Name: a microfluidic flow chamber model for platelet transfusion and hemostasis measures platelet deposition and fibrin formation in real-time
Uploaded: 2017-02-14T15:00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Microfluidic Flow Chamber Model for Platelet Transfusion and Hemostasis Measures Platelet Deposition and Fibrin Formation in Real-time at JoVE.com

Это исследование было поддержано Фондом исследований и разработок бельгийской службы Красного Креста Фландрии крови. Мы признаем финансовую поддержку, оказываемую &quot;Bijzonder onderzoeksfond&quot; (BOF - специальное исследование фонда) из Гентского университета, предоставленного проекта с номером контракта BOF30290744.

<ol>
	<li>Levi, M., Hunt, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+appraisal+of+point-of-care+coagulation+testing+in+critically+ill+patients.">A critical appraisal of point-of-care coagulation testing in critically ill patients.</a> J. Thromb. Haemost. 13 (11), 1960-1967 (2015).</li><li>Van Aelst, B., Feys, H. B., Devloo, R., Vandekerckhove, P., Compernolle, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+Flow+Chambers+Using+Reconstituted+Blood+to+Model+Hemostasis+and+Platelet+Transfusion+In+Vitro.">Microfluidic Flow Chambers Using Reconstituted Blood to Model Hemostasis and Platelet Transfusion In Vitro.</a> J. Vis. Exp. (109), e53823 (2016).</li><li>Witt, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+platelet+function+defects+by+multi-parameter+assessment+of+thrombus+formation.">Identification of platelet function defects by multi-parameter assessment of thrombus formation.</a> Nat. Commun. 5, 4257 (2014).</li><li>Cazenave, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+washed+platelet+suspensions+from+human+and+rodent+blood.">Preparation of washed platelet suspensions from human and rodent blood.</a> Methods Mol. Biol. 272, 13-28 (2004).</li><li>Roest, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+chamber-based+assays+to+measure+thrombus+formation+in+vitro:+requirements+for+standardization.">Flow chamber-based assays to measure thrombus formation in vitro: requirements for standardization.</a> J. Thromb. Haemost. 9 (11), 2322-2324 (2011).</li><li>Zwaal, R. F., Comfurius, P., Bevers, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid-protein+interactions+in+blood+coagulation.">Lipid-protein interactions in blood coagulation.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1376 (3), 433-453 (1998).</li><li>Dargaud, Y., Luddington, R., Baglin, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elimination+of+contact+factor+activation+improves+measurement+of+platelet-dependent+thrombin+generation+by+calibrated+automated+thrombography+at+low-concentration+tissue+factor.">Elimination of contact factor activation improves measurement of platelet-dependent thrombin generation by calibrated automated thrombography at low-concentration tissue factor.</a> J. Thromb. Haemost. 4 (5), 1160-1161 (2006).</li><li>Bevers, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+Ca(2+)-induced+microvesiculation+and+deficient+expression+of+procoagulant+activity+in+erythrocytes+from+a+patient+with+a+bleeding+disorder:+a+study+of+the+red+blood+cells+of+Scott+syndrome.">Defective Ca(2+)-induced microvesiculation and deficient expression of procoagulant activity in erythrocytes from a patient with a bleeding disorder: a study of the red blood cells of Scott syndrome.</a> Blood. 79 (2), 380-388 (1992).</li><li>Bevers, E. M., Comfurius, P., van Rijn, J. L., Hemker, H. C., Zwaal, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+prothrombin-converting+activity+and+the+exposure+of+phosphatidylserine+at+the+outer+surface+of+platelets.">Generation of prothrombin-converting activity and the exposure of phosphatidylserine at the outer surface of platelets.</a> Eur. J. Biochem. 122 (2), 429-436 (1982).</li><li>Muller, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+polyphosphates+are+proinflammatory+and+procoagulant+mediators+in+vivo.">Platelet polyphosphates are proinflammatory and procoagulant mediators in vivo.</a> Cell. 139 (6), 1143-1156 (2009).</li><li>Smith, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyphosphate+modulates+blood+coagulation+and+fibrinolysis.">Polyphosphate modulates blood coagulation and fibrinolysis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103 (4), 903-908 (2006).</li><li>Tiberghien, P., Follea, G., Muller, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+Transfusions+in+Acute+Leukemia.">Platelet Transfusions in Acute Leukemia.</a> N. Engl. J. Med. 375 (1), 96-97 (2016).</li><li>Deckmyn, H., Feys, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assays+for+quality+control+of+platelets+for+transfusion.">Assays for quality control of platelets for transfusion.</a> ISBT Science Series. 8 (1), 221-224 (2013).</li><li>Sakariassen, K. S., Bolhuis, P. A., Sixma, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+blood+platelet+adhesion+to+artery+subendothelium+is+mediated+by+factor+VIII-Von+Willebrand+factor+bound+to+the+subendothelium.">Human blood platelet adhesion to artery subendothelium is mediated by factor VIII-Von Willebrand factor bound to the subendothelium.</a> Nature. 279 (5714), 636-638 (1979).</li><li>Alevriadou, B. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+analysis+of+shear-dependent+thrombus+formation+and+its+blockade+by+inhibitors+of+von+Willebrand+factor+binding+to+platelets.">Real-time analysis of shear-dependent thrombus formation and its blockade by inhibitors of von Willebrand factor binding to platelets.</a> Blood. 81 (5), 1263-1276 (1993).</li><li>Nesbitt, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+shear+gradient-dependent+platelet+aggregation+mechanism+drives+thrombus+formation.">A shear gradient-dependent platelet aggregation mechanism drives thrombus formation.</a> Nat. Med. 15 (6), 665-673 (2009).</li><li>Stalker, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hierarchical+organization+in+the+hemostatic+response+and+its+relationship+to+the+platelet-signaling+network.">Hierarchical organization in the hemostatic response and its relationship to the platelet-signaling network.</a> Blood. 121 (10), 1875-1885 (2013).</li><li>Swieringa, F., Kuijpers, M. J., Lamers, M. M., vander Meijden, P. E., Heemskerk, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rate-limiting+roles+of+the+tenase+complex+of+factors+VIII+and+IX+in+platelet+procoagulant+activity+and+formation+of+platelet-fibrin+thrombi+under+flow.">Rate-limiting roles of the tenase complex of factors VIII and IX in platelet procoagulant activity and formation of platelet-fibrin thrombi under flow.</a> Haematologica. 100 (6), 748-756 (2015).</li><li>McDonald, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fabrication+of+microfluidic+systems+in+poly(dimethylsiloxane).">Fabrication of microfluidic systems in poly(dimethylsiloxane).</a> Electrophoresis. 21 (1), 27-40 (2000).</li><li>Gutierrez, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+devices+for+studies+of+shear-dependent+platelet+adhesion.">Microfluidic devices for studies of shear-dependent platelet adhesion.</a> Lab. Chip. 8 (9), 1486-1495 (2008).</li><li>Hartman, R. L., McMullen, J. P., Jensen, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deciding+whether+to+go+with+the+flow:+evaluating+the+merits+of+flow+reactors+for+synthesis.">Deciding whether to go with the flow: evaluating the merits of flow reactors for synthesis.</a> Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 50 (33), 7502-7519 (2011).</li><li>Podoplelova, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Blood coagulation factors bound to procoagulant platelets are concentrated in their cap structures to promote clotting. , (2016).</li><li>Der Meijden, P. E. V. a. n., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-+and+erythrocyte-derived+microparticles+trigger+thrombin+generation+via+factor+XIIa.">Platelet- and erythrocyte-derived microparticles trigger thrombin generation via factor XIIa.</a> J. Thromb. Haemost. 10 (7), 1355-1362 (2012).</li><li>Nickel, K. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+polyphosphate-factor+XII+pathway+drives+coagulation+in+prostate+cancer-associated+thrombosis.">The polyphosphate-factor XII pathway drives coagulation in prostate cancer-associated thrombosis.</a> Blood. 126 (11), 1379-1389 (2015).</li><li>Okorie, U. M., Denney, W. S., Chatterjee, M. S., Neeves, K. B., Diamond, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+surface+tissue+factor+thresholds+that+trigger+coagulation+at+venous+and+arterial+shear+rates:+amplification+of+100+fM+circulating+tissue+factor+requires+flow.">Determination of surface tissue factor thresholds that trigger coagulation at venous and arterial shear rates: amplification of 100 fM circulating tissue factor requires flow.</a> Blood. 111 (7), 3507-3513 (2008).</li><li>Shen, F., Kastrup, C. J., Liu, Y., Ismagilov, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Threshold+response+of+initiation+of+blood+coagulation+by+tissue+factor+in+patterned+microfluidic+capillaries+is+controlled+by+shear+rate.">Threshold response of initiation of blood coagulation by tissue factor in patterned microfluidic capillaries is controlled by shear rate.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 28 (11), 2035-2041 (2008).</li></ol>

Авторы не имеют ничего раскрывать.

Переливание концентратов тромбоцитов назначают для тромбоцитопенической пациента, чтобы предотвратить или остановить кровотечение. Его клиническое воздействие было недавно выделен в историческом обзоре острого лейкоза 12, напомнив , что увеличение выживаемости педиатрических больных в шестидесятых и семидесятых годов были в основном связаны с улучшением (тромбоцитов) трансфузионной медицины. Тромбоцитов концентраты также используются, чтобы остановить кровотечение в острой травмы или во время операции. В этих условиях, тромбоциты с отличными прокоагулянтных свойствами, которые быстро инициируют гемостаз, являются предпочтительными, но тромбоциты концентраты получают из пожертвований добровольных доноров и, в отличие от фармакологического препарата, стандартизованы препарата только, а не (химического) состава. Таким образом, несколько вопросов в банковской сфере в крови являются без ответа, в том числе и на оптимальных условиях донорства, условий хранения и практики переливания крови. В области плatelet (переливание) биологии, много вопросов по оформлению клеток из обращения, вклад трансфузии тромбоцитов в гемостазе, или их иммунология также остаются без ответа. Многочисленные лабораторные методы для анализа функции тромбоцитов доступны, но они в основном решить особую аспект функции тромбоцитов, как агрегирование или дегрануляции 13. Для того, чтобы оценить в целом тромбоциты и концентратов тромбоцитов, комплексные модели гемостаза необходимы, и они должны включать в себя гидродинамику. Кровь реологию имеет решающее значение для правильной интерпретации тромбоцитов поведение во время остановки кровотечения 14, 15 или 16 , тромбоз, даже если антикоагулянтная терапия предотвращает Са 2+ и / или тромбин , чтобы участвовать в присутствии цитрата или гепарина, соответственно 2. Для изучения взаимосвязи между свертывающей и функции тромбоцитов в потоке 17, 18, нормальное образование тромбина требуется, и , следовательно, свободный Са 2+ , а также. Экспериментальная установка для исследования гемостаза при этих условиях является сложной, так как меры, чтобы предотвратить &quot;артефакт&quot; или неконтролируемая активация коагуляции следует принимать как можно больше. Кроме того, многие специализированные исследовательские группы используют заказные аппаратные средства 19, 20, что приводит к существенной межлабораторный изменчивости 5. Типичные ограничения этого подхода являются использование прямоугольных сосудов, профилей без пульсирующих потоков и поверхностных покрытий нечеловеческих 5. Анализ мы описываем здесь используются коммерчески доступные инструменты и, следовательно, могут быть пригодны для стандартизации. Поскольку реакции коагуляции каскад легко активируется, как только кровь не содержится в человеческом теле, контролируемое рекальцификации является ключевым шагом. TO добиться этого, добавление Ca 2+ должно быть отложено до непосредственно перед перфузией над реактивным коллагеном поверхности, потому что , когда 2+ буфер Ca поставляется навалом застывшей крови, коагуляция неизбежно происходит, в конце концов засорение трубки и смещения данных интерпретация (данные не показаны). Решение этой проблемы заключается в прокачивать буфер Ca 2+ и кровь по отдельности, что позволяет для смешивания с помощью конвективных и диффузионных сил во время перфузии на своем пути к анализу камеры. Полное смешение достигается в 46-сантиметровом участке трубы между смешивания и анализа камер с. Эта длина была рассчитана для оптимального времени пребывания реагентов в смесь на основе фундаментальных законов массы и конвективного переноса 21 во время перфузии при скорости потока , используемого (1000 с -1). Такой подход оказался управляемым и воспроизводимым. Контактная активация коагуляции иногда рассматривается как артефакт простойотбор проб крови и следует избегать при интерпретации время свертывания. Таким образом, мы показали, что, при отсутствии ингибиторов, контактно-индуцированной коагуляции начинается при 16.7 мин (± 3,7 мин) перфузией. При наличии CTI ингибировать FXIIa-опосредованную активацию контакта, коагуляция не инициируется в течение определенного произвольно ходе эксперимента (30 мин). Это окно экспериментов достаточно долго, чтобы различать образцы, которые про- или антитромботической. Даже при том, свертывание путем активации контакта может быть нежелательным последствием контакта крови искусственных поверхностей, наши данные показывают четкую биологическую эффекта дозу тромбоцитов. Это может быть важно для трансфузионной медицины, потому что последние данные по FXII, тромбоцитов полифосфаты 10, распределение 22 фосфатидилсерин и тромбоцитов микрочастицы 23 фактически переоценены контактной коагуляции тропинка в качестве важного фактора для гемостаза, еособенно в контексте тромбоза 24. Например, переменная выход трансфузии тромбоцитов у пациентов или переменной экспрессии фосфатидилсерина из насыпным тромбоцитов может, таким образом, вызывать изменчивость в терапевтической эффективности в случае успеха коагуляции показано, что в зависимости от этих факторов. К со-иммобилизации липидированного rhTF с коллагеном, внеш пути коагуляции, или пути TF, активируется во время осаждения тромбоцитов на коллагене. Это расширяет анализ ее наиболее полный режим, в качестве модели для ран, которые приносят кровь в контакт с клетками и ткани TF-подшипник. Наши данные показывают, что совместное иммобилизации коллагена и TF уменьшает момент начала коагуляции, но не изменяет скорость коагуляции. Следует отметить, что количество rhTF иммобилизованным на поверхности является важной переменной в данной модели 25, 26 и должен быть стандартизован в рамках данного исследования. В PresenCE ИТК, путь ТФ может изучаться исключительно (не показано), так как предотвращается активация контактная. В заключение, наша экспериментальная установка сочетает в себе модель переливания путем воссоздания тромбоцитопенической крови с тромбоцитами и насыпным модели гемостаза путем кальций-зависимой отложение тромбоцитов и образованием фибрина при гидродинамическом потоке. Этот анализ будет использоваться для ответа на вопросы о прокоагулянтной природе насыпным тромбоцитов и методы подготовки концентрата тромбоцитов эффекты имеют по этому вопросу.

Первичный и вторичный гемостаз были первоначально задумана как два относительно выделяемой биохимических процессов. Первичный гемостаз рассматривается как важный вклад в условиях артериального кровотока, с ключевой ролью тромбоцитов, в то время как вторичный гемостаз был замечен доминировать коагуляции при венозного кровотока, что позволяет каскадом протеазы с образованием нерастворимого фибрина. За последние несколько десятилетий изменили эту традиционную точку зрения, по существу, признав, что активация тромбоцитов и свертывания взаимосвязаны и являются одинаково важными процессами во время физиологического и патологического гемостаза у всех (не экстремальных) гидродинамических кругах. Эта точка зрения была переведена в клинику, где все чаще используются анализы , разработанные для комплексного измерения коагуляции цельной крови, хотя и с большим количеством оставшихся вопросов , касающихся актуальности, применимости и полезности 1. Недавно мы опубликовали функциональный анализ тромбоцитовКонцентраты с использованием микрожидкостных проточных камер , покрытых фибриллярного коллагена в модели ин витро переливании 2, с образцами , содержащими нормальное количество эритроцитов, плазмы и тромбоцитов. Этот метод использует гепарин или гирудин не кровь с антикоагулянтом, что подразумевает отсутствие или ограниченное участие вторичного гемостаза, который зависит от образования тромбина и ионизированного кальция (Ca 2+). Для того, чтобы поддержать образование тромбина и , таким образом , чтобы охватить все аспекты гемостаза при микрожидком потока, мы разработали дополнительный метод на той же технической платформе, в настоящее время , включая бесплатный Ca 2+. Таким образом, осаждение тромбоцитов и образование фибрина могут быть изучены, снова в модели трансфузии тромбоцитов, с целью оценки качества тромбоцитов концентрата. В этом методе, тромбоциты и фибриноген помечены флуорофоров, которые полностью разделенных эмиссионных спектров. Двойной цвет, видео в реальном времени микроскопии затем позволяет анализироватьпервичной адгезии тромбоцитов, а также инициирование коагуляция и осаждение фибрина. Важной переменной в этом типе анализа является рекальцификации, поскольку добавление Ca 2+ в застывшей крови, перед перфузией, неизбежно вызовет контакт инициированное коагуляции в контейнере. Это будет начало смещения считывание из-за засорения труб и биочипов бухтах до перфузии. Таким образом, в нашем методе, цитрат антикоагулянтом крови и -содержащие буфер Ca 2+ закачивают отдельно через верхние ножки в Y-образной впускной камеры. Компоненты перемешивают в течение перфузией перед входом в камеру анализа, покрытый одним или в сочетании с рекомбинантным человеческим фактором ткани (rhTF) коллагена. Путем адаптации скорости потока отдельных насосов и концентрацию Ca 2+ в буфере, 10% разбавление конечного образца крови происходит. Используя этот расширенный протокол, мы демонстрируем вклад Coagulaфициентом XII (FXII) и концентрация тромбоцитов в контакт инициации пути коагуляции в потоке. Наши данные также показывают, что путем покрытия rhTF наряду коллаген, фактор пути тканевого может быть измерено одновременно.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1210">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">1 mL Syringe</td>
			<td style="width:220px;">BD</td>
			<td style="width:256px;">A00434</td>
			<td style="width:443px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">10 mL Syringe</td>
			<td style="width:220px;">BD</td>
			<td style="width:256px;">309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">2 mL Syringe</td>
			<td style="width:220px;">BD</td>
			<td style="width:256px;">307727</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Alexa Fluor 405</td>
			<td style="width:220px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:256px;">A30100</td>
			<td style="width:443px;">The manufacturer&#39;s manual was followed for labeling of fibrinogen</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">BD vacutainer Eclipse</td>
			<td style="width:220px;">Becton, Dickinson and Company</td>
			<td style="width:256px;">368650</td>
			<td>Blood collection needle with preattached holder</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">BD vacutainer tube with EDTA&#160;</td>
			<td style="width:220px;">Becton, Dickinson and Company</td>
			<td style="width:256px;">368856</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">BD vacutainer tube with Sodium Citrate</td>
			<td style="width:220px;">Becton, Dickinson and Company</td>
			<td style="width:256px;">366575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Blocking buffer</td>
			<td style="width:220px;">in house preparation</td>
			<td style="width:256px;">in house preparation</td>
			<td style="width:443px;">1.0% (w/v) bovine serum albumin and 0.1% (w/v) glucose in HBS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Calcein AM</td>
			<td style="width:220px;">Molecular probes</td>
			<td style="width:256px;">C1430</td>
			<td style="width:443px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Coagulation buffer</td>
			<td style="width:220px;">in house preparation</td>
			<td style="width:256px;">in house preparation</td>
			<td style="width:443px;">10mM CaCl2 and 3.75 mM MgCl2 in HBS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Conical tube 15mL</td>
			<td style="width:220px;">Greiner bio-one</td>
			<td style="width:256px;">1888271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Conical tube 50mL</td>
			<td style="width:220px;">Greiner bio-one</td>
			<td style="width:256px;">227261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Corn trypsin inhibitor (CTI)</td>
			<td style="width:220px;">Enzyme Research Laboratories</td>
			<td style="width:256px;">CTI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Denaturated alcohol</td>
			<td style="width:220px;">Fiers</td>
			<td style="width:256px;">T0011.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">DiOC6</td>
			<td style="width:220px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:256px;">318426</td>
			<td style="width:443px;">3,3&#8242;-Dihexyloxacarbocyanine iodide - 1mM solution in DMSO</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;">Exigo microfluidic pump</td>
			<td>Cellix</td>
			<td>EXIGO-PC-FS7.0-MF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Fibrinogen</td>
			<td style="width:220px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:256px;">F3879</td>
			<td style="width:443px;">Labelled in house with AF 405 - stock concentration 10.7 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;">Hematology analyzer</td>
			<td>Sysmex</td>
			<td>pocH-100i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:291px;">HEPES buffered saline (HBS)</td>
			<td style="width:220px;">in house preparation</td>
			<td style="width:256px;">in house preparation</td>
			<td style="width:443px;">10mM 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid (HEPES) buffered saline (0.9% (w/v) NaCl, pH 7.4</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Horm Collagen</td>
			<td style="width:220px;">Takeda/Nycomed</td>
			<td style="width:256px;">1130630</td>
			<td style="width:443px;">Native equine tendon collagen (type I) 
			Isotonic glucose solution to dilute collagen is supplemented</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Humidified box</td>
			<td style="width:220px;">Cellix</td>
			<td style="width:256px;">HUMID-BOX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;">Incubation water bath</td>
			<td>GFL</td>
			<td>1013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;">Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Observer Z1</td>
			<td>equipped with a colibri-LED and high resolution CCD camera</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;">Mirus Evo Nanopump</td>
			<td>Cellix</td>
			<td>188-MIRUS-PUMP-EVO</td>
			<td>with Multiflow8</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;">Pipette</td>
			<td>Brand</td>
			<td>A03429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Pipette tips 100-1000</td>
			<td style="width:220px;">Greiner bio-one</td>
			<td style="width:256px;">740290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Pipette tips 1-10</td>
			<td style="width:220px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:256px;">A08928</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Pipette tips 2-200</td>
			<td style="width:220px;">Greiner bio-one</td>
			<td style="width:256px;">739280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Platelet concentrate orbital shaker</td>
			<td style="width:220px;">Helmer</td>
			<td style="width:256px;">PF-48i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Precision wipes</td>
			<td style="width:220px;">Kimtech</td>
			<td style="width:256px;">5511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Pepsin solution&#160;</td>
			<td style="width:220px;">Hanna instrument&#160;</td>
			<td style="width:256px;">HI7073L&#160;</td>
			<td style="width:443px;">2g pepsin per 75 ml solution, Protein cleaning solution with pepsin</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Recombinant Human Tissue Factor Innovin</td>
			<td style="width:220px;">Dade Berhing</td>
			<td style="width:256px;">B4212-40</td>
			<td style="width:443px;">rhTF with synthetic phospholipids</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Software microscope&#160;</td>
			<td style="width:220px;">Zeiss</td>
			<td style="width:256px;">N/A</td>
			<td>ZEN 2012</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Sterile docking device</td>
			<td style="width:220px;">Terumo BCT</td>
			<td style="width:256px;">TSCD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;">Table Top Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>521-0095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;">Tube Roller</td>
			<td>Ratek</td>
			<td>BTR5-12V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Tubing Sealer</td>
			<td style="width:220px;">Terumo BCT</td>
			<td style="width:256px;">AC-155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Vena8 syringe connector pin</td>
			<td style="width:220px;">Cellix</td>
			<td style="width:256px;">CONNECTORS-B1IC-PACK100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Vena8 Fluoro+ Biochips</td>
			<td style="width:220px;">Cellix</td>
			<td style="width:256px;">188V8CF-400-100-02P10</td>
			<td>Coated biochip</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Vena8 Needles</td>
			<td style="width:220px;">Cellix</td>
			<td style="width:256px;">SS-P-B1IC-B1OC-PACK200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Vena8 Tubing</td>
			<td style="width:220px;">Cellix</td>
			<td style="width:256px;">TUBING-TYGON-B1IC-B1OC-ROLL 100F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">VenaDelta Y1 Biochips</td>
			<td style="width:220px;">Cellix</td>
			<td style="width:256px;">VDY1-400-100-01-02</td>
			<td>Mixing biochip</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:291px;">Vortex mixer</td>
			<td style="width:220px;">VWR</td>
			<td style="width:256px;">58816-121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:291px;">ZEN2012 software</td>
			<td style="width:220px;">Zeiss</td>
			<td style="width:256px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a microfluidic flow chamber model for platelet transfusion and hemostasis measures platelet deposition and fibrin formation in real-time

Микрожидком модели гемостаза оценки функции тромбоцитов в условиях гидродинамического сдвига, но в присутствии антикоагулянтов, этот анализ ограничивается только тромбоцитами осаждения. Сложные отношения между Ca 2+ -зависимые коагуляции и тромбоцитов функции требует тщательного и контролируемого рекальцификации крови перед анализом. Наша установка использует Y-образное смесительный канал, который поставляет концентрированный Ca 2+ / Mg 2+ буфер протекающей крови непосредственно перед перфузией, что позволяет быстро рекальцификацию без образца стазу. разница Десятикратное в скорости потока между двумя резервуарами минимизирует разбавление. Рекальцифицированной кровь затем перфузию в камере анализа коллагена покрытием, и дифференциальная маркировка позволяет в режиме реального времени изображений как тромбоцитов и фибрина осаждения с помощью флуоресцентной микроскопии видео. Система использует коммерчески доступные только инструменты, увеличивая шансы стандартизации. Воссоздание Thrombocytopenic крови с тромбоцитами из накренился концентратов, кроме того моделям переливание тромбоцитов, доказывая его использование в данном исследовании области. Примерные данные показали, что начало коагуляции и осаждения фибрин были линейно зависит от концентрации тромбоцитов, подтверждая связь между первичной и вторичной гемостаза в нашей модели. В сроки от 16 перфузионной мин, активация контакта не произошло, несмотря на рекальцификации к нормальному Са 2+ и Mg 2+ уровней. Когда фактор свертывания крови XIIa подавлялась ингибитором трипсина кукурузы, на этот раз кадр был даже больше, что указывает на значительный динамический диапазон, в котором можно оценить изменения в прокоагулянтной характере тромбоцитов. Co-иммобилизация тканевого фактора с коллагена значительно снижается время начала коагуляции, но не его скорость. Опция для изучения тканевого фактора и / или контактный путь повышает универсальность и полезность анализа.

Анализ в режиме реального времени исходных данных описан на рисунке 1. Во- первых, тромбоциты прилипают к реактивной поверхности, что приводит к постоянному увеличению записанной зеленой флуоресценции (рис 1А, I), называется адгезией. Во время этой фазы, существует мало фиалка флуоресценции, указывая , что фибрин не или лишь слабо сформированы (Фигура 1В). При инициации коагуляции, фиолетово-флуоресцирующих отложения фибрина быстро (III), и в течение этого времени, тромбоцитов зеленой флуоресценции возрастает при примерно с той же скоростью, обозначаемые здесь как накопление тромбоцитов (II). Таким образом, один эксперимент возвращает три темпы роста флуоресценции (I, II, и III) в качестве суррогатного маркера для скорости, при которой тромбоцитов и фибрина осаждение происходит в этой модели. Кроме того, момент начала коагуляции ( о моменте начала (IV)) экстраполируется, что является определяющим фактором тромбоцитовпрокоагулянтное потенциал. При отсутствии TF, инициация свертывания происходит медленно и в основном проходит через контактный путь , где внутренняя Тэнасе комплекс активирует FX посредством прямой активации FIX 6 с помощью FXI и / или FXII. Чтобы продемонстрировать FXII зависимость, 4 мкМ ингибитора трипсина кукурузы (CTI) добавляли для ингибирования активированного FXII (FXIIa) 7. Это ингибирование не влияет на адгезию тромбоцитов (фиг.2А), но коагуляция не начинал для произвольно заданной общей продолжительности перфузионной эксперимента (рис 2B и дополнительного видео 1). В пробирке, контактный путь может быть инициирована инородных материалов , как стекло, или в клинических анализах с использованием минерального материала , как каолин. В естественных условиях, активированные тромбоциты обеспечивают отрицательный заряд 8 &lt;/ SUP&gt; через мембрану воздействию кислых фосфолипидов 9, как фосфатидилсерин, и / или посредством высвобождения полифосфатов (полип) 10, 11. Наши микрофлюидальные в режиме реального времени анализа подражает последнего , потому что, в диапазоне концентраций тромбоцитов, гемостатический реакция зависела от количества тромбоцитов (рисунок 3). За счет увеличения количества тромбоцитов в разведенном образце, скорость адгезии (рис 3А), накопление (фигура 3В, зеленый), и коагуляция (фигура 3В, фиалка) линейно возрастает. О моменте начала значительно укорочена (3в) при увеличении концентрации тромбоцитов, предполагая , что пороговое число (активированный) , осажденных тромбоцитов требуется , чтобы вызвать коагуляцию. После повреждения ткани в естественных условиях, однако, клетки TF-подшипник яnitiate свертывание крови через FVIIa-TF примесного Тэнасе комплекса в присутствии ионов Са 2+. Это имитируется в нашей экспериментальной установке путем последующего нанесения покрытия на коллаген-содержащих перфузионные камеры с липидированного rhTF. В парного анализа каналов , покрытых только или в комбинации с rhTF коллагена, коагуляция начало было значительно быстрее (фиг.4А). Скорость адгезии тромбоцитов не была линейной, поэтому никакой линейной регрессии не может быть выполнена (данные не показаны). И скорость коагуляции и накопления тромбоцитов не отличались от условий (4В-4С, Дополнительное видео 2). <img alt="Рисунок 1" src="/files/ftp_upload/55351/55351fig1.jpg" /> Рисунок 1: Результаты регрессионного анализа адгезии тромбоцитов и коагуляции в микрофлюидальных перфузионных камерах. На этом рисунке уточняются параметры, полученные из реального времени флуоресценции исходных данных<html> приобретенные в течение рекальцифицированной кровотока над реактивной поверхности. (А) Средняя интенсивность зеленой флуоресценции показывает отложение тромбоцитов в зависимости от времени перфузии. Кривая описывает бимодальное процесс , начинающийся с (I) медленно возрастающую линейную адгезию тромбоцитов с последующим (II) быстро растущего линейного накопления. Обе линейные части кривой регресс и наклон их описывает две скорости формирования тромба путем тромбоцитов флуоресценции; (Я) адгезия и (б) накопление. (Б) средняя интенсивность флуоресценции показывает фиолетовой отложение фибрина в зависимости от времени. Во время адгезии тромбоцитов, фиолетовый флуоресцентный практически отсутствует, в то время как он быстро развивается после начала коагуляции. (IV) о моменте начала определяется как пересечения с осью х экстраполированного линейной регрессии (III) на втором этапе формирования тромба фибрином флуоресценции обозначенной здесь в качестве коагуляции.эф = &quot;http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55351/55351fig1large.jpg&quot; целевых = &quot;_blank&quot;&gt; Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры. <img alt="фигура 2" src="/files/ftp_upload/55351/55351fig2.jpg" /> Рисунок 2: При отсутствии TF, свертывание в коллагеновых покрытием камер перфузия потока зависит от FXIIa. Микрожидкостных перфузия водостойких крови , содержащей CTI или управления буфером (контроль) проводили при скорости сдвига 1000 с -1 в общей сложности 30 мин. (А) Скорость адгезии тромбоцитов (с -1) не зависит от ИТК. (В) о моменте начала для ИТК-обработанных образцов было за пределом 30 мин эксперимента (показан пунктирной линией), демонстрирующий зависимость от FXIIa этого параметра. Бары и точки являются средними значениями, Усы стандартное отклонение. Статистический анализ был по парного критерия Стьюдента. (NS = не имеет существенного значения, п ≥3). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55351/55351fig2large.jpg" target="_blank">Пожалуйста</a> , <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55351/55351fig2large.jpg" target="_blank">нажмите здесь</a> , <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55351/55351fig2large.jpg" target="_blank">чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.</a> <img alt="Рисунок 3" src="/files/ftp_upload/55351/55351fig3.jpg" /> Рисунок 3: коагуляция в потоке зависит от количества тромбоцитов. Микрожидком эксперименты перфузионные были выполнены в коллагеновых покрытием камерах с разведенной крови в присутствии ионов Са 2+ и различных концентраций тромбоцитов (п ≥3). (А) Степень адгезии тромбоцитов (B) скорость накопления тромбоцитов (зеленый) и коагуляции (фиолетовый) и (С) о моменте начала показаны как функции концентрации тромбоцитов в разведенной крови. Точки являются средними значениями, Усы стандартные отклонения. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55351/55351fig3large.jpg" target="_blank">Пожалуйста</a> , <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55351/55351fig3large.jpg" target="_blank">нажмите здесь</a> , <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55351/55351fig3large.jpg" target="_blank">чтобы увидеть увеличенное Versi</a>на этой фигуре. <img alt="Рисунок 4" src="/files/ftp_upload/55351/55351fig4.jpg" /> Рисунок 4: Активация обоих TF и контактный затрагивающего пути коагуляции значительно укорачивает о моменте начала коагуляции. Водостойких крови, в присутствии ионов Са 2+, вливают через камеры , покрытый одним или с коллагеном и rhTF учиться самостоятельно контактного пути или комбинацию контактных и TF путей коллагена. (A) о моменте начала коагуляции существенно сокращается в TF-содержащих проточных камер. (B) Скорость накопления тромбоцитов в процессе коагуляции и (С) скорость коагуляции значимо не отличаются между коллагеном или только коллагеном и rhTF покрытием камеры потока. Бары и точки представляют собой средние значения; нитевидные кристаллы представляют собой стандартные отклонения. Статистический анализ был по парного критерия Стьюдента. (NS = не имеет существенного значения, * P &lt;<html> 0,05, п ≥3). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55351/55351fig4large.jpg" target="_blank">Пожалуйста</a> , <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55351/55351fig4large.jpg" target="_blank">нажмите здесь</a> , <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55351/55351fig4large.jpg" target="_blank">чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.</a> <img alt="Видео 1" src="/files/ftp_upload/55351/55351vid1.jpg" /> Дополнительное видео 1: При отсутствии TF, свертывание в коллагеновых покрытием камер перфузия потока зависит от FXIIa. Роль контактного пути определяется в коллагеновых покрытием камер перфузия потока. (A) , наложенное последовательность флуоресцентного изображения тромбоцитов (зеленый) и фибрина (оген) (фиолетовый) осаждения при отсутствии CTI. (В) той же последовательности , как панели А , но с зеленого канала выключен. (C) , наложенное последовательность флуоресценции изображение тромбоцитов (зеленый) и фибрина (оген) (фиолетовый) осаждения в присутствии ИТК. (D) , и ту же последовательность , как панели С , но с зеленого канала выключен.ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55351/Supplementary_video_1.avi &quot;целевых =&quot; _blank &quot;&gt; Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы загрузить это видео. <img alt="Видео 2" src="/files/ftp_upload/55351/55351vid2.jpg" /> Дополнительное видео 2: Активация обоих TF и контактный путь значительно укорачивает коагуляционной о моменте начала. Для изучения роли TF, использовались проточных камер, покрытый одним или с коллагеном и rhTF коллагена. (A) , наложенное последовательность флуоресцентного изображения тромбоцитов (зеленый) и фибрина (оген) (фиолетовый) осаждения в проточных камерах , покрытых только с коллагеном. (В) той же последовательности , как панели А , но с зеленого канала выключен. (C) , наложенное последовательность флуоресценции изображение тромбоцитов (зеленый) и фибрина (оген) (фиолетовый) осаждения в проточных камерах , покрытых коллагена и rhTF. (D) той же последовательности , как панели С , но с зеленым канала пехед прочь. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55351/Supplementary_video_2.avi" target="_blank">Пожалуйста</a> , <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55351/Supplementary_video_2.avi" target="_blank">нажмите здесь</a> , <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55351/Supplementary_video_2.avi" target="_blank">чтобы загрузить это видео.</a>

Watch this Scientific Journal Video about A Microfluidic Flow Chamber Model for Platelet Transfusion and Hemostasis Measures Platelet Deposition and Fibrin Formation in Real-time at JoVE.com

A Microfluidic Flow Chamber Model for Platelet Transfusion and Hemostasis Measures Platelet Deposition and Fibrin Formation in Real-time

Эта статья описывает экспериментальную модель гемостаза, которая одновременно измеряет функцию тромбоцитов и коагуляции. Тромбоцитами и фибрином измеряют флуоресценцию в режиме реального времени, и скорость адгезии тромбоцитов, скорость коагуляции, а начало коагуляции определяются. Модель используется для определения свойств тромбоцитов прокоагулянтную при потоке в концентратах для переливания.

Микрожидком Flow камера Модель тромбоцитами трансфузиологии и гемостаза меры тромбоцитов Отложение и фибрина Формирование в режиме реального времени

Microfluidic models of hemostasis assess platelet function under conditions of hydrodynamic shear, but in the presence of anticoagulants, this analysis is ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Parallel-plate Flow Chamber and Continuous Flow Circuit to Evaluate Endothelial Progenitor Cells under Laminar Flow Shear Stress

Параллельные пластины палаты потока и непрерывной цепи потока для оценки эндотелиальных клеток-предшественников при ламинарном Стресс сдвиговом потоке

The overall goal of this method is to describe a technique to subject adherent cells to laminar flow conditions and evaluate their response to well ...

A Novel Three-dimensional Flow Chamber Device to Study Chemokine-directed Extravasation of Cells Circulating under Physiological Flow Conditions

Роман трехмерного течения палаты по изучению устройства хемокинами направлены Экстравазация клеток, циркулирующих в физиологических условиях потока

Extravasation of circulating cells from the bloodstream plays a central role in many physiological and pathophysiological processes, including stem cell ...

Protocol for Biofilm Streamer Formation in a Microfluidic Device with Micro-pillars

Протокол биопленки Streamer формирования в микрожидкостных устройств с Micro-столбов

Several bacterial species possess the ability to attach to surfaces and colonize them in the form of thin films called biofilms. Biofilms that grow in ...

Microfluidic Genipin Deposition Technique for Extended Culture of Micropatterned Vascular Muscular Thin Films

Микрожидкостных генипин осаждения Техника для расширенной культуры Micropatterned сосудистых мышечной тонких пленок

The chronic nature of vascular disease progression requires the development of experimental techniques that simulate physiologic and pathologic vascular ...

Layer-by-layer Collagen Deposition in Microfluidic Devices for Microtissue Stabilization

Слой за слоем Коллаген осаждения в микрофлюидных Устройства для стабилизации Microtissue

Although microfluidics provides exquisite control of the cellular microenvironment, culturing cells within microfluidic devices can be challenging. 3D ...

Characterization of Leukocyte-platelet Rich Fibrin, A Novel Biomaterial

Характеристика лейкоцитов тромбоцитов Rich фибрина, роман биоматериала

Autologous platelet concentrates represent promising innovative tools in the field of regenerative medicine and have been extensively used in oral ...

Microfluidic Flow Chambers Using Reconstituted Blood to Model Hemostasis and Platelet Transfusion In Vitro

Microfluidic Flow Chambers Using Reconstituted Blood to Model Hemostasis and Platelet Transfusion In Vitro

Микрожидкостных Flow Камеры Использование водостойких крови к модели гемостаза и тромбоцитарный Переливание<em&gt; In Vitro</em

Blood platelets prepared for transfusion gradually lose hemostatic function during storage. Platelet function can be investigated using a variety of ...

Microfluidic Bioprinting for Engineering Vascularized Tissues and Organoids

Microfluidic подложке для инженерных васкуляризированной ткани и Organoids

Engineering vascularized tissue constructs and organoids has been historically challenging. Here we describe a novel method based on microfluidic ...

A Protocol for Real-time 3D Single Particle Tracking

Протокол для слежения в реальном времени 3D одной частицы

Real-time three-dimensional single particle tracking (RT-3D-SPT) has the potential to shed light on fast, 3D processes in cellular systems. Although ...

Manufacturing of a Nafion-coated, Reduced Graphene Oxide/Polyaniline Chemiresistive Sensor to Monitor pH in Real-time During Microbial Fermentation

Изготовление Nafion покрытием, снижение графена оксид/полианилин Chemiresistive датчик pH монитора в реальном времени во время микробной ферментации

Here, we report the engineering of a solid-state micro pH sensor based on polyaniline-functionalized, electrochemically reduced graphene oxide (ERGO-PA). ...