Name: mass spectrometry and luminogenic-based approaches to characterize phase i metabolic competency of in vitro cell cultures
Uploaded: 2017-03-28T14:00:00
Duration: 10 min 44 s
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The authors thank Epithelix Sarl and Biopredic International for providing the airway cells and hepatic cells micrographies and Neil Smith for the figure illustrating the experimental procedure.

<ol>
	<li>Garcia-Canton, C., Minet, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+Characterization+of+Cell+Systems+Used+in+In+Vitro+Toxicology+Testing.">Metabolic Characterization of Cell Systems Used in In Vitro Toxicology Testing.</a> Encyclopedia of Drug Metabolism and Interactions. , 1-31 (2016).</li><li>Croom, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolism+of+xenobiotics+of+human+environments.">Metabolism of xenobiotics of human environments.</a> Prog. Mol. Biol. Transl. Sci. 112, 31-88 (2012).</li><li>Lewis, D. 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Interact. 168, 66-73 (2007).</li><li>Huang, S., Wiszniewski, L., Constant, S., Roggen, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+of+in+vitro+reconstituted+3D+human+airway+epithelia+(MucilAir)+to+assess+respiratory+sensitizers.">Potential of in vitro reconstituted 3D human airway epithelia (MucilAir) to assess respiratory sensitizers.</a> Toxicol. In Vitro. 27, 1151-1156 (2013).</li><li>Sisson, J. H., Stoner, J. A., Ammons, B. A., Wyatt, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=All-digital+image+capture+and+whole-field+analysis+of+ciliary+beat+frequency.">All-digital image capture and whole-field analysis of ciliary beat frequency.</a> J. 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Toxicol. 10, 1553-1568 (2014).</li><li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+metabolism-dependent+drug+efficacy+and+toxicity+on+a+multilayer+organs-on-a-chip.">Assessment of metabolism-dependent drug efficacy and toxicity on a multilayer organs-on-a-chip.</a> Integr. Biol. 8, 1022-1029 (2016).</li><li>Takahashi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+(3D)+spheroid+cultures+improve+the+metabolic+gene+expression+profiles+of+HepaRG+cells.">Three-dimensional (3D) spheroid cultures improve the metabolic gene expression profiles of HepaRG cells.</a> Biosci. Rep. , (2015).</li></ol>

ABとEMは、この原稿の執筆時点ではブリティッシュ・アメリカン・タバコの従業員でした。この原稿で説明する作業は、ブリティッシュ・アメリカン・タバコによって資金を供給し、このビデオ、記事の掲載料は、ブリティッシュ・アメリカン・タバコによって支払われました。

現在、多くの標準化された毒物学的試験システムは、正常なヒト代謝1の代表的ではない操作細菌、細胞株、または胚細胞を使用します。これは、化学物質や薬の潜在的な毒性活性の不正確な予測につながることができます。このようなチップ上の3D細胞培養および器官などのin vitroモデル 、 革新的な、より良い人間の組織21、22、23の正常な形態および代謝活性を再現する試みで開発されています。代謝能力は、毒性学的評価と薬物生体内変化の研究のために最も適しているモデル解読するために使用することができる1つの基準です。 本稿で概説されているプロトコルは、生細胞を用いたCYP酵素の活性を測定するために設計されています。それは柔軟であり、2Dまたは3D culturにおける異なる細胞系のために使用することができますESと発光性プローブ - または質量分析ベースのアプローチのいずれかを使用するためのオプションを提供しています。両方の方法は、材料のナノグラム量を検出してのみマルチウェル形式で増殖させた細胞の小さな数を必要とするのに十分な感度です。彼らはまた、複雑なマトリックスで栽培回転楕円体または細胞に適用できます。プローブ基板の選択は、明らかに、プロトコルの重要な要素です。アッセイの特異性は、CYP酵素の選択的であるプローブに依存していると保証の別の層は、選択的CYP阻害剤を使用することによって得ることができます。この論文に記載された基質および阻害剤は、ほんの一例ですが、他は文献に見出すことができます。 酵素が低レベルで発現されることに起因する可能性が負CYP活性の結果として新たな細胞型で作業する場合、複数のインキュベーション時間を考慮することが重要です。陽性対照として使用することができる細胞型の添加は、Aを確保することが望ましいです否定結果が技術的な問題にリンクされていないと、トラブルシューティングを支援します。一次肝細胞が代謝的に有能であり、コントロールとして使用することができ、例えば、懸濁液中の初代肝細胞を使用することは非常に容易であるが、それらの生存率は、時間的に限られています。肝細胞株は、このプロトコルに記載のように使用することが比較的容易である可能な代替であるが、一部は代謝活性6、21の点で他のものより優れています。 アッセイは、総タンパク質が定量されていない限り、非破壊的であるため、長期的な研究20時間にわたってCYP活性を追従することが可能です。いくつかの細胞は、培養液中で時間をかけて、可変CYP活性を持つことになりますので、これは重要なポイントです。負の結果は、in vitroでの分化または脱分化との密集度の欠如、進行に伴うかもしれません。その場合には、アプローチは、半quantitatiありますデータは、各細胞培養物中のタンパク質の総量によって正規化されていないのでまし。 TCDDの場合のように組織に対する毒性効果を有することができるプローブ、インヒビターまたはインデューサーへの曝露のようなCYP活性を測定した後、組織を再利用することは常に可能または推奨されません。 例えばミクロソームのような細胞画分はまた、所定の細胞型のCYP活性を特徴付けるために使用することができます。ミクロソーム調製物は、しかし、細胞材料、十分な補因子の添加を多く必要とし、酵素が活性のままであることを保証するためのバッファ。生きた細胞を使用すると、トリッキーなミクロソーム調製工程を排除し、最高の仕事どのバッファおよび補因子ワークアウト。 一般的な推奨事項として、さらにそれが酵素活性と一致することを確認するために、細胞培養物中のCYPの発現プロファイルを特徴づけるためのベストプラクティスです。検証のこの追加のレベルは、代謝プローブがentiないことをお勧め与えられ、単一CYPに固有依存しており、それが測定された代謝活性は、対応する酵素発現によって一致していることを増加確信を与えます。 CYPが膜タンパク質であるので、したがって、それらは、定量的RT-PCRは、これらの酵素20をプロファイリングするための好ましいアプローチであった、ウェスタンブロットのために準備するのが比較的困難です。 このプロトコルが唯一重要なものはあるが、代謝酵素の一のファミリーを表すアッセイCYP酵素活性の方法を記載していることに留意することが重要です。質量分析アプローチの柔軟性がプローブ基板の他の代謝変換の取得方法の開発を可能にします。しかし、それらは、一度に1つを開発する必要があり、現在、少数の知られている特定のプローブおよび他の代謝酵素の家族のための選択的阻害剤です。このギャップは、in vitro細胞systeの代謝能力を総合的に評価を可能にするために取り組むべきですミズ。

生体異物代謝は身体に対して外来の化学物質は、それらの排泄1を容易にするために親水性基とのコンジュゲートの付加によって修飾されるプロセスです。典型的には、生体異物の代謝は、Iは、1つまたは複数のヒドロキシル基1、2を添加した酸化の大部分からなる相との二段階プロセスです。例えばグルクロニドまたは硫酸部分1,2のような親水性結合体のための受容体として、フェーズIIにおいて、ヒドロキシル基が使用されます。受容体基が分子にすでに存在する場合、結合ステップは、独立して、フェーズI代謝の発生する可能性があります。各反応は、ヒドロキシル化（ 図1）及び化学基板3の脱アルキル化を触媒する酵素の特定の群、 例えば 、のCYP（シトクロムP450類）により行われます。 ConjugatioNスルホトランスフェラーゼによって触媒される、UDP-グルクロノシルトランスフェラーゼ（ 図1）、グルタチオン-S-トランスフェラーゼおよびN-アセチルトランスフェラーゼ4。各組織及び臓器は、肝臓はこれらのタンパク質のほとんどを発現すると、特定の代謝酵素の発現プロファイルを有することになります。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/55502/55502fig1.jpg" /> 図1：クマリンためのフェーズIおよびフェーズII代謝の例。 CYP2A6 / CYP2A13クマリンの7 - 水酸化を触媒します。 7-ヒドロキシクマリンは、UGT1A6及びUGT1A9が最も高い活性を示すと、第II相酵素UGTsによってグルクロニド部分に結合されています。 生体異物の代謝を理解することは、二つの理由のための医薬品の安全性の評価では、化学的リスク評価のために重要である：反応速度は、薬物や化学物質がアクティブまたは非アクティブのB型で体内に残存する期間を決定しますEFORE排泄。親化合物は、代謝酵素によって、より反応性不安定で有毒種に変更することができます。また、「生物活性」として知られているような反応は、主相II抱合5によって位相I CYP酵素によっても稀な機会に駆動されます。 これに基づいて、正確に薬剤または化学的に関連するリスクを予測するためのインビトロモデルの能力は、細胞系の代謝能力に大きく依存します。罹患組織から、または正常細胞の形質転換に由来する細胞株は、多くの場合、一部でない場合起源6のそれらの組織の代謝酵素プロファイル代表のすべてを失います。正常な代謝酵素プロファイルのメンテナンスは、（少なくとも短期培養において）、一次細胞培養物におけるより良い表示され、組織は、その3次元構造体1を保持することを可能にするマトリックスで培養した場合に、さらに改善されます。したがって、CHARインビトロ細胞系の代謝能力のacterizationは、細胞モデルは、化学的安全性評価を実施することが適切であるに関する決定を導く上で重要な予備的なステップです。 本稿では、肝細胞ライン7と3D原発性肺細胞培養8とのそれらのアプリケーションの例を用いてインビトロでフェーズI CYP酵素の活性および発現をプロファイリングするためのプロトコルを提示します。 CYP特異的基質、それらの代謝産物及び阻害剤対照を質量spectrometry-およびルミネセンスに基づく定量方法と共に記載されています。いくつかのCYP誘導性であり、他のものは構成的であるので、実施例はまた、これらの2つのシナリオについて説明します。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="697">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:276px;">Reagent &#38; Cells</td>
			<td style="width:156px;"></td>
			<td style="width:203px;"></td>
			<td style="width:63px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2 &#956;m syringe filter</td>
			<td>Whatman</td>
			<td>UN203NPEORG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">24 well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4-methylumbelliferone</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M1381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5-phenyl pentyne</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>CD5001437</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6-hydroxybupropion</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H3167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6-hydroxychlorzoxazone</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>UC148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">7-ethoxycoumarin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>195642</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">7-hydroxycoumarin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H24003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">8-methoxypsoralen</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M3501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">acetic acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>695092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">acetonitrile</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A/0626/17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#945;-naphthoflavone</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>N5757</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BCA kit</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>23227</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">b-glucuronidase/arylsulfatase</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G0876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bupropion</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>B102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Carbamazepine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C4024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">chlorzoxasone</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C4397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">collagen</td>
			<td>Cell Systems</td>
			<td>5005-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">coumarin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C4261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">disulfiram</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>86720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">fluvoxamine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F2802</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glutamax (Glutamine supplement)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HepaRG metabolism supplement</td>
			<td>Merck</td>
			<td>MMAD621</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HepaRG thaw media supplement</td>
			<td>Merck</td>
			<td>MMADD671</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HepaRG</td>
			<td>Merck</td>
			<td>MMHPR116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Luciferin-CEE</td>
			<td>Promega</td>
			<td>V8751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">methanol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>M/4056/17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MucilAir airway cells</td>
			<td>Epithelix</td>
			<td>EP01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="30">
			<td height="30" style="height:30px;">MucilAir airway cells maintenance media</td>
			<td>Epithelix</td>
			<td>EP04MM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:276px;">Phenomenex Kinetex 2.6&#956;m, PFP 100A</td>
			<td>Phenomenex</td>
			<td>00B-4477-AN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TCDD</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>48599</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="36">
			<td height="36" style="height:36px;">thioTEPA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T6069</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:276px;">Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8&#181;m 2.1 x 50mm</td>
			<td>Waters</td>
			<td>86003538</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Williams&#8217; E media</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>17704-024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">UPLC</td>
			<td>Waters</td>
			<td>Acquity</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">QTRAP MS</td>
			<td>Sciex&#160;</td>
			<td>ABI Sciex 4000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">QTRAP MS software</td>
			<td>Sciex&#160;</td>
			<td>Analyst 1.4.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">luminometer</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>SpectraMax M3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">spectrophotometer</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>SpectraMax M3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">cell counter</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>Vi-Cell XR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">rotary evaporator</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Eppendorf-5301</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mass spectrometry and luminogenic-based approaches to characterize phase i metabolic competency of in vitro cell cultures

生体異物代謝酵素は、溶解度を増加し、排泄を促進する官能基を追加することにより、医薬品や毒物の生体内変化における重要な機能を果たしています。いくつかの場面で、それらの構造変更は、新毒性産物の形成につながります。動物実験を低減するために、化学的リスクは、代謝コンピテント細胞を用いて評価することができます。代謝酵素の発現は、しかしながら、 インビトロでの初代培養系において多くの時間にわたって安定ではなく、多くの場合、細胞株において部分的または不在です。したがって、in vitroでの薬品、添加物、および環境汚染物質代謝の研究は、理想的に代謝活性を特徴づけされた細胞系で実施されるべきです。ここではUPLC質量分析法による定量化化学プローブおよびそれらの代謝産物を使用して、2D細胞株および初代3D培養における代謝酵素（ヒトフェーズI）のクラスの活性を測定する手法を説明しルミノメトリー。この方法は、細胞株および種々の組織に由来する一次細胞における代謝活性を試験するために実施することができます。

3人の異なるドナー（気道M360、M370、M417）及び肝細胞株（Hep細胞ライン）からの気道細胞培養における2つのCYPの対（CYP1A1 / 1B1及びCYP2A6 / 2A13）について測定された代謝活性の例は、 図6に示されています20。 ルミノメトリーによって測定されたCYP活性 図6Aは、気道細胞におけるリュック-CEE（ルシフェリン6&#39;-クロロエチルエーテル）（3人のドナー）とを有するとTCDD誘導せず、肝細胞のCYP1A1 / 1B1 O -脱アルキル化活性によって産生さ相対発光を示します。 CYP1A1 / 1B1高度に誘導性酵素であり、典型的には、ほとんどの組織で構成的なレベルでは発現されません。 図6Aに見られるように、細胞が誘導されていない場合、何のルミネセンス信号が検出されません。両方の細胞型は、TCDD、強力なCYP1A1 / 1B1誘導、マークと共にプレインキュベートされたときEDルミネセンス信号は、制御（ 図6A）と比較して検出されます。これは、リュック-CEEプローブがその後に定量化されたルシフェリン部分の放出をもたらす代謝されていることを示しています。全体TCDD処理された肝細胞株からの活性があっても、総タンパク質の正規化した後、気道細胞の場合よりも低いです。細胞株は、初代細胞未満代謝的に活性である傾向があるので、これは珍しいことではありません。 αナフトフラボンの添加はさらにリュック-CEE代謝のCYP依存性を確認し、全ての細胞型におけるCYP1A1 / 1B1活性に対する明確な阻害効果を有します。 UPLC-MSを使用してCYP450代謝物の定量 図6Bは、INHIの存在下および非存在下におけるクマリンとのインキュベーション後に3人のドナー（気道M343、M345、M347）および肝細胞（Hep細胞ライン）からの気道細胞におけるCYP2A6 / 2A13活性の定量化を示しますBITOR 8-メトキシ。データは、総タンパク質に対して正規化されます。 0分クマリンインキュベーション制御では、全く7-ヒドロキシクマリン（ 図6B）が検出されません。 CYP2A6 / 2A13は、特定の組織で構成的に発現され、7-ヒドロキシクマリンの形成を伴う、したがって後の16時間のインキュベーションをも誘導することなく、試験された異なる種類の細胞で検出されます。 8-メトキシ場合、CYP2A阻害剤が（ 図6B）を添加し、7-ヒドロキシクマリンの形成を大幅に低減されます。 CYP阻害剤の存在下で、阻害はめったに完了すると、その他のCYPは、基板を認識するが、はるかに少ない効率的に処理することができるかもしれないので、まだいくつかの残存活性を検出することが普通であることに留意すべきです。また、それは気道細胞におけるCYP2A6のために表示されるように一次細胞を使用する場合、記録代謝活性は、ドナーの間で異なることができることを観察することができます（ 図6B）。これは、CYP活性は、各ドナーの遺伝子型と多型の傾向があると期待されています。 <img alt="図6" src="/files/ftp_upload/55502/55502fig6.jpg" /> 図6：活性アッセイは、肝細胞株においてスリー気道細胞ドナー（M360、M370、M417）にCYP1A1 / 1B1活性（A）及びCYP2A6 / 2A13活性（B）の検索結果。 （A）のLuc-CEEの脱アルキル化活性を有するとTCDDによるCYP1A1 / 1B1の誘導なしに示されています。 αナフトフラボンは、CYP1A1 / 1B1阻害剤として使用されました。活性は、インキュベーションの分単位の時間（分）との総タンパク質濃度（mg）で正規化し、相対発光単位（RLU）として表されます。彼らは恒常的に発現していると（B）CYP2A6 / 2A13は、誘導を必要としません。ピコモル/分/ mgタンパク質でクマリン7-水酸化活性は、阻害剤8 methoxypsorととせずに異なる時点で示されていますALEN。すべての結果は、平均値の標準偏差で3回の独立した測定の平均値として提示されています。この数字は、バクスター20から変更されました。 補足表1：UPLC及び質量分析計設定。 <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55502/Supplemental_Table_1.xlsx" target="_blank">このファイルをダウンロードするにはこちらをクリックしてください。</a>

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Mass Spectrometry and Luminogenic-based Approaches to Characterize Phase I Metabolic Competency of In Vitro Cell Cultures

in vitro系の代謝能力は、薬物や毒物の生体内変化及び処分のための重要な要件です。このプロトコルでは、我々は、私は細胞培養で代謝相を評価するための基準の代謝プローブのアプリケーションを記述します。

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