Name: pancreatic duct infusion: an effective and selective method of drug and viral delivery
Uploaded: 2021-09-30T13:00:00
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लेखकों के पास कोई पावती नहीं है । वित्त पोषण झेजियांग प्रांत के स्वास्थ्य और परिवार नियोजन आयोग (अनुदान 20146242) और वेनझोउ विज्ञान और प्रौद्योगिकी ब्यूरो (अनुदान Y20140248) के फाउंडेशन से प्राप्त हुआ था ।

सभी पशु प्रयोगों पिट्सबर्ग के बच्चों के अस्पताल और पिट्सबर्ग संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति के विश्वविद्यालय में पशु अनुसंधान और देखभाल समिति द्वारा अनुमोदित किया गया ।
1. प्रीऑपरेटिव ?...

<ol>
	<li>Gittes, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+biology+of+the+pancreas:+a+comprehensive+review.">Developmental biology of the pancreas: a comprehensive review.</a> Dev Biol. 326 (1), 4-35 (2009).</li><li>Gu, G., Dubauskaite, J., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+evidence+for+the+pancreatic+lineage:+NGN3++cells+are+islet+progenitors+and+are+distinct+from+duct+progenitors.">Direct evidence for the pancreatic lineage: NGN3+ cells are islet progenitors and are distinct from duct progenitors.</a> Development. 129 (10), 2447-2457 (2002).</li><li>Weinberg, N., Ouziel-Yahalom, L., Knoller, S., Efrat, S., Dor, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+tracing+evidence+for+in+vitro+dedifferentiation+but+rare+proliferation+of+mouse+pancreatic+beta-cells.">Lineage tracing evidence for in vitro dedifferentiation but rare proliferation of mouse pancreatic beta-cells.</a> Diabetes. 56 (5), 1299-1304 (2007).</li><li>Raper, S. E., DeMatteo, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus-mediated+in+vivo+gene+transfer+and+expression+in+normal+rat+pancreas.">Adenovirus-mediated in vivo gene transfer and expression in normal rat pancreas.</a> Pancreas. 12 (4), 401-410 (1996).</li><li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+cell+tracing,+lineage+tagging+and+targeted+genetic+manipulations+in+multiple+cell+types+using+pancreatic+ductal+infusion+of+adeno-associated+viral+vectors+and/or+cell-tagging+dyes.">Pancreatic cell tracing, lineage tagging and targeted genetic manipulations in multiple cell types using pancreatic ductal infusion of adeno-associated viral vectors and/or cell-tagging dyes.</a> Nat Protoc. 9 (12), 2719-2724 (2014).</li><li>Song, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGFR+signaling+regulates+beta+cell+proliferation+in+adult+mice.">EGFR signaling regulates beta cell proliferation in adult mice.</a> J Biol Chem. 291 (43), (2016).</li><li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M2+macrophages+promote+beta-cell+proliferation+by+up-regulation+of+SMAD7.">M2 macrophages promote beta-cell proliferation by up-regulation of SMAD7.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (13), E1211-E1220 (2014).</li><li>Laukkarinen, J. M., Van Acker, G. J., Weiss, E. R., Steer, M. L., Perides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+acute+biliary+pancreatitis+induced+by+retrograde+pancreatic+duct+infusion+of+Na-taurocholate.">A mouse model of acute biliary pancreatitis induced by retrograde pancreatic duct infusion of Na-taurocholate.</a> Gut. 56 (11), 1590-1598 (2007).</li><li>Lichtenstein, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+lung+injury+in+two+experimental+models+of+acute+pancreatitis:+infusion+of+saline+or+sodium+taurocholate+into+the+pancreatic+duct.">Acute lung injury in two experimental models of acute pancreatitis: infusion of saline or sodium taurocholate into the pancreatic duct.</a> Crit Care Med. 28 (5), 1497-1502 (2000).</li><li>Perides, G., van Acker, G. J., Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+acute+biliary+pancreatitis+induced+by+retrograde+infusion+of+bile+acids+into+the+mouse+pancreatic+duct.">Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct.</a> Nat Protoc. 5 (2), 335-341 (2010).</li><li>Guo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+transduction+and+labeling+of+pancreatic+ducts+by+targeted+recombinant+viral+infusion+into+mouse+pancreatic+ducts.">Specific transduction and labeling of pancreatic ducts by targeted recombinant viral infusion into mouse pancreatic ducts.</a> Lab Invest. 93 (11), 1241-1253 (2013).</li><li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenin3+activation+is+not+sufficient+to+direct+duct-to-beta+cell+transdifferentiation+in+the+adult+pancreas.">Neurogenin3 activation is not sufficient to direct duct-to-beta cell transdifferentiation in the adult pancreas.</a> J Biol Chem. 288 (35), 25297-25308 (2013).</li></ol>

यह काम अग्नाशय वाहिनी जलसेक के पीछे की कार्यप्रणाली का विस्तार से वर्णन करता है, जो जीन और अन्य अणुओं के वितरण के लिए एक प्रभावी माउस मॉडल है, विशेष रूप से और प्रभावी रूप से अग्न्याशय के लिए। विभिन्न समू?...

अग्न्याशय एक द्विअध्यकार अंग है, जिसमें एंडोक्राइन और एक्सोक्राइन दोनों घटक होते हैं। कई विकृतियां अग्न्याशय को पीड़ित कर सकती हैं, जिनमें मधुमेह, अग्नाशय की बीमारी और अग्नाशय का कैंसर1शामिल है। इन बीमारियों के सभी तीन अध्ययन के सक्रिय क्षेत्रों को चिह्नित, न केवल तत्काल चिकित्सा विकसित करने के लिए, लेकिन यह भी बेहतर उनके रोग विज्ञान को समझने के लिए ।
एक लक्षित चिकित्सीय वितरण विधि फायदेमंद होगी। हमने एक अग्नाशय वाहिनी जलसेक तकनीक विकसित की है जो अग्नाशय की कोशिकाओं को दवा और वायरल वितरण के लिए एक प्रभावी और चयनात्मक विधि है। इस मॉडल में, अग्नाशय की नली चुनिंदा कैनुलेटेड है, और आम पित्त वाहिनी को ऑक्सलाइड किया जाता है, जो विशेष रूप से अग्न्याशय को वितरण के लिए अनुमति देता है।
यह तकनीक विशिष्ट कोशिका प्रकारों के वंश का पता लगाने की अनुमति दे सकती है ताकि अग्नाशय के विकास और विकृति 2,3के लिए महत्वपूर्ण विकासात्मकरास्तोंको और स्पष्ट किया जा सके । वायरल वैक्टर में विभिन्न प्रवर्तक कोशिका रेखाओं के विशिष्ट लक्ष्यीकरण और इन कोशिका रेखाओं में जीन की शुरूआत के लिए अनुमति देते हैं4,5. यह काम एक वायरल वेक्टर के अग्नाशय वाहिनी अर्क के बाद अग्न्याशय के भीतर एक हरे फ्लोरोसेंट प्रोटीन (GFP) की अभिव्यक्ति को दर्शाता है एक नकली सर्जरी बनाम GFP व्यक्त ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="762">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:288px;">Mice (25-30g, 8-12 weeks old)</td>
			<td style="width:171px;">Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:288px;">Ketofen</td>
			<td style="width:171px;">Henry Schein Inc.</td>
			<td style="width:137px;">5487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:288px;">Ethanol (70%)</td>
			<td style="width:171px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:137px;">34923</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:288px;">Sterile Saline Solution</td>
			<td style="width:171px;">Baxter Healthcare Corp.</td>
			<td style="width:137px;">2B-13-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:288px;">Protective Equipment</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:288px;">Hair Removal Product</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td>Nair or trimmer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:288px;">Gauze Pads 2in x 2in</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Healthcare</td>
			<td style="width:137px;">22-362-178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:288px;">Needles (30.5G and 25G)</td>
			<td style="width:171px;">Becton Dicksinson and Co.</td>
			<td style="width:137px;">305106 and 305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:288px;">Syringe for Ketofen and Saline</td>
			<td style="width:171px;">Becton Dicksinson and Co.</td>
			<td style="width:137px;">309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:288px;">Syringe for Pump</td>
			<td style="width:171px;">Henke Sass Wolf</td>
			<td style="width:137px;">4010.200V0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:288px;">Infusion Pump</td>
			<td style="width:171px;">Pump Systems Inc.</td>
			<td style="width:137px;">NE-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:288px;">Infusion Catheter</td>
			<td style="width:171px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:137px;">CMF31G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:288px;">Curved Bulldog Clamps (2)</td>
			<td style="width:171px;">Roboz</td>
			<td style="width:137px;">RS-7439</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:288px;">Arruga Forceps</td>
			<td style="width:171px;">Roboz</td>
			<td style="width:137px;">RS-5163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:288px;">Adson Forcep</td>
			<td style="width:171px;">Roboz</td>
			<td style="width:137px;">RS-5234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:288px;">Needle Holder</td>
			<td style="width:171px;">Roboz</td>
			<td>RS-7882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:288px;">Scissor</td>
			<td style="width:171px;">Roboz</td>
			<td>RS-5982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:288px;">Cotton Tip Applicators</td>
			<td style="width:171px;">Physician Sales and Services</td>
			<td>22-9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:288px;">Dissecting Microscope</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:288px;">Suture</td>
			<td style="width:171px;">Owens and Minor</td>
			<td>SXMD1B402</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

pancreatic duct infusion: an effective and selective method of drug and viral delivery

अग्न्याशय एंडोक्राइन और एक्सोक्राइन दोनों घटकों के साथ एक द्विअध्यशील अंग है। कई विकृतियां अग्न्याशय को पीड़ित कर सकती हैं, जिनमें मधुमेह, अग्नाशय की बीमारी और अग्नाशय का कैंसर शामिल है। इन बीमारियों के सभी तीन अध्ययन के सक्रिय क्षेत्रों को चिह्नित, न केवल तत्काल चिकित्सा विकसित करने के लिए, लेकिन यह भी बेहतर उनके रोग विज्ञान को समझने के लिए । अध्ययन के इन क्षेत्रों को आगे बढ़ाने के लिए कुछ उपकरण हैं । अग्नाशय वाहिनी जलसेक एक महत्वपूर्ण तकनीक है कि वंश ट्रेसिंग, जीन परिचय, और सेल लाइन विशिष्ट लक्ष्यीकरण के लिए अनुमति दे सकते है । तकनीक के लिए डुओडेनम और एम्पुला के दूसरे हिस्से के जटिल विच्छेदन की आवश्यकता होती है, जिसके बाद पित्त वाहिनी के ऑक्सीकरण और अग्नाशय वाहिनी के कैनुलेशन होते हैं। हालांकि तकनीक तकनीकी रूप से पहली बार में चुनौतीपूर्ण है, अनुप्रयोगों असंख्य हैं । समूहों के बीच प्रक्रिया की बारीकियों में अस्पष्टता एक मानक प्रोटोकॉल की आवश्यकता पर प्रकाश डाला । यह काम एक वायरल वेक्टर के अग्नाशय वाहिनी अर्क के बाद अग्न्याशय के भीतर एक हरे फ्लोरोसेंट प्रोटीन (GFP) की अभिव्यक्ति का वर्णन करता है एक नकली सर्जरी बनाम GFP व्यक्त । जलसेक और इसलिए अभिव्यक्ति अग्न्याशय के लिए विशिष्ट है, किसी भी अन्य ऊतक प्रकार में मौजूद अभिव्यक्ति के बिना।

अभ्यास और सावधान शल्य चिकित्सा तकनीक के साथ, इन चूहों की जीवित रहने की दर 95% से अधिक होनी चाहिए। जलसेक के एक सप्ताह बाद, वांछित प्रभाव अग्न्याशय में स्पष्ट होना चाहिए। 10 से 12 सप्ताह की उम्र मे?...

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Pancreatic Duct Infusion: An Effective and Selective Method of Drug and Viral Delivery

अग्नाशय वाहिनी जलसेक एक महत्वपूर्ण तकनीक है कि वंश ट्रेसिंग, जीन परिचय, और सेल लाइन विशिष्ट लक्ष्यीकरण के लिए अनुमति दे सकते है । अग्नाशय की कोशिकाओं को दवा और वायरल वितरण के लिए एक अग्नाशय वाहिनी जलसेक तकनीक यहां प्रस्तुत की जाती है।

अग्नाशय वाहिनी जलसेक: दवा और वायरल वितरण की एक प्रभावी और चयनात्मक विधि

The pancreas is a bifunctional organ with both endocrine and exocrine components. A number of pathologies can afflict the pancreas, including diabetes, ...

इस अग्नाशय वाहिनी जलसेक प्रक्रिया का समग्र लक्ष्य अग्न्याशय में वंश अनुरेखण, जीन परिचय, और सेल लाइन विशिष्ट लक्ष्यीकरण को सक्षम करना है। इस विधि से अग्न्याशय को प्रभावित करने वाली बीमारियों के बारे में महत्वपूर्ण सवालों के जवाब देने में मदद मिल सकती है, जिसमें क्रोनिक अग्नाशयशोथ, मधुमेह और अग्नाशय का कैंसर शामिल है। शुरू करने के लिए, एक एनेस्थेटाइज्ड माउस को विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे रखें ताकि इसका पेट देखने के क्षेत्र के केंद्र में तैनात हो।एक शल्य टेप के साथ जानवर को स्थिर करें और फिर उन्हें सूखने से रोकने के लिए अपनी आंखों पर एक नेत्र मरहम लागू करें। इसके बाद, माउस के पेट को हेयर रिमूवल क्रीम की मोटी परत से ढक दें। और लगभग तीन मिनट के बाद, धीरे से सभी बालों को हटाने के लिए 70% इथेनॉल में भिगोया धुंध के साथ क्रीम मिटा।अंत में, त्वचा को 70% इथेनॉल से पोंछें, इसके बाद किसी भी संदूषक को हटाने और त्वचा को कीटाणुरहित करने के लिए 10% पोविडोन आयोडाइड समाधान के बाद। सर्जरी शुरू करने के लिए, एक स्केलपेल के साथ एक मिडलाइन त्वचा चीरा बनाएं जो xiphoid प्रक्रिया से अम्बिलिकस तक फैली हुई है। फिर एडसन संदंश का उपयोग कर, पेरिटोनम उठा और कैंची के साथ एक छोटे से मिडलाइन छेद बनाते हैं ।पेरिटोनम के मिडलाइन के साथ कट का विस्तार करें ताकि इसकी लंबाई त्वचा के चीरे की लंबाई के बराबर हो। इसके बाद, जिगर को खींचने के लिए कुंद रिट्रैक्टर्स का उपयोग करें और आम पित्त वाहिनी को उजागर करने के बाद, इसे घुमावदार बुलडॉग वैस्कुलर क्लैंप के साथ दबाएं। डुओडेनम और अरुगा संदंश के साथ पहचानें, इसे डुओडेनम के दूसरे हिस्से की पूर्ववर्ती सतह पर एक सफेद स्थान के रूप में दिखाई देने वाले पैपिला को प्रदर्शित करने के लिए इसे बाहर निकालें।अग्नाशय वाहिनी की पहचान करने के लिए, डुओडेनम कौडली को वापस लें, फिर डुओडेनम को 30-1/5 गेज सुई की स्थिति में रखें और अपनी दीवार पर एक पंचर बनाएं जो सीधे पैपिला के विपरीत है। समाधान को बढ़ावा देने के लिए, बनाए गए डुओडेनोटॉमी के माध्यम से एक जलसेक पंप से जुड़े कैथेटर को पेश करें और इसे वाहिनी के साथ स्लाइड करें जब तक कि यह पोत के भीतर दिखाई न दे, लेकिन मामूली डक्टल सहायक नदियों को दरकिनार करने से बचने के लिए एक सेंटीमीटर से आगे नहीं पहुंचता है। कैथेटर को दूसरे घुमावदार बुलडॉग वैस्कुलर क्लैंप के साथ क्लैंपिंग करके स्थिर करें।फिर नली में समाधान के 150 माइक्रोलीटर के जलसेक शुरू करने के लिए पंप चालू करें। इसके बाद, संचार मात्रा के किसी भी नुकसान से बचने के लिए लगभग 1.5 मिलीलीटर खारा माउस के पेरिटोनम को इंजेक्ट करें और फिर उपयोग को रोकने के लिए एक नम धुंध के साथ उजागर आंत्र को कवर करें। एक बार जलसेक पूरा हो जाने के बाद, स्थिर कैथेटर को छोड़ दें और बुलडॉग क्लैंप का उपयोग करें, धीरे-धीरे इसे अग्नाशय की नली से हटा दें।फिर आम पित्त वाहिनी से क्लैंप जारी करें। पेरिटोनम और त्वचा को लगातार एक परत में टांका लगाकर बंद करें और एनाल्जेसिक की दो खुराकों में से पहली को प्रशासित करें, जिनमें से दूसरा अगले दिन दिया जाएगा। फिर माउस को एक गर्मी दीपक के नीचे तैनात पिंजरे में वापस करें और जानवर को भोजन और पानी विज्ञापन लिबिटम प्रदान करें।माउस का निरीक्षण करें जब तक कि यह पर्याप्त चेतना वापस नहीं ले ले ले। सर्जरी के सात दिन बाद, इच्छामृत्यु वाले पशु अग्न्याशय के साथ-साथ तिल्ली, यकृत और ग्रहणेरम से उत्पाद शुल्क नियंत्रण के रूप में सेवारत। पूरे अलग ऊतकों को 4% पैराफॉर्मल्डिहाइड समाधान में विसर्जित करें और उन्हें रात भर चार डिग्री सेल्सियस पर ठीक करें।एक बार ऊतकों को ठीक कर दिया जाता है, क्रायो नमूनों को चार डिग्री सेल्सियस पर 30% सुक्रोज समाधान में भिगोकर रात भर बचाता है। एक रात क्रायो संरक्षण के बाद, स्नैप तरल नाइट्रोजन में नमूनों को फ्रीज करें और एक माइक्रोटॉम का उपयोग करके, छह माइक्रोमीटर पर ऊतक वर्गों में कटौती करें। अंत में, फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के तहत अनुभागों की छवि।यहां प्रस्तुत अग्न्याशय वर्गों की सूक्ष्म छवियां चूहों से सात दिन नकली सर्जरी और अग्नाशय वाहिनी AAV8 के जलसेक के बाद GFP जीन ले जाने के लिए उत्पादित कर रहे हैं । जिगर, तिल्ली, और AAV8 के साथ संचार माउस से अलग duodenum किसी भी GFP संकेत नहीं दिखा था, जबकि अग्न्याशय प्रमुख GFP अभिव्यक्ति का पता चला, अग्नाशय-अग्नाशय वाहिनी जलसेक के बाद वायरस के विशिष्ट वितरण की पुष्टि । एक बार महारत हासिल करने के बाद, इस तकनीक को ठीक से प्रदर्शन करने पर 10 मिनट में किया जा सकता है।इस प्रक्रिया को करते समय, सावधानीपूर्वक विच्छेदन करना और कैथेटर की शुरुआत के लिए सबसे छोटा संभव डुओडेनोटॉमी करना बहुत महत्वपूर्ण है। इसके विकास के बाद, तकनीक ने अग्न्याशय का अध्ययन करने वाले शोधकर्ताओं के लिए कई विकृतियों की जांच करने का मार्ग प्रशस्त किया जो अंग को पीड़ित करते हैं, जिनमें क्रोनिक अग्नाशयशोथ, मधुमेह और कृंतक और बड़े पशु मॉडल दोनों में अग्नाशय के कैंसर शामिल हैं। इस वीडियो को देखने के बाद, आपको अग्नाशय की नली को प्रभावी और चुनिंदा दोनों रूप से कैसे बढ़ावा देना चाहिए।

Research

JoVE Journal

Medicine

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