Name: isolation, characterization, and purification of macrophages from tissues affected by obesity-related inflammation
Uploaded: 2017-04-03T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Characterization, and Purification of Macrophages from Tissues Affected by Obesity-related Inflammation at JoVE.com

Wir möchten den Flow Cytometry Core Facility in The Pennsylvania State University Millennium Science Complex danken.

Alle experimentelle Protokolle (Abschnitte 1, 1.2 und 1.3) stimmten mit den institutionellen Animal Care und Nutzung Committee (IACUC) an der Pennsylvania State University.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Gewebe</td>
			<td>Dissoziation-Puffer-Vorbereitung</td>
			<td>Endvolumen</td>
			<td>Lagerung</td>
		</tr>
<tr>
<td>Weißen Fettgewebe (WAT)</td>
			<td>
Dissoziation Puffer: 2,5 % HEPES, 10 mg/mL Rinderser...

<ol>
	<li>Davies, L. C., Taylor, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-resident+macrophages:+Then+and+Now.">Tissue-resident macrophages: Then and Now.</a> Immunology. 144 (4), 541-548 (2015).</li><li>Kahn, S. E., Hull, R. L., Utzschneider, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+linking+obesity+to+insulin+resistance+and+type+2+diabetes.">Mechanisms linking obesity to insulin resistance and type 2 diabetes.</a> Nature. 444 (12), 840-846 (2006).</li><li>Van Gaal, L. F., Mertens, I. L., De Block, C. 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Diät-induzierten Stoffwechselstörung Modelle, die Komorbiditäten wie Atherosklerose, einfache Steatose, Steatohepatitis zu imitieren und Typ-2-Diabetes, sind weitgehend verwendet, um die zugrunde liegenden molekularen Mechanismen der Progression der Erkrankung besser zu verstehen. Kollagenase abhängigen Verdauung wird häufig verwendet, Gewebe, Zellen aus der extrazellulären Matrix (ECM)16,27zu befreien zu distanzieren. Enzyme wie Kollagenase stören Kollage...

Maus-Modellen sind weitgehend benutzt worden, um die Dynamik der menschlichen Krankheiten zu studieren. Richtige Isolierung der ansässigen Gewebezellen von Mäusen in einem kranken Zustand kann eine Plattform bieten, für das Verständnis der molekularen und zellulären Beiträge zur Pathogenese einer Krankheit1. Eine Störung, die von entscheidender Bedeutung ist Übergewicht. Die Inzidenz der Adipositas weiter steigen weltweit parallel mit Insulinresistenz und Typ-2 Diabetes Mellitus, Herz-Kreislauf-Erkrankungen und Fettleber2,3. Übermäßiger Konsum Nährstoff ist weiter verzerrt durch verminderte körperliche Aktivität auslösen veränderten Signale aus Fettgewebe, die das zelluläre Milieu von anderen peripheren Geweben wie der Aorta und Leber4verändern können. Solche Störungen der metabolischen Homöostase führt eine chronische niedriggradigen systemischen Entzündung5.
Klassische Aktivierung von Makrophagen wohnhaft sind, um die Aorta und Leber sowie ihre Einstellung zu weißen Fettgewebe (WAT) nachweislich nicht nur Dysregulation von metabolischen Signalen zu initiieren, sondern auch nachhaltig Entzündung6,7. Die phänotypische und funktionelle Heterogenität von Makrophagen ist stark verbunden mit der Entstehung von Übergewicht im Zusammenhang mit Komorbiditäten7. Die dynamische Plastizität in Makrophagen Polarisierung ermöglicht diese Zellen eine Reihe von aktivierten Phänotypen, die das Fortschreiten zu koordinieren und Auflösung der Entzündung8auszustellen. Während klassisch aktivierte Makrophagen (M1) in der Ausbreitung der Entzündung beteiligt sind, wurden Alternativ aktivierte Makrophagen (M2) mit Auflösung und Gewebe Reparatur9,10verbunden.
Wie der Körper metabolische Belastung erfährt, sammelt sich ungewöhnlich weißen Fettgewebe. Das erweiterte Fettgewebe anzieht und behält sich Entzündungszellen, die normalen Adipocyte Funktion zur Förderung der Insulinresistenz, Hyperglykämie und letztlich Typ-2 Diabetes Mellitus, Insulin-Resistenz oder Hyperglykämie11tiefgreifend verändern, 12. Parallel infiltriert weißen Fettgewebe umbaut in Reaktion auf inflammatorische Signale veröffentlicht von klassisch aktivierte (M1) Fettgewebe Makrophagen (ATMs)13,14. Diese mehrzellige Organ übt eine Kaskade von Signalen, die die normale Funktion der anderen Organe des Körpers wie die Aorta und Leber4entgleist.
Die Leber ist eine metabolische Kraftwerk, das als Reaktion auf Reize aus nahe gelegenen Dysregulated WAT15passt. Hepatische Makrophagen oder Kupffer Zellen als Reaktion auf metabolische Veränderungen, sezernieren inflammatorischen Zytokinen, die beide parenchymatösen verwandeln und nicht parenchymatösen Zelle Phänotyp und fördern Gewebe umgestaltet. Hepatische Lipid Akkumulation, Entzündung, übermäßige extrazelluläre Matrix Einlagen, Nekrose und eventuelle Funktion Verlust folgt die entzündlichen Beleidigungen beitragen, das breite Spektrum der Leberschäden im Zusammenhang mit nicht-alkoholische Fettleber 16,17,18.
Parallel zu kompromittierten WAT und Leberfunktion akkumulieren große Arterien Lipiden in der Arterienwand, wie der Körper chronischer metabolischer Stress19 erfährt. Arterielle Lipid Ansammlung löst die Sekretion von Chemokinen durch aktivierten Endothelzellen und spätere Rekrutierung von Monozyten20. Einmal eingestellt, vermehren Monozyten, differenzieren, Lipoproteine aufnehmen und zu Schaumzellen. Atherogenese initiiert und getragen von der Pro-inflammatorischen Aktivität von rekrutiert und Gewebe resident Lipid-beladene Makrophagen. Die extrazellulären und intrazellulären Stress-Signale weitergeleitet in diesem atherogenic Mikroumgebung erliegen, diese Makrophagen dann in eine Signalkaskade Apoptotic engagieren. Wenn diese Schaumzellen sterben, tragen sie ihre Lipid gefüllt Inhalte zum nekrotischen Kern der Läsion, die dann zu Plaque Ruptur, Herzinfarkt und Schlaganfall führt.
Die Heterogenität der Makrophagen Phänotypen orchestriert Kollektiv, teilweise die Adipositas induziert durch entzündliche Veränderungen in Dysregulated Gewebe wie WAT, Leber und Aorta8,21. Charakterisierung von rekrutiert und resident Gewebe Makrophagen konnte Einblick in mögliche molekulare Targets, die Makrophagen Phänotyp1bearbeiten. Um Makrophagen von Adipositas-induzierte entzündetem Gewebe effektiv zu charakterisieren, erhalten Sie eine einzellige Suspension durch enzymatische Verdauung. Solche Protokolle Dissoziation müssen ausreichend erniedrigende Bindegewebe bei gleichzeitiger Minimierung immun Zelltod und bietet optimale Zellausbeute wirksam. Die Enzym-Mischung ist abhängig von der Art des Gewebes und seiner strukturellen Make-up. Elastische Gewebe wie der Aorta erfordert stärkere enzymatische Aktivität im Vergleich zu der Leber und WAT Gewebe Dissoziation zu erreichen. Aus der Einzelzelle Suspension können Gewebe resident Makrophagen eindeutig gekennzeichnet oder isoliert für weitere nachgelagerte Analysen wie transkriptionelle Profilierung.
Hier ist eine gewebespezifische Protokoll beschrieben, die Kollagenase-abhängige Gewebe Verdauung und polychromatische Durchflusszytometrie verwendet, um effektiv zu isolieren und zu charakterisieren Gewebe-Bewohner Makrophagen aus traditionellen Ernährung induzierten Adipositas gewonnen, Arteriosklerose, einfache Steatose und Steatohepatitis Mausmodellen. Gleichzeitige Färbung der Zelle Oberflächenmarker mit Antikörpern gegen Leukozyten-(CD45 und/oder CD11b) und Makrophagen - spezifische Antigene (F4/80) wird häufig verwendet um Makrophagen Populationen22zu identifizieren. Fluoreszenz-aktivierte Zelle sortieren (FACS) ist eine wirkungsvolle Strategie verwendet, um diese identifizierten Populationen in hoher Reinheit zu sortieren. Die sortierte Bevölkerung kann dann für Phänotyp spezifischen Gen-Profile mit nachgeschalteten molekulare Analyse (z. B. quantitative Real-Time Polymerase-Kettenreaktion)23ausgewertet werden. Obwohl standard Durchflusszytometrie und Flow Cytometry-basierte Zellsortierung mächtige Werkzeuge in Makrophagen in einem stark heterogenen Zellsuspension zu unterscheiden sind, müssen der ehemaligen Protokolle optimiert werden, um erfolgreichen Ausgang zu gewährleisten. In dieser Studie sind Protokolle, die effektiv zu isolieren und zu charakterisieren bestimmte tragfähige Gewebe Makrophagen beschrieben; noch wichtiger ist, bietet diese Studie entscheidende Einblicke in technische Probleme, die häufig sowie proaktive und Fehlersuche Strategien zu verhindern bzw. zu lösen auftreten.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="940">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">26G x 5/8 in Needles</td>
			<td style="width:151px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305115</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:321px;">23G x 0.75 in needle x 12 in. tubing Blood Collection Set</td>
			<td style="width:151px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">367297</td>
			<td style="width:349px;">Used for cannulation of subhepatic IVC during liver perfusion</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">21G 1 1/2 in. Needles</td>
			<td style="width:151px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305156</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">1mL syringe with rubber stops</td>
			<td style="width:151px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">309659</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">10mL Syringes</td>
			<td style="width:151px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">309604</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">1mL Syringe</td>
			<td style="width:151px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">309659</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">F4/80 PE</td>
			<td style="width:151px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">123110</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">CD11c PE/Cy7</td>
			<td style="width:151px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">117318</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">CD11b PE/Cy5</td>
			<td style="width:151px;">eBioscience</td>
			<td style="width:119px;">15-0112-81</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">Anti-mouse CD16/32 Fc Block&#160;</td>
			<td style="width:151px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">101320</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">CD45 Pacific Blue</td>
			<td style="width:151px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">103126</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">PE Rat IgG2a</td>
			<td style="width:151px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">400508</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">PE/Cy7 Armenian Hamster IgG</td>
			<td style="width:151px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">400922</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">PE/Cy5 Rat IgG2b</td>
			<td style="width:151px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">400610</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">Pacific Blue Rat IgG2c</td>
			<td style="width:151px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">400717</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">Dulbecco&#8217;s Modified Eagle Medium (DMEM)&#160;</td>
			<td style="width:151px;">Cellgro</td>
			<td style="width:119px;">15-017-CV</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">1X Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:151px;">Cellgro</td>
			<td style="width:119px;">21-031-CV</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">70 micron cell strainers</td>
			<td style="width:151px;">Corning, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">352350</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">&#160;1.7 mL microcentrifuge tube&#160;</td>
			<td style="width:151px;">Denville</td>
			<td style="width:119px;">C2170</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:321px;">Paraformaldehyde Aqueous Solution -16X</td>
			<td style="width:151px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:119px;">CAS #30525-89-4</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:321px;">Micro Dissecting Scissors, 3.5 inch, Straight, 23mm, Sharp&#160;</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>52132-10P</td>
			<td style="width:349px;">Used for general dissecting purposes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro Forceps, 4in, full curve, 0.8mm</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>52102-37P&#160;</td>
			<td style="width:349px;">Used for general dissecting purposes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">Spring dissection scissors &#8211; 3 mm Cutting edge&#160;</td>
			<td style="width:151px;">Fine Science Tool</td>
			<td style="width:119px;">15000-10</td>
			<td style="width:349px;">Used for aorta dissection Steps 1.3.3.17 to 1.3.3.28</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">Curved 0.07 x 0.04 mm Tip Forceps&#160;</td>
			<td style="width:151px;">Fine Science Tool</td>
			<td style="width:119px;">11297-10</td>
			<td style="width:349px;">Used for aorta dissection Steps 1.3.3.17 to 1.3.3.28</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">Hemostatic Forceps (Curved)</td>
			<td style="width:151px;">Fine Science Tool</td>
			<td style="width:119px;">13021-12</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">Heparin Sodium Salt</td>
			<td style="width:151px;">Fischer Scientific</td>
			<td style="width:119px;">9041-08-1</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:321px;">35mm Cell Culture/Petri Dishes</td>
			<td style="width:151px;">Fischer Scientific</td>
			<td style="width:119px;">12-565-90</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">Polystyrene Petri Dishes (10 cm) w/lid</td>
			<td style="width:151px;">Fischer Scientific</td>
			<td style="width:119px;">08-757-100D</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">15mL Conical Centrifuge Tubes (Polypropylene)</td>
			<td style="width:151px;">Fischer Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-959-53A</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">50mL Conical Centrifuge Tubes&#160;(Polypropylene)</td>
			<td style="width:151px;">Fischer Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-432-22</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">5mL Round-Bottom Polystyrene Tubes&#160;</td>
			<td style="width:151px;">Fischer Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-959-5</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:151px;">Gemini Bio-Products</td>
			<td style="width:119px;">100-106</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:321px;">Ethanol (Stock Ethyl Alcohol Denatured, Anyhydrous)</td>
			<td style="width:151px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;">EX0285-1</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">Bovine Serum Albumin</td>
			<td style="width:151px;">Rockland</td>
			<td style="width:119px;">BSA-50</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">HEPES</td>
			<td style="width:151px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H3375</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">Collagenase Type II</td>
			<td style="width:151px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">C6885</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">Collagenasse Type XI</td>
			<td style="width:151px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">C7657</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">Hyaluronidase Type I</td>
			<td style="width:151px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H3506</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">DNAse</td>
			<td style="width:151px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">DN25</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">Collagenase Type I</td>
			<td style="width:151px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">C0130</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">NaOH</td>
			<td style="width:151px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">1310-73-2&#160;</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:321px;">CaCl2</td>
			<td style="width:151px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">449709-10G</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">500mL beaker&#160;</td>
			<td style="width:151px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">02-540M</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">4 cm Hemostatic clamp</td>
			<td style="width:151px;">Stoelting</td>
			<td style="width:119px;">52120-40</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">Toothed forceps</td>
			<td style="width:151px;">Stoelting</td>
			<td style="width:119px;">52104-33P</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">50 micron Disposable filters</td>
			<td style="width:151px;">Systemex</td>
			<td style="width:119px;">04-0042-2317</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:321px;">Collagenase Type IV</td>
			<td style="width:151px;">ThermoFischer Scientific</td>
			<td style="width:119px;">17104019</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:321px;">Ammonium Chloride Potassium (ACK)</td>
			<td style="width:151px;">ThermoFischer Scientific&#160;</td>
			<td style="width:119px;">A1049201</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">Razors (0.22 mm (0.009&#34;))</td>
			<td style="width:151px;">VWR International</td>
			<td style="width:119px;">55411-050</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:321px;">Texas Red Live/Dead stain</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:349px;">Red viability stain (in Figure 1A)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation, characterization, and purification of macrophages from tissues affected by obesity-related inflammation

Übergewicht fördert einen chronische entzündlichen Zustand, der weitgehend durch Gewebe-Bewohner Makrophagen sowie Monocyte abgeleiteten Makrophagen vermittelt wird. Diät-induzierten Adipositas (DIO) ist ein wertvolles Modell bei der Untersuchung der Rolle der Makrophagen Heterogenität; angemessene Makrophagen Isolationen sind jedoch schwierig, von entzündetem Gewebe zu erwerben. In diesem Protokoll beschreiben wir die Isolierung Schritte und notwendigen Lösungsanleitungen stammen aus unseren Studien eine geeignete Bevölkerung von Gewebe-Bewohner Makrophagen von Mäusen nach 18 Wochen der fettreichen (HFD) oder High-Fat/High-Cholesterin (einzuholen HFHCD) Diät Intervention. Dieses Protokoll konzentriert sich auf drei Markenzeichen Gewebe untersucht Adipositas und Arteriosklerose einschließlich der Leber, weißen Fettgewebe (WAT) und der Aorta. Wir markieren wie dualistische Nutzung des Flow Cytometry erreichen eine neue Dimension der Isolierung und Charakterisierung von Gewebe-Bewohner Makrophagen. Ein grundlegenden Abschnitt dieses Protokolls befasst sich mit die Feinheiten gewebespezifischen enzymatischen Verdauung und Makrophagen Isolierung und anschließende Zelloberfläche Antikörper Färbung für durchflusszytometrischen Analyse zugrunde liegen. Dieses Protokoll befasst sich mit vorhandenen Komplexität zugrunde liegende fluoreszierende aktiviert Zelle sortieren (FACS) und enthält Erläuterungen zu diesen komplexen Problemen um breite Palette Charakterisierung von angemessen sortierte Zellpopulationen zu erhalten. Dazu gehören Alternative Anreicherungsverfahren für das Sortieren von Zellen, wie die dichten Leber, ermöglichen Flexibilität und Zeit bei der Arbeit mit FACS. Kurz gesagt, dieses Protokoll aids-Forscher, Makrophagen Heterogenität aus einer Vielzahl von entzündetem Gewebe in einer bestimmten Studie zu bewerten und liefert aufschlussreiche Tipps zur Problembehandlung, die erfolgreich für günstige zellulären Isolierung und Charakterisierung von Immunzellen in DIO-vermittelte Entzündung.

Bei der Verwendung von Apolipoprotein E mangelhaft (ApoE KO) C57BL/6 (BL6) Mäuse auf einem hohen Fett hohe Cholesterin-Diät (HCHFD oder HCD) für 18 Wochen, 1 x 10-4 - 2 x 104 CD45 gepflegt+F4/80+ Aorten Makrophagen können isoliert werden, wenn zwei Proben zusammengefasst. Lebern von HFHCD gefütterten ApoE KO Mäusen seziert produziert größer als 5 x 105 sortiert Kupffer Zellen (die Sortierung zur Verfügung stehende Zeit abhän...

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Isolation, Characterization, and Purification of Macrophages from Tissues Affected by Obesity-related Inflammation

Dieses Protokoll ermöglicht ein Forscher zu isolieren und zu charakterisieren, Gewebe-Bewohner Makrophagen in verschiedenen hallmark entzündetem Gewebe extrahiert aus Diät-induzierten Modelle der Stoffwechselstörungen.

Isolierung, Charakterisierung und Reinigung der Makrophagen aus den Geweben von Fettleibigkeit bedingte Entzündung betroffen

Obesity promotes a chronic inflammatory state that is largely mediated by tissue-resident macrophages as well as monocyte-derived macrophages. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

Isolierung und Charakterisierung von dendritischen Zellen und Makrophagen aus dem Mausdarm

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Proteomic Profiling of Macrophages by 2D Electrophoresis

Proteomik von Makrophagen durch 2D-Elektrophorese

The goal of the two-dimensional (2D) electrophoresis protocol described here is to show how to analyse the phenotype of human cultured macrophages. The ...

Isolation of Leukocytes from the Murine Tissues at the Maternal-Fetal Interface

Isolierung von Leukozyten aus dem Mausgeweben an der Maternal-Fetal-Schnittstelle

Immune tolerance in pregnancy requires that the immune system of the mother undergoes distinctive changes in order to accept and nurture the developing ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

Ein optimiertes Verfahren zur Isolierung und Ausbau unveränderlichen natürlichen Killer T-Zellen aus der Milz der Maus

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network

Isolierung, Charakterisierung und funktionelle Untersuchung des Zahnfleisch Immune Cell Network

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident ...

Functional Characterization of Regulatory Macrophages That Inhibit Graft-reactive Immunity

Funktionelle Charakterisierung von regulatorischen Makrophagen, die eine pfropfreaktive Immunität hemmen

Macrophage accumulation in transplanted organs has long been recognized as a feature of allograft rejection1. Immunogenic monocytes infiltrate the ...

Phenotypic Characterization of Macrophages from Rat Kidney by Flow Cytometry

Phänotypische Charakterisierung von Makrophagen aus Rattenniere mittels Durchflusszytometrie

There is increasing evidence suggesting the important role of inflammation and, subsequently, macrophages in the development and progression of renal ...

Analysis of Microglia and Monocyte-derived Macrophages from the Central Nervous System by Flow Cytometry

Analyse von Mikroglia und Monozyten-abgeleiteten Makrophagen aus dem Zentralnervensystem durch Durchflusszytometrie

Numerous studies have demonstrated the role of immune cells, in particular macrophages, in central nervous system (CNS) pathologies. There are two main ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolierung von Salmonella Typhimurium-mit Phagosom von Makrophagen

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Isolation and Characterization of Extracellular Vesicles from Adult Schistosoma japonicum

Isolation and Characterization of Extracellular Vesicles from Adult Schistosoma japonicum

Isolierung und Charakterisierung von extrazellulären Vesikel von Erwachsenen Schistosoma japonicum

Extracellular vesicles (EVs) are membranous vesicles released by a variety of cells into the extracellular microenvironment. EVs represent a population of ...