Name: an il-8 transiently transgenized mouse model for the in vivo long-term monitoring of inflammatory responses
Uploaded: 2017-07-07T12:30:00
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Este trabajo fue apoyado por el FFC # 18/2013 de la Fundación de Fibrosis Quística de Italia, FFC # 29/2015 y por la Liga Italiana de Fibrosis Quística a través de la Rama de Veneto-Associazione Veneta Lotta contro la Fibrosi Cistica Onlus.

Todos los experimentos con animales descritos fueron aprobados por el Comité Interministerial de Experimentación Animal del Centro Interdepartamental de Investigación Experimental de la Universidad de Verona y aprobados por el Comité de Bienestar Animal para la experimentación animal y cumplen con la Directiva Europea 2010/63 UE, la D.Lgs 26/2014 y la Revisada &quot;Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio&quot;, Washington, DC: National Academy Press, 1996. Este protocolo y experimentación fueron ap...

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	<li>Barnes, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+approaches+to+asthma-chronic+obstructive+pulmonary+disease+overlap+syndromes.">Therapeutic approaches to asthma-chronic obstructive pulmonary disease overlap syndromes.</a> J Allergy Clin Immunol. 136 (3), 531-545 (2015).</li><li>Cohen-Cymberknoh, M., Kerem, E., Ferkol, T., Elizur, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Airway+inflammation+in+cystic+fibrosis:+molecular+mechanisms+and+clinical+implications.">Airway inflammation in cystic fibrosis: molecular mechanisms and clinical implications.</a> Thorax. 68 (12), 1157-1162 (2013).</li><li>Dhooghe, B., Noel, S., Huaux, F., Leal, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+inflammation+in+cystic+fibrosis:+pathogenesis+and+novel+therapies.">Lung inflammation in cystic fibrosis: pathogenesis and novel therapies.</a> Clin Biochem. 47 (7-8), 539-546 (2014).</li><li>Durham, A. L., Caramori, G., Chung, K. F., Adcock, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+anti-inflammatory+therapeutics+in+asthma+and+chronic+obstructive+lung+disease.">Targeted anti-inflammatory therapeutics in asthma and chronic obstructive lung disease.</a> Transl Res. 167 (1), 192-203 (2015).</li><li>Sagel, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+biomarkers+of+airway+inflammation+in+cystic+fibrosis.">Noninvasive biomarkers of airway inflammation in cystic fibrosis.</a> Curr Opin Pulm Med. 9 (6), 516-521 (2003).</li><li>Starkey, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+infectious+exacerbations+of+airway+inflammation.">Murine models of infectious exacerbations of airway inflammation.</a> Curr Opin Pharmacol. 13 (3), 337-344 (2013).</li><li>Cacalano, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+and+B+cell+expansion+in+mice+that+lack+the+murine+IL-8+receptor+homolog.">Neutrophil and B cell expansion in mice that lack the murine IL-8 receptor homolog.</a> Science. 265 (5172), 682-684 (1994).</li><li>Simonet, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+impaired+neutrophil+migration+in+mice+overexpressing+human+interleukin-8.">Long-term impaired neutrophil migration in mice overexpressing human interleukin-8.</a> J Clin Invest. 94 (3), 1310-1319 (1994).</li><li>Stellari, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+transiently+transgenized+mice+with+a+bovine+interleukin+8+(CXCL8)+promoter/luciferase+reporter+construct.">In vivo imaging of transiently transgenized mice with a bovine interleukin 8 (CXCL8) promoter/luciferase reporter construct.</a> PLoS One. 7 (6), e39716 (2012).</li><li>Stellari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+the+lung+inflammatory+response+to+Pseudomonas+aeruginosa+and+its+modulation+by+azithromycin.">In vivo imaging of the lung inflammatory response to Pseudomonas aeruginosa and its modulation by azithromycin.</a> J Transl Med. 13, 251 (2015).</li><li>Stellari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+monitoring+of+lung+inflammation+in+CFTR-deficient+mice.">In vivo monitoring of lung inflammation in CFTR-deficient mice.</a> J Transl Med. 14 (1), 226 (2016).</li><li>De Simone, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+genetic+background+influences+the+response+to+the+opportunistic+Pseudomonas+aeruginosa+infection+altering+cell-mediated+immunity+and+bacterial+replication.">Host genetic background influences the response to the opportunistic Pseudomonas aeruginosa infection altering cell-mediated immunity and bacterial replication.</a> PLoS One. 9 (9), e106873 (2014).</li></ol>

En un trabajo previo 11 , se mostró un contraste entre los marcadores BLI y BAL dependientes de bIL-8-Luc. Se basó en el grado diferencial de sensibilidad dentro de cepas de ratón [ 12] . Por esta razón, la primera aplicación del modelo bIL-8-Luc a una cepa de ratón diferente requiere un estudio inicial de la respuesta inflamatoria, tanto en términos de BLI como de marcadores inflamatorios más estandarizados. La transfección de ratones...

Las enfermedades pulmonares crónicas, como el asma, la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), la fibrosis quística (fibrosis quística) y la bronquiectasia, se caracterizan por la inflamación de las vías respiratorias. La inflamación de las vías respiratorias se caracteriza por edema, infiltración celular, linfocitos T y activación de los mastocitos, aumento de las secreciones de las vías respiratorias y deposición excesiva de colágeno. La CF es un trastorno multisistémico, y su principal causa de mortalidad y morbilidad es la infección bacteriana pulmonar con aumento de la exacerbación pulmonar. La disminución de la función pulmonar predice un resultado significativamente peor 1 , 2 , 3 , 4 . El estado inflamatorio del tracto respiratorio suele observarse a través de la evaluación de marcadores inmunológicos reclutados durante el proceso inflamatorio en material derivado de las vías respiratorias inferiores y superiores, como el esputo, que proporciona res variablesUlts. También se realizan broncoscopias 5 . Los modelos murinos son herramientas valiosas para investigar la patogénesis y la evolución de enfermedades caracterizadas por inflamación de las vías respiratorias y para las que aún no se han identificado tratamientos o curas eficaces. Se han utilizado modelos animales de infección pulmonar e inflamación para estudiar las interacciones entre el asma y el huésped, incluyendo el papel de los químicos que simulan las condiciones humanas ( por ejemplo, exposición al humo del cigarrillo, LPS, elastasa, ovalbúmina, poli I: C etc. Así como combinaciones de los anteriores) 6 . La medición de los parámetros relacionados con la inflamación requiere el sacrificio de los animales, ya que se requieren abordajes invasivos para medir factores tales como carga bacteriana, citocinas en los pulmones y líquido de lavado broncoalveolar (BAL) recogido. Además, a menudo se requieren exámenes histológicos. La posibilidad de obtener información sobre la cinética de respuesta inflamatoria requiere el uso deErous. Por lo tanto, una técnica que permita obtener dicha información sin la necesidad de sacrificar los animales es valiosa en bases técnicas, éticas, económicas y operativas. La IL-8 es un agente esencial en el proceso inflamatorio, reclutando leucocitos al tejido inflamado. Representa una lectura molecular para el estudio de la activación de la vía inflamatoria. MIP-2 y KC pueden ser homólogos funcionales de IL-8 humana en ratones. Los ratones expresan sólo un potencial receptor de IL-8, un homólogo de CXCR2 humano 7 , 8 , pero son capaces de modular un promotor del gen de IL-8 heterólogo que conduce un gen reportero. Recientemente se ha desarrollado un modelo murino de inflamación pulmonar después de la observación de que un promotor de IL-8 bovino / reportero de luciferasa puede ser transactivado en ratones. Esta característica permite la utilización de imágenes de bioluminiscencia (BLI) para controlar la respuesta inflamatoria en la vida aNimals 9 . Este modelo ha sido adaptado para estudiar la inflamación desencadenada por exoproductos bacterianos ( por ejemplo, LPS o productos liberados por cepas bacterianas) o TNFalfa 10 , 11 . El proceso de descubrimiento de fármacos se centra en el desarrollo y optimización de antiguas y nuevas moléculas anti-inflamatorias que pueden tratar enfermedades pulmonares, como la FC, el asma y la EPOC. Estas nuevas entidades químicas deben ser rápidamente y convenientemente probadas en modelos animales que pueden estar vinculados a fenotipos clínicos específicos con el fin de facilitar el diseño de ensayos clínicos inteligentes.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1536">
	<tbody>
		<tr height="30">
			<td height="30" style="height:30px;width:347px;">FMT 2500 Fluorescence Tomography System</td>
			<td style="width:457px;">Perkin Elmer Inc.</td>
			<td style="width:147px;">Experimental Builder</td>
			<td style="width:587px;"></td>
		</tr>
		<tr height="30">
			<td height="30" style="height:30px;">IVIS Lumina serie II Pre-clinical In Vivo Imaging System</td>
			<td style="width:457px;">Perkin Elmer Inc.</td>
			<td>Experimental Builder</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">MMPsense 750 FAST</td>
			<td style="width:457px;">Perkin Elmer Inc.</td>
			<td style="width:147px;">NEV10001EX</td>
			<td>Protect from light, store the probe at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Female inbred BalbC</td>
			<td style="width:457px;">Harlan Laboratories Italy</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Prior to use, animals were acclimatized for at least 5 days to the local vivarium conditions</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">bIL-8-Luc plasmid</td>
			<td style="width:457px;">Department of Medical Veterinary Science, University of Parma, Italy</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Store the plasmid at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">pGL3basic vector</td>
			<td style="width:457px;">Promega</td>
			<td style="width:147px;">E1751</td>
			<td>Store the vector at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">JetPEI DNA transfection reagent</td>
			<td style="width:457px;">Polyplus transfection</td>
			<td style="width:147px;">201B-001G</td>
			<td>The DNA and JetPEI mix was formulated with a final N/P ratio of 7</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">D-luciferin potassium salt 1g</td>
			<td style="width:457px;">Perkin Elmer Inc.</td>
			<td align="right" style="width:147px;">122796</td>
			<td>Protect from light, store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Living Image software</td>
			<td style="width:457px;">Caliper Life Sciences,</td>
			<td>Experimental Builder</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:457px;">ESTEVE spa</td>
			<td style="width:147px;">571329.8</td>
			<td>Do not inhale</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Bio-Plex Cytokine Assay Kit</td>
			<td style="width:457px;">Bio-Rad Laboratories</td>
			<td style="width:147px;">M60-009RDPD</td>
			<td>Store the unopened kit at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Automated cell counter</td>
			<td style="width:457px;">Dasit XT 1800J</td>
			<td>Experimental Builder</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Penn-century model DP-4M Dry power insufflator</td>
			<td style="width:457px;">Penn-century</td>
			<td>DPM-EXT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Gas anesthesia system XGI-8</td>
			<td style="width:457px;">Perkin Elmer Inc.</td>
			<td>Experimental Builder</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">PE190 micro medical tubing</td>
			<td style="width:457px;">2biological instruments snc</td>
			<td style="width:147px;">BB31695-PE/8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Syringe without needle 5ml</td>
			<td style="width:457px;">Terumo</td>
			<td style="width:147px;">SS*05SE1</td>
			<td>Cut the boards of the piston by a scissors</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Hamilton 0,10 ml (model 1710)</td>
			<td style="width:457px;">Gastight</td>
			<td align="right">81022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Discofix 3-way Stopcock</td>
			<td style="width:457px;">Braun</td>
			<td align="right">4095111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Syringe with needle 1ml</td>
			<td style="width:457px;">Pic solution</td>
			<td align="right">3,071,260,300,320</td>
			<td>Use without needle</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:347px;">Plastic feeding tubes 18ga x 50mm</td>
			<td style="width:457px;">2biological instruments snc</td>
			<td>FTP-18-50</td>
			<td>Cut obliquely the tip&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an il-8 transiently transgenized mouse model for the in vivo long-term monitoring of inflammatory responses

La inflamación de las vías respiratorias se asocia a menudo con infecciones bacterianas y representa un determinante principal de la enfermedad pulmonar. La determinación in vivo de las capacidades proinflamatorias de diversos factores es desafiante y requiere procedimientos terminales, como el lavado broncoalveolar y la extirpación de los pulmones para el análisis in situ , impidiendo la visualización longitudinal en el mismo ratón. Aquí, la inflamación pulmonar se induce a través de la instilación intratraqueal de sobrenadante de cultivo de Pseudomonas aeruginosa (SN) en ratones transgénicos transitoriamente expresando el gen indicador de luciferasa bajo el control de un promotor bovino heterólogo de IL-8. La expresión de luciferasa en el pulmón se monitoriza mediante análisis de imagen bioluminiscente in vivo (BLI) en un intervalo de tiempo de 2,5 a 48 h después de la instilación. El procedimiento puede repetirse varias veces dentro de 2 - 3 meses, permitiendo así la evaluación de la respuesta inflamatoria en los mismos ratones conLa necesidad de terminar con los animales. Este enfoque permite el monitoreo de factores pro y antiinflamatorios que actúan en el pulmón en tiempo real y parece adecuado para estudios funcionales y farmacológicos.

El modelo de ratón transgénico transitorio bIL-8-Luc se usó para la monitorización in vivo de la inflamación pulmonar en ratones desafiados con sobrenadante bacteriano concentrado (30x) que contenía factores de virulencia secretados. La respuesta inflamatoria inducida fue detectable por imágenes in vivo como un aumento de la señal BLI. La actividad proinflamatoria fue claramente detectable 2,5 h después de la instilación, aunque la señal BLI alcanzó el pico ...

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An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

El método descrito aquí permite la visualización de la activación de la inflamación dependiente del promotor de IL-8 en los pulmones de ratones a través de imágenes de bioluminiscencia no invasivas (BLI). El mismo animal puede ser sometido a BLI múltiples veces durante hasta dos meses a partir del momento de la entrega de la construcción de indicador de luciferasa.

Un modelo de ratón IL-8 transgénicamente transgéni-<em&gt; In Vivo</em&gt; Monitoreo a Largo Plazo de las Respuestas Inflamatorias

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

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Un modelo ortotópico de cáncer de ovario seroso en ratones inmunocompetentes para In vivo Imágenes y seguimiento de tumores de las respuestas inmunitarias del tumor

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

Investigación

Inmunología e Infección

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions

Utilización del modelo de EpiAirway para la caracterización de largo plazo Interacciones Huésped-Patógeno

Nontypeable Haemophilus influenzae  (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

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La inducción de la enfermedad de injerto contra huésped y<em&gt; En Vivo</em&gt; T Monitoreo Celular Utilizando un modelo murino MHC de concordancia

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Differentiating Functional Roles of Gene Expression from Immune and Non-immune Cells in Mouse Colitis by Bone Marrow Transplantation

Diferenciar los roles funcionales de la expresión génica de las células inmunes y no inmunes en la colitis de ratón por Trasplante de Médula Ósea

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Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

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Caracterización De Las Respuestas Inflamatorias Durante La Colonización Intranasal Con Streptococcus pneumoniae

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Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

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Crónica a largo plazo<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Infección de las vías respiratorias en los ratones

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The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

Application of Long-term cultured Interferon-&#947; Enzyme-linked Immunospot Assay for Assessing Effector and Memory T Cell Responses in Cattle

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Aplicación de Ensayo inmunoensayo de largo plazo culta Interferón-γ ligado a enzimas para la evaluación efectoras y de memoria T respuestas celulares en el ganado

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