Name: bronchoalveolar lavage of murine lungs to analyze inflammatory cell infiltration
Uploaded: 2017-05-04T12:30:00
Duration: 7 min 3 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bronchoalveolar Lavage of Murine Lungs to Analyze Inflammatory Cell Infiltration at JoVE.com

LVH является научным сотрудником на кафедре биомедицинской молекулярной биологии университета Гента. ERJ поддерживается UniVacFlu, номер гранта 607690. KR поддерживается проектом EC-FP7 FLUNIVAC.

<ol>
	<li>Stankunas, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+protein+alleles+using+knockin+mice+and+a+chemical+inducer+of+dimerization.">Conditional protein alleles using knockin mice and a chemical inducer of dimerization.</a> Mol Cell. 12 (6), 1615-1624 (2003).</li><li>Hunninghake, G. W., Gadek, J. E., Kawanami, O., Ferrans, V. J., Crystal, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+and+immune+processes+in+the+human+lung+in+health+and+disease:+evaluation+by+bronchoalveolar+lavage.">Inflammatory and immune processes in the human lung in health and disease: evaluation by bronchoalveolar lavage.</a> Am J Pathol. 97 (1), 149-206 (1979).</li><li>Gee, J. B., Fick, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchoalveolar+lavage.">Bronchoalveolar lavage.</a> Thorax. 35 (1), 1-8 (1980).</li><li>Tornling, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyaluronic+acid+in+bronchoalveolar+lavage+in+rats+exposed+to+quartz.">Hyaluronic acid in bronchoalveolar lavage in rats exposed to quartz.</a> Br J Ind Med. 44 (7), 443-445 (1987).</li><li>Henderson, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+bronchoalveolar+lavage+to+detect+respiratory+tract+toxicity+of+inhaled+material.">Use of bronchoalveolar lavage to detect respiratory tract toxicity of inhaled material.</a> Exp Toxicol Pathol. 57, 155-159 (2005).</li><li>Morris, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+analysis+of+the+lung+microbiota+of+cynomolgous+macaques+during+long-term+SHIV+infection.">Longitudinal analysis of the lung microbiota of cynomolgous macaques during long-term SHIV infection.</a> Microbiome. 4 (1), 38 (2016).</li><li>Naessens, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GM-CSF+treatment+prevents+respiratory+syncytial+virus-induced+pulmonary+exacerbation+responses+in+postallergic+mice+by+stimulating+alveolar+macrophage+maturation.">GM-CSF treatment prevents respiratory syncytial virus-induced pulmonary exacerbation responses in postallergic mice by stimulating alveolar macrophage maturation.</a> J Allergy Clin Immunol. 137 (3), 700-709 (2016).</li><li>Chockalingam, A., Duraiswamy, R., Jagadeesan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchoalveolar+lavage+cellular+analyses+in+conjunction+with+high-resolution+computed+tomography+imaging+as+a+diagnostic+intervention+for+patients+with+suspected+interstitial+lung+disease.">Bronchoalveolar lavage cellular analyses in conjunction with high-resolution computed tomography imaging as a diagnostic intervention for patients with suspected interstitial lung disease.</a> Lung India. 33 (3), 287-291 (2016).</li><li>Crystal, R. G., Reynolds, H. Y., Kalica, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchoalveolar+lavage.+The+report+of+an+international+conference.">Bronchoalveolar lavage. The report of an international conference.</a> Chest. 90 (1), 122-131 (1986).</li><li>Baughman, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+uncertainties+of+bronchoalveolar+lavage.">The uncertainties of bronchoalveolar lavage.</a> Eur Respir J. 10 (9), 1940-1942 (1997).</li><li>Singletary, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modification+of+a+common+BAL+technique+to+enhance+sample+diagnostic+value.">Modification of a common BAL technique to enhance sample diagnostic value.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 47 (5), 47-51 (2008).</li><li>Angus, D. W., Baker, J. A., Mason, R., Martin, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+potential+influence+of+CO2,+as+an+agent+for+euthanasia,+on+the+pharmacokinetics+of+basic+compounds+in+rodents.">The potential influence of CO2, as an agent for euthanasia, on the pharmacokinetics of basic compounds in rodents.</a> Drug Metab Dispos. 36 (2), 375-379 (2008).</li><li>Menon, V., Thomas, R., Ghale, A. R., Reinhard, C., Pruszak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry+protocols+for+surface+and+intracellular+antigen+analyses+of+neural+cell+types.">Flow cytometry protocols for surface and intracellular antigen analyses of neural cell types.</a> J Vis Exp. (94), (2014).</li><li>Inglis, H., Norris, P., Danesh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+the+analysis+of+extracellular+vesicles+using+flow+cytometry.">Techniques for the analysis of extracellular vesicles using flow cytometry.</a> J Vis Exp. (97), (2015).</li><li>Rubio-Navarro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+Characterization+of+Macrophages+from+Rat+Kidney+by+Flow+Cytometry.">Phenotypic Characterization of Macrophages from Rat Kidney by Flow Cytometry.</a> J Vis Exp. (116), (2016).</li><li>Butcher, M. J., Herre, M., Ley, K., Galkina, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry+analysis+of+immune+cells+within+murine+aortas.">Flow cytometry analysis of immune cells within murine aortas.</a> J Vis Exp. (53), (2011).</li><li>Noto, A., Ngauv, P., Trautmann, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-based+flow+cytometry+assay+to+measure+cytotoxic+activity.">Cell-based flow cytometry assay to measure cytotoxic activity.</a> J Vis Exp. (82), e51105 (2013).</li><li>Adan, A., Alizada, G., Kiraz, Y., Baran, Y., Nalbant, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry:+basic+principles+and+applications.">Flow cytometry: basic principles and applications.</a> Crit Rev Biotechnol. , 1-14 (2016).</li><li>Database, J. S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ELISA+method.">The ELISA method.</a> J Vis Exp. , (2016).</li><li>Gallagher, S., Chakavarti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoblot+analysis.">Immunoblot analysis.</a> J Vis Exp. (16), (2008).</li><li>Wunderlich, M. L., Dodge, M. E., Dhawan, R. K., Shek, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+fluorometric+immunoassay+testing+methodology+and+troubleshooting.">Multiplexed fluorometric immunoassay testing methodology and troubleshooting.</a> J Vis Exp. (58), (2011).</li><li>Song, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+bronchoalveolar+lavage+method+based+on+suction+frequency+number+and+lavage+fraction+number+using+rats.">Standardization of bronchoalveolar lavage method based on suction frequency number and lavage fraction number using rats.</a> Toxicol Res. 26 (3), 203-208 (2010).</li><li>Seliger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+high-precision+flow+cytometry+based+technique+for+total+white+blood+cell+counting+in+chickens.">A rapid high-precision flow cytometry based technique for total white blood cell counting in chickens.</a> Vet Immunol Immunopathol. 145 (1-2), 86-99 (2012).</li><li>Daniele, R. P., Elias, J. A., Epstein, P. E., Rossman, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchoalveolar+lavage:+role+in+the+pathogenesis,+diagnosis,+and+management+of+interstitial+lung+disease.">Bronchoalveolar lavage: role in the pathogenesis, diagnosis, and management of interstitial lung disease.</a> Ann Intern Med. 102 (1), 93-108 (1985).</li><li>Delayre-Orthez, C., Becker, J., de Blay, F., Frossard, N., Pons, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposure+to+endotoxins+during+sensitization+prevents+further+endotoxin-induced+exacerbation+of+airway+inflammation+in+a+mouse+model+of+allergic+asthma.">Exposure to endotoxins during sensitization prevents further endotoxin-induced exacerbation of airway inflammation in a mouse model of allergic asthma.</a> Int Arch Allergy Immunol. 138 (4), 298-304 (2005).</li><li>Delayre-Orthez, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PPARalpha+downregulates+airway+inflammation+induced+by+lipopolysaccharide+in+the+mouse.">PPARalpha downregulates airway inflammation induced by lipopolysaccharide in the mouse.</a> Respir Res. 6, 91 (2005).</li><li>Delayre-Orthez, C., de Blay, F., Frossard, N., Pons, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-dependent+effects+of+endotoxins+on+allergen+sensitization+and+challenge+in+the+mouse.">Dose-dependent effects of endotoxins on allergen sensitization and challenge in the mouse.</a> Clin Exp Allergy. 34 (11), 1789-1795 (2004).</li><li>Hachet-Haas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+neutralizing+molecules+to+inhibit+actions+of+the+chemokine+CXCL12.">Small neutralizing molecules to inhibit actions of the chemokine CXCL12.</a> J Biol Chem. 283 (34), 23189-23199 (2008).</li><li>Ble, F. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+the+lung+S1P(1)+receptor+reduces+allergen-induced+plasma+leakage+in+mice.">Activation of the lung S1P(1) receptor reduces allergen-induced plasma leakage in mice.</a> Br J Pharmacol. 158 (5), 1295-1301 (2009).</li><li>Ble, F. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allergen-induced+lung+inflammation+in+actively+sensitized+mice+assessed+with+MR+imaging.">Allergen-induced lung inflammation in actively sensitized mice assessed with MR imaging.</a> Radiology. 248 (3), 834-843 (2008).</li><li>Reber, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dissociated+glucocorticoid+receptor+modulator+reduces+airway+hyperresponsiveness+and+inflammation+in+a+mouse+model+of+asthma.">A dissociated glucocorticoid receptor modulator reduces airway hyperresponsiveness and inflammation in a mouse model of asthma.</a> J Immunol. 188 (7), 3478-3487 (2012).</li><li>Drent, M., Cobben, N. A., Henderson, R. F., Wouters, E. F., van Dieijen-Visser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Usefulness+of+lactate+dehydrogenase+and+its+isoenzymes+as+indicators+of+lung+damage+or+inflammation.">Usefulness of lactate dehydrogenase and its isoenzymes as indicators of lung damage or inflammation.</a> Eur Respir J. 9 (8), 1736-1742 (1996).</li><li>Henderson, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+bronchoalveolar+lavage+to+detect+lung+damage.">Use of bronchoalveolar lavage to detect lung damage.</a> Environ Health Perspect. 56, 115-129 (1984).</li><li>Forget, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+adherent+cell+perifusion+technique+to+study+the+overall+and+sequential+response+of+rat+alveolar+macrophages+to+toxic+substances.">An adherent cell perifusion technique to study the overall and sequential response of rat alveolar macrophages to toxic substances.</a> Environ Health Perspect. 51, 131-140 (1983).</li><li>Sung, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+from+welding-fume-exposure-induced+lung+fibrosis+and+pulmonary+function+changes+in+sprague+dawley+rats.">Recovery from welding-fume-exposure-induced lung fibrosis and pulmonary function changes in sprague dawley rats.</a> Toxicol Sci. 82 (2), 608-613 (2004).</li><li>Majetschak, M., Sorell, L. T., Patricelli, T., Seitz, D. H., Knoferl, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+and+possible+role+of+proteasomes+in+the+bronchoalveolar+space+of+the+injured+lung.">Detection and possible role of proteasomes in the bronchoalveolar space of the injured lung.</a> Physiol Res. 58 (3), 363-372 (2009).</li><li>Rehn, B., Bruch, J., Zou, T., Hobusch, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+of+rat+alveolar+macrophages+by+bronchoalveolar+lavage+under+normal+and+activated+conditions.">Recovery of rat alveolar macrophages by bronchoalveolar lavage under normal and activated conditions.</a> Environ Health Perspect. 97, 11-16 (1992).</li><li>Kelly, C. A., Ward, C., Stenton, S. C., Hendrick, D. J., Walters, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+pulmonary+macrophage+and+neutrophil+function+in+sequential+bronchoalveolar+lavage+aspirates+in+sarcoidosis.">Assessment of pulmonary macrophage and neutrophil function in sequential bronchoalveolar lavage aspirates in sarcoidosis.</a> Thorax. 43 (10), 787-791 (1988).</li><li>Eklund, A., Tornling, G., Blaschke, E., Curstedt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix+components+in+bronchoalveolar+lavage+fluid+in+quartz+exposed+rats.">Extracellular matrix components in bronchoalveolar lavage fluid in quartz exposed rats.</a> Br J Ind Med. 48 (11), 776-782 (1991).</li><li>Olsen, G. N., Harris, J. O., Castle, J. R., Waldman, R. H., Karmgard, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-1-antitrypsin+content+in+the+serum,+alveolar+macrophages,+and+alveolar+lavage+fluid+of+smoking+and+nonsmoking+normal+subjects.">Alpha-1-antitrypsin content in the serum, alveolar macrophages, and alveolar lavage fluid of smoking and nonsmoking normal subjects.</a> J Clin Invest. 55 (2), 427-430 (1975).</li></ol>

Авторам нечего раскрывать.

БАЛ является полезным методом получения цитологической и биохимической информации в ответ на инфекции или наркотики. Первоначально БАЛ использовался для управления чрезмерным выделением слизи у пациентов, страдающих токсичностью фосгена 3 . В настоящее время этот метод используется у людей для исследования патогенеза, диагностики и лечения заболеваний легких 3 , 24 . В лабораторных животных БАЛ обычно используется для мониторинга воспалительных реакций, иммунных механизмов и инфекционных процессов, которые происходят в легочных дыхательных путях 1 , 2 . Для изучения воспалительного клеточного узора в моделях респираторных заболеваний БАЛ должен сопровождаться абсолютным и дифференциальным подсчетом клеток. В дополнение к абсолютному номеру ячейки также интересны относительные номера ячеек. Например, модели ремонта и рака показывают vКоличество клеток в клетках BAL увеличивается незначительно. В этой модели полезно оценить клеточный состав. Используя окраску клеток в сочетании с световой микроскопией, на основе морфологии 25 , 26 , 27 , 28 , 29 , 30 можно идентифицировать различные типы клеток, такие как эозинофилы, нейтрофилы, макрофаги и лимфоциты. Проточная цитометрия может использоваться для конкретных оценок, например для идентификации различных фенотипов Т-клеток 7 , 31 . В дополнение к идентификации различных популяций инфильтрирующих клеток, неклеточный состав легких можно исследовать с использованием БАЛ. Методы, такие как ELISA, иммуноблот, массив бусинок цитокинов, иммуногистохимия и количественная полимеразная цепная реакция выполняются на БАЛ-жидкости для определения цитокинов, ростаФакторов и других воспалительных компонентов. Для определения повреждения легких можно также измерить уровни общего белка и лактатдегидрогеназы в жидкости БАЛ 32 , 33 . С развитием новых диагностических инструментов геномная и протеомная характеристика компонентов БАЛ станет возможной в ближайшем будущем. Сочетание расширяющихся вычислительных возможностей и высокопроизводительных технологий экспрессии генов позволит определить профили экспрессии определенных генов для различных болезненных состояний. Выполнение этих методик на БАЛ может обеспечить образцы экспрессии генов и белков, чтобы идентифицировать важные молекулы, вовлеченные в различные фазы легочных заболеваний. Основным ограничением данных, полученных из жидкости БАЛ, является отсутствие сопоставимости между различными исследованиями 3 , 9 . Существует высокая степеньИзменчивость в технике лаважа и последующая обработка БАЛА. Чтобы иметь возможность сравнивать каждую пробу BAL, необходимо, чтобы стандартизировать тип промывной жидкости, который привил, сайт инстилляции, и фракцию, которая должна быть проанализирована для клеточного и не клеточного состава. Существует значительные различия в количестве лаважа фракций между различными испытаниями, колеблется от одного до 14 раз 34, 35, 36. Эта разница может оказать влияние на ожидаемую величину общего числа клеток в легких. Важно знать, какая BAL фракция жидкости содержит большинство клеток. Песни и др. показал , что примерно 70% от общего числа клеток были получены во фракции одного до трех 22. Тем не менее, другие сообщения о том , что второе промывание содержал больше клеток , чем первый 37, 38 </sup&gt;. Мы можем сделать вывод из этих исследований, что промывание только одна фракции не представляет все легких, что приводит к неправильной интерпретации результатов. Неклеточный состав жидкости BAL содержит ценную информацию о состоянии здоровья легких 33, 39, 40. Изменения в разведении БАЛА способствует разнице в квантификации растворимой фракции и, следовательно, к различиям в результатах между испытаниями. Песни и др. по сравнению с белками и лактата дегидрогеназы уровни каждой промывной фракции и пришли к выводу, что первая промывание фракция содержала два-три раза больше, чем во второй фракции. Для того, чтобы получить репрезентативную выборку BAL для анализа, некоторые технические соображения имеют решающее значение. Один из них заключается в проведении надлежащего обезболивания. Это очень важно, чтобы проверить футовый рефЛекс мыши для обеспечения терминала седации. Это важно не только по этическим соображениям, но и потому, что трудно установить и сохранить катетер в правильном положении, если мышь не правильно наркозом. Второй важный фактор является техническим положением катетера в трахее. Когда катетер вставлен слишком глубоко, это может привести к повреждению структуры легких. Дистальный конец катетера не должен достигать легких во время процедуры BAL. Катетер также должен быть стабилизирован и обвязывается с хлопчатобумажной нитью. Если катетер не стабилизируется, вводят физиологический раствор может течь вверх в полость носа, а не в легких. Во время инъекции и аспирации солевого раствора, важно, чтобы держать катетер устойчивым. Данные, полученные из БАЛА должен представлять все мышиные легких. Поэтому важно , чтобы привить адекватный объем солевого буфера (т.е.3 мл, разделяли на 3 аликвоты по 1 мл каждый). Между выходом клеток и выходом жидкости BAL нет линейной зависимости. Важно аккуратно собирать раствор, массируя грудную клетку мыши. Если сдвигающие силы слишком сильны, жизнеспособность, функция и структура клеток в дыхательных путях и жидкости БАЛ могут быть скомпрометированы. Если аспирированная жидкость не видна в шприце, осторожно перемещайте катетер глубже или выше в трахее. Особое внимание следует уделить конкретным аспектам обработки и анализа БАЛ. Это позволит максимизировать информацию, сохраненную в образцах BAL. После БАЛ клетки находятся в среде с низким содержанием питательных веществ в солевом растворе. Поэтому очень важно обрабатывать образцы в течение 1 часа после отбора проб БАЛ. Если требуется длительное хранение, требуется использование питательной среды. Чтобы сохранить жизнеспособность клеток, избегайте труб, которые способствуют прилипанию клеток к поверхности. Избегать centrifugation клеточных суспензий на скоростях, которые могут поставить под угрозу целостности клеток или для предотвращения взмучивания равномерного считываемых клеток БАЛА. BAL жидкости, содержащей клетки должны быть центрифугировали при 400 х г и 4 ° С в течение 7 мин. Важно иметь в виду, что клеточные суспензии следует проводить при температуре 4 ° С во время обработки.

Воздушные пути встречаются многочисленные оскорбления, которые могут привести к воспалению, инвазии патогенов или злокачественные трансформации. Эпителиальные клетки, которые выстилают просвет легких, образуют один из главных барьеров тела млекопитающих. Вместе с альвеолярными макрофагами они предотвращают проникновение экологических угроз в системную систему через дыхательные пути. Примеры таких угроз включают органические и неорганические химикаты, бактерии и вирусы. Аналогичным образом, могут быть разработаны специальные иммунизации или терапевтические вмешательства, направленные на легкие. Во всех этих случаях тщательный анализ вызванного ответа важен для понимания, вмешательства или предотвращения биологических процессов, происходящих в дыхательной системе. Бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ) является бесценным методом для анализа таких ответов, поскольку полученные в результате образцы содержат важную информацию о воспалительных реакциях, иммунных механизмах и прогрессировании инфекционных заболеванийЧто может произойти в легочных дыхательных путях 1 , 2 . Используя БАЛ, можно изучать инфильтрирующие клетки. Это контрастирует с переваренными легкими, которые дают «грязнее» клеточную популяцию, со многими мертвыми и липкими клетками. БАЛ выполняют путем введения солевого раствора в конечные бронхиолы и последующего восстановления этого раствора. Полученное решение можно затем использовать для количественной оценки и фенотипического анализа резидентных легких и инфильтрирующих воспалительных клеток. Этот метод часто применяется для изучения клеточного притока в моделях заболеваний дыхательных путей, таких как астма, хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) и модели инфекционных заболеваний. Помимо клеточного состава, молекулярный состав легочных дыхательных путей также отражается в жидкости БАЛ. Для анализа этого фермент-связанный иммуносорбентный анализ (ELISA), иммуноблот и одновременный анализ нескольких цитокинов с помощью массива цитокинов могут бытьпроводится для оценки наличия цитокинов и хемокинов. БАЛ является хорошо признанным методом для изучения притока воспалительных клеток в воспалительных моделях животных респираторных болезней. Наблюдение измененного клеточного притока (например, повышенные уровни лимфоцитов, эозинофилы, нейтрофилов или) может привести к более глубокому пониманию болезни и может быть объективным параметр для оценки эффективности терапевтического вмешательства. Точная и воспроизводимая интерпретация BAL клеточного анализа требует, чтобы БАЛ выполнена правильно, и что собранные жидкости и обрабатываются должным образом. Термин «бронхиальная промывание» была введена более восьмидесяти лет назад Ститтой 3. В 1961 году Myrvik получены альвеолярных макрофагов из промывной жидкости кролика легких 3. BAL теперь широко используемый метод для анализа и мониторинга легких в модели мыши, однакоRe по-прежнему не представляет собой стандартную процедуру БАЛ в научной литературе 4 , 5 . Кроме того, существует, вероятно, так много способов выполнить БАЛ, поскольку существуют исследовательские лаборатории, использующие технику 3 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 . Важно, что данные, полученные из БАЛ, представляют собой целое мышечное легкое, а не только часть легкого. Такая вариативность затрудняет интерпретацию и сравнение результатов между различными испытаниями. Здесь описана базовая, недорогая и воспроизводимая процедура BAL, которая позволяет собирать клеточную и растворимую фракцию, присутствующую в просвете дыхательных путей мыши. Короче говоря, катетер помещают в открытую трахею oFa - терминально обезболиваемая мышь. С катетером соединен шприц, и в легкие вводится буферный солевой раствор, содержащий этилендиаминтетрауксусную кислоту (ЭДТА). Пробу легкого отбирают путем мягкой повторной промывки солевого раствора с помощью плунжера. Отрицательное давление, прилагаемое на этом этапе, минимально, чтобы предотвратить обрушение дыхательных путей. После сбора полученная БАЛ должна быть обработана далее для перечисления и идентификации клеток методом проточной цитометрии.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>balanced salt solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14175-129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethyleendiaminetetra acetic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E6511</td>
			<td>irritating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23G x 1 1/4 needle</td>
			<td>Henke Sass Wolf</td>
			<td>4710006030</td>
			<td>size: 0,60 x 30 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26G x 1/2 neelde</td>
			<td>Henke Sass Wolf</td>
			<td>4710004512</td>
			<td>size: 0,45*12 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic tubing</td>
			<td>BD medical technology</td>
			<td>427411</td>
			<td>Polyethylene Tubing, I.D 0.58 mm (.023&#34;) O.D. .965 mm (0.38&#34;) 30.5m (100&#39;)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium pentobarbital</td>
			<td>Kela NV</td>
			<td>514</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phosphate buffered saline</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE17-516F</td>
			<td>PBS without Ca++ Mg++ or phenol red; sterile filtered</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml syringes</td>
			<td>Henke Sass Wolf</td>
			<td>5010.200V0</td>
			<td>non pyrogenic and non toxic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH&#160;</td>
			<td>91197-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH&#160;</td>
			<td>91460-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifuge tube 50 ml</td>
			<td>TH.Geyer</td>
			<td>7696705</td>
			<td>Free from Rnase/Dnase/endotoxin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifuge tube 15 ml</td>
			<td>TH.Geyer</td>
			<td>7696702</td>
			<td>Free from Rnase/Dnase/endotoxin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microcentrifuge tube 1,5 ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>0030 120.094</td>
			<td>polypropylene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>5415R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>75004030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ammonium-chloride-potassium (ACK) lysing buffer</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>10-548E</td>
			<td>sterile filtered</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>live/dead -efluor506</td>
			<td>ebioscience</td>
			<td>65-0866-18 &#160;</td>
			<td>fixable viability dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11c-PE-cy7</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>25-0114-81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SiglecF-PE</td>
			<td>BD Pharmingen&#160;</td>
			<td>552126&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MHCII-APCefluor780</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>107628&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3-PE-cy5</td>
			<td>VWR</td>
			<td>55-0031-U100&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD19-PE-cy5</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>15-0193-83&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11b-V450</td>
			<td>BD Pharmingen&#160;</td>
			<td>560455&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ly6G-AF700</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>127621</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absolute Counting Beads</td>
			<td>Life Technologies Europe B.V.&#160;</td>
			<td>C36950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-CD16/CD32</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>553142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well 340 &#181;l storage plate plate</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353263</td>
			<td>V-bottom, natural polypropylene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>flow cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>catheter</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>393202</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bronchoalveolar lavage of murine lungs to analyze inflammatory cell infiltration

Bronchoalveolar Lavage (BAL) - экспериментальная процедура, которая используется для исследования клеточного и бесклеточного содержимого просвета легких ex vivo, чтобы получить представление о текущем состоянии болезни. Здесь описывается простой и эффективный метод выполнения БАЛ на легких мыши без использования специальных инструментов или оборудования. Жидкость БАЛ выделяют путем введения катетера в трахею мышей с терминальной анестезией, через которые в бронхиолы вводят солевой раствор. Приложенная жидкость мягко убирается, чтобы максимизировать извлечение флюида BAL и минимизировать усилия сдвига. Этот метод позволяет сохранить жизнеспособность, функцию и структуру клеток в дыхательных путях и БАЛ. Для получения более глубокого понимания состояния болезни легких могут применяться многочисленные методики. В этом случае широко используемым методом идентификации и подсчета различных типов иммунных клеток являетсяГде проточная цитометрия комбинируется с панелью выбора флуоресцентно меченных клеточных поверхностно-специфических маркеров. Представленная здесь процедура BAL также может быть использована для анализа инфекционных агентов, жидких компонентов или ингаляционных частиц в легких мыши.

После проведения БАЛ с 3х1 мл буферного солевого раствора необходимо восстановить объем между 2 и 3 мл. Эта жидкость БАЛ может быть дополнительно проанализирована для характеристики клеточного и неклеточного содержимого. Для исследования присутствия цитокинов и хемокинов могут быть выполнены ELISA 19 , иммуноблот 20 и одновременный анализ множественных цитокинов матрицей 21 цитокиновых гранул. Кроме того, альбумин и общее содержание белка в этой жидкости могут быть определены 22 . В качестве примера, эта рукопись описывает, как анализировать клеточный состав жидкости БАЛ методом проточной цитометрии. Анализируемую жидкость БАЛ собирали у самок мышей Balb / cAnNCrl (возраст: 7 недель) через 24 ч после интратрахеальной инфильтрации липополисахаридом. Следующие антитела, связанные с флуорофором, wКоторые используются для идентификации различных типов клеток: CD11c, SiglecF, MHCII, CD3ε, CD19, Ly6g и CD11b (см. Таблицу 1 и таблицу материалов ). Также применялся фиксируемый жизнеспособный краситель. Используя стратегию стробирования, основанную на дифференциальной экспрессии антигенов на поверхностях различных популяций клеток ( рис. 1 ), можно было идентифицировать макрофаги, дендритные клетки, В-клетки, Т-клетки, нейтрофилы и эозинофилы. Во-первых, обломки и дублеты были отфильтрованы по параметрам прямого и бокового рассеяния. Жизнеспособный краситель облегчал стробирование на живых клетках. Затем идентифицировали высокие клетки CD11c и низкие клетки CD11c. В CD11c с высокой популяцией идентифицировали макрофаги и дендритные клетки на основе экспрессии MHCII и SiglecF, соответственно. В CD11c с низкой популяцией Т-клетки и В-клетки были идентифицированы на основе CD3ε и экспрессии CD19, соответственно. ВОстальная клеточная популяция, нейтрофилы и эозинофилы были идентифицированы на основе экспрессии CD11b и Ly-6G маркера, соответственно. Подсчет шариков добавляли для определения абсолютных чисел клеток разных популяций клеток путем сравнения отношения событий шарика к событиям ячейки 23 . Эти счетные бусины были идентифицированы на основе их свойств прямого и бокового рассеивания ( рис. 1 ). В таблице 4 приведен обзор абсолютных чисел клеток разных популяций клеток в жидкости БАЛ наивной мыши и мыши, которую стимулировали в течение 24 ч с помощью 5 мкг липополисахарида. <img alt="Рисунок 1" src="/files/ftp_upload/55398/55398fig1.jpg" /> Рисунок 1: Стратегия стробирования для проточной цитометрической детекции макрофагов, дендритных клеток, Т-клеток, В-клеток, нейтрофилов и эозинофиловN BAL Fluid. Клетки BAL выделяли с использованием описанного BAL-протокола. Клетки выделяли из мышей через 24 ч после интратрахеальной инстилляции липополисахарида. Подсчет шариков и ячеек был определен по свойствам прямого и бокового рассеяния. В клеточном вороте отдельные клетки идентифицировали с использованием прямого и бокового разброса. В этой последней популяции были идентифицированы клетки, которые были живыми. Затем идентифицировали высокие клетки CD11c и CD11c с низкими клетками. В CD11c с высокой популяцией идентифицировали макрофаги и дендритные клетки на основе экспрессии MHCII и SiglecF, соответственно. В CD11c с низкой популяцией Т-клетки и В-клетки были идентифицированы на основе CD3ε и экспрессии CD19, соответственно. В оставшейся популяции клеток нейтрофилы и эозинофилы были идентифицированы на основе экспрессии CD11b и Ly-6G, соответственно. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55398/55398fig1large.jpg" target="_blank">Нажмите здесь, чтобы посмотреть</a>Более крупная версия этого рисунка. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> Клеточная популяция </td><td> Абсолютное число клеток у наивных мышей </td><td> Абсолютное число клеток у LPS-стимулированных мышей </td></tr><tr><td> макрофаги </td><td> 79612 </td><td> 25439 </td></tr><tr><td> Дендритные клетки </td><td> 495 </td><td> 671 </td></tr><tr><td> Т-клетки </td><td> 45271 </td><td> 28089 </td></tr><tr><td> В-клетки </td><td> 4164 </td><td> 2926 </td></tr><tr><td> нейтрофилы </td><td> 632 </td><td> 566716 </td></tr><tr><td> эозинофилы </td><td> 3483 </td><td> 4332 </td></tr></tbody></table> Таблица 4: ПредставлениеРезультаты анализа проточной цитометрии на BAL-жидкости наивных и LPS-стимулированных мышей.

Watch this Scientific Journal Video about Bronchoalveolar Lavage of Murine Lungs to Analyze Inflammatory Cell Infiltration at JoVE.com

Bronchoalveolar Lavage of Murine Lungs to Analyze Inflammatory Cell Infiltration

Состояние здоровья легкого отражается типом и числом иммунных клеток, которые присутствуют в бронхиолах легких. Мы описываем метод бронхоальвеолярного лаважа, который позволяет изолировать и исследовать неадгезивные клетки и растворимые факторы из нижних дыхательных путей мышей.

Бронхоальвеолярное спазмы легких у мышей для анализа воспалительной клеточной инфильтрации

Bronchoalveolar Lavage (BAL) is an experimental procedure that is used to examine the cellular and acellular content of the lung lumen ex vivo to gain ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Non-surgical Intratracheal Instillation of Mice with Analysis of Lungs and Lung Draining Lymph Nodes by Flow Cytometry

Безоперационное эндотрахеальном введении мышей с анализа легких и легочных Слив лимфатических узлов методом проточной цитометрии

Phagocytic cells such as alveolar macrophages and lung dendritic cells (LDCs) continuously sample antigens from the alveolar spaces in the 
lungs. LDCs, ...

Peptide:MHC Tetramer-based Enrichment of Epitope-specific T cells

Пептиды: MHC тетрамеров на основе обогащения эпитопов Т-клеток

A  basic necessity for researchers studying adaptive immunity with in vivo experimental models is an  ability to identify T cells based on their T cell ...

Whole-cell MALDI-TOF Mass Spectrometry is an Accurate and Rapid Method to Analyze Different Modes of Macrophage Activation

Цельноклеточная MALDI-TOF масс-спектрометрии является точным и быстрым методом для анализа различных режимах активации макрофагов

MALDI-TOF is an extensively used mass spectrometry technique in chemistry and biochemistry. It has been also applied in medicine to identify molecules and ...

The Utilization of Oropharyngeal Intratracheal PAMP Administration and Bronchoalveolar Lavage to Evaluate the Host Immune Response in Mice

Использование ротоглотки интратрахеального PAMP администрации и бронхоальвеолярного лаважа для оценки иммунного ответа хозяина у мышей

The host immune response to pathogens is a complex biological process. The majority of in vivo studies classically employed to characterize host-pathogen ...

An Optimized Protocol to Analyze Glycolysis and Mitochondrial Respiration in Lymphocytes

Оптимизированный протокол для анализа гликолиза и митохондриального дыхания в лимфоцитах

Lymphocytes respond to a variety of stimuli by activating intracellular signaling pathways, which in turn leads to rapid cellular proliferation, migration ...

Flow Virometry to Analyze Antigenic Spectra of Virions and Extracellular Vesicles

Поток Virometry для анализа антигенные спектры вирионов и внеклеточной везикул

Cells release small extracellular vesicles (EVs) into the surrounding media. Upon virus infection cells also release virions that have the same size of ...

Induction of an Inflammatory Response in Primary Hepatocyte Cultures from Mice

Стимуляция воспалительной реакции в первичной культурах гепатоцитов мышей

The liver plays a decisive role in the regulation of systemic inflammation. In chronic kidney disease in particular, the liver reacts in response to the ...

Screening Assays to Characterize Novel Endothelial Regulators Involved in the Inflammatory Response

Скрининг Assays характеризовать Роман эндотелиальной регуляторы, участвующих в воспалительной реакции

The endothelial layer is essential for maintaining homeostasis in the body by controlling many different functions. Regulation of the inflammatory ...

Quantification of Monocyte Transmigration and Foam Cell Formation from Individuals with Chronic Inflammatory Conditions

Количественная оценка Моноцит трансмиграции и образование пены клетки от физических лиц с хронические воспалительные заболевания

Coronary artery disease (CAD) is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. Atherosclerosis, a leading cause of CAD, is initiated by the ...

A Novel Feeder-free System for Mass Production of Murine Natural Killer Cells In Vitro

A Novel Feeder-free System for Mass Production of Murine Natural Killer Cells In Vitro

Роман фидер бесплатная система для массового производства мышиных естественных клеток-киллеров в пробирке

Natural killer (NK) cells belong to the innate immune system and are a first-line anti-cancer immune defense; however, they are suppressed in the tumor ...