Name: an il-8 transiently transgenized mouse model for the in vivo long-term monitoring of inflammatory responses
Uploaded: 2017-07-07T12:30:00
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Questo lavoro è stato sostenuto dal Progetto FFC n. 18/2013, FFC # 29/2015 e dalla Lega Cistica Fibrosa Italiana attraverso la Federazione Italiana di Fibrosi Cistica (Associazione Veneta Lotta contro la Fibrosi Cistica Onlus).

Tutti gli esperimenti animali descritti sono stati approvati dal comitato intramurale per la sperimentazione animale del Centro Interdipartimentale di Ricerca Sperimentale presso l&#39;Università degli Studi di Verona e rispettano la Direttiva Europea 2010/63 UE, il D.Lgs 26/2014 e la revisione &quot;Guida per la cura e l&#39;uso degli animali da laboratorio&quot;, Washington, DC: National Academy Press, 1996. Questo protocollo e la sperimentazione sono stati approvati dal National Institutes of Health (n 273/15). Gli ...

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	<li>Barnes, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+approaches+to+asthma-chronic+obstructive+pulmonary+disease+overlap+syndromes.">Therapeutic approaches to asthma-chronic obstructive pulmonary disease overlap syndromes.</a> J Allergy Clin Immunol. 136 (3), 531-545 (2015).</li><li>Cohen-Cymberknoh, M., Kerem, E., Ferkol, T., Elizur, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Airway+inflammation+in+cystic+fibrosis:+molecular+mechanisms+and+clinical+implications.">Airway inflammation in cystic fibrosis: molecular mechanisms and clinical implications.</a> Thorax. 68 (12), 1157-1162 (2013).</li><li>Dhooghe, B., Noel, S., Huaux, F., Leal, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+inflammation+in+cystic+fibrosis:+pathogenesis+and+novel+therapies.">Lung inflammation in cystic fibrosis: pathogenesis and novel therapies.</a> Clin Biochem. 47 (7-8), 539-546 (2014).</li><li>Durham, A. L., Caramori, G., Chung, K. F., Adcock, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+anti-inflammatory+therapeutics+in+asthma+and+chronic+obstructive+lung+disease.">Targeted anti-inflammatory therapeutics in asthma and chronic obstructive lung disease.</a> Transl Res. 167 (1), 192-203 (2015).</li><li>Sagel, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+biomarkers+of+airway+inflammation+in+cystic+fibrosis.">Noninvasive biomarkers of airway inflammation in cystic fibrosis.</a> Curr Opin Pulm Med. 9 (6), 516-521 (2003).</li><li>Starkey, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+infectious+exacerbations+of+airway+inflammation.">Murine models of infectious exacerbations of airway inflammation.</a> Curr Opin Pharmacol. 13 (3), 337-344 (2013).</li><li>Cacalano, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+and+B+cell+expansion+in+mice+that+lack+the+murine+IL-8+receptor+homolog.">Neutrophil and B cell expansion in mice that lack the murine IL-8 receptor homolog.</a> Science. 265 (5172), 682-684 (1994).</li><li>Simonet, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+impaired+neutrophil+migration+in+mice+overexpressing+human+interleukin-8.">Long-term impaired neutrophil migration in mice overexpressing human interleukin-8.</a> J Clin Invest. 94 (3), 1310-1319 (1994).</li><li>Stellari, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+transiently+transgenized+mice+with+a+bovine+interleukin+8+(CXCL8)+promoter/luciferase+reporter+construct.">In vivo imaging of transiently transgenized mice with a bovine interleukin 8 (CXCL8) promoter/luciferase reporter construct.</a> PLoS One. 7 (6), e39716 (2012).</li><li>Stellari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+the+lung+inflammatory+response+to+Pseudomonas+aeruginosa+and+its+modulation+by+azithromycin.">In vivo imaging of the lung inflammatory response to Pseudomonas aeruginosa and its modulation by azithromycin.</a> J Transl Med. 13, 251 (2015).</li><li>Stellari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+monitoring+of+lung+inflammation+in+CFTR-deficient+mice.">In vivo monitoring of lung inflammation in CFTR-deficient mice.</a> J Transl Med. 14 (1), 226 (2016).</li><li>De Simone, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+genetic+background+influences+the+response+to+the+opportunistic+Pseudomonas+aeruginosa+infection+altering+cell-mediated+immunity+and+bacterial+replication.">Host genetic background influences the response to the opportunistic Pseudomonas aeruginosa infection altering cell-mediated immunity and bacterial replication.</a> PLoS One. 9 (9), e106873 (2014).</li></ol>

In un precedente lavoro 11 , è stato mostrato un contrasto tra i marcatori BLI e BAL dipendenti da bIL-8-Luc. Si è basata sul grado differenziale di sensibilità all&#39;interno dei ceppi del mouse 12 . Per questa ragione, la prima applicazione del modello bIL-8-Luc su un diverso ceppo di topi richiede uno studio iniziale della risposta infiammatoria, sia in termini di BLI che di marcatori infiammatori più standardizzati. La trasfezione dei ...

Malattie polmonari croniche, come l&#39;asma, la malattia polmonare cronica ostruttiva (BPCO), la fibrosi cistica (CF) e la bronchiectasia, sono caratterizzati da infiammazioni delle vie aeree. L&#39;infiammazione delle vie aeree è caratterizzata da edema, infiltrazione cellulare, linfocita T e attivazione delle cellule mastiche, aumento delle secrezioni delle vie aeree e deposizione eccessiva di collagene. CF è un disturbo multisystem e la sua principale causa di mortalità e morbilità è l&#39;infezione batterica polmonare con aggravamento dell&#39;esacerbazione polmonare. Il declino della funzione polmonare prevede un risultato significativamente più povero 1 , 2 , 3 , 4 . Lo stato infiammatorio del tratto respiratorio è solitamente osservato attraverso la valutazione di marcatori immunologici reclutati durante il processo infiammatorio in materiale derivato dalle vie aeree inferiori e superiori, come l&#39;espettorato, che fornisce resistenza variabileULT. Le broncoscopie sono anche eseguite 5 . I modelli murini sono strumenti preziosi per indagare la patogenesi e l&#39;evoluzione delle malattie caratterizzate da infiammazioni delle vie aeree e per i quali non sono ancora stati identificati trattamenti o cure efficaci. I modelli animali di infezione polmonare e infiammazione sono stati utilizzati per studiare l&#39;interazione tra asma e patogeno, compreso il ruolo di sostanze chimiche che simulano le condizioni umane ( es. Esposizione al fumo di sigarette, LPS, elastasi, ovalbumina, poli I: C ecc. Nonché combinazioni di quanto sopra) 6 . La misura dei parametri legati all&#39;infiammazione richiede il sacrificio degli animali, in quanto sono necessari approcci invasivi per misurare fattori quali il carico batterico, le citochine nei polmoni e il fluido di lavaggio broncoalveolare (BAL). Inoltre, gli esami istologici sono spesso necessari. La possibilità di ottenere informazioni sulla cinetica di risposta infiammatoria richiede l&#39;uso di numTopi erosi. Pertanto, una tecnica che consentirebbe di ottenere tali informazioni senza la necessità di sacrificare gli animali è preziosa su basi tecniche, etiche, economiche e operative. IL-8 è un giocatore essenziale nel processo infiammatorio, recluta leucociti al tessuto infiammato. Rappresenta una lettura molecolare per lo studio dell&#39;attivazione della via infiammatoria. MIP-2 e KC possono essere omologhi funzionali di umano IL-8 nei topi. I topi esprimono solo un potenziale recettore IL-8, un omologo del CXCR2 umano 7 , 8 , ma sono in grado di modulare un promotore di gene ET-8 eterologo che guida un gene reporter. Un modello murino di infiammazione polmonare è stato recentemente sviluppato dopo l&#39;osservazione che un topo bovino IL-8 promotore / luciferasi reporter construct può essere transactivated nei topi. Questa caratteristica consente l&#39;utilizzo della bioluminescenza imaging (BLI) per monitorare la risposta infiammatoria nel vivere unNomi 9 . Questo modello è stato adattato per studiare l&#39;infiammazione attivata da esoproduzioni batteriche ( ad es. LPS o prodotti rilasciati da ceppi batterici) o TNFalfa 10 , 11 . Il processo di scoperta di droga è incentrato sullo sviluppo e l&#39;ottimizzazione di vecchie e nuove molecole antinfiammatorie che possono trattare le malattie polmonari, come CF, asma e BPCO. Queste nuove entità chimiche devono essere testate rapidamente e convenientemente in modelli animali che possono essere collegati a specifici fenotipi clinici per facilitare la progettazione di studi clinici intelligenti.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1536">
	<tbody>
		<tr height="30">
			<td height="30" style="height:30px;width:347px;">FMT 2500 Fluorescence Tomography System</td>
			<td style="width:457px;">Perkin Elmer Inc.</td>
			<td style="width:147px;">Experimental Builder</td>
			<td style="width:587px;"></td>
		</tr>
		<tr height="30">
			<td height="30" style="height:30px;">IVIS Lumina serie II Pre-clinical In Vivo Imaging System</td>
			<td style="width:457px;">Perkin Elmer Inc.</td>
			<td>Experimental Builder</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">MMPsense 750 FAST</td>
			<td style="width:457px;">Perkin Elmer Inc.</td>
			<td style="width:147px;">NEV10001EX</td>
			<td>Protect from light, store the probe at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Female inbred BalbC</td>
			<td style="width:457px;">Harlan Laboratories Italy</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Prior to use, animals were acclimatized for at least 5 days to the local vivarium conditions</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">bIL-8-Luc plasmid</td>
			<td style="width:457px;">Department of Medical Veterinary Science, University of Parma, Italy</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Store the plasmid at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">pGL3basic vector</td>
			<td style="width:457px;">Promega</td>
			<td style="width:147px;">E1751</td>
			<td>Store the vector at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">JetPEI DNA transfection reagent</td>
			<td style="width:457px;">Polyplus transfection</td>
			<td style="width:147px;">201B-001G</td>
			<td>The DNA and JetPEI mix was formulated with a final N/P ratio of 7</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">D-luciferin potassium salt 1g</td>
			<td style="width:457px;">Perkin Elmer Inc.</td>
			<td align="right" style="width:147px;">122796</td>
			<td>Protect from light, store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Living Image software</td>
			<td style="width:457px;">Caliper Life Sciences,</td>
			<td>Experimental Builder</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:457px;">ESTEVE spa</td>
			<td style="width:147px;">571329.8</td>
			<td>Do not inhale</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Bio-Plex Cytokine Assay Kit</td>
			<td style="width:457px;">Bio-Rad Laboratories</td>
			<td style="width:147px;">M60-009RDPD</td>
			<td>Store the unopened kit at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Automated cell counter</td>
			<td style="width:457px;">Dasit XT 1800J</td>
			<td>Experimental Builder</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Penn-century model DP-4M Dry power insufflator</td>
			<td style="width:457px;">Penn-century</td>
			<td>DPM-EXT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Gas anesthesia system XGI-8</td>
			<td style="width:457px;">Perkin Elmer Inc.</td>
			<td>Experimental Builder</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">PE190 micro medical tubing</td>
			<td style="width:457px;">2biological instruments snc</td>
			<td style="width:147px;">BB31695-PE/8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Syringe without needle 5ml</td>
			<td style="width:457px;">Terumo</td>
			<td style="width:147px;">SS*05SE1</td>
			<td>Cut the boards of the piston by a scissors</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Hamilton 0,10 ml (model 1710)</td>
			<td style="width:457px;">Gastight</td>
			<td align="right">81022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Discofix 3-way Stopcock</td>
			<td style="width:457px;">Braun</td>
			<td align="right">4095111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Syringe with needle 1ml</td>
			<td style="width:457px;">Pic solution</td>
			<td align="right">3,071,260,300,320</td>
			<td>Use without needle</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Plastic feeding tubes 18ga x 50mm</td>
			<td style="width:457px;">2biological instruments snc</td>
			<td>FTP-18-50</td>
			<td>Cut obliquely the tip&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an il-8 transiently transgenized mouse model for the in vivo long-term monitoring of inflammatory responses

L&#39;infiammazione delle vie aeree è spesso associata a infezioni batteriche e rappresenta un determinante importante della malattia polmonare. La determinazione in vivo delle capacità proinfiammatorie di vari fattori è impegnativa e richiede procedure terminali, come lavaggio broncoalveolare e rimozione dei polmoni per analisi in situ , escludendo la visualizzazione longitudinale nello stesso topo. Qui, l&#39;infiammazione del polmone è indotta attraverso l&#39;instillazione intratracheale del supernatante di coltura Pseudomonas aeruginosa (SN) in topi transientemente transgeniati che esprimono il gene reporter del luciferasi sotto il controllo di un promotore bovino eterologo IL-8. L&#39;espressione della luciferasi nel polmone è controllata dall&#39;analisi bioluminescente (BLI) in vivo su un tempo di 2,5 a 48 ore dopo l&#39;instillazione. La procedura può essere ripetuta più volte entro 2 - 3 mesi, consentendo così la valutazione della risposta infiammatoria negli stessi topi conLa necessità di terminare gli animali. Questo approccio consente di monitorare in tempo reale i fattori pro e anti-infiammatori che agiscono nel polmone e sembra adatto per studi funzionali e farmacologici.

Il modello del topo transgenico bIL-8-Luc è stato utilizzato per il monitoraggio in vivo dell&#39;infiammazione polmonare nei topi sfidati con supernatante batterico concentrato (30x) contenente fattori di virulenza di secrezione. La risposta infiammatoria indotta è stata rilevata dall&#39;immagine in vivo come aumento del segnale BLI. L&#39;attività proinfiammatoria è stata chiaramente rilevabile dopo 2,5 h post-instillazione, anche se il segnale BLI ha raggiunto i...

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An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

Il metodo descritto qui consente la visualizzazione dell&#39;attivazione dell&#39;infiammazione dipendente dal promotore IL-8 nei polmoni dei topi attraverso la bioluminescenza non invasiva (BLI). Lo stesso animale può essere sottoposto a più volte BLI per un massimo di due mesi a partire dal momento della consegna del costruttore di reporter luciferasi.

Un modello di topo transgenizzato IL-8 per il<em&gt; In Vivo</em&gt; Monitoraggio a lungo termine delle risposte infiammatorie

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

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Un modello ortotopico di carcinoma ovarico sieroso in topi immunocompetenti per In vivo Tumore Imaging e monitoraggio del tumore Risposte immunitarie

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

Ricerca

Immunologia e infezioni

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions

L&#39;uso del Modello EpiAirway per Caratterizzare a lungo termine interazioni ospite-patogeno

Nontypeable Haemophilus influenzae  (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

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Induzione di Graft-versus-host disease e<em&gt; In Vivo</em&gt; T monitoraggio cellulare Utilizzando un MHC-abbinato modello murino

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Differentiating Functional Roles of Gene Expression from Immune and Non-immune Cells in Mouse Colitis by Bone Marrow Transplantation

Differenziare i ruoli funzionali di espressione genica di cellule immunitarie e non immunitarie in Colite mouse da trapianto di midollo osseo

To understand the role of a gene in the development of colitis, we compared the responses of wild-type mice and gene-of-interest deficient knockout mice ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

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Caratterizzazione delle risposte infiammatorie durante la colonizzazione intranasale con streptococco pneumoniae

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

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Long Term cronica<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Infezione delle vie aeree nei topi

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

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L&#39;uso di fluorescenti target matrici per la valutazione delle cellule T risposte<em&gt; In vivo</em

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

Application of Long-term cultured Interferon-&#947; Enzyme-linked Immunospot Assay for Assessing Effector and Memory T Cell Responses in Cattle

Application of Long-term cultured Interferon-ÃƒÅ½Ã‚Â³ Enzyme-linked Immunospot Assay for Assessing Effector and Memory T Cell Responses in Cattle

Applicazione di lungo termine colta interferone-γ Enzyme Linked immunospot Assay per la valutazione effettori e memoria delle cellule T risposte a Bovino

Effector and memory T cells are generated through developmental programing of na&#239;ve cells following antigen recognition. If the infection is ...

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

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Un<em&gt; In Vitro</em&gt; Modello per la misurazione Risposte immunitarie Malaria nel contesto della coinfezione da HIV

Malaria and HIV co-infection is a growing health priority. However, most research on malaria or HIV currently focuses on each infection individually. ...

Increased Recovery Time and Decreased LPS Administration to Study the Vagus Nerve Stimulation Mechanisms in Limited Inflammatory Responses

Aumento tempo di recupero e Diminuzione LPS Per studiare il nervo vago meccanismi di stimolazione in risposta infiammatoria limitati

Inflammation is a local response to infection and tissue damage mediated by activated macrophages, monocytes, and other immune cells that release ...