Name: pancreatic duct infusion: an effective and selective method of drug and viral delivery
Uploaded: 2021-09-30T13:00:00
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저자는 인정이 없습니다. 기금은 절강성 보건 가족 계획위원회 (그랜트 20146242)와 원저우 과학 기술 국 (그랜트 Y20140248)의 재단으로부터 수령되었습니다.

모든 동물 실험은 피츠버그 아동 병원과 피츠버그 대학 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 동물 연구 및 관리 위원회에 의해 승인되었습니다.
1. 수술 전 준비
<ol><li>적절한 마취 수준으로 코 콘을 통해 흡입 된 이소플루란 (유지 보수1 - 3 %, 유도에 대한 최대 5 %)을 투여하십시오. 집게로 발가락 핀치에 의해 마취의 적절성을 모니터링합니다. 반응의 부족은 적당한 여겨지고, 호...

<ol>
	<li>Gittes, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+biology+of+the+pancreas:+a+comprehensive+review.">Developmental biology of the pancreas: a comprehensive review.</a> Dev Biol. 326 (1), 4-35 (2009).</li><li>Gu, G., Dubauskaite, J., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+evidence+for+the+pancreatic+lineage:+NGN3++cells+are+islet+progenitors+and+are+distinct+from+duct+progenitors.">Direct evidence for the pancreatic lineage: NGN3+ cells are islet progenitors and are distinct from duct progenitors.</a> Development. 129 (10), 2447-2457 (2002).</li><li>Weinberg, N., Ouziel-Yahalom, L., Knoller, S., Efrat, S., Dor, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+tracing+evidence+for+in+vitro+dedifferentiation+but+rare+proliferation+of+mouse+pancreatic+beta-cells.">Lineage tracing evidence for in vitro dedifferentiation but rare proliferation of mouse pancreatic beta-cells.</a> Diabetes. 56 (5), 1299-1304 (2007).</li><li>Raper, S. E., DeMatteo, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus-mediated+in+vivo+gene+transfer+and+expression+in+normal+rat+pancreas.">Adenovirus-mediated in vivo gene transfer and expression in normal rat pancreas.</a> Pancreas. 12 (4), 401-410 (1996).</li><li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+cell+tracing,+lineage+tagging+and+targeted+genetic+manipulations+in+multiple+cell+types+using+pancreatic+ductal+infusion+of+adeno-associated+viral+vectors+and/or+cell-tagging+dyes.">Pancreatic cell tracing, lineage tagging and targeted genetic manipulations in multiple cell types using pancreatic ductal infusion of adeno-associated viral vectors and/or cell-tagging dyes.</a> Nat Protoc. 9 (12), 2719-2724 (2014).</li><li>Song, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGFR+signaling+regulates+beta+cell+proliferation+in+adult+mice.">EGFR signaling regulates beta cell proliferation in adult mice.</a> J Biol Chem. 291 (43), (2016).</li><li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M2+macrophages+promote+beta-cell+proliferation+by+up-regulation+of+SMAD7.">M2 macrophages promote beta-cell proliferation by up-regulation of SMAD7.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (13), E1211-E1220 (2014).</li><li>Laukkarinen, J. M., Van Acker, G. J., Weiss, E. R., Steer, M. L., Perides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+acute+biliary+pancreatitis+induced+by+retrograde+pancreatic+duct+infusion+of+Na-taurocholate.">A mouse model of acute biliary pancreatitis induced by retrograde pancreatic duct infusion of Na-taurocholate.</a> Gut. 56 (11), 1590-1598 (2007).</li><li>Lichtenstein, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+lung+injury+in+two+experimental+models+of+acute+pancreatitis:+infusion+of+saline+or+sodium+taurocholate+into+the+pancreatic+duct.">Acute lung injury in two experimental models of acute pancreatitis: infusion of saline or sodium taurocholate into the pancreatic duct.</a> Crit Care Med. 28 (5), 1497-1502 (2000).</li><li>Perides, G., van Acker, G. J., Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+acute+biliary+pancreatitis+induced+by+retrograde+infusion+of+bile+acids+into+the+mouse+pancreatic+duct.">Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct.</a> Nat Protoc. 5 (2), 335-341 (2010).</li><li>Guo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+transduction+and+labeling+of+pancreatic+ducts+by+targeted+recombinant+viral+infusion+into+mouse+pancreatic+ducts.">Specific transduction and labeling of pancreatic ducts by targeted recombinant viral infusion into mouse pancreatic ducts.</a> Lab Invest. 93 (11), 1241-1253 (2013).</li><li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenin3+activation+is+not+sufficient+to+direct+duct-to-beta+cell+transdifferentiation+in+the+adult+pancreas.">Neurogenin3 activation is not sufficient to direct duct-to-beta cell transdifferentiation in the adult pancreas.</a> J Biol Chem. 288 (35), 25297-25308 (2013).</li></ol>

이 작품은 췌장 덕트 주입 뒤에 방법론을 상세히 설명, 췌장에 유전자 및 기타 분자의 전달을위한 효과적인 마우스 모델. 다양한 그룹 간의 절차의 세부 사항에 대한 모호성은 표준화된 프로토콜8,9,10의필요성을강조했다.
젊고 건강한 마우스의 선택으로 시작하는 절차의 몇몇 중요한 단계가 있습니다. 십?...

췌장은 내분비와 외신 성분을 모두 갖춘 양기능 기관입니다. 많은 병리들이 당뇨병, 췌장염 및 췌장암1을포함한 췌장을 괴롭히수 있다. 이 질병의 세 가지 모두 즉각적인 치료를 개발할뿐만 아니라 병리 생리학을 더 잘 이해하기 위해 연구의 활성 영역을 표시합니다.
표적 치료 전달 방법은 도움이 될 것입니다. 우리는 췌장 세포에 약물 및 바이러스 성 전달에 대한 효과적이고 선택적 방법입니다 췌장 덕트 주입 기술을 개발했다. 이 모델에서 췌장 덕트는 선택적으로 캔누레이트되고 일반적인 담관이 가려져 췌장에만 전달될 수 있습니다.
이 기술은 췌장 발달 및병리학에중요한 발달 경로를 더욱 해명하기 위하여 특정 세포 모형의 계보 추적을 허용할 수 있습니다2,3. 바이러스 벡터에서 상이한 프로모터는 세포주및 이들세포주4,5로유전자의 도입을 위해 특정 표적화를 허용한다. 이 작품은 GFP를 표현하는 바이러스 벡터의 췌장 덕트 주입 후 췌장 내의 녹색 형광 단백질(GFP)의 발현을 보여 준다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="762">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:288px;">Mice (25-30g, 8-12 weeks old)</td>
			<td style="width:171px;">Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:288px;">Ketofen</td>
			<td style="width:171px;">Henry Schein Inc.</td>
			<td style="width:137px;">5487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:288px;">Ethanol (70%)</td>
			<td style="width:171px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:137px;">34923</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:288px;">Sterile Saline Solution</td>
			<td style="width:171px;">Baxter Healthcare Corp.</td>
			<td style="width:137px;">2B-13-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:288px;">Protective Equipment</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:288px;">Hair Removal Product</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td>Nair or trimmer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:288px;">Gauze Pads 2in x 2in</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Healthcare</td>
			<td style="width:137px;">22-362-178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:288px;">Needles (30.5G and 25G)</td>
			<td style="width:171px;">Becton Dicksinson and Co.</td>
			<td style="width:137px;">305106 and 305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:288px;">Syringe for Ketofen and Saline</td>
			<td style="width:171px;">Becton Dicksinson and Co.</td>
			<td style="width:137px;">309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:288px;">Syringe for Pump</td>
			<td style="width:171px;">Henke Sass Wolf</td>
			<td style="width:137px;">4010.200V0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:288px;">Infusion Pump</td>
			<td style="width:171px;">Pump Systems Inc.</td>
			<td style="width:137px;">NE-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:288px;">Infusion Catheter</td>
			<td style="width:171px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:137px;">CMF31G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:288px;">Curved Bulldog Clamps (2)</td>
			<td style="width:171px;">Roboz</td>
			<td style="width:137px;">RS-7439</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:288px;">Arruga Forceps</td>
			<td style="width:171px;">Roboz</td>
			<td style="width:137px;">RS-5163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:288px;">Adson Forcep</td>
			<td style="width:171px;">Roboz</td>
			<td style="width:137px;">RS-5234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:288px;">Needle Holder</td>
			<td style="width:171px;">Roboz</td>
			<td>RS-7882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:288px;">Scissor</td>
			<td style="width:171px;">Roboz</td>
			<td>RS-5982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:288px;">Cotton Tip Applicators</td>
			<td style="width:171px;">Physician Sales and Services</td>
			<td>22-9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:288px;">Dissecting Microscope</td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:288px;">Suture</td>
			<td style="width:171px;">Owens and Minor</td>
			<td>SXMD1B402</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

pancreatic duct infusion: an effective and selective method of drug and viral delivery

췌장은 내분비와 외신 성분을 모두 갖춘 양기능 기관입니다. 많은 병리학은 당뇨병, 췌장염 및 췌장암을 포함하여 췌장을 괴롭히수 있습니다. 이 질병의 세 가지 모두 즉각적인 치료를 개발할뿐만 아니라 병리 생리학을 더 잘 이해하기 위해 연구의 활성 영역을 표시합니다. 이러한 연구 영역을 발전시킬 수 있는 도구는 거의 없습니다. 췌장 덕트 주입은 혈통 추적, 유전자 도입 및 세포 주 별 표적을 허용할 수 있는 중요한 기술입니다. 이 기술은 십이지장과 암풀라의 두 번째 부분의 복잡한 해부를 필요로하며, 담관의 폐색과 췌장 덕트의 캐닝이 뒤따릅니다. 이 기술은 처음에는 기술적으로 도전적이지만 응용 프로그램은 무수합니다. 그룹 간의 절차의 세부 사항에서 모호성은 표준 프로토콜의 필요성을 강조했습니다. 이 작품은 GFP를 표현하는 바이러스 벡터의 췌장 덕트 주입 후 췌장 내의 녹색 형광 단백질(GFP)의 발현을 설명합니다. 주입 및 따라서 발현은 다른 조직 유형에 존재하는 발현없이 췌장에 특이적이다.

연습과 신중한 수술 기술로, 이 마우스의 생존율은 95% 이상이어야 합니다. 주입 후 1 주일, 원하는 효과는 췌장에서 분명해야한다. 생관10~12주생쥐는 췌장덕 주입을 위해 활용되었다. 여기서 우리는 가짜 수술과 비교하여 녹색 형광성 단백질 (GFP)을 표현하기 위해 CMV 프로모터와 아데노 관련 바이러스 혈청형 8 (AAV8)을 사용합니다. 마우스 췌장은 주입 후 7 일 수확하였다. 췌...

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Pancreatic Duct Infusion: An Effective and Selective Method of Drug and Viral Delivery

췌장 덕트 주입은 혈통 추적, 유전자 도입 및 세포 주 별 표적을 허용할 수 있는 중요한 기술입니다. 췌장 세포에 대한 약물 및 바이러스 성 전달을위한 췌장 덕트 주입 기술이 여기에 제시됩니다.

췌장 덕트 주입: 효과적이고 선택적 약물 및 바이러스 성 전달 방법

The pancreas is a bifunctional organ with both endocrine and exocrine components. A number of pathologies can afflict the pancreas, including diabetes, ...

이 췌장 덕트 주입 절차의 전반적인 목표는 췌장에 있는 혈통 추적, 유전자 소개 및 세포 주 별 표적을 가능하게 하는 것입니다. 이 방법은 만성 췌장염, 당뇨병 및 췌장암을 포함하여 췌장에 영향을 미치는 질병에 대한 중요한 질문에 대답하는 것을 도울 수 있었습니다. 시작하려면, 그것의 복부가 시야의 중앙에 위치하도록 해부 현미경의 밑에 마취마우스를 놓습니다.수술용 테이프로 동물을 고정한 다음 안과 연고를 눈에 적용하여 건조를 방지합니다. 다음으로, 제모 크림의 두꺼운 층으로 마우스의 복부를 덮습니다. 그리고 약 3 분 후, 부드럽게 모든 머리를 제거하기 위해 70 %에탄올에 담근 거즈로 크림을 닦아.마지막으로, 70%에탄올로 피부를 닦아낸 다음 10%의 포비도요드 용액을 사용하여 오염 물질을 제거하고 피부를 소독합니다. 수술을 시작하려면 메스로 심포이성 공정에서 배꼽까지 이어지는 중간선 피부 절개를 만듭니다. 그런 다음 Adson 집게를 사용하여 회리죄를 들어 올리고 가위로 작은 중간 구멍으로 만듭니다.길이가 피부 절개 길이와 같도록 회음의 중간선을 따라 컷을 확장합니다. 다음으로, 무딘 리트랙터를 사용하여 간을 끌어당기고 일반적인 담관을 노출한 후 곡선 불독 혈관 클램프로 고정하십시오. 십이지극과 아루가 집게로 식별하고, 십이지장의 두 번째 부분의 전방 표면에 흰색 반점으로 보이는 유두를 표시하기 위해 caudally 꺼내냅니다.췌장 덕트를 식별하려면 십이지장 카우들렌을 철회한 다음 30-1/5 게이지 바늘을 십이지장에게 접선으로 배치하고 유두와 정면으로 맞은 벽에 구멍을 만듭니다. 솔루션을 주입하려면 생성된 십이지장 절제술을 통해 주입 펌프에 연결된 카테터를 도입하고 선박 내에서 볼 수 있지만 경미한 덕트 지류를 우회하지 않도록 1센티미터 이상 에 도달할 때까지 덕트를 따라 밀어 내십시오. 두 번째 곡선 불독 혈관 클램프로 카테터를 고정하여 고정합니다.그런 다음 펌프를 켜서 용액 150 마이크로리터를 덕트에 주입합니다. 다음으로, 식염수의 약 1.5 밀리리터마우스의 복막에 주입한 다음, 증식을 방지하기 위해 증조거로 노출된 대장을 덮는다. 주입이 완료되면 고정 된 카테터를 방출하고 불독 클램프를 사용하여 췌장 덕트에서 부드럽게 제거하십시오.그런 다음 일반적인 담관에서 클램프를 놓습니다. 지속적으로 단일 층에서 그들을 봉합하여 회중과 피부를 닫고 진통제의 두 복용량의 첫 번째를 관리, 두 번째는 다음 날 주어질 것이다. 그런 다음 열 램프 아래에 위치한 케이지에 마우스를 반환하고 음식과 물 광고 리비툼을 동물을 제공합니다.그것은 흉골 회복에 명시 된 충분 한 의식을 회복 될 때까지 마우스를 관찰. 수술 7일 후, 안락사된 동물 췌장에서 비장, 간, 십이지장에서 돌출하여 대조군으로 활동합니다. 전체 격리 된 조직을 4 % para포름 알데히드 솔루션에 담그고 하룻밤 사이에 섭씨 4도에서 수정하십시오.조직이 고정되면, 냉동은 하룻밤 섭씨 4도에서 30 % 자당 용액에 담그어 샘플을 보호합니다. 하룻밤 냉동 보호 후, 스냅 액체 질소에 샘플을 동결 하고 마이크로 토메를 사용하여, 6 마이크로 미터에서 조직 섹션을 잘라. 마지막으로, 형광 현미경의 밑에 단면도를 심상.여기에 제시 된 췌장 섹션의 현미경 이미지는 GFP 유전자를 운반하는 AAV8의 가짜 수술 및 췌장 덕트 주입 후 7 일 마우스에서 배회. 간, 비장, 및 AAV8주입된 마우스로부터 분리된 십이지장들은 췌장이 눈에 띄는 GFP 발현을 드러내는 동안 어떤 GFP 신호를 도모하지 않았고, 췌장성 바이러스의 췌장별 전달을 확인하여 췌장성 주입을 확인했습니다. 일단 마스터되면 이 기술을 제대로 수행하면 10분 만에 수행할 수 있습니다.이 절차를 수행하는 동안, 신중한 해부를 수행하고 카테터의 도입을위한 가장 작은 가능한 십이지장 절제술을 하는 것이 매우 중요합니다. 그것의 발달 후에, 기술은 설치류와 더 큰 동물 모형 둘 다에 있는 만성 췌장염, 당뇨병 및 췌장암을 포함하여 기관을 괴롭히는 병학의 수를 조사하기 위하여 췌장을 공부하는 연구원을 위한 도로를 포장했습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 췌장 덕트를 효과적이고 선택적으로 주입하는 방법에 대해 매우 잘 이해해야 합니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

An Affordable HIV-1 Drug Resistance Monitoring Method for Resource Limited Settings

자원 제한 설정에 대한 경제적 인 HIV-1 약제 내성 모니터링 방법

HIV-1 drug resistance has the potential to seriously compromise the effectiveness and impact of antiretroviral therapy (ART). As ART programs in ...

연구

의학

Surgical Injury to the Mouse Pancreas through Ligation of the Pancreatic Duct as a Model for Endocrine and Exocrine Reprogramming and Proliferation

내분비 및 외분비 리 프로그래밍과 대량 살상 무기 확산 모델로 췌관의 결찰을 통해 마우스 췌장 외과 부상

Expansion of pancreatic beta cells in vivo or ex vivo, or generation of beta cells by differentiation from an embryonic or adult stem cell, can provide ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

마우스의기도 신속 삽관 용 개선 된 방법

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

Modeling and Simulations of Olfactory Drug Delivery with Passive and Active Controls of Nasally Inhaled Pharmaceutical Aerosols

비강 흡입은 제약 에어로졸의 수동 및 능동 제어 모델링 및 강한 약물 전달의 시뮬레이션

There are many advantages of direct nose-to-brain drug delivery in the treatment of neurological disorders. However, its application is limited by the ...

Intraluminal Drug Delivery to the Mouse Arteriovenous Fistula Endothelium

마우스 동정맥루 내피에 관내 약물 전달

Delivery of therapeutic agents to enhance arteriovenous fistula (AVF) maturation can be administered either via intraluminal or external routes. The ...

Drug-Induced Sleep Endoscopy (DISE) with Target Controlled Infusion (TCI) and Bispectral Analysis in Obstructive Sleep Apnea

Drug-Induced Sleep Endoscopy DISE with Target Controlled Infusion TCI and Bispectral Analysis in Obstructive Sleep Apnea

약물 유발 폐쇄성 수면 무호흡증의 대상 제어 주입 (TCI) 및 이중 분광 분석과 수면 내시경 (DISE)

The aim of this study was to establish a standardized protocol for drug-induced sleep endoscopy (DISE) to differentiate obstruction patterns in ...

A Novel Method: Super-selective Adrenal Venous Sampling

새로운 방법: 최고 선택적 부 신 정 맥 샘플링

Primary aldosteronism (PA) and subclinical Cushing&#39;s syndrome (SCS) are conditions in which the adrenal glands autonomously produce excessive amounts ...

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