Name: a device for performing cell migration/wound healing in a 96-well plate
Uploaded: 2017-03-07T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить г Tam Po Leung, г-н Вонг Чи Кин и технический состав факультета Workshop науки, Гонконг Baptist University, за свои технические навыки и консультации в создании прототип этого wounder.

1. Введение в Части Wounder (Рисунок 1) <ol><li> Подготовьте держатель штифта путем фиксации ранении штифты на равных расстояниях. Держите кончики пипеток и отрегулируйте высоту наконечника путем перемещения регулируемых ранив штифты вверх и вниз. </li><li> Установить регулируемый ориентируемся...

<ol>
	<li>Friedl, P., Wolf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumour-cell+invasion+and+migration:+diversity+and+escape+mechanisms.">Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms.</a> Nat Rev Cancer. 3 (5), 362-374 (2003).</li><li>Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prespecification+and+plasticity:+shifting+mechanisms+of+cell+migration.">Prespecification and plasticity: shifting mechanisms of cell migration.</a> Curr Opin Cell Biol. 16 (1), 14-23 (2004).</li><li>Lampugnani, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+migration+into+a+wounded+area+in+vitro.">Cell migration into a wounded area in vitro.</a> Methods Mol Biol. 96, 177-182 (1999).</li><li>Sholley, M. M., Gimbrone, M. A., Cotran, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+migration+and+replication+in+endothelial+regeneration:+a+study+using+irradiated+endothelial+cultures.">Cellular migration and replication in endothelial regeneration: a study using irradiated endothelial cultures.</a> Lab Invest. 36 (1), 18-25 (1977).</li><li>Gotlieb, A. I., Spector, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Migration+into+an+in+vitro+experimental+wound:+a+comparison+of+porcine+aortic+endothelial+and+smooth+muscle+cells+and+the+effect+of+culture+irradiation.">Migration into an in vitro experimental wound: a comparison of porcine aortic endothelial and smooth muscle cells and the effect of culture irradiation.</a> Am J Pathol. 103 (2), 271-282 (1981).</li><li>Chen, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+migration+chip+for+chemotaxis-based+microfluidic+selection+of+heterogeneous+cell+populations.">Single-cell migration chip for chemotaxis-based microfluidic selection of heterogeneous cell populations.</a> Sci Rep. 18 (5), 9980 (2015).</li><li>Yarrow, J. C., Periman, Z. E., Westwood, N. J., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+cell+migration+assay+using+scratch+wound+healing,+a+comparsion+of+image-based+readout+methods.">A high-throughput cell migration assay using scratch wound healing, a comparsion of image-based readout methods.</a> BMC Biotechnol. 4, 21 (2004).</li><li>Lauder, H., Frost, E. E., Hiley, C. R., Fan, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+the+repair+process+involved+in+the+repair+of+a+cell+monolayer+using+an+in+vitro+model+of+mechanical+injury.">Quantification of the repair process involved in the repair of a cell monolayer using an in vitro model of mechanical injury.</a> Angiogenesis. 2 (1), 67-80 (1998).</li><li>Yue, P. Y. K., Leung, E. P. Y., Mak, N. K., Wong, R. N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+method+for+quantifying+cell+migration/+wound+healing+in+96-well+plates.">A simplified method for quantifying cell migration/ wound healing in 96-well plates.</a> J. Biomol Screen. 15 (4), 427-433 (2010).</li><li>Yue, P. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elucidation+of+the+mechanisms+underlying+the+angiogenic+effects+of+ginsenoside+Rg(1)+in+vivo+and+in+vitro.">Elucidation of the mechanisms underlying the angiogenic effects of ginsenoside Rg(1) in vivo and in vitro.</a> Angiogenesis. 8 (3), 205-216 (2005).</li><li>Kwok, H. H., Chan, L. S., Poon, P. Y., Yue, P. Y., Wong, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ginsenoside-Rg1+induces+angiogenesis+by+the+inverse+regulation+of+MET+tyrosine+kinase+receptor+expression+through+miR-23a.">Ginsenoside-Rg1 induces angiogenesis by the inverse regulation of MET tyrosine kinase receptor expression through miR-23a.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 287 (3), 276-283 (2015).</li></ol>

Наша ячейка wounder имеет несколько уникальных особенностей в решении проблем традиционной миграции клеток анализов. 8-канальный механический ячейки wounder изготовлен из высококачественной нержавеющей стали (сталь 304) с длительным сроком службы, который можно стерилизовать автоклавирован...

Миграция клеток играет важную роль в клеточных процессах, таких как эмбриогенез, нейрогенез, ангиогенез, заживление ран, слизистых оболочек, эпителиальные ремонт-мезенхимальных-переходов при нормальном развитии и ситуации заболевания 1. Это сложный процесс , который включает в себя координацию многочисленных меж- и внутриклеточных событий , в том числе сигнальных взаимодействий молекул, поляризация клеток, цитоскелета реорганизации, матрицы ремоделирования, мембранного выпячивания и динамическая межклеточной адгезии модуляции 2. Путем изучения миграции клеток, обнаружение и проверка химических веществ или биологических молекул, приводящих к движению клеток и связанных с ней биохимических путей может быть определена. Этот фундаментальный процесс может быть использован с выгодой в качестве прокси-сервера для различных приложений, таких как лечение заболеваний и наркомании таргетинга. Ранив анализ является одним из клеточной миграции анализов 3. Здесь Anиндивидуальный образец клеток будут частично удалены с помощью механических средств, чтобы произвести обнаженную область, где клетки будут мигрировать, чтобы покрыть область. Процент восстановления в определенный момент времени будет контролироваться. При обработке большого количества образцов, такие вопросы, как экспериментальной стоимости и перекрестного загрязнения в образцах может быть проблематичным. Хотя многие коммерческие инструменты и анализы доступны для изучения миграции клеток 4, 5, 6, многие из них требовали дорогих и сложное оборудование , и все еще необходимы улучшения. По этим причинам, 8-канальный механический ячейки wounder (рисунок 1) разрабатывается. Наш 8-канальный механический ячейка wounder включила несколько уникальных особенностей в решении вышеуказанных проблем. Это обеспечивает гибкость для выполнения миграции клеток / ранив анализов в формате культуры 96-луночного планшета. Регулируемое гуiding дизайн бар гарантирует, что площадь повреждения находится в центральном положении каждой лунки. Кроме того, высота направляющих стержней может быть отрегулирована таким образом, чтобы wounder применима для различных марок культуральных планшетов. И, наконец, регулируемая конструкция позволяет ранении контактный ровный контакт кончиках пипеток с поверхностью пластины культуры для достижения одновременного и воспроизводимую ранению 7, 8.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well cell culture plate</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>167008</td>
			<td>Other brands of 96-well cell culture plate can also be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P10 pipette tips</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>301-03-051</td>
			<td>Short P10 pipette tip is more easy to create a clear wound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wounder</td>
			<td>R&#38;P Technology Limited</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium 199</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M2520-1L</td>
			<td>For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. 
			Use appropirate culture medium and condition for other type of cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26140079</td>
			<td>For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. 
			Use appropirate culture medium and condition for other type of cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td>For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. 
			Use appropirate culture medium and condition for other type of cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3393</td>
			<td>For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. 
			Use appropirate culture medium and condition for other type of cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin from bovine skin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9391</td>
			<td>For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. 
			Use appropirate culture medium and condition for other type of cells.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a device for performing cell migration/wound healing in a 96-well plate

Миграции клеток / ранив анализа является широко используемым методом для изучения миграции клеток и другие биологические процессы, такие как ангиогенез и метастазирование опухоли. В этом анализе клетки выращивают с образованием сливающийся монослой и механический рана создается царапанием с устройством. Тогда скорость миграции клеток по отношению к обнаженную область можно контролировать с помощью визуализации. Наш 8-канальный механический wounder предназначен для решения большинства проблем, связанных с миграцией клеток анализа. Во-первых, наша wounder можно легко стерилизовать автоклавированием или с общими дезинфицирующими средствами. Во-вторых, отдельные регулируемые штифты позволяют даже контактировать с клеточной культуральной пластины таким образом, что могут быть созданы острые и воспроизводимые раны. В-третьих, направляющие стержни с обеих сторон wounder обеспечить последовательную позицию ранив в каждую лунку. Использование одноразовых наконечников пластиковой пипетки для ранении может дополнительно обеспечивать лучшее обработку wounder, а также свести к минимуму перекрестные contaminatиона. В заключение, наша ячейка wounder может предоставить исследователям с удобным и воспроизводимым устройством для проведения анализа миграции клеток с использованием стандартного 96-луночного культурального пластину.

Этот 8-канальный механический wounder построен поцарапать монослой клеток для выполнения анализа миграции клеток. Это удобно устройство, которое может выполнять клеточные царапать анализы в 96-луночные планшеты в менее чем за минуту без специальной подготовки. Это wounder м?...

Watch this Scientific Journal Video about A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate at JoVE.com

A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate

Здесь мы приводим протокол для выполнения полупроницаемую с высокой пропускной способностью анализа миграции клеток на 96-луночный культуральный планшет. Этот протокол является быстрый, простой и экономичный способ создать логичную скретч раны на клетку монослоя.

Устройства для осуществления миграции клеток / заживлении ран в 96-луночный планшет

The cell migration/wounding assay is a commonly used method to study cell migration and other biological processes, such as angiogenesis and tumor ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

Понимание начале Органогенез, используя упрощенную<em&gt; На месте</em&gt; Гибридизация Протокола в<em&gt; Xenopus</em

Organogenesis is the study of how organs are specified and then acquire their specific shape and functions during development.  The Xenopuslaevis embryo ...

Automated Quantification of Hematopoietic Cell &#8211; Stromal Cell Interactions in Histological Images of Undecalcified Bone

Automated Quantification of Hematopoietic Cell ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬Å“ Stromal Cell Interactions in Histological Images of Undecalcified Bone

Автоматизированная Количественное кроветворной клетки - Стромальные межклеточного взаимодействия в гистологических Изображения Undecalcified Bone

Confocal microscopy is the method of choice for the analysis of localization of multiple cell types within complex tissues such as the bone marrow. ...

Scalable 96-well Plate Based iPSC Culture and Production Using a Robotic Liquid Handling System

Масштабируемость 96-луночного планшета основании IPSC Культура и производства с помощью роботизированной системы наливных

Continued advancement in pluripotent stem cell culture is closing the gap between bench and bedside for using these cells in regenerative medicine, drug ...

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Создание клинически значимых<em&gt; Экс Vivo</em&gt; Мок хирургии катаракты модель для исследования Эпителиальный заживления раны в родной микроокружения

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

Microinjection for Transgenesis and Genome Editing in Threespine Sticklebacks

Микроинъекция для Трансгенез и редактирования генома в трехиглой колюшками

The threespine stickleback fish has emerged as a powerful system to study the genetic basis of a wide variety of morphological, physiological, and ...

Adenoviral Gene Therapy for Diabetic Keratopathy: Effects on Wound Healing and Stem Cell Marker Expression in Human Organ-cultured Corneas and Limbal Epithelial Cells

Аденовируса генной терапии для больных сахарным диабетом Кератопатия: Влияние на заживление ран и стволовых клеток маркера выражение в человеческих органов культивируемых роговиц и лимбальных эпителиальных клеток

The goal of this protocol is to describe molecular alterations in human diabetic corneas and demonstrate how they can be alleviated by adenoviral gene ...

Rapid Isolation of BMPR-IB+ Adipose-Derived Stromal Cells for Use in a Calvarial Defect Healing Model

Быстрое Выделение BMPR-IB + жировая стромальных клеток, полученных для использования в костный дефект модели заживления

Invasive cancers, major injuries, and infection can cause bone defects that are too large to be reconstructed with preexisting bone from the patient's own ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

Новая методика трансплантации молочной жировой ткани для визуализации образования сосудов сосудистых эндотелиальных стволовых клеток

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Поколение эшафот бесплатно, трехмерные инсулина выражая Pancreatoids от мыши поджелудочной железы прародителями в пробирке

The pancreas is a complex organ composed of many different cell types that work together to regulate blood glucose homeostasis and digestion. These cell ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Визуализация узлов и Notochordal пластины в Gastrulating эмбрионов мыши, используя растровая электронная микроскопия и вся гора иммунофлуоресценции

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...