Name: magnetic stirrer method for the detection of trichinella larvae in muscle samples
Uploaded: 2017-03-03T15:00:00
Duration: 9 min 44 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples at JoVE.com

Wij u vriendelijk bedanken Sabine Reckinger voor een uitstekende technische bijstand en ondersteuning.

1. Voorbereidingen <ol><li> monstername Opmerking: De magneetroerder methode kan worden gebruikt voor een of spier samengevoegde monsters. <ol><li> Verzamel monsters uit de juiste voorliefde sites en in een passend bedrag 9. Raadpleeg de eisen land of aan de aanbevelingen van ICT, OIE of ISO. <ol><li> Voor de Europese Unie, bijvoorbeeld, neem een ​​1 g monster van een diafragma pilaar bij de overgang van spier naar pees van tamme varkens. Zorg ervoor dat alle spieren monsters zijn vrij van alle vet en fascia. </li></ol></li><li> Als de tong wordt getest, verwijdert de oppervlaktelaag voorafgaand aan het testen. </li><li> Pas op als monsters worden bevroren, omdat de meeste Trichinellalarven niet bestand zijn bevriezen en afwikkelen na de dood, zijn minder bestand tegen de spijsvertering en hebben de neiging vast te houden aan de container muren, wat resulteert in verminderde gevoeligheid van de test. Opmerking: Indien bevroren, het dubbele van de steekproefgrootte op loosten en verhoging van de sedimentatie (zie hieronder). </li></ol></li><li> Voorbereiding van de spijsvertering vloeistof <ol><li> Voeg 25% HCl (16 ± 0,5 ml) tot 2 liter leidingwater voorverwarmd tot 46-48 ° C in een 3 L glazen beker. Te lage temperatuur leidt tot onvolledige vertering; te hoge temperatuur deactiveert de enzymatische eigenschappen van pepsine. </li><li> Plaats een roerstaafje in de beker en roer de oplossing op een voorverwarmd bord (46-48 ° C). </li><li> Voeg 10 ± 0,2 g pepsine (1: 10.000 NF, 1: 12.500 BP, 2000 FIP) aan de zure oplossing. Opmerking: De kwaliteit van de pepsine is van het allergrootste belang is en enzymactiviteit moet worden gecertificeerd door de producent. Om laboratorium veiligheidsredenen en om de pepsine activiteit te behouden, moet de volgorde van het toevoegen van digestievloeistof componenten worden nageleefd. </li></ol></li><li> Muscle monstervoorbereiding <ol><li> Hak tot 100 g van de spier monsters in een blender of molen. Om blen vergemakkelijkending, voeg 2 ml voorverwarmd water aan de monsters en mix op max snelheid 2-3 s. </li><li> Voordat de tweede mengen, opent u de blender en overdragen spier monster aan de top van het mengen kom rand marge aan de onderkant en herhaal mengen. Blijven mengen met uitbarstingen van 2-3 s tot er geen zichtbare stukjes vlees blijven. Opmerking: Te weinig vermenging kan leiden tot onvolledige spijsvertering, terwijl te veel mengen de larven aanwezig Trichinella in de monsters 6 kunnen beschadigen. </li></ol></li></ol> 2. Procedure <ol><li> Muscle monsterontsluiting <ol><li> Transfer 1 L van de digestievloeistof in een cilinder. Breng de gemalen vlees in de beker en te verspreiden bij de vertering vloeistof met een lepel of vork. Spoel de mixer deksel blade mixer kom met 500 ml van de voorverwarmde digestie fluïdum in de 3 L bekerglas. Opmerking: Onvolledige spoelen kan resulteren in het verlies van sensItivity. </li><li> Bedek het bekerglas met aluminiumfolie en houdt een constante temperatuur van 44-46 ° C en monitor met een thermometer. </li><li> Roer de digestievloeistof 30 minuten tot een diepe draaikolk zonder spatten ontstaat tot het vlees deeltjes verdwijnen. Afhankelijk van het soort vlees getest (bv vlees van wilde dieren), verhogen de vertering tijd tot een maximum van 60 minuten. </li></ol></li><li> Filtratie en sedimentatie van de digestievloeistof <ol><li> Om de hoeveelheid onverteerd weefsel vast te stellen, de omvang op nul, wegen de zeef voor gebruik, en noteer het gewicht. De zeef moet schoon en vrij van elk weefsel deeltjes, die de Trichinellalarven het bereiken van de sedimentatie trechter kunnen belemmeren. Controleer of de scheiding trechter verticaal wordt genivelleerd. </li><li> Na de vertering, giet de digestievloeistof door een 180 urn zeef in een scheiding glas trechter. De breedte van de scheiding glas trechter mag niet be groter dan 55% van de lengte larve goede sedimentatie mogelijk. Zorg ervoor dat eventuele overflow te voorkomen. </li><li> Om verlies van de gevoeligheid te voorkomen, spoel het bekerglas en de zeef met ongeveer 200 ml leidingwater uit een squeeze wassen fles en breng het spoelwater in de sedimentatie glas trechter. Zorg zorgvuldig spoelen de randen van de 3 L bekerglas. Til de zeef en het gebied afspoelen onder de zeef grondig. </li></ol></li><li> Bepaling van onverteerd weefsel bedrag Opmerking: Als gevolg van fouten in de uitvoering van de werkwijze kan spierweefsel op de zeef blijft, en fascia en bindweefsel onverteerbaar zijn. De hoeveelheid van onverteerd weefsel wordt bepaald gedurende de eerste 10 min sedimentatiestap (zie 2.5). Dit maakt ongeveer 30 minuten voor de zeef droog, het restwater het vastgestelde gewicht van de onverteerd weefsel kan beïnvloeden. <ol><li> Plaats een papieren handdoek op een schaal, en wegen van de zeef met de undigested weefsels. </li><li> Trek de zeef gewicht vóór filtratie uit de zeef gewicht met onverteerd weefsels. Het verteringsproces als voldoende beschouwd indien niet meer dan 5% van het uitgangsgewicht van de zeef (dat wil zeggen 5 g / 100 g uitgangsmateriaal) blijft. </li><li> Als de hoeveelheid onverteerd weefsel 5% overschrijdt, herhaal de test met verse spier monsters. Als het restmateriaal hoofdzakelijk bestaat uit onverteerd spierweefsel en verse monsters beschikbaar zijn, verteren het onverteerde resten telkens onderzoeken aanvulling op de oorspronkelijke monsters. </li></ol></li><li> Sedimentatie van de digestievloeistof <ol><li> Houd de gefilterde digestievloeistof in de scheitrechter gedurende 30 minuten. Als ongemoeid gelaten, zal de Trichinellalarven bezinken op de bodem van de trechter. </li><li> Indien bevroren monsters worden gebruikt, verhogen de sedimentatie tijd maximaal 60 minuten. </li><li> Zodra sedimentatie is voltooid, wordt de kraan volledig openvan de scheitrechter te laten ten minste 40 ml van de digestievloeistof snel af in een bekerglas (80 ml als spier monsters die eerder bevroren was geweest). </li><li> Allereerst de helft van de vloeistof in de cilinder en vervolgens de kraan volledig open in tegengestelde richting 10 ml digestievloeistof laten passen. Tenslotte opent de kraan in de tegengestelde richting nog 10 ml. Deze procedure garandeert dat Trichinellalarven niet worden gevangen in de kraan. Opmerking: voldoende snelheid vereist om nog in de scheitrechter larven te voorkomen, verminderen gevoeligheid. </li></ol></li><li> Sedimentatie van de vertering fluïdum in de cilinder <ol><li> Laat het sediment in de cilinder gedurende 10 minuten om larven te sedimenteren. Verwijder 30 ml supernatant door afzuigen met een pipet zonder de 10 ml sediment. </li><li> Om de hoeveelheid weefsel vezels in het monster te verminderen, voeg 30 ml leidingwater om het sediment en laat nog 10 min. Herhaal dit totdat de vloeistof helder. </li><li> Verwijder supernatant en breng de 10 ml gewassen sediment naar een gerasterde petrischaal of tellen van larven. Spoel de cilinder met 10 ml leidingwater en vervolgens het water toe te voegen aan het monster. Opmerking: Als grote hoeveelheden vuil in het monster kan de identificatie van de Trichinellalarven (figuur 1) te voorkomen, moet verder wasstappen worden uitgevoerd, indien nodig. </li></ol></li><li> Microscopisch onderzoek <ol><li> Gebruik trichinoscoop of stereomicroscoop met een substap uitgezonden lichtbron van regelbare, in een 15 tot 20x vergroting de monsters onmiddellijk na de wasstappen onderzoeken. </li><li> Na het storten van het monster in de gerasterde petrischaal, onderzoekt de schaal / bekken systematisch raster door raster. Als er geen verdachte structuren worden gevonden, beweeg de vloeistof in de gerasterde petrischaal of tellen van larven in een circulaire manier om eventuele Trichinella la toestaanrvae, die mogelijk zijn uitzicht, zich ophopen in het midden van de petrischaal. Herhaal het onderzoek. </li><li> Als een verdachte structuur wordt gevonden, te verhogen vergroting tot 40 - 100X. Verwijderen Trichinellalarven uit de schaal / bekken met een pipet en in een buis met een 90% ethanol. </li><li> Na het volledige gerecht is onderzocht, herhaalt u de procedure, vanaf de zachte schudden van de schotel / bekken. Herhaal de procedure ten minste drie maal of totdat er geen larven meer worden gevonden. </li><li> Tel het aantal larven. Correleren met de hoeveelheid spierweefsel getest en aanwezig larven per gram (lpg). </li><li> Als er te veel larven aanwezig zijn bij de vertering vloeistof naar de larvale aantal betrouwbaar te bepalen zijn, de terugkeer van de vloeistof met de larven van de maatcilinder, afspoelen met leidingwater uit een squeeze wassen fles, en laat larven naar de bodem. </li><li> Na 10 minuten sedimentatie, verminder de supernatant om een bepaald volume (bijvoorbeeld10 mL). Om de exacte volume te bepalen, breng het supernatant naar een nieuwe cilinder met een pipet. </li><li> Suspendeer larven homogeen in de vloeistof door krachtig schudden. Tijdens het schudden beweging, voeg 12 druppels van 20 ul larvale schorsing op een petrischaal. </li><li> Onderzoek elke druppel met een microscoop. Bepaal het aantal larven in 240 pi en verwijder de hoogste en laagste telling. Extrapoleren aantal larven tot het totale volume (bijvoorbeeld 10 ml) supernatant. Opmerking: De kwaliteit van de stereo-microscoop is van het grootste belang voor de identificatie van Trichinellalarven. </li><li> Wanneer de larven in een buis worden verzameld door een pipet, zorgvuldig te controleren dat de larven niet plakken op de pipet muur, maar worden overgebracht naar de buis. Opmerking: Positieve Trichinella bevindingen uit samengevoegde monsters moet terug van het zwembad worden herleid tot het karkas van herkomst. Hier moet de grootte van het zwembad geleidelijk worden verlaagd totdat de positieve karkas is identiteitceerd. De steekproefomvang kan worden verhoogd tijdens dit proces gevoeligheid te verhogen. Wanneer het onderzoek van een verzamelmonster een positieve of onzeker Hierdoor wordt een verdere 20 g monster van elk varken. De 20 g monsters van vijf varkens samengevoegd en onderzocht met behulp van de beschreven werkwijze. Aldus worden monsters van 20 groepen van vijf varkens onderzocht. Wanneer Trichinella in een samengevoegde monster wordt gedetecteerd van vijf varkens, zijn 20 g monsters van de afzonderlijke varkens in de groep en elk wordt afzonderlijk onderzocht totdat de positieve karkas van herkomst wordt gedetecteerd. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Gottstein, B., Pozio, E., N&#246;ckler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology,+Diagnosis,+Treatment,+and+Control+of+Trichinellosis.">Epidemiology, Diagnosis, Treatment, and Control of Trichinellosis.</a> Clin. Microbiol. Rev. 22, 127-145 (2009).</li><li>Pozio, E., Murrell, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematics+and+epidemiology+of+Trichinella.">Systematics and epidemiology of Trichinella.</a> Adv. Parasitol. 63, 367-439 (2006).</li><li>9 CFR Part 318.10 - Prescribed treatment of pork and products containing pork to destroy trichinae. U.S. Government Publishing Office Available from: <a target="_blank" href="https://www.gpo.gov/fdsys/pkg/CFR-2016-title9-vol2/pdf/CFR-2016-title9-vol2-sec318-10.pdf">https://www.gpo.gov/fdsys/pkg/CFR-2016-title9-vol2/pdf/CFR-2016-title9-vol2-sec318-10.pdf</a> (2012)</li><li>Gamble, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+Commission+on+Trichinellosis:+recommendations+on+methods+for+the+control+of+Trichinella+in+domestic+and+wild+animals+intended+for+human+consumption.">International Commission on Trichinellosis: recommendations on methods for the control of Trichinella in domestic and wild animals intended for human consumption.</a> Vet. Parasitol. 93 (3-4), 393-408 (2000).</li><li>Gajadhar, A. A., Forbes, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+internationally+recognized+quality+assurance+system+for+diagnostic+parasitology+in+animal+health+and+food+safety,+with+example+data+on+trichinellosis.">An internationally recognized quality assurance system for diagnostic parasitology in animal health and food safety, with example data on trichinellosis.</a> Vet. Parasitol. 103, 133-140 (2002).</li><li>N&#246;ckler, K., Kapel, C. M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+3,+Detection+and+surveillance+for+Trichinella:+meat+inspection+and+hygiene,+and+legislation.">Chapter 3, Detection and surveillance for Trichinella: meat inspection and hygiene, and legislation.</a> FAO/WHO/OIE Guidelines for the surveillance, management, prevention and control of trichinellosis. , 69-98 (2007).</li><li>Boch, J., Schnieder, T., Supperer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Veterin&#228;rmedizinische Parasitologie. , (2006).</li><li>Despommier, D. D., M&#252;ller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stichosome+and+its+secretion+granules+in+the+mature+muscle+larva+of+Trichinella+spiralis.">The stichosome and its secretion granules in the mature muscle larva of Trichinella spiralis.</a> J. Parasitol. 62 (5), 775-785 (1976).</li><li>Marucci, G., Interisano, M., La Rosa, G., Pozio, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+identification+of+nematode+larvae+different+from+those+of+the+Trichinella+genus+detected+by+muscle+digestion.">Molecular identification of nematode larvae different from those of the Trichinella genus detected by muscle digestion.</a> Vet Parasitol. 194, 117-120 (2013).</li><li>Forbes, L. B., Gajadhar, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+validated+Trichinella+digestion+assay+and+an+associated+sampling+and+quality+assurance+system+for+use+in+testing+pork+and+horse+meat.">A validated Trichinella digestion assay and an associated sampling and quality assurance system for use in testing pork and horse meat.</a> J. Food Prot. 62, 1308-1313 (1999).</li><li>Malakauskas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+epidemiology+of+Trichinella+spp.+in+three+Baltic+countries:+Lithuania,+Latvia,+and+Estonia.">Molecular epidemiology of Trichinella spp. in three Baltic countries: Lithuania, Latvia, and Estonia.</a> Parasitol. Res. 100 (4), 687-693 (2007).</li><li>Kapel, C. M., Webster, P., Gamble, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+distribution+of+sylvatic+and+domestic+Trichinella+larvae+in+production+animals+and+wildlife.">Muscle distribution of sylvatic and domestic Trichinella larvae in production animals and wildlife.</a> Vet. Parasitol. 132 (1-2), 101-105 (2005).</li><li>Interisano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+latex+agglutination+test+for+the+detection+of+Trichinella+infections+in+pigs.">Validation of a latex agglutination test for the detection of Trichinella infections in pigs.</a> Vet. Parasitol. 194, 121-124 (2013).</li><li>Pozio, E., La Rosa, ., G, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCR-derived+methods+for+the+identification+of+Trichinella+parasites+from+animal+and+human+samples.">PCR-derived methods for the identification of Trichinella parasites from animal and human samples.</a> Methods Mol. Biol. 216, 299-309 (2003).</li></ol>

De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen.

Hoewel de magneetroerder methode gemakkelijk kan worden uitgevoerd, niet strikt vast te houden aan technische details leidt tot onvoldoende gevoeligheid, waardoor de gezondheid van de consument in gevaar te brengen. De kritische controlepunten zijn gemarkeerd in de bovenstaande tekst. Bovendien, het gebruik van geschikte uitrusting is cruciaal voor het succes van de test. Alle vaten moet worden gemaakt van glas en pipetpunten bekleed met silicium hechting larven reduceren tot het oppervlak. De gevoeligheid van de digestiemethode afhankelijk van het larvale dichtheid in de spieren en de hoeveelheid spiermonster getest. Voor een larvale dichtheid van 3-5 lpg van spierweefsel, een gevoeligheid van 100% werd gerapporteerd, maar onder 1 gpl daalde de gevoeligheid tot 40% 13. Afhankelijk van de geteste soort gastheerdier, kan de gevoeligheid van de test worden verbeterd door de hoeveelheid van het gebruikte monster. de infection last in wilde dieren is meestal laag, dus grotere steekproeven maten worden gebruikt 14. Voorliefde sites ook variëren tussen gastheer dieren. Hier, hoe lager verteerbaarheid van bepaalde spieren zoals de tong rekening moet worden gehouden, die ook kan leiden tot grotere monsterhoeveelheden 15. Verder is het belangrijk te begrijpen dat de magnetische roerder methode geen controles bevat. Daarom, kwaliteitsborging beheer van de monsterneming tot de documentatie is essentieel voor accurate en nauwkeurige resultaten te verkrijgen. De kwaliteit van de prestaties van het laboratorium voor Trichinella larven in de spieren monsters op te sporen moeten worden gecontroleerd door regelmatige deelname van elke analist in ringonderzoeken. Verdere beperkingen van de methode zijn dat de definitieve identificatie fase van de spier larven door microscopie is zeer subjectief en heavily afhankelijk van de kennis van de larvale morfologie door de onderzoeksrechter analist. Een interessant alternatief methode om dit probleem te omzeilen is het magnetische roerder werkwijze / isolatie op filter gevolgd door larven detectie door een latex agglutinatietest. Echter, volgens de EU-wetgeving deze methode wordt alleen als gelijkwaardig beschouwd voor het testen van vlees van varkens, maar niet voor dieren die een hoger risico op infectie, zoals wilde zwijnen 4. De identificatie van de larvale antigeen monoklonale antilichamen maakt de test objectiever, maar ontkent het laboratorium de mogelijkheid van het bepalen van het aantal larven per gram vlees 16. Verdere variaties van de magneetroerder werkwijze omvatten de mechanisch bijgestaan ​​Verzameldigestiemethode methode / sedimentatie techniek, de mechanisch bijgestaan ​​samengevoegd monster digestion methode / isolatie op filter techniek, en de automatische verzameldigestiemethode voor monsters van maximaal 35 g techniek. Deze technieken zijn allemaal gebaseerd op het kunstmatige vertering van het vlees en de visualisatie en telling van Trichinellalarven, maar verschillen in de voor de filtratie en sedimentatie stappen materiaal. De geïsoleerde larven kan verder worden geïdentificeerd op het soort niveau door een moleculaire test (bijvoorbeeld multiplex PCR) 17. Volgens de EU-wetgeving, moeten alle positieve monsters worden naar het nationale referentielaboratorium of EURLP voor de Trichinellasoort vastberadenheid.

Nematoden van het geslacht Trichinella kan worden gedetecteerd in dwarsgestreepte spieren van carnivore en omnivore zoogdieren, vogels, reptielen en wereldwijd. Deze zoönotische aaltjes kunnen mensen bij het rauw of semi-rauw vlees en afgeleide producten te bereiken van varkens, paarden en wild worden ingenomen. Dit zoönose kan een ernstige ziekte bij de mens wordt gekenmerkt door pathognomonisch tekenen en symptomen, zoals diarree, koorts, periorbitaal oedeem en spierpijn en mogelijke complicaties, zoals myocarditis, trombo-embolische ziekte en encefalitis 1 zijn. Trichinella spiralis is de meest voorkomende etiologische agent van Trichinella infectie bij wilde en gedomesticeerde dieren en veroorzaakt de meeste van de menselijke besmettingen wereldwijd. In Europa, Noord- en West-Afrika en West-Azië, Trichinella britovi is een andere bron van de menselijke infecties. Daarnaast worden tien andere taxa minder wordt genoemd als oorzakelijke<html> middelen van de humane ziekte en zijn te vinden in verschillende gebieden van de wereld, meestal bij wilde dieren 2. Naast de wilde dieren zoals wilde zwijnen, beren, walrussen en dassen, varkensvlees is de belangrijkste bron van menselijke besmetting wereldwijd. De beste manier om trichinellose voorkomen is om geen eten van rauwe vleesproducten en geen vlees, vooral wild veilige temperaturen (koken&gt; 65 ° C gedurende 1 min, dat wil zeggen de kleur van het vlees van roze bruin veranderen in de kern van de vleesproduct) 3. De Europese Unie en USDA hebben invriezen en baktijden en temperaturen gespecificeerd voor varkensvlees producten die kunnen worden gebruikt om T. spiralis larven dood vlees 4, 5. Bovendien, aanbevelingen voor de inactivatie van Trichinella in vlees en vleesproducten werden op Trichinellose gepubliceerd door de Internationale Commissie&quot;xref&quot;&gt; 6. In Europa, naast de invoering van gecontroleerde huisvestingsomstandigheden in commerciële varkenskuddes waar het risico op Trichinella infectie verwaarloosbaar het voorkomen van menselijke trichinellose is gebaseerd op onderzoek van het laboratorium van monsters van gevoelige dieren 4. Voor voedselveiligheid doeleinden, spijsvertering assays zijn de enige betrouwbare procedures voor de directe detectie van Trichinella larven in vlees 3, 7. Zelfs als er meerdere variaties van de spijsvertering assay, de magneetroerder methode is de internationaal aanvaarde referentiemethode 3, 4, 7. Deze test is gebaseerd op de detectie van Trichinella larven in dwarsgestreept spierweefsel. Na de enzymatische vertering van het nemen van monsters en daaropvolgende filtratie en sedimentatie stappen, Trichinella larven worden geïdentificeerd met behulp van microscopie. Afhankelijk van de handelsverplichtingen en nationale wetgeving, zijn er een veelheid van kleine variaties in het algemeen protocol van de magneetroerder methode. Hier worden de technische gegevens op basis van de EU-eisen 4, ISO-specificaties 8, ICT richtlijnen 6, en de ervaring van de Europese Unie referentielaboratorium voor parasieten (EURLP) en de Duitse referentielaboratorium voor Trichinella.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1019">
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Knife,Scissors, Tweezers&#160;</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td style="width:80px;"></td>
			<td style="width:363px;">Cutting samples and removing non-digestible tissue</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Blender&#160;</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">With a sharp chopping blade</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Magnetic stirrer</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">With thermostatically controlled heating plate</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Stirring Rod</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Teflon-coated, approximately 5 cm long</td>
		</tr>
		<tr height="66">
			<td height="66" style="height:66px;width:220px;">Conical glass separation funnel</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Capacity of at least 2 litres, preferably fitted with Teflon safety plugs. The width should not be larger than 55% of the length to allow a good larva sedimentation</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Stands, rings and clamps</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;"></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:220px;">Sieve</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Mesh size 180 microns, external diameter 11 cm, with stainless steel mesh</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Funnel</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Internal diameter not less than 12 cm, to support the sieves</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Glass beaker</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Capacity 3 litres</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Glass measuring cylinder</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Capacity 50 to 100 ml, or centrifuge tube</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:220px;">Stereo-microscope</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">With a substage transmitted light source of adjustable intensity or trichinoscope with a horizontal table</td>
		</tr>
		<tr height="66">
			<td height="66" style="height:66px;width:220px;">Petri dishes</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">9 cm diameter, marked on their undersides into 10 &#215; 10 mm square examination areas using a pointed instrument or a larval counting basin for the tricinoscope</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Aluminium foil</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Alternatively a lid to cover the beakers</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">25 % hydrochloric acid</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;"></td>
		</tr>
		<tr height="100">
			<td height="100" style="height:100px;width:220px;">Pepsin</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Strength: 1:10 000 NF (US National Formulary) corresponding to 1:12 500 BP (British Pharmacopoeia) and to 2 000 FIP (F&#233;d&#233;ration internationale de pharmacie), or stabilised liquid pepsin with minimum 660 European Pharmacopoeia units/ml</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Ethanol</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">70-90% ethyl alcohol</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Tap water</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Heated to 46-48 &#176;C before use</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Balance</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Accurate to at least 0.1 g</td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:220px;">Metal tray</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Capacity 10 to 15 litres, to collect the remaining digestive juice</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Pipettes and pipette holder</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Different sizes (1, 10 and 25 ml)</td>
		</tr>
		<tr height="47">
			<td height="47" style="height:47px;width:220px;">Thermometer&#160;</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">Accurate to 0.5 &#176;C, temperature range at least from 20 &#176; C to 70 &#176; C</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Siphon&#160;</td>
			<td style="width:356px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:363px;">For tap water</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

magnetic stirrer method for the detection of trichinella larvae in muscle samples

Trichinellose is een slopende ziekte bij mensen en wordt veroorzaakt door de consumptie van rauw of onvoldoende verhit vlees van de dieren geïnfecteerd met de nematode larven van het geslacht Trichinella. De belangrijkste bronnen van humane infecties wereldwijd zijn vlees van wild en varkensvlees of varkensvlees producten. In veel landen is het voorkomen dat er trichinellose gebaseerd op de identificatie van geïnfecteerde dieren door de vertering van kunstmatige spieren monsters van relevante kadavers. Er zijn verschillende methoden die zijn gebaseerd op de digestie van vlees maar de magneetroerder werkwijze wordt beschouwd als de gouden standaard. Met deze methode kan de detectie van Trichinella larven door microscopie na de enzymatische afbraak van de monsters spieren en de daaropvolgende filtratie en sedimentatie stappen. Hoewel deze methode speciale en dure apparatuur vereist, kunnen de controles niet worden gebruikt. Daarom moeten strikte kwaliteitsmanagement worden applied gedurende de test. Het doel van dit werk is om gedetailleerde instructies hanteren en kritische controlepunten van de methode aan analisten, op basis van de ervaring van de Europese Unie referentielaboratorium voor parasieten en het Nationaal Referentielaboratorium van Duitsland op Trichinella te bieden.

<html> Na digestie kan de vorm van het infectieuze larven spier variëren, waardoor identificatie bemoeilijkt. Typische vormen omvatten strak opgerold larven, licht opgerold larven of c-vormige of volledig afgewikkeld larven (figuren 2B - 2C). Het aantal larven per gram kan aanzienlijk variëren en kan variëren van een larve tot enkele honderden larven. De morfologie van de spier infectieve larve wordt getoond in figuur 2A. Trichinellalarven zijn 0,7-1,5 mm lang en ongeveer 0,3 mm breed. De slokdarm is smal en heeft een iets afgeronde einde. De cuticula is glad. In de voorste helft van de lichaamsholte, de stichosome, een structuur opgebouwd uit een lange slanke buis omgeven door een rij 45-55 grote cellen (stichocytes), kan worden waargenomen. De endeldarm is ook afgerond zonder uitsteeksels of aanhangsels 10, 11. t &quot;&gt; Andere structuren, naast Trichinellalarven, kan worden na spier- digestie Enkele voorbeelden getoond in Figuren 3A -.. 3F wilde dieren worden vaak geïnfecteerd met andere parasieten of het nemen van monsters voor het testen verontreinigd gedurende het uithalen proces levende of levenloze structuren / organismen. de lengte van de larven, het uiterlijk van de voorste en achterste einden en het optreden van de stichosome helpen om onderscheid tussen verschillende nematode genera 12. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/55354/55354fig1.jpg" /> Figuur 1: microscopisch onderzoek van Trichinellalarven After (A) Onvoldoende en (b) voldoende spoelen Steps. Schaalbalken geven 100 urn. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55354/55354fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier om te zien een grotere ve</a>rsion van dit cijfer. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/55354/55354fig2.jpg" /> Figuur 2: morfologie van Infectieuze Trichinellalarven Het tonen van de Rectum, Stichosome en de slokdarm van de larve (A). Mogelijke vormen van de spier larven na digestie weergegeven (B) strak opgerold en licht opgerold bewegende larven en (C) afgewikkeld larven. Schaalbalken geven 100 urn. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55354/55354fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a> <img alt="figuur 3" src="/files/ftp_upload/55354/55354fig3.jpg" /> Figuur 3: Voorbeelden van Incidentele bevindingen na ontsluiting van Muscle Monsters met de magneetroerder Method. (A) varkenshaar-achtige haar vanaarde worm aangetroffen bij wilde zwijnen; (B) Alaria alata van wilde zwijnen; (C) spiervezels van wilde zwijnen; (D) metastrongylus sp. van wilde zwijnen; (E) plantaardige vezels gevonden in wilde zwijnen (F): Toxocara sp. larve van wilde zwijnen. Schaalbalken geven 100 urn. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55354/55354fig3large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples at JoVE.com

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

Het voorkomen van menselijke trichinellose in veel landen is gebaseerd op onderzoek van het laboratorium van monsters van gevoelige dieren door werkwijzen van de spijsvertering, waarvan de magnetische roerder methode wordt de gouden standaard.

Magneetroerder werkwijze voor de detectie van<em&gt; Trichinella</em&gt; Larven in Muscle Samples

Trichinellosis is a debilitating disease in humans and is caused by the consumption of raw or undercooked meat of animals infected with the nematode ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combinatie van Adhesive-tape-gebaseerde Sampling en fluorescentie In situ Hybridisatie voor snelle detectie van Salmonella Op Fresh Produce

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Use of Fluorescent Immuno-Chemistry for the detection of Edwardsiella ictaluri in channel catfish (I. punctatus) samples

Use of Fluorescent Immuno-Chemistry for the detection of Edwardsiella ictaluri in channel catfish I. punctatus samples

Het gebruik van TL-Immuno-Chemie voor de detectie van Edwardsiella ictaluri In kanaal meerval ( I. punctatus) Monsters

While Edwardsiella ictaluri is a major pathogen of channel catfish Ictalurus punctatus and has been discovered nearly 
three decades ago 1,2, so far, to ...

Multiplex Detection of Bacteria in Complex Clinical and Environmental Samples using Oligonucleotide-coupled Fluorescent Microspheres

Multiplex detectie van bacteriën in complexe klinische en Milieu monsters met behulp van oligonucleotide-coupled Fluorescent Microsferen

Bacterial vaginosis (BV) is a recurring polymicrobial syndrome that is characterized by a change in the "normal" microbiota from Lactobacillus-dominated ...

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

High-throughput Detection Methode voor Influenza Virus

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

Qualitative and Quantitative Assays for Detection and Characterization of Protein Antimicrobials

Kwalitatieve en Kwantitatieve Testen voor detectie en karakterisering van proteïne Antimicrobials

Initial evaluations of large microbial libraries for potential producers of novel antimicrobial proteins require both qualitative and quantitative methods ...

Fast and Specific Assessment of the Halogenating Peroxidase Activity in Leukocyte-enriched Blood Samples

Snelle en specifieke beoordeling van de halogenerend Peroxidase activiteit in leukocyten verrijkte bloedmonsters

In this paper a protocol for the quick and standardized enrichment of leukocytes from small whole blood samples is described. This procedure is based on ...

Swab Sampling Method for the Detection of Human Norovirus on Surfaces

Swab Sampling Methode voor de detectie van humane Norovirus op oppervlakken

Human noroviruses are a leading cause of epidemic and sporadic gastroenteritis worldwide. Because most infections are either spread directly via the ...

A Method for Targeted 16S Sequencing of Human Milk Samples

Een methode voor gerichte 16S sequentiebepaling van menselijke melkmonsters

Studies of microbial communities have become widespread with the development of relatively inexpensive, rapid, and high throughput sequencing. However, as ...

Rapid, Safe, and Simple Manual Bedside Nucleic Acid Extraction for the Detection of Virus in Whole Blood Samples

Snelle, veilige en eenvoudige handleiding bed nucleïnezuur extractie voor de opsporing van Virus in monsters van volbloed

The rapid diagnosis of an infection is essential for the outbreak management, risk containment, and patient care. We have previously shown a method for ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Een High-throughput Platform voor de Screening van Salmonella spp. /Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...