Name: an il-8 transiently transgenized mouse model for the in vivo long-term monitoring of inflammatory responses
Uploaded: 2017-07-07T12:30:00
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이 작품은 이탈리아 낭성 섬유증 재단 프로젝트 FFC # 18 / 2013, FFC # 29 / 2015 및 Veneto Branch-Associazione Veneta Lotta contro la Fibrosi Cistica Onlus를 통한 이탈리아 낭포 성 섬유종 연맹의 지원을 받았습니다.

기술 된 모든 동물 실험은 베로나 대학 (University of Verona)의 실험 연구 서비스 센터 (Interdepartmental Center of Experimental Research Service)의 동물 실험을위한 동물 실험을위한 교내 동물 복지위원회의 승인을 받았으며, European Directive 2010/63 UE, Italian D.Lgs 26/2014 및 개정 된 &quot;실험실 동물의 관리 및 사용 안내서&quot;, 워싱턴 DC : National Academy Press, 1996.이 프로토콜과 실험은 국립 보건원 (National Institutes of Health...

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	<li>Barnes, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+approaches+to+asthma-chronic+obstructive+pulmonary+disease+overlap+syndromes.">Therapeutic approaches to asthma-chronic obstructive pulmonary disease overlap syndromes.</a> J Allergy Clin Immunol. 136 (3), 531-545 (2015).</li><li>Cohen-Cymberknoh, M., Kerem, E., Ferkol, T., Elizur, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Airway+inflammation+in+cystic+fibrosis:+molecular+mechanisms+and+clinical+implications.">Airway inflammation in cystic fibrosis: molecular mechanisms and clinical implications.</a> Thorax. 68 (12), 1157-1162 (2013).</li><li>Dhooghe, B., Noel, S., Huaux, F., Leal, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+inflammation+in+cystic+fibrosis:+pathogenesis+and+novel+therapies.">Lung inflammation in cystic fibrosis: pathogenesis and novel therapies.</a> Clin Biochem. 47 (7-8), 539-546 (2014).</li><li>Durham, A. L., Caramori, G., Chung, K. F., Adcock, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+anti-inflammatory+therapeutics+in+asthma+and+chronic+obstructive+lung+disease.">Targeted anti-inflammatory therapeutics in asthma and chronic obstructive lung disease.</a> Transl Res. 167 (1), 192-203 (2015).</li><li>Sagel, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+biomarkers+of+airway+inflammation+in+cystic+fibrosis.">Noninvasive biomarkers of airway inflammation in cystic fibrosis.</a> Curr Opin Pulm Med. 9 (6), 516-521 (2003).</li><li>Starkey, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+infectious+exacerbations+of+airway+inflammation.">Murine models of infectious exacerbations of airway inflammation.</a> Curr Opin Pharmacol. 13 (3), 337-344 (2013).</li><li>Cacalano, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+and+B+cell+expansion+in+mice+that+lack+the+murine+IL-8+receptor+homolog.">Neutrophil and B cell expansion in mice that lack the murine IL-8 receptor homolog.</a> Science. 265 (5172), 682-684 (1994).</li><li>Simonet, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+impaired+neutrophil+migration+in+mice+overexpressing+human+interleukin-8.">Long-term impaired neutrophil migration in mice overexpressing human interleukin-8.</a> J Clin Invest. 94 (3), 1310-1319 (1994).</li><li>Stellari, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+transiently+transgenized+mice+with+a+bovine+interleukin+8+(CXCL8)+promoter/luciferase+reporter+construct.">In vivo imaging of transiently transgenized mice with a bovine interleukin 8 (CXCL8) promoter/luciferase reporter construct.</a> PLoS One. 7 (6), e39716 (2012).</li><li>Stellari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+the+lung+inflammatory+response+to+Pseudomonas+aeruginosa+and+its+modulation+by+azithromycin.">In vivo imaging of the lung inflammatory response to Pseudomonas aeruginosa and its modulation by azithromycin.</a> J Transl Med. 13, 251 (2015).</li><li>Stellari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+monitoring+of+lung+inflammation+in+CFTR-deficient+mice.">In vivo monitoring of lung inflammation in CFTR-deficient mice.</a> J Transl Med. 14 (1), 226 (2016).</li><li>De Simone, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+genetic+background+influences+the+response+to+the+opportunistic+Pseudomonas+aeruginosa+infection+altering+cell-mediated+immunity+and+bacterial+replication.">Host genetic background influences the response to the opportunistic Pseudomonas aeruginosa infection altering cell-mediated immunity and bacterial replication.</a> PLoS One. 9 (9), e106873 (2014).</li></ol>

이전 연구 11 에서 bIL-8-Luc 의존성 BLI와 BAL 마커 사이의 대조가 나타났다. 그것은 마우스 균주 내 민감도 차이에 의존했다. 이러한 이유 때문에 bIL-8-Luc 모델을 다른 마우스에 처음 적용하기 위해서는 BLI와 표준화 된 염증 표지자 모두에서 염증 반응에 대한 초기 연구가 필요합니다. 마우스 transfection은 경미한 폐 염증과 DNA 주입 후 3 ~ 4 일까지 BLI가 검출 할 수...

천식, 만성 폐색 성 폐 질환 (COPD), 낭포 성 섬유증 (CF) 및 기관지 확장증과 같은 만성 폐 질환은기도 염증을 특징으로합니다. 기도 염증은 부종, 세포 침투, T 임파구 및 비만 세포 활성화,기도 분비 증가 및 과도한 콜라겐 침착을 특징으로합니다. CF는 다 체계 장애로 사망률 및 이환율의 주요 원인은 폐 악화의 증가로 인한 폐 세균 감염입니다. 폐 기능의 저하는 결과 1 , 2 , 3 , 4를 예견한다. 호흡기의 염증 상태는 일반적으로 가래와 같은 하부기도와 상부기도로부터 유도 된 물질에서 염증 과정 동안 모집 된 면역 마커의 평가를 통해 관찰되며,ults. 기관지 내시경도 시행됩니다 5 . Murine 모델은기도 염증으로 특징 지어지는 질병의 발병 기전과 진화를 조사하고 효과적인 치료법이나 치료법이 아직 밝혀지지 않은 유용한 도구입니다. 폐 감염과 염증의 동물 모델은 천식과 숙주 - 병원체 상호 작용을 연구하는데 사용되어왔다. 예를 들어, 인간의 상태 ( 예 : 담배 연기 노출, LPS, 엘라 스타 제, 오발 부민, 폴리 I : C 등 )를 모방하는 화학 물질의 역할 물론 위의 조합으로) 6 . 염증 관련 매개 변수를 측정하려면 박테리아 부하, 폐의 사이토 카인 및 기관지 폐포 세척액 (BAL)과 같은 요인을 측정하기 위해 침입 접근이 필요하므로 동물을 희생해야합니다. 또한 조직 검사가 종종 필요합니다. 염증 반응 속도론에 대한 정보를 얻을 수있는 가능성은 num쥐. 따라서 동물을 희생 할 필요없이 이러한 정보를 얻을 수있는 기술은 기술적, 윤리적, 경제적 및 운영상의 기반에 가치가 있습니다. IL-8은 염증 과정에서 필수적인 역할을하며 백혈구를 염증 조직에 모집합니다. 그것은 염증 경로 활성화 연구를위한 분자 판독 값을 나타냅니다. MIP-2 및 KC는 마우스에서 인간 IL-8의 기능 상 동체 일 수있다. 마우스는 단지 하나의 가능한 IL-8 수용체, 인간 CXCR2 7,8 의 동족체를 발현하지만, 이들은 리포터 유전자를 유도하는 이종 IL-8 유전자 프로모터를 조절할 수있다. 폐 염증 쥐 모델은 소 IL-8 프로모터 / 루시퍼 라 아제 리포터 구조물이 마우스에서 트랜스 활성화 될 수 있다는 관찰 후에 최근에 개발되었다. 이 기능을 통해 생체 내 이미징 (BLI)을 통해 생체 내 염증 반응을 모니터링 할 수 있습니다.nimals 9 . 이 모델은 세균 exoproducts ( 예 : LPS 또는 세균성 균주에 의해 방출 된 제품) 또는 TNFα 10,11에 의해 유발 된 염증을 연구하기 위해 채택되었습니다. 약물 발견 과정은 CF, 천식 및 만성 폐쇄성 폐 질환과 같은 폐 질환을 치료할 수있는 새로운 항 염증 분자의 개발 및 최적화에 중점을두고 있습니다. 이 새로운 화학 물질은 똑똑한 임상 시험의 설계를 용이하게하기 위해 특정 임상 표현형과 연결될 수있는 동물 모델에서 신속하고 편리하게 시험되어야합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1536">
	<tbody>
		<tr height="30">
			<td height="30" style="height:30px;width:347px;">FMT 2500 Fluorescence Tomography System</td>
			<td style="width:457px;">Perkin Elmer Inc.</td>
			<td style="width:147px;">Experimental Builder</td>
			<td style="width:587px;"></td>
		</tr>
		<tr height="30">
			<td height="30" style="height:30px;">IVIS Lumina serie II Pre-clinical In Vivo Imaging System</td>
			<td style="width:457px;">Perkin Elmer Inc.</td>
			<td>Experimental Builder</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">MMPsense 750 FAST</td>
			<td style="width:457px;">Perkin Elmer Inc.</td>
			<td style="width:147px;">NEV10001EX</td>
			<td>Protect from light, store the probe at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Female inbred BalbC</td>
			<td style="width:457px;">Harlan Laboratories Italy</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Prior to use, animals were acclimatized for at least 5 days to the local vivarium conditions</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">bIL-8-Luc plasmid</td>
			<td style="width:457px;">Department of Medical Veterinary Science, University of Parma, Italy</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Store the plasmid at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">pGL3basic vector</td>
			<td style="width:457px;">Promega</td>
			<td style="width:147px;">E1751</td>
			<td>Store the vector at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">JetPEI DNA transfection reagent</td>
			<td style="width:457px;">Polyplus transfection</td>
			<td style="width:147px;">201B-001G</td>
			<td>The DNA and JetPEI mix was formulated with a final N/P ratio of 7</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">D-luciferin potassium salt 1g</td>
			<td style="width:457px;">Perkin Elmer Inc.</td>
			<td align="right" style="width:147px;">122796</td>
			<td>Protect from light, store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Living Image software</td>
			<td style="width:457px;">Caliper Life Sciences,</td>
			<td>Experimental Builder</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:457px;">ESTEVE spa</td>
			<td style="width:147px;">571329.8</td>
			<td>Do not inhale</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Bio-Plex Cytokine Assay Kit</td>
			<td style="width:457px;">Bio-Rad Laboratories</td>
			<td style="width:147px;">M60-009RDPD</td>
			<td>Store the unopened kit at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Automated cell counter</td>
			<td style="width:457px;">Dasit XT 1800J</td>
			<td>Experimental Builder</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Penn-century model DP-4M Dry power insufflator</td>
			<td style="width:457px;">Penn-century</td>
			<td>DPM-EXT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Gas anesthesia system XGI-8</td>
			<td style="width:457px;">Perkin Elmer Inc.</td>
			<td>Experimental Builder</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">PE190 micro medical tubing</td>
			<td style="width:457px;">2biological instruments snc</td>
			<td style="width:147px;">BB31695-PE/8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Syringe without needle 5ml</td>
			<td style="width:457px;">Terumo</td>
			<td style="width:147px;">SS*05SE1</td>
			<td>Cut the boards of the piston by a scissors</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Hamilton 0,10 ml (model 1710)</td>
			<td style="width:457px;">Gastight</td>
			<td align="right">81022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Discofix 3-way Stopcock</td>
			<td style="width:457px;">Braun</td>
			<td align="right">4095111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Syringe with needle 1ml</td>
			<td style="width:457px;">Pic solution</td>
			<td align="right">3,071,260,300,320</td>
			<td>Use without needle</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Plastic feeding tubes 18ga x 50mm</td>
			<td style="width:457px;">2biological instruments snc</td>
			<td>FTP-18-50</td>
			<td>Cut obliquely the tip&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an il-8 transiently transgenized mouse model for the in vivo long-term monitoring of inflammatory responses

기도 염증은 세균 감염과 관련이 있으며 폐 질환의 주요 결정 인자입니다. 여러 요인의 염증 유발 능력을 생체 내에서 측정하는 것은 어려우며 기관지 폐포 세척 및 동일 장소 에서 종양 시각화를 배제한 현장 분석을위한 폐 제거와 같은 말단 절차가 필요합니다. 여기에서, 폐 염증은 이종 IL-8 bovine promoter의 조절하에 루시퍼 라 아제 리포터 유전자를 발현하는 transiently transgenized mice에서 Pseudomonas aeruginosa 배양 상등액 (SN)의 기관 내 점적을 통해 유도된다. 폐에서의 루시퍼 라제 발현은 점안 후 2.5-48 시간의 시간대 에 생체 내 생물 발광 이미지 (BLI) 분석에 의해 모니터링된다. 이 절차는 2 ~ 3 개월 이내에 여러 번 반복 할 수 있으므로 동일한 마우스에서 염증 반응을 평가할 수 있습니다동물을 해산 할 필요가있다. 이 접근법은 실시간으로 폐에서 작용하는 항 염증 인자의 모니터링을 허용하며, 기능적 및 약리학 적 연구에 적합하다.

bIL-8-Luc 일시적 형질 전환 마우스 모델은 분비 된 독성 인자를 함유하는 농축 된 박테리아 상등액 (30x)으로 항원 투여 된 마우스에서 폐 염증의 생체 내 모니터링을 위해 사용되었다. 유도 된 염증 반응은 BLI 신호의 증가로서 생체 내 이미징에 의해 검출 가능 하였다. BLI 시그널은 5 시간에서 24 시간 사이 최고 피크에 도달 했음에도 불구하고 프로 염증성 활성?...

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An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

여기에 설명 된 방법은 비 침습적 bioluminescence 이미징 (BLI)을 통해 생쥐의 폐에서 IL-8 프로모터 의존 염증 활성화의 시각화 수 있습니다. 동일한 동물을 루시퍼 레이즈 리포터 구조물의 전달 시점으로부터 최대 2 개월 동안 BLI에 여러 번 투여 할 수있다.

IL-8 transiently Transgenized 마우스 모델<em&gt; In Vivo</em&gt; 염증 반응의 장기 모니터링

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

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에 대한 면역 적격 마우스에 묽은 난소암의 Orthotopic 모델 생체내에</em종양 면역 응답> 종양 이미징 및 모니터링

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

연구

면역학 및 감염병학

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions

장기 호스트 병원체 상호 작용을 특성화에 대한 EpiAirway 모델의 사용

Nontypeable Haemophilus influenzae  (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

이식 - 대 - 호스트 질병의 유도 및<em&gt; 생체 내</emMHC 검색 손쥐 모델을 사용&gt; T 셀 모니터링

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Differentiating Functional Roles of Gene Expression from Immune and Non-immune Cells in Mouse Colitis by Bone Marrow Transplantation

골수 이식으로 마우스 대장염에서 면역 및 비 면역 세포에서 유전자 발현의 기능 역할을 차별화

To understand the role of a gene in the development of colitis, we compared the responses of wild-type mice and gene-of-interest deficient knockout mice ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

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연쇄상 구균 폐렴으로 비강 내 식민지 화 중 염증 반응의 특성화

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

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장기 만성<em&gt; 녹농균</em마우스의&gt;기도 감염

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

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T 세포 반응의 평가를위한 형광 대상 배열의 사용<em&gt; 생체 내</em

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

Application of Long-term cultured Interferon-&#947; Enzyme-linked Immunospot Assay for Assessing Effector and Memory T Cell Responses in Cattle

Application of Long-term cultured Interferon-ÃƒÅ½Ã‚Â³ Enzyme-linked Immunospot Assay for Assessing Effector and Memory T Cell Responses in Cattle

소에 이펙터 및 메모리 T 세포 반응을 평가하기위한 장기 배양 인터페론-γ 효소 링크 된 Immunospot 분석의 응용 프로그램

Effector and memory T cells are generated through developmental programing of na&#239;ve cells following antigen recognition. If the infection is ...

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

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<em&gt; 체외</em&gt; HIV 공동 감염의 맥락에서 말라리아에 면역 반응을 측정하기위한 모델

Malaria and HIV co-infection is a growing health priority. However, most research on malaria or HIV currently focuses on each infection individually. ...

Increased Recovery Time and Decreased LPS Administration to Study the Vagus Nerve Stimulation Mechanisms in Limited Inflammatory Responses

복구 시간 증가 및 제한 염증 반응에서 미주 신경 자극 메커니즘을 연구에 LPS 관리를 감소

Inflammation is a local response to infection and tissue damage mediated by activated macrophages, monocytes, and other immune cells that release ...