Name: controllable ion channel expression through inducible transient transfection
Uploaded: 2017-02-17T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Controllable Ion Channel Expression through Inducible Transient Transfection at JoVE.com

Questo lavoro è stato sostenuto dalla Israel Science Foundation [Grants 1721/12, 1368/12, 1444/16 e] (AP). AP è affiliata con Brettler Center e David R. Bloom Center, Facoltà di Farmacia, Università Ebraica di Gerusalemme.

1. legatura il gene di interesse nella reprimibile sito del vettore <ol><li> Ottenere un vettore inducibile come pcDNA5 / FRT / TO o pcDNA4 / TO. </li><li> Analizzare il gene di interesse per tutti i siti di restrizione potenzialmente sensibili nel mezzo del gene che sono anche presenti nel sito di clonaggio multiplo del vettore scelto dal DNA in silico software di analisi 4. </li><li> Uso sovrapposizione PCR standard tecniche 4, fiancheggiano il gene di interes...

<ol>
	<li>Ooi, A., Wong, A., Esau, L., Lemtiri-Chlieh, F., Gehring, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Guide+to+Transient+Expression+of+Membrane+Proteins+in+HEK-293+Cells+for+Functional+Characterization.">A Guide to Transient Expression of Membrane Proteins in HEK-293 Cells for Functional Characterization.</a> Frontiers in Physiology. 7, 300 (2016).</li><li>Thomas, P., Smart, T. 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D., Denton, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screening+for+small-molecule+modulators+of+inward+rectifier+potassium+channels.">High-throughput screening for small-molecule modulators of inward rectifier potassium channels.</a> J Vis Exp. (71), e4209 (2013).</li></ol>

Transfection è un protocollo ampiamente usato per l&#39;espressione della proteina e di ricerca, con molte varianti per migliorare l&#39;espressione di coerenza e stabilità. reagenti di trasfezione transiente offrono un semplice, facile da usare protocollo in cui la cellula e la proteina di interesse possono essere analizzati in poche ore a tutta la notte dal momento della trasfezione. Purtroppo questo approccio può essere imprevedibile se la modalità di analisi richiede un livello costante di espressione della prot...

Esprimendo eterologhi sistemi è una delle tecniche più utilizzate per studiare un gran numero di funzioni cellulari 1. Il loro profilo basso endogena di proteine, minima necessità di manutenzione, la crescita affidabile, e la capacità di intraprendere e di esprimere DNA estraneo hanno fatto linee cellulari quali embrionale umano Rene (HEK293) e ovaio di criceto cinese (CHO) quasi indispensabile per la ricerca biologica 2, 3. Le aree di ricerca che utilizza sistemi eterologhi includono proteine ​​di membrana, di segnalazione intracellulare, e l&#39;attività enzimatica. A seguito di trasfezione di DNA estraneo all&#39;interno della cellula, molte diverse forme di analisi possono essere eseguite, tra cui elettrofisiologia, l&#39;imaging del calcio raziometrico, Western Blot, ecc 4, 5. A causa della vasta gamma di potenziali applicazioni per i sistemi di espressione eterologa, molti differereagenti e prodotti nt sono stati sviluppati per utilizzare queste cellule e le loro qualità 6. sistemi di consegna del DNA che si integrano in modo transitorio o permanente DNA estraneo nelle cellule per studiare proteina esogena è diventato uno degli strumenti più popolari e utili per la ricerca biologica. Più specificamente, transitoriamente trasfezione del DNA in una cellula è ampiamente usato come un semplice processo avanti, rettilineo che richiede relativamente poco tempo e materiali. Inoltre, il tasso di successo di cellule che subiscono trasfezione è alto 7. Questa tecnica è molto affidabile quando combinato con un gene marcatore come proteina fluorescente verde (GFP), e può essere utilizzato per diverse tecniche come l&#39;imaging calcio e elettrofisiologia 5. Purtroppo, però, esprimono transitoriamente DNA nelle cellule ospiti viene fornito con alcune importanti insidie, non in meno che il livello di espressione per cellule è inaffidabile. Il numero di copie di DNA plasmidico taken up per cella è incontrollabile, quindi l&#39;espressione tra i singoli esperimenti può variare notevolmente 2. Questo problema diventa significativo quando uno tenta di replicare le condizioni fisiologiche, o l&#39;esecuzione di precise tecniche di raccolta dei dati. Come soluzione a complicazioni menzionati sopra, i protocolli di trasfezione stabili sono stati progettati in cui un gene di interesse può essere inserito nel genoma di una cellula sotto stretto controllo di un promotore inducibile, ad esempio un sistema tetraciclina repressore espressione, assicurando una singola copia del plasmide integra nel genoma di ciascuna cella e viene espresso solo dopo l&#39;induzione del meccanismo di trascrizione, per esempio, in presenza di doxiciclina. Mentre questo risolve gli ostacoli di livelli di espressione proteica incoerenti, questo metodo perde la comodità di protocollo rapido e relativamente semplice trasfezioni transitorie. Stabilire una linea cellulare stabile richiede almeno un paio di settimane in which si deve calibrare una curva di uccisione fissato antibiotici specifici per mantenere l&#39;espressione proteica e garantire l&#39;integrazione del vettore e abilmente selezionare e crescere colonie di cellule. Nel complesso questo richiede molto più tempo e fatica con un tasso di successo più bassa 8. Qui, vi presentiamo un protocollo intermedio che si basa sui punti di forza di entrambe le opzioni di trasfezione popolari per fornire un modo semplice ed efficace per controllare i livelli di espressione in qualsiasi linea cellulare inducibile. Pur mantenendo le cellule con un sistema tet inducibile, abbiamo transitoriamente trasfezione nostro gene di interesse, Transient Receptor Potential canale cationico membro sottofamiglia V 1 (TRPV1), legatura in un vettore che può homologously coniugare con il sistema repressore. In questo modo, il gene può essere introdotto nelle cellule senza cominciando a esprimere. Solo con l&#39;aggiunta di doxiciclina non gene comincia a esprimere, ci permette di calibrare i livelli di proteine ​​exprESSIONE secondo la tecnica o livelli osservati in condizioni fisiologiche. Il nostro protocollo evita anche complicanze lunghe associati con la generazione di una linea cellulare che esprime stabilmente. Iniziamo mostrando i livelli mutevoli di attivazione TRPV1 nella diagnostica per immagini del calcio da un-indotta attraverso quattro ore di induzione e come l&#39;aumento dei livelli intracellulari di calcio correlato. Abbiamo quindi duplicare il protocollo in tutta la configurazione della cella della tecnica del patch clamp, mostrando l&#39;attuale aumento con il tempo di induzione crescente. Infine, vi presentiamo alcuni esempi di registrazioni elettrofisiologiche singoli canali, e dimostrare che questa tecnica è particolarmente utile per espressione controllata quando alla ricerca di raccolta di dati precisi sulla base di singole unità della proteina. Attraverso il nostro protocollo, offriamo un modo comodo per controllare l&#39;espressione della proteina in sistemi eterologhi, evitando lunghe complicazioni di coltura cellulare, fornendo così un modo per controllare le condizioni tra esperimenti e fornire mori risultati replicabili.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="655">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">pcDNA&#8482;4/TO Mammalian Expression Vector</td>
			<td style="width:153px;">ThermoScientific Fisher</td>
			<td style="width:119px;">V102020</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">pcDNA&#8482;5/TO Mammalian Expression Vector</td>
			<td style="width:153px;">ThermoScientific Fisher</td>
			<td style="width:119px;">V103320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">PureLink Quick PCR Purification Kit</td>
			<td style="width:153px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">K310001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Swift&#8482;&#160;MaxPro Thermal Cycler</td>
			<td style="width:153px;">Esco&#160;</td>
			<td style="width:119px;">n.a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Restriction Enzymes</td>
			<td style="width:153px;">ThermoScientific Fisher</td>
			<td style="width:119px;">ER0501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Agarose&#160;</td>
			<td style="width:153px;">Lonza</td>
			<td style="width:119px;">50004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">PureLink Quick Gel Extraction Kit</td>
			<td style="width:153px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">K210012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">NanoDrop 2000c</td>
			<td style="width:153px;">ThermoScientific Fisher</td>
			<td>ND-2000C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">T4 DNA Ligase</td>
			<td style="width:153px;">ThermoScientific Fisher</td>
			<td style="width:119px;">EL0011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">One Shot&#174; TOP10 Chemically Competent E. coli</td>
			<td style="width:153px;">ThermoScientific Fisher</td>
			<td style="width:119px;">C404006&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ampicillin (Sodium), USP Grade</td>
			<td style="width:153px;">Gold Bio</td>
			<td style="width:119px;">A-301-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tryptone for microbiology</td>
			<td style="width:153px;">Merck</td>
			<td align="right" style="width:119px;">6.19305E+13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Yeast Extract</td>
			<td style="width:153px;">BD worldwide</td>
			<td align="right" style="width:119px;">212750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">&#160;SIF6000R Incubated Shaker</td>
			<td style="width:153px;">LAB COMPANION</td>
			<td style="width:119px;">45H118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:25px;width:216px;"> 
			NucleoSpin&#174;plasmid</td>
			<td style="width:153px;">Macherey Nagel</td>
			<td align="right" style="width:119px;">740588.25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">MS 300V Power Supply</td>
			<td style="width:153px;">Major Science</td>
			<td style="width:119px;">MP-300V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Owl&#8482; EasyCast&#8482; B1A Mini Gel Electrophoresis System</td>
			<td style="width:153px;">ThermoScientific Fisher</td>
			<td style="width:119px;">B1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">T-REx&#8482;-293 cell line</td>
			<td style="width:153px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">R710-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:216px;">DMEM (1X), liquid (high glucose)</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">41965-039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HindIII-HF&#174;</td>
			<td style="width:153px;">NEB</td>
			<td style="width:119px;">R3104S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">ApaI</td>
			<td style="width:153px;">NEB</td>
			<td style="width:119px;">R0114S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">CutSmart&#174; Buffer</td>
			<td style="width:153px;">NEB</td>
			<td style="width:119px;">B7204S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">pcDNA&#8482;6/TR&#160; Mammalian Expression Vector</td>
			<td style="width:153px;">ThermoScientific Fisher</td>
			<td style="width:119px;">V102520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Fetal Bovine Serum, qualified, E.U.-approved, South America origin</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10270106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HEPES Buffer Solution (1 M)</td>
			<td style="width:153px;">Biological Industries</td>
			<td style="width:119px;">03-025-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Penicillin-Streptomycin Solution</td>
			<td style="width:153px;">Biological Industries</td>
			<td style="width:119px;">03-031-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">L-Alanyl-L-Glutamine (Stable Glutamine) (200 mM)</td>
			<td style="width:153px;">Biological Industries</td>
			<td style="width:119px;">03-022-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Heracell&#8482; 150i CO2 Incubator</td>
			<td style="width:153px;">ThermoScientific Fisher</td>
			<td align="right" style="width:119px;">51026406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">MSC-Advantage&#8482; Class II Biological Safety Cabinet</td>
			<td style="width:153px;">ThermoScientific Fisher</td>
			<td align="right" style="width:119px;">51025411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Blasticidine S hydrochloride</td>
			<td style="width:153px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">15205-25MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Dulbecco&#8217;s Phosphate Buffered Saline Modified, without calcium chloride and magnesium chloride</td>
			<td style="width:153px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D8537-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Trypsin-EDTA (0.05%), phenol red</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td align="right" style="width:119px;">25300054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">DOUBLE NEUBAUER RULED METALLIZED HEMACYTOMETER</td>
			<td style="width:153px;">Hausser Scientific</td>
			<td align="right" style="width:119px;">31000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Opti-MEM I Reduced Serum Medium</td>
			<td style="width:153px;">Gibco</td>
			<td align="right" style="width:119px;">31985070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">TransIT&#174;-LT1 Transfection Reagent</td>
			<td style="width:153px;">Mirus</td>
			<td style="width:119px;">MIR 2300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">glass coverslips, #1 thickness, 12mm diameter round</td>
			<td style="width:153px;">Knittel Glass</td>
			<td style="width:119px;">GG-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">BioCoat&#8482; Poly-D-Lysine</td>
			<td style="width:153px;">Corning</td>
			<td align="right" style="width:119px;">354210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Water, Cell Culture Grade</td>
			<td style="width:153px;">Biological Industries</td>
			<td style="width:119px;">03-055-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Doxycycline hyclate</td>
			<td style="width:153px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D9891-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fura-2, AM ester</td>
			<td style="width:153px;">Biotium</td>
			<td style="width:119px;">BTM-50034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pluronic&#174; F-127</td>
			<td style="width:153px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P2443-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">&#181;-Slide 8 Well</td>
			<td style="width:153px;">ibidi</td>
			<td align="right" style="width:119px;">80826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">(E)-Capsaicin</td>
			<td style="width:153px;">Tocris</td>
			<td align="right" style="width:119px;">462</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Olympus IX70 Fluorescence Microscope</td>
			<td style="width:153px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;">n.a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Lambda DG-4 Wavelength Switcher</td>
			<td style="width:153px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:119px;">n.a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">EXi Blue Fluorescence Microscopy Camera</td>
			<td style="width:153px;">QImaging</td>
			<td style="width:119px;">n.a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">MetaFluor Fluorescence Ratio Imaging Software</td>
			<td style="width:153px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:119px;">n.a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Thin Walled Borosilicate Tubing</td>
			<td style="width:153px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:119px;">B150-110-7.5HP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Standard Walled Borosilicate Tubing</td>
			<td style="width:153px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:119px;">B150-86-7.5HP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dimethyl sulfoxide anhydrous</td>
			<td style="width:153px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right" style="width:119px;">276855</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">P1000 micropipette puller</td>
			<td style="width:153px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:119px;">P-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">MF-900 Microforge</td>
			<td style="width:153px;">NARISHIGE</td>
			<td style="width:119px;">n.a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">ValveBank perfusion sysytem</td>
			<td style="width:153px;">AutoMate Scientific</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Digidata&#174; 1440A Low-noise Data Acquisition System</td>
			<td style="width:153px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:119px;">n.a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Axopatch 200B Amplifier</td>
			<td style="width:153px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:119px;">n.a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">pCLAMP 10.6 Software</td>
			<td style="width:153px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:119px;">n.a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">micromanipulator</td>
			<td style="width:153px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:119px;">MP-225</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

controllable ion channel expression through inducible transient transfection

Trasfezione, la consegna di acidi nucleici estranei in una cella, è un potente strumento di ricerca proteine. Attraverso questo metodo, i canali ionici possono essere studiati attraverso l&#39;analisi elettrofisiologiche, caratterizzazione biochimica, gli studi mutazionali, e loro effetti sui processi cellulari. trasfezioni transienti offrono un semplice protocollo in cui la proteina diventa disponibile per l&#39;analisi entro poche ore o giorni. Anche se questo metodo presenta un protocollo efficiente relativamente semplice e tempo, uno dei componenti critici sta calibrando l&#39;espressione del gene di interesse a livelli fisiologicamente importanti o livelli che sono adatti per l&#39;analisi. A tal fine, molti approcci diversi che offrono la possibilità di controllare l&#39;espressione del gene di interesse sono emersi. Diversi protocolli di trasfezione delle cellule stabili forniscono un modo per introdurre in modo permanente un gene di interesse nel genoma cellulare, ai sensi del regolamento di un transcrip tetraciclina controllatoattivazione zionale. Mentre questa tecnica produce livelli di espressione affidabili, ogni gene di interesse richiede alcune settimane di lavoro qualificato, fra cui tarature di una curva di uccisione, la selezione di colonie di cellule, e in generale più risorse. Qui vi presentiamo un protocollo che utilizza trasfezione transiente del potenziale canale cationico membro sottofamiglia V 1 gene Transient Receptor (TRPV1) in un sistema inducibile come un modo efficace per esprimere una proteina in un modo controllato, che è essenziale per l&#39;analisi dei canali ionici. Abbiamo dimostrato che l&#39;utilizzo di questa tecnica, siamo in grado di effettuare l&#39;imaging di calcio, cellula intera, e l&#39;analisi monocanale con livelli dei canali controllati richiesti per ogni tipo di raccolta dati con un unico trasfezione. Nel complesso, questo fornisce una tecnica replicabile che può essere utilizzato per studiare struttura e funzione canali ionici.

Per creare rapidamente un modello di espressione inducibile, abbiamo fatto uso di cellule HEK293 che esprimono tetraciclina repressore della proteina (TR) (ad esempio, T-Rex-293) e vettori che contengono sequenze di operatore tetraciclina (Teto) tra il promotore CMV e il sito di clonazione multiplo (ad esempio, pcDNA4 / TO). Quando trasfettata in TREX-293 cellule, l&#39;espressione del gene di interesse in pcDNA4 / TO è repressa, come TR lega al teto. Aggiunta di doxic...

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Controllable Ion Channel Expression through Inducible Transient Transfection

Studiare canali ionici, attraverso un sistema di espressione eterologhi è diventata una tecnica di base nella ricerca biomedica. In questo manoscritto, presentiamo un metodo efficiente tempo per realizzare canali ionici strettamente controllato eseguendo trasfezione transiente sotto il controllo di un promotore inducibile.

Controllabile Espressione Ion Canale attraverso inducibile trasfezione transiente

Transfection, the delivery of foreign nucleic acids into a cell, is a powerful tool in protein research. Through this method, ion channels can be ...

Research

JoVE Journal

Genetics

siRNA Transfection and EMSA Analyses on Freshly Isolated Human Villous Cytotrophoblasts

siRNA Transfection e l&#39;EMSA Analisi su appena isolate umani dei villi citotrofoblasti

Human primary villous cytotrophoblasts are a very useful source of primary cells to study placental functions and regulatory mechanisms, and to comprehend ...

Ricerca

Genetica

The Terroir Concept Interpreted through Grape Berry Metabolomics and Transcriptomics

Il concetto Terroir interpretato attraverso uva a bacca Metabolomica e Trascrittomica

Terroir refers to the combination of environmental factors that affect the characteristics of crops such as grapevine (Vitis vinifera) according to ...

Inducible T7 RNA Polymerase-mediated Multigene Expression System, pMGX

Inducibile T7 RNA Polymerase-mediato sistema di espressione multigene, pMGX

Co-expression of multiple proteins is increasingly essential for synthetic biology, studying protein-protein complexes, and characterizing and harnessing ...

Studying Cell Cycle-regulated Gene Expression by Two Complementary Cell Synchronization Protocols

Studiare l&#39;espressione del gene regolamentata mediante ciclo cellulare da due protocolli complementari di sincronizzazione delle cellule

The gene expression program of the cell cycle represents a critical step for understanding cell cycle-dependent processes and their role in diseases such ...

Microinjection of CRISPR/Cas9 Protein into Channel Catfish, Ictalurus punctatus, Embryos for Gene Editing

Microinjection of CRISPR/Cas9 Protein into Channel Catfish, Ictalurus punctatus, Embryos for Gene Editing

Microinjection di proteine CRISPR/Cas9 in Channel Catfish, Ictalurus punctatus, embrioni per Gene Editing

The complete genome of the channel catfish, Ictalurus punctatus, has been sequenced, leading to greater opportunities for studying channel catfish gene ...

Constitutive and Inducible Systems for Genetic In Vivo Modification of Mouse Hepatocytes Using Hydrodynamic Tail Vein Injection

Constitutive and Inducible Systems for Genetic In Vivo Modification of Mouse Hepatocytes Using Hydrodynamic Tail Vein Injection

Sistemi costitutive e inducibile per la modificazione genetica In Vivo degli epatociti Mouse usando l'iniezione della vena della coda idrodinamica

In research models of liver cancer, regeneration, inflammation, and fibrosis, flexible systems for in vivo gene expression and silencing are highly ...

Transient Expression of Foreign Genes in Insect Cells (sf9) for Protein Functional Assay

Transient Expression of Foreign Genes in Insect Cells sf9 for Protein Functional Assay

Espressione transiente di geni estranei in cellule di insetto (sf9) per analisi funzionale della proteina

The transient gene expression system is one of the most important technologies for performing protein functional analysis in the baculovirus in vitro cell ...

Exploring the Root Microbiome: Extracting Bacterial Community Data from the Soil, Rhizosphere, and Root Endosphere

Esplorare il microbioma radice: estrazione dei dati di comunità batteriche dal suolo e la rizosfera radice Endosphere

The intimate interaction between plant host and associated microorganisms is crucial in determining plant fitness, and can foster improved tolerance to ...

Tissue-specific miRNA Expression Profiling in Mouse Heart Sections Using In Situ Hybridization

Tissue-specific miRNA Expression Profiling in Mouse Heart Sections Using In Situ Hybridization

Tessuto-specifici miRNA Expression Profiling in Mouse cuore sezioni mediante ibridazione In Situ

micro-RNAs (miRNAs) are single-stranded RNA transcripts that bind to messenger RNAs (mRNAs) and inhibit their translation or promote their degradation. To ...

Inducible and Reversible Dominant-negative (DN) Protein Inhibition

Inducible and Reversible Dominant-negative DN Protein Inhibition

Inibizione della proteina viscoelastica e reversibile dominante-negativo (DN)

Dominant-negative (DN) protein inhibition is a powerful method to manipulate protein function and offers several advantages over other genome-based ...