Name: analyzing dendritic morphology in columns and layers
Uploaded: 2017-03-23T15:00:00
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Diese Arbeit wurde von der Intramural Research Program der National Institutes of Health, die Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health und Human Development (Erteilungs HD008913 bis C-HL) und das Zentrum für Informationstechnologie (PGM, NP, ESM und MM).

Hinweis: Das Protokoll enthält drei Abschnitte: Dual-View - Bildgebung (Abschnitte 1 - 3), dendritische Verfolgung und Registrierung (Abschnitte 4 - 6) und dendritischen Analyse (Abschnitte 7-9) (Bild 1). Die Codes und Beispieldateien sind in Tabelle der Materialien / Ausrüstung zur Verfügung gestellt. 1. Dual Image Acquisition HINWEIS: Dieser Schritt ist so konzipiert, in zwei orthogonalen (horizontal und frontal) Orientierunge...

<ol>
	<li>Kaas, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topographic+maps+are+fundamental+to+sensory+processing.">Topographic maps are fundamental to sensory processing.</a> Brain Res Bull. 44 (2), 107-112 (1997).</li><li>Sanes, J. R., Zipursky, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+principles+of+insect+and+vertebrate+visual+systems.">Design principles of insect and vertebrate visual systems.</a> Neuron. 66 (1), 15-36 (2010).</li><li>Huberman, A. D., Clandinin, T. 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Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+circuits+and+their+variations+within+different+columns+in+the+visual+system+of+Drosophila.">Synaptic circuits and their variations within different columns in the visual system of Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (44), 13711-13716 (2015).</li><li>Gao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neural+substrate+of+spectral+preference+in+Drosophila.">The neural substrate of spectral preference in Drosophila.</a> Neuron. 60 (2), 328-342 (2008).</li><li>Karuppudurai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+hard-wired+glutamatergic+circuit+pools+and+relays+UV+signals+to+mediate+spectral+preference+in+Drosophila.">A hard-wired glutamatergic circuit pools and relays UV signals to mediate spectral preference in Drosophila.</a> Neuron. 81 (3), 603-615 (2014).</li><li>Strother, J. A., Nern, A., Reiser, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+observation+of+ON+and+OFF+pathways+in+the+Drosophila+visual+system.">Direct observation of ON and OFF pathways in the Drosophila visual system.</a> Curr Biol. 24 (9), 976-983 (2014).</li><li>Ting, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoreceptor-derived+activin+promotes+dendritic+termination+and+restricts+the+receptive+fields+of+first-order+interneurons+in+Drosophila.">Photoreceptor-derived activin promotes dendritic termination and restricts the receptive fields of first-order interneurons in Drosophila.</a> Neuron. 81 (4), 830-846 (2014).</li><li>Ting, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tiling+of+R7+axons+in+the+Drosophila+visual+system+is+mediated+both+by+transduction+of+an+activin+signal+to+the+nucleus+and+by+mutual+repulsion.">Tiling of R7 axons in the Drosophila visual system is mediated both by transduction of an activin signal to the nucleus and by mutual repulsion.</a> Neuron. 56 (5), 793-806 (2007).</li><li>Peng, H., Ruan, Z., Long, F., Simpson, J. H., Myers, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=V3D+enables+real-time+3D+visualization+and+quantitative+analysis+of+large-scale+biological+image+data+sets.">V3D enables real-time 3D visualization and quantitative analysis of large-scale biological image data sets.</a> Nat Biotechnol. 28 (4), 348-353 (2010).</li><li>Takemura, S. Y., Lu, Z., Meinertzhagen, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+circuits+of+the+Drosophila+optic+lobe:+the+input+terminals+to+the+medulla.">Synaptic circuits of the Drosophila optic lobe: the input terminals to the medulla.</a> J Comp Neurol. 509 (5), 493-513 (2008).</li><li>Takemura, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+circuits+integrate+neighboring+visual+signals+in+a+Drosophila+motion+detection+pathway.">Cholinergic circuits integrate neighboring visual signals in a Drosophila motion detection pathway.</a> Curr Biol. 21 (24), 2077-2084 (2011).</li><li>Keller, P. J., Schmidt, A. D., Wittbrodt, J., Stelzer, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstruction+of+zebrafish+early+embryonic+development+by+scanned+light+sheet+microscopy.">Reconstruction of zebrafish early embryonic development by scanned light sheet microscopy.</a> Science. 322 (5904), 1065-1069 (2008).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatially+isotropic+four-dimensional+imaging+with+dual-view+plane+illumination+microscopy.">Spatially isotropic four-dimensional imaging with dual-view plane illumination microscopy.</a> Nat Biotechnol. 31 (11), 1032-1038 (2013).</li><li>Popko, J., Fernandes, A., Brites, D., Lanier, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+analysis+of+NeuronJ+tracing+data.">Automated analysis of NeuronJ tracing data.</a> Cytometry A. 75 (4), 371-376 (2009).</li><li>Meijering, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+validation+of+a+tool+for+neurite+tracing+and+analysis+in+fluorescence+microscopy+images.">Design and validation of a tool for neurite tracing and analysis in fluorescence microscopy images.</a> Cytometry A. 58 (2), 167-176 (2004).</li><li>Pool, M., Thiemann, J., Bar-Or, A., Fournier, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NeuriteTracer:+a+novel+ImageJ+plugin+for+automated+quantification+of+neurite+outgrowth.">NeuriteTracer: a novel ImageJ plugin for automated quantification of neurite outgrowth.</a> J Neurosci Methods. 168 (1), 134-139 (2008).</li><li>Scorcioni, R., Polavaram, S., Ascoli, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-Measure:+a+web-accessible+tool+for+the+analysis,+comparison+and+search+of+digital+reconstructions+of+neuronal+morphologies.">L-Measure: a web-accessible tool for the analysis, comparison and search of digital reconstructions of neuronal morphologies.</a> Nat Protoc. 3 (5), 866-876 (2008).</li><li>Kaplan, E. L., Meier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonparametric+Estimation+from+Incomplete+Observations.">Nonparametric Estimation from Incomplete Observations.</a> JASA. 53, 457-481 (1958).</li></ol>

Hier zeigen wir , wie man Bild und analysieren dendritischen Dorne von Drosophila Medulla Neuronen. Der erste Abschnitt, Dual-View-Bildgebung, beschreibt die Entfaltungs und Kombination von zwei Bildstapeln in einem hochauflösenden Bildstapel. Der zweite Abschnitt, Dendriten Verfolgung und Anmeldung, beschreibt die Verfolgung und Registrierung von Dendriten der Medulla Neuronen auf die Referenzspaltenanordnung. Der dritte Abschnitt, dendritische Analyse, beschreibt die Verwendung von benutzerdefinierten Skript...

Während der Entwicklung Neuronen aufwendige Dendriten in komplexen, aber klischee verzweigten Muster Synapsen mit ihren präsynaptischen Partnern zu bilden. Dendritische Verzweigungsmuster korrelieren mit neuronalen Identität und Funktionen. Die Standorte der dendritischen Dorne bestimmen die Art der präsynaptischen Eingänge sie erhalten, während die dendritischen Komplexität und Feldverzweigungsgrößen die Eingangsnummer regeln. Somit sind dendritische morphologischen Eigenschaften kritische Determinanten für die synaptische Verbindungen und neuronale Berechnung. In vielen Regionen der komplexen Gehirnen, wie beispielsweise die Fliegen optic Lappen und der wirbel Retina sind in Spalten und Schichten synaptischen Schaltungen organisiert Informationsverarbeitungs 1, 2 zu erleichtern. In einer solchen Spalte und Schicht Organisation, präsynaptischen Neuronen einer deutlichen Modalität Projekt Axone zu einer bestimmten Schicht zu beenden (sog Schicht-spezifisches Targeting) und eine geordnete zweidimensionale Anordnung zu bilden (so called topographische Karte), während postsynaptischen Neuronen Dendriten von geeigneter Größe in bestimmten Schichten erweitern präsynaptischen Eingänge der richtigen Typen und Zahlen zu erhalten. Während axonalen zu Schichten und Spalten Targeting gut 3 untersucht wurde, 4, ist viel weniger bekannt , wie Dendriten auf bestimmte Schichten geleitet werden und erweitern geeigneter Größe rezeptiven Felder 5 synaptischen Verbindungen mit den richtigen präsynaptischen Partnern zu bilden. Die Schwierigkeit der Bildgebung und Quantifizierung von dendritischen zu Schichten und Spalten Targeting hat die Studie von dendritischen Entwicklung in säulen und laminierten Hirnstrukturen behindert. Drosophila Medulla Neuronen sind ein ideales Modell für dendritische Routing und Schaltungsanordnung in Spalten und Schichten zu studieren. Die Fliege Medulla neuropil wird als 3D-Gitter aus 10 Schichten organisiert und etwa 750 Spalten. Jede Spalte ist durch einen Satz von Afferenzen innervated, einschließlich photoreceptors R7 / R8 und Lamina Neuronen L1 - L5, deren axonalen Terminals bilden topographische Karten in einem schichtspezifisch 6. Über 38 Arten von Medulla Neuronen sind in jedem Medulla Spalte und aufwendige Dendriten in bestimmten Schichten und mit entsprechenden Feldgrößen Eingänge aus diesen afferents 7 zu erhalten. Die synaptischen Schaltungen in der Medulla wurden bei der elektronenmikroskopischen Ebene rekonstruiert; Somit werden die synaptischen Partnerschaften gut 7 etabliert, 8. Darüber hinaus genetische Werkzeuge für verschiedene Arten von Medulla Neuronen Kennzeichnung sind vorhanden 9, 10, 11. Durch die Untersuchung drei Arten von transmedulla (Tm) Neuronen (Tm2, TM9 und TM20) haben wir bisher zwei identifizierten Zelltyp-spezifischen dendritischen Eigenschaften: (i) Tm Neuronen Dendriten in entweder der vorderen oder hinteren Richtung projizieren (planar projection Richtung) in Abhängigkeit von den Zelltypen und (ii) Dendriten der Medulla Neuronen enden in spezifischen medulla Schichten in einer zelltypspezifischen Weise (Schicht spezifische Terminierung) 12. Planar Projektionsrichtung und schichtspezifische Terminierung sind ausreichend, um diese drei Arten von Tm Neuronen zu differenzieren, während Mutationen, die Tm Antworten auf Schicht und Spalten Cues beeinflussen verschiedene Aspekte dieser Attribute stören. Hier präsentieren wir einen kompletten Workflow für die Prüfung des dendritischen Strukturierung von Drosophila Medulla Neuronen in Spalten und Schichten (Abbildung 1). Zuerst zeigen wir ein Dual-View-Bildgebungsverfahren, die kundenspezifische Software verwendet zwei konfokalen Bild zu kombinieren, stapelt hochwertige isotropen Bilder zu erzeugen. Diese Methode erfordert nur konventionelle konfokale Mikroskopie qualitativ hochwertige Bilder zu erzeugen, die für die zuverlässige Verfolgung von dendritischen Verzweigungen erlauben, ohne Mikroskopie mit Superauflösung zurückgreifen, wie eins STED (Stimulated Emission Depletion) oder strukturelle Beleuchtung. Zweitens stellen wir ein Verfahren zur dendritischen Dorne Tracing und zu einer Referenzspaltenanordnung der resultierenden Neuriten Spuren Registrierung. Drittens zeigen wir die Berechnungsmethoden für die Informationen auf der ebenen Projektionsrichtung und schichtspezifische Beendigung von Dendriten Extraktion sowie für Schätzungen für dendritischen Verzweigungen und Beendigung Frequenzen abzuleiten. Zusammen ermöglichen diese Verfahren für die Charakterisierung von dendritischen Muster in 3D, die Klassifizierung der Zelltypen auf dendritischen Morphologien basiert, und die Identifizierung von möglichen Defekten in Mutanten.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1632">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:464px;">Software</td>
			<td style="width:301px;"></td>
			<td style="width:227px;"></td>
			<td style="width:640px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Huygens Professional&#160;</td>
			<td>Scientific Volume Imaging</td>
			<td>version 16.05</td>
			<td>for image deconvolution (https://svi.nl).&#160; commercial software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MIPAV</td>
			<td></td>
			<td>version 7.3.0</td>
			<td>for image recombination and registration (http://mipav.cit.nih.gov/.).&#160; freeware</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MIPAV plugin: PlugInDrosophilaRetinalRegistration.class</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>freeware</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MIPAV plugin: PlugInDrosophilaStandardColumnRegistration.class</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>freeware</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Imaris</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td></td>
			<td>for tracing neurites and assigning reference points for image registration (http://www.bitplane.com). commercial software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vaa3D</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for visualizing swc files (https://github.com/Vaa3D/release/releases/).&#160; freeware</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matlab</td>
			<td>Mathworks</td>
			<td>R2014b</td>
			<td>for morphometric analysis of dendrites (http://www.mathworks.com).&#160; commercial software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matlab toolbox: TREES1.14</td>
			<td></td>
			<td>v1.14</td>
			<td>for analyzing dendritic morphometric parameters (http://www.treestoolbox.org/download.html).&#160; freeware</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matlab toolbox: Dendritic_Tree_Toolbox</td>
			<td></td>
			<td>v1.0</td>
			<td>for calculating morphometric parameters (https://science.nichd.nih.gov/confluence/display/snc/Data+collections+for+imagines+combination+and+standardize+column+registration). Freeware</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sample files</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SWC file definition</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>http://www.neuronland.org/NLMorphologyConverter/MorphologyFormats/SWC/Spec.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">The codes and sample files for image combination and registration</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>https://science.nichd.nih.gov/confluence/display/snc/Data+collections+for+imagines+combination+and+standardize+column+registration</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Reference point example&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>https://science.nichd.nih.gov/confluence/download/attachments/117216914/points.csv?version=1&#38;modificationDate=1471880596000&#38;api=v2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Computer system</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MS Windows Windows 7 x64 or Macintosh OS X 10.7 or later</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>3GHz 64-bit quad-core processor, 16G RAM (minimal)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Optional: Quadro4000&#160; (or above) graphic card</td>
			<td>Nvidia</td>
			<td></td>
			<td>for stereographic visualization of dendrites.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Optional: NVIDIA 3D vision2</td>
			<td>Nvidia</td>
			<td></td>
			<td>http://www.nvidia.com/object/3d-vision-main.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Optional: 120 Hz LCD display for NVIDIA 3D vision2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>http://www.nvidia.com/object/3d-vision-system-requirements.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Reagents for imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">24B10 antibody</td>
			<td>The Developmental Studies Hybridoma Bank</td>
			<td>24B10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GFP Tag Antibody</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>G10362</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Goat anti-Rabbit (H+L), Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>A11034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Goat anti-Mouse (H+L), Alexa Fluor 568</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>A21124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">VECTASHIELD Antifade Mounting Medium</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mounting&#160;Clay&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S04179</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">70% glycerol in 1X PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cover glasses, high performance, D=0.17mm</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>474030-9000-000</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analyzing dendritic morphology in columns and layers

In vielen Regionen des zentralen Nervensystems, wie beispielsweise die Fliegen optic Lappen und der wirbel cortex werden in Schichten und Säulen synaptischen Schaltungen organisiert Gehirn Verdrahtung während der Entwicklung und der Informationsverarbeitung in den entwickelten Tieren erleichtern. Postsynaptischen Neuronen aufwendige Dendriten in typspezifische Muster in bestimmten Schichten mit entsprechenden präsynaptischen zu Synapse. Die Fliege medulla Neuropil besteht aus 10 Schichten und 750 Spalten; jede Spalte von Dendriten von mehr als 38 Arten von Medulla Neuronen innervated, die mit den axonalen Terminals einiger 7 Arten von Afferenzen in einem typspezifischen Art und Weise entsprechen. Dieser Bericht beschreibt die Verfahren zur Abbildung und Dendriten der Medulla Neuronen zu analysieren. Der Workflow besteht aus drei Abschnitten: (i) die Dual-View-Abbildungsabschnitt verbindet zwei konfokale Bildstapel in orthogonalen Richtungen in eine hochauflösende 3D-Bild von Dendriten gesammelt; (Ii) die Dendriten Verfolgung und Registrierung Abschnitt Spuren dendritischenDorne in 3D und registriert auf die Referenzspaltenanordnung dendritischen Spuren; (Iii) die dendritische Analyseabschnitt analysiert dendritische Muster in Bezug auf Spalten und Schichten, einschließlich der schichtspezifischen Termination und planar Projektionsrichtung dendritischer Dorne und leitet Schätzungen von dendritischen Verzweigungs und Termination Frequenzen. Die Protokolle verwenden benutzerdefinierte Plugins gebaut auf der Open-Source-MIPAV (Medical Imaging Verarbeitung, Analyse und Visualisierung) Plattform und benutzerdefinierte Toolboxen in der Matrix Laborsprache. Zusammen bieten diese Protokolle einen vollständigen Arbeitsablauf die dendritische Routing von Drosophila medulla Neuronen in Schichten und Säulen zur Analyse, Zelltypen zu identifizieren, und Defekte in Mutanten zu bestimmen.

Unter Verwendung des Dual-View-Bildgebungsverfahren hier vorgestellten ein Gehirn fly dünn markiertem TM20 Neuronen enthält, wurde in zwei orthogonalen Richtungen abgebildet. Vor der Bildgebung wurde das Gehirn mit den entsprechenden primären und sekundären Antikörper zur Visualisierung von membran tethered GFP und Photorezeptor Axone gefärbt. Für die Bildgebung wurde das Gehirn zuerst in der horizontalen Ausrichtung montiert (2A, B). Ein GFP-markiertem TM20 Neuro...

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Analyzing Dendritic Morphology in Columns and Layers

Hier zeigen wir , wie dendritische Routing von Drosophila Medulla Neuronen in Spalten und Schichten zu analysieren. Der Workflow enthält einen Dual-View-Imaging-Technik, um die Bildqualität und Computational Tools für das Aufspüren, Registrierung dendritischen Dorne auf die Referenzspaltenanordnung und für die Analyse der dendritischen Strukturen in 3D-Raum zu verbessern.

Analyse dendritischer Morphologie in Spalten und Schichten

In many regions of the central nervous systems, such as the fly optic lobes and the vertebrate cortex, synaptic circuits are organized in layers and ...

Research

JoVE Journal

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Forschung

Neurowissenschaften

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Schnelle Micro-Iontophorese von Glutamat und GABA: Ein nützliches Tool, um Synaptic Integration Untersuchen

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The Indirect Neuron-astrocyte Coculture Assay: An In Vitro Set-up for the Detailed Investigation of Neuron-glia Interactions

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Die indirekte Neuron-Astrozyten Cokultur Assay: Ein<em&gt; In Vitro</em&gt; Für die detaillierte Untersuchung von Neuron-Glia Interaktionen Set-up

Proper neuronal development and function is the prerequisite of the developing and the adult brain. However, the mechanisms underlying the highly ...

Quantitative Analysis of Neuronal Dendritic Arborization Complexity in Drosophila

Quantitative Analysis of Neuronal Dendritic Arborization Complexity in Drosophila

Quantitative Analyse der neuronalen dendritischen Arborization Komplexität in Drosophila

Dendrites are the branched projections of a neuron, and dendritic morphology reflects synaptic organization during the development of the nervous system. ...

Visualizing and Analyzing Intracellular Transport of Organelles and Other Cargos in Astrocytes

Visualisierung und Analyse des intrazellulären Transports von Organellen und anderen Ladungen in Astrozyten

Astrocytes are among the most abundant cell types in the adult brain, where they play key roles in a multiplicity of functions. As a central player in ...