Name: in vitro and in vivo assessment of t, b and myeloid cells suppressive activity and humoral responses from transplant recipients
Uploaded: 2017-08-12T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients at JoVE.com

Bu eser ANR (ANR-11-LABX-0016-01) ve aynı zamanda tarafından finanse edilen IHU Cesti projesi tarafından yönetilen "Investissements d'Avenir" Fransız hükümeti programı'nın parçası olan Labex IGO proje (n ° ANR-11-LABX-0016-01) bağlamında gerçekleşmiştir " Fransız Ulusal araştırma Ajansı (ANR tarafından) (ANR-10-IBHU-005) yönetilen Investissements d'Avenir"Fransız hükümeti programı. IHU Cesti projesi de Nantes Métropole ve Région Pays de la Loire tarafından desteklenmektedir.

Not: Tüm iletişim kuralları burada bir Etik Komitesi tarafından onaylanmış ve steril bir şekilde yapılmalıdır.
1. nesil hoşgörü, kardiyak homogreft fare modeli
<ol><li>
lew.1w LEW.1A homogreft yordamı için
	<ol>
<li>Bir donör erkek lew.1w isoflurane O2 inhalasyon, %1 N2ile O 5 dk. yer dorsal dekübitus, hayvan sonra takıma kullanarak fare ve karın Torakotomi gerçekleştirmek için betadin ile dezenfekte anestezi (Yani, kesi i...

Evlat edinen toplam splenocytes aktarım yeni aşılı alıcı içine indüklenen veya bir tedavi ile potentiated düzenleyici satır olup olmadığını belirlemek için etkili bir yoldur. Ana ışınlama kaynaklı geçici lymphopenia transferden sonra hücre hayatta kalma ve hoşgörü kurulması teşvik etmektedir. Ayrıca, alt öldürücü ışınlama sırasında bağışıklık sulandırma, bulaşıcı tolerans34denilen bir fenomen yeni düzenleyici hücrelere dönüştürmek tolerogenic öze...

Sıçan kalp homogreft hoşgörü indüksiyon tedavisi, hoşgörü indüksiyon ve bakım, mekanizmaları deşifre değerlendirmek için bir güvenilir organ nakli model ve işlevsel olarak yetkili ve baskın düzenleyici hücreleri uyarmak için bir potansiyele sahiptir. Aşağıdaki protokolleri bir tam uyuşmazlığı heterotopik kalp nakli Lewis 1W donör sıçan (LEW.1W, RT1u) dan Lewis 1A alıcı fareye (LEW.1A, RT1bir) açıklar. Bu greft birlikte akut ret hızla (yaklaşık 7 gün içinde) oluşur ve kolayca palpasyonla karın üzerinden ölçüm yenerek greft tarafından tespit edilebilir. Burada sıçan kalp homogreft tolerans ikna etmek için üç Protokolü öneriyorum. Bu modeller tolerans indüklenen ve/veya farklı düzenleyici hücre tipleri tarafından yapılmaktadır. İlk, bir adenovirus CD40Ig kodlama ile CD40-CD40L etkileşimleri engelleme (AdCD40Ig) indüklenen CD8 nesil+ Tregs tolerans adoptively ne zaman ikna yeteneğine sahip ikincil aşılı alıcıların1' e transfer. Ayrıca, CD8 tükenmesi+ hücreleri (anti-CD8α antikorlar ile) AdCD40Ig tedavi alıcılar oluşturulan Bregs ve RegMCs2'. CD8 derin analizi+ özellikleri vurgulanır İnterlökin-34 (IL-34) ve Fibroleukin-2 (FGL-2)3,4,5,6 tanımlanan çeşitli immunoregulatory moleküllerin önemli rol Tregs . IL-34 overexpression (bir AAV vektör ile) Tregs RegMCs üretimi ile indüklenen ise overexpression FGL-2 Bregs, karmaşık ağ düzenleyici hücrelerin temel indüklenen.
Kronik ret yavaş yavaş gelişir ve uzun vadeli bir derinlemesine analiz kronik ret karşı tolerans ayırt etmek zorundadır. Greft için hücre infiltrasyonu, genellikle değerlendirildi fibrozis, kalınlaşma yükünün vasküler duvar ve tamamlayıcı C4d tarafından immunohistology7. Histoloji yöntemleri hayvan kurban gerektirir veya biyopsi grefti iken, burada biz tolere homogreft farklı özelliklerini değerlendirmek için basit bir yöntem tarif: ortaya çıkması ve düzenleyici hücreleri ve kan Anti-donör spesifik antikor yanıtlarını fonksiyonu Akış Sitometresi tarafından örnek (burada, Floresans aktif hücre (FACS) sıralama kullanılır).
Bakım tedavisi tutuklanması sonra homogreft için hoşgörü genellikle düzenleyici hücreleri8indüksiyon ile ilişkilidir. Son yıllarda çalışmalar odaklı CD4 üzerinde+Tregs oybirliği ile karakterize onlar anahtar işaretleri Foxp3 tarafından+, CD25yüksekve CD127-9,10,11. Benzer şekilde, çeşitli işaretçileri için CD8 atfedilmiştir+ Tregs, CD122 gibi+, CD28-, CD45RCdüşük, PD1+ve Helios+ 1,12,13,14 , 15 , 16 , 17. yaş, GITR, CTLA4 ve sitokinler ifadesi üzerinde (IL-10, TGFβ, Il-34, IL-35, FGL-2) bir Treg profil3,4,6,13, ayrıca ilişkili bulunmuştur 18,19,20,21. Ancak, Bregs, RegMCs veya NKTregs, gibi gelişmekte olan düzenleyici hücre popülasyonlarının ilgili belirli işaretleri yok. Gerçekten de, Bregs çoğunlukla olgunlaşmamış CD24 rapor edilen+ hücreleri, belirsiz CD27 ifade ve bazen üretimi IL-10, TGFβ veya granzyme B22,23,24. Myeloid hücre lineage karmaşıklığı CD14, CD16, CD80, CD86, CD40, CD209a veya CD16325,26gibi onların Düzenleyici veya proinflamatuar profili tanımlamak için birkaç işaretleri bir arada gerektirir. Son olarak, bazı işaretleri NKTregs CD11b gibi tanımlamak için bildirilmiş olan+, CD27+, TGFβ+, ama daha fazla çalışmalar hakkında diğer phenotypically27,28,29 açıklamak için gerekli ,30,31,32. Böylece, delillerin baskılayıcı aktivitenin daha fazla yeni biyolojik, tanımlanması için fenotipik açıklama meşrulaştırmak için gerekli olan yeni immunoregulatory arabulucu ve yeni hücre tedaviler kapsamı genişletmek için.
Biz süpresif etkinliği hücre değerlendirmek için iki tamamlayıcı yöntem öneriyoruz. İlk olarak, etiketli efektör T hücrelerle hücreler (ZPT) farklı oranlarıyla 6 gün içinde sunulması allojeneik donör antijen tarafından uyarılan süpresif hücre kültürü çalışmalarının vitro yöntemi oluşur ve efektör analiz T Hücre proliferasyonu bu bağışıklık suppression donör yönetmen yansıtır. Tedavi fareler hücrelerden doğrudan hücrelere saf fareler ve aşılı fareler süpresif etkinliği için (veya diğer düzenleyici hücre nüfus), tedavi olmayan, bir bastırıcı: efektör oranları aralığındaki karşılaştırılabilir. Ayrıca, bu yöntem does değil istemek birisi nakli ve sonuçları 6 gün içinde alınır. İkincisi, in vivo yöntemi amaçlanan düzenleyici hücreleri tedavi bir sıçan gelen yeni radyasyonlu aşılı alıcıya transfer oluşur. Üzerinden B hücreleri, myeloid hücrelerin veya T hücreleri iken saf olmayan tedavi fareler genellikle akut ret inhibe ve greft hayatta kalma evlat edinen transferi üzerine uzatmak mümkün değildir, bu öznitelikleri hücreleri aktivitesiyle potentiated süpresif tedavi alıcılardan gelen var 1,2,3,4,33. Alıcının ışınlama tarafından indüklenen Lymphopenia adoptively transfer edilen hücreleri kan homeostazı tarafından etkilenmez ve daha kolay Anti-donör bağışıklık yanıtı master için izin vermek için önerilir. Her iki yöntem de allojeneik vitro kullanımı üçüncü parti ZPT veya vivo içinde evlat edinen transferini süpresif için bir üçüncü taraf kalp ile aşılı alıcılar hücrelere Anti-donör özgüllük analizine izin. Vivo yöntemi temsil önemli bir sayı bir hücre, kötü gerektirir, ancak hücre altgrupları daha kolay süpresif etkinlik vitro33için tespit edilebilir.
Humoral yanıt tolerans durumunu ve donör antijenleri için yönlendirilmiş antikor yanıt kontrolünü değerlendirmek için ölçülebilir. Nitekim, tolerans verici doğru humoral yanıt yokluğu ama alıcıların humoral yanıt-e doğru yeni antijenleri geliştirmek kapasite korunması ve bellek yanıtları korunması tarafından karakterize edilebilir. İlk olarak, alloantibody algılama prensibi üzerinde donör hücre tanıma alıcı antikorlar kuluçka donör hücre türü serum ile aşılı bir alıcıdan takip romanından uyarlandı. Eksojen antijenleri için yönettiği ikinci, humoral yanıt aşağıdaki uyarılması değerlendirildi: uzun vadeli hoşgörülü alıcılar ile anahtar deliği vantuzlu Hemocyanin (tam Freund's adjuvan ile emülsiyon KLH) olabilir. Belirli IgM ve IgG antikorlar antijenlere karşı varlığı 4 ila 13 gün, sırasıyla, ardından bağışıklama, enzim bağlantılı ImmunoSorbent Assay (ELISA)34ile tespit edilebilir. Üçüncü olarak, bağışıklık belleği yanıt korunması ve gün nakli alıcı serumu gün toplanan ile + 8 ve nakli takip +17 boyama RBCs -7 ve 3 xenogeneic kırmızı kan hücreleri (RBCs) enjeksiyonu ile tespit edilebilir. Tüm bu yöntemler belirli ikincil antikorlar ve hızlı FACS boyama tarafından daha az 1,5 saat sonuçlarında edinimi veya ELISA birkaç saat kullanarak immünglobulin alt türlerinden tanımlanması için izin.
Son olarak, bu protokoller nakli modelleri karakterizasyonu için tasarlanmıştır ve Otoimmün hastalık modelleri için uygulanan bir ölçüde olabilir. Yöntem ilkeleri tüm türler için aktarılmış.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>animals</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LEW.1W and LEW.1A rats</td>
			<td>Janvier Labs, France</td>
			<td></td>
			<td>8 weeks old,&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BN third party donor rats</td>
			<td>Janvier Labs, France</td>
			<td></td>
			<td>8 weeks old,&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>name</td>
			<td>company</td>
			<td>catalogue number</td>
			<td>comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AdCD40Ig</td>
			<td>Viral Vector Core, INSERM UMR 1089, Nantes, France</td>
			<td></td>
			<td>home made plasmids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL34-AAV</td>
			<td>Viral Vector Core, INSERM UMR 1089, Nantes, France</td>
			<td></td>
			<td>home made plasmids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGL2-AAV</td>
			<td>Viral Vector Core, INSERM UMR 1089, Nantes, France</td>
			<td></td>
			<td>home made plasmids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-TCR</td>
			<td>Hybridoma from European Collection of Cell Culture, Salisbury, U.K</td>
			<td>R7/3 clone</td>
			<td>Home made culture, purification and fluororophore coupling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-CD25</td>
			<td>Hybridoma from European Collection of Cell Culture, Salisbury, U.K</td>
			<td>OX39 clone</td>
			<td>Home made culture, purification and fluororophore coupling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-CD8</td>
			<td>Hybridoma from European Collection of Cell Culture, Salisbury, U.K</td>
			<td>OX8 clone</td>
			<td>Home made culture, purification and fluororophore coupling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-CD45RA</td>
			<td>Hybridoma from European Collection of Cell Culture, Salisbury, U.K</td>
			<td>OX33 clone</td>
			<td>Home made culture, purification and fluororophore coupling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-CD161</td>
			<td>Hybridoma from European Collection of Cell Culture, Salisbury, U.K</td>
			<td>3.2.3 clone</td>
			<td>Home made culture, purification and fluororophore coupling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-CD11b/c</td>
			<td>Hybridoma from European Collection of Cell Culture, Salisbury, U.K</td>
			<td>OX42 clone</td>
			<td>Home made culture, purification and fluororophore coupling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-TCRgd</td>
			<td>Hybridoma from European Collection of Cell Culture, Salisbury, U.K</td>
			<td>V65 clone</td>
			<td>Home made culture, purification and fluororophore coupling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-CD45RC</td>
			<td>Hybridoma from European Collection of Cell Culture, Salisbury, U.K</td>
			<td>OX22 clone</td>
			<td>Home made culture, purification and fluororophore coupling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-CD4</td>
			<td>Hybridoma from European Collection of Cell Culture, Salisbury, U.K</td>
			<td>OX35 clone</td>
			<td>Home made culture, purification and fluororophore coupling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-CD45R</td>
			<td>BD Biosciences, Mountain View, CA</td>
			<td>#554881, His24 clone</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-rat IgG-FITC</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch Laboratories, INC, Baltimore, USA</td>
			<td>#112-096-071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-rat IgG1</td>
			<td>Serotec</td>
			<td>#MCA 194</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-rat IgG2a</td>
			<td>Serotec</td>
			<td>#MCA 278</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-rat IgG2b</td>
			<td>Serotec</td>
			<td>#MCA 195</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-rat IgM-FITC</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch Laboratories, INC, Baltimore, USA</td>
			<td>#115-095-164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>streptavidin HRP</td>
			<td>BD Biosciences, Mountain View, CA</td>
			<td>#554066</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KLH</td>
			<td>Sigma Aldrich, St. Louis, USA</td>
			<td>#9013-72-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS 1X</td>
			<td>Thermo Fisher&#160;Scientific Inc, USA</td>
			<td></td>
			<td>Phosphate Buffer Solution without calcium and magnesium,&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma, Saint-Louis, USA</td>
			<td>#9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TMB substrate reagent kit</td>
			<td>BD Biosciences, Mountain View, CA</td>
			<td>#555214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTraceTM CFSE cell proliferation kit</td>
			<td>Thermo Fisher&#160;Scientific Inc, USA</td>
			<td>#C34554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 medium 1X</td>
			<td>Thermo Fisher&#160;Scientific Inc, USA</td>
			<td>#31870-025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>penicilline streptomycine</td>
			<td>Thermo Fisher&#160;Scientific Inc, USA</td>
			<td>#15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes Buffer</td>
			<td>Thermo Fisher&#160;Scientific Inc, USA</td>
			<td>#15630-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>non essential amino acids</td>
			<td>Thermo Fisher&#160;Scientific Inc, USA</td>
			<td>#11140-035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Thermo Fisher&#160;Scientific Inc, USA</td>
			<td>#11360-039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 beta mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma, Saint-Louis, USA</td>
			<td>#M3148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Proliferation Dye eFluor&#174; 450 Cell</td>
			<td>Thermo Fisher&#160;Scientific Inc, USA</td>
			<td>#65-0842-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamine</td>
			<td>Sigma, Saint-Louis, USA</td>
			<td>#G3126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher&#160;Scientific Inc, USA</td>
			<td>#D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase D</td>
			<td>Roche Diagnostics, Germany</td>
			<td>#11088882001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma, Saint-Louis, USA</td>
			<td>#E5134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl 0.9%</td>
			<td>Fresenius Kabi</td>
			<td>#B230561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic dynabeads</td>
			<td>Dynal, Invitrogen</td>
			<td>#11033</td>
			<td>Goat anti-mouse IgG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>One Comp eBeads</td>
			<td>Ebiosciences, San Diego, USA</td>
			<td>#01-1111-42</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Refer to the institutional guidelines</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Refer to the institutional guidelines</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naplbuphine</td>
			<td>Refer to the institutional guidelines</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Terramycine</td>
			<td>Refer to the institutional guidelines</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Refer to the institutional guidelines</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>Refer to the institutional guidelines</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Freund&#39;s adjuvant</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rompun</td>
			<td>Refer to the institutional guidelines</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringer lactate</td>
			<td>Refer to the institutional guidelines</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Refer to the institutional guidelines</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red blood cell lysis solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Dilute 8,29g NH4Cl (Sigma, Saint-Louis, USA A-9434), 1g KHCO3 (Prolabo 26 733.292) and 37.2mg EDTA (Sigma, Saint-Louis, USA E5134) in 800ml H2O. Adjust pH to 7.2-7.4 and complete to 1L with H2O.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase D</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Dilute 1g collagenase in 500 ml RPMI-1640 + 5 ml Hepes + 2% FCS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS-FCS (2%)-EDTA (0.5%)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Add 5 mL EDTA 0,1M (Sigma, Saint-Louis, USA E5134) and 20ml FCS to 1ml PBS 1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CFSE (Vybrant CFDA SE Cell Tracer Kit Invitrogen)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Dilute 50&#181;g (=1 vial) of CFDA SE (component A) in 90&#956;l DMSO (component B) solution to obtain a 10mM stock solution. Then, dilute stock solution at 1/20 000 in PBS 1X to obtain a 0.5&#956;M solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>complete medium for coculture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>500ml complete RPMI-1640 medium with 5 ml Penicillin (80 unit/ml)-Steptomycin (80 mg/ml), 5 ml L-Glutamine, 5 ml Non Essential Amino Acids (100X), 5ml Pyruvate Sodium (100mM), 5 ml HEPES buffer (1M), 2.5 ml b mercaptomethanol (7 ml of 2-bmercaptoethanol stock diluted in 10 ml RPMI), 10% FCS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>name</td>
			<td>company</td>
			<td>catalog number</td>
			<td>comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>equipments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>falcon 50ml</td>
			<td>BD Biosciences, Mountain View, CA</td>
			<td>#227261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>falcon 15ml</td>
			<td>BD Biosciences, Mountain View, CA</td>
			<td>#188271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sieve</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning plastic culture dishes</td>
			<td>VWR, Pessac</td>
			<td>#391-0439</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100&#181;m and 60&#181;m tissue filters</td>
			<td>Sefar NITEX, Heiden, Switzerland</td>
			<td>#03-100/44 and #03-60/35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 wells U bottom plates for coculture</td>
			<td>&#160;Falcon U-bottom Tissue Culture plate, sterile, Corning</td>
			<td>#353077</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 wells V bottom plates for FACS staining</td>
			<td>ThermoScientifique, Danemark</td>
			<td>#249570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 wells flat bottom ELISA plates</td>
			<td>Nunc Maxisorb</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>seringue for spleen crush</td>
			<td>BD Biosciences, Mountain View, CA</td>
			<td>#309649</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA reader</td>
			<td>SPARK 10M, Tecan, Switzerland</td>
			<td>SPARK 10M, Tecan, Switzerland</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bain marie&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X rays irradiator</td>
			<td>Lincolshire, England</td>
			<td>Faxitron CP160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>solar agitator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Canto II</td>
			<td>BD Biosciences, Mountain View, CA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Aria II</td>
			<td>BD Biosciences, Mountain View, CA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>magnet</td>
			<td>Thermo Fisher&#160;Scientific Inc, USA</td>
			<td>12302D</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro and in vivo assessment of t, b and myeloid cells suppressive activity and humoral responses from transplant recipients

Ana endişe Ekiminde indüksiyon düzenleyici hücre aracılığıyla belirli tolerans ulaşmaktır. Dayanıklılık mekanizmaları güvenilir modelleri gerektirir. Burada, costimulation sinyalleri abluka veya gen transferi yoluyla immunoregulatory moleküllerinin upregulation indüklenen sıçan, kardiyak homogreft tolerans modelleri açıklar. Bu modellerin her düzenleyici T hücreleri (Tregs), düzenleyici B hücreleri (Bregs) veya düzenleyici myeloid hücrelerin (RegMCs) gibi düzenleyici hücreleri nesil vivo içinde izin. Bu makale, biz tanımlamak ve kendi sorumluluk tolerans indüksiyon ve bakım. belirlemek için vitro ve in vivo düzenleyici hücre etkinliği tanımlamak için kullanılan iki tamamlayıcı protokol tarif İlk olarak, vitro süpresif tahlil hücre hızlı kimlik efektör bağışıklık yanıtı üzerinde süpresif kapasiteli bir doz bağımlı şekilde izin ve sitokin ölçüm ve sitotoksisite gibi daha fazla çözümleme için kullanılabilir. İkinci olarak, hücreleri yeni radyasyonlu aşılı alıcıya, evlat edinen transferi hoşgörülü arıtılmış alıcıdan gelen vurgulanmış yönetmen graft bağışıklık yanıtı kontrol ve/veya dönüştürme yeni düzenleyici hücre (Bu hücreler tolerogenic özellikleri bulaşıcı tolerans olarak adlandırdığı tabaka). Bu yöntem bilinen fenotipik işaretçileri olan hücrelere sınırlı değildir ve herhangi bir hücre popülasyona uzatılabilir. Ayrıca, donör allospecificity düzenleyici hücre (alanında önemli bir hedefi) üçüncü donör hücreleri kullanarak tespit edilebilir veya içinde vitro veya vivo içindegrefti yönlendirilmiş. Son olarak, düzenleyici bu hücreleri belirli tolerogenic kapasitesini belirlemek için biz humoral Anti-donör antikor yanıt ve yeni veya eski bilinen antijenlere karşı humoral yanıt-e doğru geliştirmek için alıcının kapasitesini değerlendirmek için iletişim kuralları sağlar. Açıklanan tolerans modelleri daha fazla yeni biyolojik ve immunoregulatory molekülleri, belirlemek için düzenleyici hücreleri tanımlamak için kullanılan ve diğer nakli modelleri veya otoimmün hastalıklar kemirgen ya da insan için uyarlanabilir.

Baskılayıcı etkinlik (Resim 2), ZPT (şekil 1), Yanıtlayıcı hücreleri ve Tregs aynı anda boylama takip değerlendirilmesi veya ayrı ayrı (şekil 4), ve diğer sözde düzenleyici hücreler (şekil 3),-ebilmek var olmak Düzenleyici hücrelerin ve vitro ölçüm CFSE parlaklık (şekil 5) tarafından doğrudan enjeksiyon ta...

Watch this Scientific Journal Video about In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients at JoVE.com

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

Burada, hoşgörü Ekiminde teşvik ve içinde in vitro ve in vivo değerlendirmek için bir protokol farklı hücre alt kümeleri alıcıdan gelen süpresif kapasitesi ve donör veya eksojen antijenleri doğru alıcının bağışıklık durumu mevcut.

Vitro ve In Vivo değerlendirme T, B ve Myeloid hücrelerin süpresif etkinlik ve nakli alıcılardan gelen Humoral yanıt

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

Induction and Assessment of Class Switch Recombination in Purified Murine B Cells

Sınıf Anahtarı Rekombinasyon murin B Hücreleri Saf İndüksiyon ve Değerlendirme

Humoral immunity is the branch of the immune system maintained by B cells and mediated through the secretion of antibodies. Upon B cell activation, the ...

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Fare T-hücrelerinin, T-hücre reseptörleri retroviral İletimi

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

Primer insan T hücrelerinin piggyBac Transposon Sistem Modifikasyon

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

T hücre yanıtlarının Değerlendirme Floresan hedef Dizilerin Kullanımı<em&gt; In vivo</em

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

T hücrelerinin türetilmesi<em&gt; İn Vitro</em&gt; Fare Embriyonik Kök Hücreleri

The OP9/OP9-DL1 co-culture system has become a well-established method for deriving differentiated blood cell types from embryonic and hematopoietic ...

Measurement of In Vitro Integration Activity of HIV-1 Preintegration Complexes

Measurement of In Vitro Integration Activity of HIV-1 Preintegration Complexes

Ölçümü<em&gt; İn Vitro</em&gt; HIV-1 Preintegration Kompleksleri Entegrasyon Etkinliği

HIV-1 envelope proteins engage cognate receptors on the target cell surface, which leads to viral-cell membrane fusion followed by the release of the ...

The Isolation, Differentiation, and Quantification of Human Antibody-secreting B Cells from Blood: ELISpot as a Functional Readout of Humoral Immunity

İzolasyon, Farklılaşma ve Niceleme İnsan Kanı B Hücreleri Antikor salgılayan: ELISPOT Hümoral Bağışıklık bir Fonksiyonel Göstergesi&#39;nin olarak

The hallmark of humoral immunity is to generate functional ASCs, which synthesize and secrete Abs specific to an antigen (Ag), such as a pathogen, and are ...

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells (iTregs) from Na&#239;ve CD4+ T Cells Using a TGF-&#946;-containing Protocol

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells iTregs from NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4+ T Cells Using a TGF-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-containing Protocol

Bir TGF-β-içeren Protokolü kullanılarak naif CD4 + T hücrelerinden insan CD4 + FoxP3 + Bağlı regülatör T hücreleri (iTregs) in vitro ayrımında

Regulatory T cells (Tregs) are an integral part of peripheral tolerance, suppressing immune reactions against self-structures and thus preventing ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Salmonella typhimuriumyalıtım-makrofajlar üzerinden Phagosomes içeren

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

İnsan T-hücre hatırlama yanıt Vivo içinde çalışmaya emme Blister iletişim kuralı

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...