collection of semen may be useful for a wide range of applications including studies involving sperm quality, sperm telomere dynamics, and epigenetics. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Harvesting Sperm and Artificial Insemination of Mice

Skörd sperma och artificiell insemination av Möss

Rodents of the genus Peromyscus (deer mice) are the most prevalent native North American mammals.  Peromyscus species are used in a wide range of research ...

Isolation of Genomic DNA from Mouse Tails

Isolering av genomisk DNA från mus Tails

Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue

Mänskliga Pancreatic Islet Isolering: Del I: Matsmältning och Insamling av pankreas vävnad

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

Isolation and Culture of Avian Embryonic Valvular Progenitor Cells

Isolering och odling av aviär Embryonala Klaffel progenitorceller

Proper formation and function of embryonic heart valves is critical for developmental progression. The early embryonic heart is a U-shaped tube of ...

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

Isolering och In vitro Aktivering av Caenorhabditis elegans Spermier

Males and hermaphrodites are the two naturally found sexual forms in the nematode C. elegans. The amoeboid sperm are produced by both males and ...

A Practical and Novel Method to Extract Genomic DNA from Blood Collection Kits for Plasma Protein Preservation

En praktisk och ny metod att extrahera genomisk DNA från Kits blodinsamling för Plasma Protein Preservation

Laboratory tests can be done on the cellular or  fluid portions of the blood. The use of different blood collection tubes  determines the portion of the ...

Collection, Isolation and Enrichment of Naturally Occurring Magnetotactic Bacteria from the Environment

Insamling, isolering och anrikning av naturligt förekommande Magnetotactic bakterier från miljön

Magnetotactic bacteria (MTB) are aquatic microorganisms that were first notably described in 19751 from sediment samples collected in salt marshes of ...

Culturing Caenorhabditis elegans in Axenic Liquid Media and Creation of Transgenic Worms by Microparticle Bombardment

Culturing Caenorhabditis elegans in Axenic Liquid Media and Creation of Transgenic Worms by Microparticle Bombardment

Odling<em&gt; Caenorhabditis elegans</em &gt; I axenisk Liquid Media och Skapande av transgena maskarna från mikropartikelbombardemang

In this protocol, we present the required materials, and the procedure for making modified&#160;C. elegans&#160;Habituation and Reproduction media ...

DNA Electroporation, Isolation and Imaging of Myofibers

DNA Elektroporation, isolering och avbildning av Myofibers

Mature muscle has a unique structure that is amenable to live cell imaging. Herein, we describe the experimental protocol for expressing fluorescently ...

Sperm Collection of Differential Quality Using Density Gradient Centrifugation

Spermier samling av differentiell kvalitet med hjälp av täthet lutning centrifugering

In sexual reproduction, a male gamete or sperm cell fuses with a female gamete to bring about fertilization. However, a large number of sperm cells with ...