Name: bioluminescence imaging of neuroinflammation in transgenic mice after peripheral inoculation of alpha-synuclein fibrils
Uploaded: 2017-04-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bioluminescence Imaging of Neuroinflammation in Transgenic Mice After Peripheral Inoculation of Alpha-Synuclein Fibrils at JoVE.com

המחברים מודים אולגה שארמה, תרזה Hundt, והצוות של מתקני מיקרוסקופיה ובעלי חיים DZNE לקבלת תמיכה טכנית.

כל הנהלים כולל חיות בוצעו באישור ועדת הגנה על בעלי חיים של הסוכנות להגנת הסביבה נורדריין וסטפליה המדינה (LANUV). בעלי חיים שוכנו ומטופל בהתאם לתנאים סטנדרטיים עם אור 12 h / מחזור כהה גישה חופשית למזון ומים. 1. מודל חיה <ol style=";text-align:right;di...

<ol>
	<li>Aguzzi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+biology:+Beyond+the+prion+principle.">Cell biology: Beyond the prion principle.</a> Nature. 459 (7249), 924-925 (2009).</li><li>Kordower, J. H., Chu, Y., Hauser, R. A., Freeman, T. B., Olanow, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lewy+body-like+pathology+in+long-term+embryonic+nigral+transplants+in+Parkinson's+disease.">Lewy body-like pathology in long-term embryonic nigral transplants in Parkinson's disease.</a> Nat Med. 14 (5), 504-506 (2008).</li><li>Li, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lewy+bodies+in+grafted+neurons+in+subjects+with+Parkinson's+disease+suggest+host-to-graft+disease+propagation.">Lewy bodies in grafted neurons in subjects with Parkinson's disease suggest host-to-graft disease propagation.</a> Nat Med. 14 (5), 501-503 (2008).</li><li>Hansen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=alpha-Synuclein+propagates+from+mouse+brain+to+grafted+dopaminergic+neurons+and+seeds+aggregation+in+cultured+human+cells.">alpha-Synuclein propagates from mouse brain to grafted dopaminergic neurons and seeds aggregation in cultured human cells.</a> J Clin Invest. 121 (2), 715-725 (2011).</li><li>Masuda-Suzukake, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prion-like+spreading+of+pathological+alpha-synuclein+in+brain.">Prion-like spreading of pathological alpha-synuclein in brain.</a> Brain. 136 (4), 1128-1138 (2013).</li><li>Holmqvist, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+evidence+of+Parkinson+pathology+spread+from+the+gastrointestinal+tract+to+the+brain+in+rats.">Direct evidence of Parkinson pathology spread from the gastrointestinal tract to the brain in rats.</a> Acta Neuropathol. 128 (6), 805-820 (2014).</li><li>Luk, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathological+alpha-synuclein+transmission+initiates+Parkinson-like+neurodegeneration+in+nontransgenic+mice.">Pathological alpha-synuclein transmission initiates Parkinson-like neurodegeneration in nontransgenic mice.</a> Science. 338 (6109), 949-953 (2012).</li><li>Sacino, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+CNS+alpha-synuclein+pathology+by+fibrillar+and+non-amyloidogenic+recombinant+alpha-synuclein.">Induction of CNS alpha-synuclein pathology by fibrillar and non-amyloidogenic recombinant alpha-synuclein.</a> Acta Neuropathol Commun. 1, 38 (2013).</li><li>Sacino, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intramuscular+injection+of+alpha-synuclein+induces+CNS+alpha-synuclein+pathology+and+a+rapid-onset+motor+phenotype+in+transgenic+mice.">Intramuscular injection of alpha-synuclein induces CNS alpha-synuclein pathology and a rapid-onset motor phenotype in transgenic mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (29), 10732-10737 (2014).</li><li>Mougenot, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prion-like+acceleration+of+a+synucleinopathy+in+a+transgenic+mouse+model.">Prion-like acceleration of a synucleinopathy in a transgenic mouse model.</a> Neurobiol Aging. 33 (9), 2225-2228 (2012).</li><li>Bartz, J. C., Kincaid, A. E., Bessen, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+prion+neuroinvasion+following+tongue+infection.">Rapid prion neuroinvasion following tongue infection.</a> J Virol. 77 (1), 583-591 (2003).</li><li>Tamg&#252;ney, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+prions+by+bioluminescence+imaging.">Measuring prions by bioluminescence imaging.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (35), 15002-15006 (2009).</li><li>Watts, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+of+multiple+system+atrophy+prions+to+transgenic+mice.">Transmission of multiple system atrophy prions to transgenic mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (48), 19555-19560 (2013).</li><li>Breid, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroinvasion+of+alpha-Synuclein+Prionoids+after+Intraperitoneal+and+Intraglossal+Inoculation.">Neuroinvasion of alpha-Synuclein Prionoids after Intraperitoneal and Intraglossal Inoculation.</a> J Virol. 90 (20), 9182-9193 (2016).</li><li>Giasson, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+alpha-synucleinopathy+with+severe+movement+disorder+in+mice+expressing+A53T+human+alpha-synuclein.">Neuronal alpha-synucleinopathy with severe movement disorder in mice expressing A53T human alpha-synuclein.</a> Neuron. 34 (4), 521-533 (2002).</li><li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+imaging+of+GFAP+expression+after+neuronal+damage+in+mice.">Non-invasive imaging of GFAP expression after neuronal damage in mice.</a> Neurosci Lett. 367 (2), 210-212 (2004).</li><li>Bernis, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prion-like+propagation+of+human+brain-derived+alpha-synuclein+in+transgenic+mice+expressing+human+wild-type+alpha-synuclein.">Prion-like propagation of human brain-derived alpha-synuclein in transgenic mice expressing human wild-type alpha-synuclein.</a> Acta Neuropathol Commun. 3 (1), 75 (2015).</li><li>Gunther, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+testing+and+spinal+cord+removal+in+a+mouse+model+for+amyotrophic+lateral+sclerosis+(ALS).">Clinical testing and spinal cord removal in a mouse model for amyotrophic lateral sclerosis (ALS).</a> J Vis Exp. (61), (2012).</li><li>Jackson-Lewis, V., Przedborski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+for+the+MPTP+mouse+model+of+Parkinson's+disease.">Protocol for the MPTP mouse model of Parkinson's disease.</a> Nat Protoc. 2 (1), 141-151 (2007).</li><li>Mathews, S. T., Plaisance, E. P., Kim, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+systems+for+westerns:+chemiluminescence+vs.+infrared+detection.">Imaging systems for westerns: chemiluminescence vs. infrared detection.</a> Methods Mol Biol. 536, 499-513 (2009).</li><li>Kim, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposure+to+bacterial+endotoxin+generates+a+distinct+strain+of+alpha-synuclein+fibril.">Exposure to bacterial endotoxin generates a distinct strain of alpha-synuclein fibril.</a> Sci Rep. 6, 30891 (2016).</li><li>Keller, A. F., Gravel, M., Kriz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+pathogenesis:+disease+onset+is+characterized+by+marked+induction+of+GFAP+in+Schwann+cells.">Live imaging of amyotrophic lateral sclerosis pathogenesis: disease onset is characterized by marked induction of GFAP in Schwann cells.</a> Glia. 57 (10), 1130-1142 (2009).</li><li>St&#246;hr, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+synthetic+Abeta+prion+strains+producing+different+amyloid+deposits+in+bigenic+mice.">Distinct synthetic Abeta prion strains producing different amyloid deposits in bigenic mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. , (2014).</li><li>Luk, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracerebral+inoculation+of+pathological+alpha-synuclein+initiates+a+rapidly+progressive+neurodegenerative+alpha-synucleinopathy+in+mice.">Intracerebral inoculation of pathological alpha-synuclein initiates a rapidly progressive neurodegenerative alpha-synucleinopathy in mice.</a> J Exp Med. 209 (5), 975-986 (2012).</li><li>Recasens, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lewy+body+extracts+from+Parkinson+disease+brains+trigger+alpha-synuclein+pathology+and+neurodegeneration+in+mice+and+monkeys.">Lewy body extracts from Parkinson disease brains trigger alpha-synuclein pathology and neurodegeneration in mice and monkeys.</a> Ann Neurol. 75 (3), 351-362 (2014).</li><li>Sacino, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+CNS+alpha-synuclein+pathology+by+fibrillar+and+non-amyloidogenic+recombinant+alpha-synuclein.">Induction of CNS alpha-synuclein pathology by fibrillar and non-amyloidogenic recombinant alpha-synuclein.</a> Acta Neuropathol Commun. 1 (1), 38 (2013).</li><li>Peelaerts, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=alpha-Synuclein+strains+cause+distinct+synucleinopathies+after+local+and+systemic+administration.">alpha-Synuclein strains cause distinct synucleinopathies after local and systemic administration.</a> Nature. 522 (7556), 340-344 (2015).</li></ol>

הזרקה היקפית של סיבים-synuclein אלפא לתוך הצפק של Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) עכברים מייצגים שיטה קלילה כדי לגרום פגיעה עצבית מלווית neuroinflammation לשחזר מאפיינים חשובים של synucleinopathies. באופן דומה, הזרקת הלשון מייצגת נתיב אחר neuroinvasion ידי prionoids-synuclein אלפא בעכברים טרנסגניים אב...

יש ראיות הולכות ומצטברים כי-synuclein אלפא יש מאפיינים דומים לאלו של חלבון הפריון, במיוחד ביכולתה-זרע עצמי להפיץ misfolding בין תאים לאורך מסלולים עצביים. מאפיין זה של synuclein אלפא גם נקרא &quot;פריון דמוי&quot; או &quot;prionoid&quot;, והוא נתמך על ידי תצפיות וניסויים להשתלה, אשר מצביעים על ההדבקה של synuclein אלפא misfolded מנוירונים חולה כדי הושתל נוירונים בריאים 1, 2 , 3, 4. כמו כן הזרקה ישירה של-synuclein אלפא misfolded לתוך המוח או בפריפריה, למשל בשריר hindlimb או לדופן המעי, התוצאות התפשטות פתולוגיה אלפא-synuclein לחלקים הדיסטלי של 5 CNS, 6, 7, &lt;sup class = &quot;Xref&quot;&gt; 8, 9, 10. ניתחנו העברת prionoids-synuclein אלפא באמצעות מסלולים היקפיים בפירוט יותר התייחס לשאלה האם-synuclein אלפא misfolded עשויה neuroinvade העצבים המרכזית לאחר intraglossal יחיד או זריקה intraperitoneal, תכונה שבעבר הוכח עבור פריונים אבל לא עבור אלפא misfolded synuclein. לאחר ההזרקה של פריונים לתוך הלשון, neuroinvasion של CNS מושג באמצעות התפשטות לאורך העצב תת-הלשון של הלשון שמובילה את הגרעין של עצב תת-לשון, הנמצא בגזע המוח 11. כמו במודל של עכברים בחרנו Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) עכברים כי ביטוי יתר של מוטציה A53T של synuclein אלפא האדם מן האמרגן הפריון, ו גחלילית בלוציפראז בשליטה של האמרגן GFAP לפקח ההפעלה astrocytic ידי פליטת אור, כמו בעבר הראו במוח שלפריון נגוע עכברים 12. בידיים שלנו bigenic Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) עכברים לא לפתח מחלת עד 23 חודשים של גיל כפי שהוכח על ידי אחרים 13. זריקה אחת של סיבי-synuclein אלפא האנושי דרך intraglossal או מחלה נוירולוגית הנגרמת המסלול intraperitoneal עם פתולוגיה במוחם ואת מיתרי השדרה של Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) עכברים תומכים בהשערה כי prionoids-synuclein אלפא אפיונים חשובים עם פריונים 14.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>anti-actin antibody</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>MAB1501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-alpha-synuclein, phospho S129 antibody [pSyn#64]</td>
			<td>Wako</td>
			<td>015-25191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-alpha-synuclein, phospho S129 antibody [EP1536Y]</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab51253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-GFAP antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>Z0334 01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-IBA-1 antibody</td>
			<td>Wako</td>
			<td>019-19741</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Sequestosome-1 (p62) antibody</td>
			<td>Proteintech</td>
			<td>18420-1-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-ubiquitin antibody [Ubi-1]</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>MAB1510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline (PBS)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>14190169</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine&#160;</td>
			<td>Ratiopharm</td>
			<td></td>
			<td>100 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Ratiopharm</td>
			<td></td>
			<td>10 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27-gauge syringe</td>
			<td>VWR</td>
			<td>613-4900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane&#160;</td>
			<td>Piramal Healthcare</td>
			<td>PZN&#160; 4831850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Depilatory cream</td>
			<td>Veet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secureline lab marker&#160;</td>
			<td>Neolab</td>
			<td>25040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-luciferin potassium salt</td>
			<td>Acris</td>
			<td>LK10000</td>
			<td>30 mg/mL stock solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermomixer</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5776671</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sonopuls Mini20 sonicator</td>
			<td>Bandelin</td>
			<td>3648</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina II imaging system</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Image 3.0 Software</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tg(M83+/-) mice or B6;C3-Tg(Prnp-SNCA*A53T)83Vle/J mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>004479</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard pattern forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11000-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Narrow pattern forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-laurylasarcosyl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L5125-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optima Max-XP ultracentrifuge&#160;</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td></td>
			<td>TLA-110 rotor&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thickwall polycarbonate tubes</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>362305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAG Novex 4-12% Bis-Tris Midi Protein Gels</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>WG1401BOX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP conjugated antibody</td>
			<td>Cayman</td>
			<td>Cay10004301-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IR Dye 680 conjugated antibody&#160;</td>
			<td>LI-COR Biosciences</td>
			<td>926-68070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperSignal West Dura Extended Duration Substrate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>34075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stella 3200 imaging system</td>
			<td>Raytest</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Odyssey infrared imaging system&#160;</td>
			<td>LI-COR Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20&#160;</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>TWEEN201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SA/T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immobilon-FL PVDF membrane</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>IPFL00010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Roth</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen peroxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SA/00216763/000500</td>
			<td>working solution 3%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumine (BSA)&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A3294-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>PCN5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>D1306</td>
			<td>working dilution 1:50,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount media&#160;</td>
			<td>Omnilab</td>
			<td>SA/F4680/000025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM700 confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HALT protease and phosphatase inhibitors</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>10516495</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precellys 24-Dual homogenizer&#160;</td>
			<td>Peqlab</td>
			<td>91-PCS24D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 conjugated antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A31619</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 conjugated antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A11005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce&#160;BCA&#160;Protein&#160;Assay&#160;Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10741395</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome RM2255</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM700 confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bioluminescence imaging of neuroinflammation in transgenic mice after peripheral inoculation of alpha-synuclein fibrils

כדי ללמוד את ההתנהגות כמו-הפריון של synuclein אלפא misfolded, מודלי עכבר נדרשים המאפשרים שידור מהיר ופשוט של prionoids אלפא-synuclein, אשר גורם בנוירופתולוגיה בתוך מערכת העצבים המרכזית (CNS). כאן אנו מתארים כי intraglossal או זריקה intraperitoneal של הסיבים-synuclein אלפא לתוך bigenic Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) עכברים, אשר ביטוי יתר אלפא-synuclein אדם עם מוטציה A53T מן האמרגן חלבון הפריון ו גחלילית בלוציפראז מ האמרגן עבור חלבון גליה fibrillary חומצי (GFAP), מספיקה כדי לגרום למחלה neuropathologic. בהשוואה הומוזיגוטיים Tg (M83 + / +) בעכברים כי לפתח סימפטומים נוירולוגיים חמורים מתחיל בגיל של 8 חודשים, הטרוזיגוטיים Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) חיות להישאר חופשי של המחלה ספונטנית עד שהם יגיעו בגיל 22 חודשים. מעניין, הזרקה של סיבי synuclein-אלפא באמצעות intraperitoneאל מסלול מושרה מחל נוירולוגית עם שיתוק בארבעה מתוך חמש Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) עכברים עם זמן דגירה החציוני של 229 ± 17 ימים. חיות נושאים מחלות הראו פיקדונות חמורים-synuclein אלפא פוספורילציה במוחם וחוטי שדרה. הצטברויות של synuclein אלפא היו sarkosyl-מסיסות ו colocalized עם היוביקוויטין ו p62, ולוו תגובה דלקתית וכתוצאה מכך דבק astrocytic ו microgliosis. באופן מפתיע, חיסון של סיבי synuclein-אלפא לתוך הלשון היה פחות יעיל בגרימת מחלה עם רק אחד מחמש חיות מוזרקות מראות פתולוגיה-synuclein אלפא לאחר 285 ימים. הממצאים שלנו מראים כי חיסון באמצעות המסלול intraglossal ועוד זאת דרך המסלול intraperitoneal מתאים לגרום מחלה נוירולוגית עם סימני ההיכר הרלוונטיים synucleinopathies ב Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) בעכברים. זה מספק מודל חדש לחקר הפריון דמוי בפתוגנזה לגרוםפ לפי prionoids-synuclein אלפא ביתר פירוט.

הזרקה היקפית של prionoids-synuclein אלפא באמצעות הלשון או בנוירופתולוגיה מושרה הצפק ב CNS של bigenic Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) עכברים (לוח 1 ואיור 1). לאחר הזרקת intraperitoneal יחידה עם סיבים-synuclein אלפא, ארבעה מתוך חמישה עכברים פתחו מחל נוירולוגית...

Watch this Scientific Journal Video about Bioluminescence Imaging of Neuroinflammation in Transgenic Mice After Peripheral Inoculation of Alpha-Synuclein Fibrils at JoVE.com

Bioluminescence Imaging of Neuroinflammation in Transgenic Mice After Peripheral Inoculation of Alpha-Synuclein Fibrils

הזרקה היקפית של סיבים-synuclein אלפא לתוך הצפק או הלשון של Tg (M83 +/-: GFAP -luc +/-) עכברים, המבטאים אלפא-synuclein אדם עם מוטצית A53T משפחתית בלוציפראז גחלילית, יכול לגרום בנוירופתולוגיה, כולל neuroinflammation , במערכת העצבים המרכזית שלהם.

הדמית פליטת אור של neuroinflammation בעכברים טרנסגניים לאחר היקפיים הרכבה של אלפא-Synuclein סיבים

To study the prion-like behavior of misfolded alpha-synuclein, mouse models are needed that allow fast and simple transmission of alpha-synuclein ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

הגולגולת דק חלון טכניקה כרונית דו פוטון ב-vivo הדמיה של microglia Murine של מודלים של Neuroinflammation

Traditionally in neuroscience, in vivo two photon imaging of the murine central nervous system has either involved the use of open-skull1,2 or ...

Oral Administration of Rotenone using a Gavage and Image Analysis of Alpha-synuclein Inclusions in the Enteric Nervous System

אוראלית של Rotenone באמצעות Gavage וניתוח מקדימה של Alpha-synuclein תכלילים במערכת העצבים enteric

In Parkinson's disease (PD) patients, the associated pathology follows a characteristic pattern involving inter alia the enteric nervous system (ENS) 1,2, ...

Live Imaging of Dorsal Root Axons after Rhizotomy

הדמיה חיה של אקסונים לאחר רוט הגבי Rhizotomy

The primary sensory axons injured by spinal root injuries fail to regenerate into the spinal cord, leading to chronic pain and permanent sensory loss. ...

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

דור של חולדות למריחה מהונדסים על ידי<em&gt; ברחם</em&gt; Electroporation ו<em&gt; בvivo</em&gt; הקרנת פליטת אור

 In utero electroporation (IUE) is a technique which allows genetic modification of cells in the brain for investigating neuronal development. So far, the ...

Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury

השתלה של תאי ensheathing חוש ריח להערכת החלמה תפקודית לאחר פגיעה עצבית היקפית

Olfactory ensheathing cells (OECs) are neural crest cells which allow growth and regrowth of the primary olfactory neurons. Indeed, the primary olfactory ...

Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons

Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons

הקרינה ופליטת אור הדמיה של Ca subcellular<sup&gt; 2 +</sup&gt; בבני נוירונים בהיפוקמפוס

Susceptibility to neuron cell death associated to neurodegeneration and ischemia are exceedingly increased in the aged brain but mechanisms responsible ...

Sequential Extraction of Soluble and Insoluble Alpha-Synuclein from Parkinsonian Brains

הפקה רציפה של המסיס ובלתי מסיס אלפא-סינוקלאין ממוח פרקינסון

Alpha-synuclein (&#945;-syn) protein is abundantly expressed mainly within neurons, and exists in a number of different forms - monomers, tetramers, ...

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

הדמיה פעילות עצבית בתוך קליפת המגע הראשי באמצעות Thy1-העכברים הטרנסגניים GCaMP6s

The mammalian brain exhibits marked symmetry across the sagittal plane. However, detailed description of neural dynamics in symmetric brain regions in ...

Exogenous Administration of Microsomes-associated Alpha-synuclein Aggregates to Primary Neurons As a Powerful Cell Model of Fibrils Formation

הממשל אקסוגני של אלפא-synuclein Microsomes-הקשורים אגרגטים כדי נוירונים העיקרי כמודל תא עוצמה היווצרות הסיבים

For years, the inability of replicating formation of insoluble alpha-synuclein (&#945;S) inclusions in cell cultures has been a great limitation in the ...