Name: protocols for visualizing steroidogenic organs and their interactive organs with immunostaining in the fruit fly drosophila melanogaster
Uploaded: 2017-04-14T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Protocols for Visualizing Steroidogenic Organs and Their Interactive Organs with Immunostaining in the Fruit Fly Drosophila melanogaster at JoVE.com

אנו מודים רייקו כסא ו Tomotsune Ameku לתמיכה הטכנית שלהם עבור עבודה זו. אנחנו גם מודה Kei איטו, אולגה Alekseyenko, אקיקו קוטו, מסאיוקי מיורה, מרכז במלאי Bloomington תסיסנית, קיוטו לניירות מרכז (DGRC), והבנק התפתחותית מחקרים Hybridoma עבור מניות ריאגנטים. עבודה זו נתמכה על ידי מענקים YSN מן JSPs KAKENHI גרנט מספר 16K20945, קרן נאיטו, ו Inoue מדע ומחקר פרס; ועל ידי מענק RN מ MEXT KAKENHI גרנט מספר 16H04792.

הערה: התכנית הכוללת של פרוטוקולים מוצגת באיור 1. 1. דיסקציה של בלוטת טבעת הזחל (RG) הערה: D. melanogaster, השייכת Diptera cyclorrhaphous, האחריות ההורית היא שבתוך איבר האנדוקרינית מורכב הנ...

<ol>
	<li>Miller, W. L., Auchus, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Molecular+Biology,+Biochemistry,+and+Physiology+of+Human+Steroidogenesis+and+Its+Disorders.">The Molecular Biology, Biochemistry, and Physiology of Human Steroidogenesis and Its Disorders.</a> Endocr. Rev. 32 (1), 81-151 (2011).</li><li>Rousseau, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fifty+years+ago:+The+quest+for+steroid+hormone+receptors.">Fifty years ago: The quest for steroid hormone receptors.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 375 (1), 10-13 (2013).</li><li>Gilbert, L. I., Rybczynski, R., Warren, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+and+biochemical+nature+of+the+ecdysteroidogenic+pathway.">Control and biochemical nature of the ecdysteroidogenic pathway.</a> Annu. Rev. Entomol. 47, 883-916 (2002).</li><li>Niwa, R., Niwa, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzymes+for+ecdysteroid+biosynthesis:+their+biological+functions+in+insects+and+beyond.">Enzymes for ecdysteroid biosynthesis: their biological functions in insects and beyond.</a> Biosci. Biotechnol. Biochem. 78 (8), 1283-1292 (2014).</li><li>Kozlova, T., Thummel, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+regulation+of+postembryonic+development+and+reproduction+in+drosophila.">Steroid regulation of postembryonic development and reproduction in drosophila.</a> Trends Endocrinol. Metab. 11 (7), 276-280 (2000).</li><li>Ishimoto, H., Kitamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+molting-roles+of+the+steroid+molting+hormone+ecdysone+in+regulation+of+memory+and+sleep+in+adult+Drosophila.">Beyond molting-roles of the steroid molting hormone ecdysone in regulation of memory and sleep in adult Drosophila.</a> Fly. 5 (3), 215-220 (2011).</li><li>Ishimoto, H., Sakai, T., Kitamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecdysone+signaling+regulates+the+formation+of+long-term+courtship+memory+in+adult+Drosophila+melanogaster.">Ecdysone signaling regulates the formation of long-term courtship memory in adult Drosophila melanogaster.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 106 (15), 6381-6386 (2009).</li><li>Simon, A. F., Shih, C., Mack, A., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+control+of+longevity+in+Drosophila+melanogaster.">Steroid control of longevity in Drosophila melanogaster.</a> Science. 299 (5611), 1407-1410 (2003).</li><li>Buszczak, M., Freeman, M. R., Carlson, J. R., Bender, M., Cooley, L., Segraves, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a+Ecdysone+response+genes+govern+egg+chamber+development+during+mid-oogenesis+in+Drosophila.">a Ecdysone response genes govern egg chamber development during mid-oogenesis in Drosophila.</a> Development. 126 (20), 4581-4589 (1999).</li><li>Carney, G. E., Bender, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+drosophila+ecdysone+receptor+(EcR)+gene+is+required+maternally+for+normal+oogenesis.">The drosophila ecdysone receptor (EcR) gene is required maternally for normal oogenesis.</a> Genetics. 154 (3), 1203-1211 (2000).</li><li>Uryu, O., Ameku, T., Niwa, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+progress+in+understanding+the+role+of+ecdysteroids+in+adult+insects:+Germline+development+and+circadian+clock+in+the+fruit+fly+Drosophila+melanogaster.">Recent progress in understanding the role of ecdysteroids in adult insects: Germline development and circadian clock in the fruit fly Drosophila melanogaster.</a> Zoological Lett. 1, 32 (2015).</li><li>Ameku, T., Niwa, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mating-Induced+Increase+in+Germline+Stem+Cells+via+the+Neuroendocrine+System+in+Female+Drosophila.">Mating-Induced Increase in Germline Stem Cells via the Neuroendocrine System in Female Drosophila.</a> PLOS Genet. 12 (6), e1006123 (2016).</li><li>Danielsen, E. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+Genome-Wide+Screen+Identifies+Regulators+of+Steroid+Hormone+Production+and+Developmental+Timing.">A Drosophila Genome-Wide Screen Identifies Regulators of Steroid Hormone Production and Developmental Timing.</a> Dev. Cell. 37 (6), 558-570 (2016).</li><li>Ou, Q., Zeng, J., Yamanaka, N., Brakken-Thal, C., O'Connor, M. B., King-Jones, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Insect+Prothoracic+Gland+as+a+Model+for+Steroid+Hormone+Biosynthesis+and+Regulation.">The Insect Prothoracic Gland as a Model for Steroid Hormone Biosynthesis and Regulation.</a> Cell Rep. , (2016).</li><li>Yamanaka, N., Rewitz, K. F., O'Connor, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecdysone+control+of+developmental+transitions:+lessons+from+Drosophila+research.">Ecdysone control of developmental transitions: lessons from Drosophila research.</a> Annu. Rev. Entomol. 58, 497-516 (2013).</li><li>Niwa, Y. S., Niwa, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+regulation+of+insect+steroid+hormone+biosynthesis+and+its+role+in+controlling+timing+of+molting+and+metamorphosis.">Transcriptional regulation of insect steroid hormone biosynthesis and its role in controlling timing of molting and metamorphosis.</a> Dev. Growth Differ. 58, 94-105 (2015).</li><li>Monastirioti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+octopamine+cell+population+residing+in+the+CNS+abdominal+ganglion+controls+ovulation+in+Drosophila+melanogaster.">Distinct octopamine cell population residing in the CNS abdominal ganglion controls ovulation in Drosophila melanogaster.</a> Dev. Biol. 264 (1), 38-49 (2003).</li><li>Siegmund, T., Korge, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innervation+of+the+ring+gland+of+Drosophila+melanogaster.">Innervation of the ring gland of Drosophila melanogaster.</a> J. Comp. Neurol. 431 (4), 481-491 (2001).</li><li>McBrayer, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prothoracicotropic+Hormone+Regulates+Developmental+Timing+and+Body+Size+in+Drosophila.">Prothoracicotropic Hormone Regulates Developmental Timing and Body Size in Drosophila.</a> Dev. Cell. 13 (6), 857-871 (1979).</li><li>Shimada-Niwa, Y., Niwa, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonergic+neurons+respond+to+nutrients+and+regulate+the+timing+of+steroid+hormone+biosynthesis+in+Drosophila.">Serotonergic neurons respond to nutrients and regulate the timing of steroid hormone biosynthesis in Drosophila.</a> Nat. Commun. 5, 5778 (2014).</li><li>Brady, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+technique+for+making+very+fine,+durable+dissecting+needles+by+sharpening+tungsten+wire+electrolytically.">A simple technique for making very fine, durable dissecting needles by sharpening tungsten wire electrolytically.</a> Bull World Health Organ. 32 (1), 143-144 (1965).</li><li>Abramoff, M. D., Magalh&#227;es, P. J., Ram, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image+processing+with+ImageJ.">Image processing with ImageJ.</a> Biophotonics Int. 11 (7), 36-42 (2004).</li><li>Ohhara, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autocrine+regulation+of+ecdysone+synthesis+by+&#946;3-octopamine+receptor+in+the+prothoracic+gland+is+essential+for+Drosophila+metamorphosis.">Autocrine regulation of ecdysone synthesis by &#946;3-octopamine receptor in the prothoracic gland is essential for Drosophila metamorphosis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 112 (5), 1452-1457 (2015).</li><li>Gibbens, Y. Y., Warren, J. T., Gilbert, L. I., O'Connor, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroendocrine+regulation+of+Drosophila+metamorphosis+requires+TGFbeta/Activin+signaling.">Neuroendocrine regulation of Drosophila metamorphosis requires TGFbeta/Activin signaling.</a> Development. 138 (13), 2693-2703 (2011).</li><li>Parvy, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+&#946;FTZ-F1+in+regulating+ecdysteroid+titers+during+post-embryonic+development+in+Drosophila+melanogaster.">A role for &#946;FTZ-F1 in regulating ecdysteroid titers during post-embryonic development in Drosophila melanogaster.</a> Dev. Biol. 282 (1), 84-94 (2005).</li><li>Parvy, J. -. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forward+and+feedback+regulation+of+cyclic+steroid+production+in+Drosophila+melanogaster.">Forward and feedback regulation of cyclic steroid production in Drosophila melanogaster.</a> Development. 141 (20), 3955-3965 (2014).</li><li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes.">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118 (2), 401-415 (1993).</li><li>Rewitz, K. F., Yamanaka, N., Gilbert, L. I., O'Connor, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Insect+Neuropeptide+PTTH+Activates+Receptor+Tyrosine+Kinase+Torso+to+Initiate+Metamorphosis.">The Insect Neuropeptide PTTH Activates Receptor Tyrosine Kinase Torso to Initiate Metamorphosis.</a> Science. 326 (5958), 1403-1405 (2009).</li><li>Li, H. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+GAL4+driver+resource+for+developmental+and+behavioral+studies+on+the+larval+CNS+of+Drosophila.">A GAL4 driver resource for developmental and behavioral studies on the larval CNS of Drosophila.</a> Cell Rep. 8 (3), 897-908 (2014).</li><li>Alekseyenko, O. V., Lee, C., Kravitz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+manipulation+of+serotonergic+neurotransmission+affects+the+escalation+of+aggression+in+adult+male+Drosophila+melanogaster.">Targeted manipulation of serotonergic neurotransmission affects the escalation of aggression in adult male Drosophila melanogaster.</a> PLOS One. 5 (5), e10806 (2010).</li><li>Domanitskaya, E., Anllo, L., Sch&#252;pbach, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phantom,+a+cytochrome+P450+enzyme+essential+for+ecdysone+biosynthesis,+plays+a+critical+role+in+the+control+of+border+cell+migration+in+in+Drosophila.">Phantom, a cytochrome P450 enzyme essential for ecdysone biosynthesis, plays a critical role in the control of border cell migration in in Drosophila.</a> Dev. Biol. 386 (2), 408-418 (2014).</li><li>Song, X., Zhu, C. -. H., Doan, C., Xie, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germline+stem+cells+anchored+by+adherens+junctions+in+the+Drosophila+ovary+niches.">Germline stem cells anchored by adherens junctions in the Drosophila ovary niches.</a> Science. 296 (5574), 1855-1857 (2002).</li><li>Niwa, Y. S., Niwa, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+control+of+steroid+hormone+biosynthesis+during+development+in+the+fruit+fly+Drosophila+melanogaster.">Neural control of steroid hormone biosynthesis during development in the fruit fly Drosophila melanogaster.</a> Genes Genet. Syst. 89 (1), 27-34 (2014).</li><li>Yoshiyama-Yanagawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+conserved+Rieske+oxygenase+DAF-36/Neverland+is+a+novel+cholesterol-metabolizing+enzyme.">The conserved Rieske oxygenase DAF-36/Neverland is a novel cholesterol-metabolizing enzyme.</a> J. Biol. Chem. 286 (29), 25756-25762 (2011).</li><li>Niwa, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-molting+glossy/shroud+encodes+a+short-chain+dehydrogenase/reductase+that+functions+in+the+&amp;#34;Black+Box&amp;#34;+of+the+ecdysteroid+biosynthesis+pathway.">Non-molting glossy/shroud encodes a short-chain dehydrogenase/reductase that functions in the &amp;#34;Black Box&amp;#34; of the ecdysteroid biosynthesis pathway.</a> Development. 137 (12), 1991-1999 (2010).</li><li>Komura-Kawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+Zinc+Finger+Transcription+Factor+Ouija+Board+Controls+Ecdysteroid+Biosynthesis+through+Specific+Regulation+of+spookier.">The Drosophila Zinc Finger Transcription Factor Ouija Board Controls Ecdysteroid Biosynthesis through Specific Regulation of spookier.</a> PLOS Genet. 11 (12), e1005712 (2015).</li><li>Yamanaka, N., Marqu&#233;s, G., O'Connor, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vesicle-Mediated+Steroid+Hormone+Secretion+in+Drosophila+melanogaster.">Vesicle-Mediated Steroid Hormone Secretion in Drosophila melanogaster.</a> Cell. 163 (4), 907-919 (2015).</li><li>Riemensperger, T., Pech, U., Dipt, S., Fiala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+calcium+imaging+in+the+nervous+system+of+Drosophila+melanogaster.">Optical calcium imaging in the nervous system of Drosophila melanogaster.</a> BBA-Gen. Subjects. 1820 (8), 1169-1178 (2012).</li><li>Owald, D., Lin, S., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light,+heat,+action:+neural+control+of+fruit+fly+behavior.">Light, heat, action: neural control of fruit fly behavior.</a> Phil. T. Roy. Soc. B. 370 (1677), 20140211 (2015).</li></ol>

למדנו ביוסינתזה ecdysteroid מנגנון הרגולציה שלה ב ד melanogaster, ועבדתי פרוטוקול לנתיחת immunostaining. התזמון של ביוסינתזה ecdysteroid מושפע לגירויים סביבתיים באמצעות תשומות עצביות 33, כך שחיוני לשמר את העצבוב של איברי ecdysteroidogenic יחד עם המוח, VNC, ורקמות אחרות במהלך לנתיחה. ...

בשנת יצורים רב-תאיים, קבוצת תאים הוא ניחן פונקציה מיוחדת בפעילות שלהם ביוגני כי הוא חיוני לגוף כולו. כדי למלא את משימותיהם, בכל רקמה או איבר מבטא שורה של גנים הקשורים לתפקידם ומתקשרת עם רקמות אחרות לתזמר את פעילותם בהקשר של פיתוח. כדי לאפיין פונקציות הסלולר מיוחדות כגון ואינטראקציות בין-איבר, אנו צריכים לציין קבוצת התאים יחד עם סוגים אחרים של תאי אצלינו שלמים בארכיטקטורה הרבה-התאית. דוגמא אחת של איברים מיוחדים כגון היא איבר steroidogenic, שבו אנזימי biosynthetic רבים לתווך שלבי ההמרה מכולסטרול להורמוני סטרואידים פעילים 1. רוב גני אנזימים אלה באים לידי ביטוי במיוחד איברי steroidogenic, ואת המסלול ביוסינתזה מוסדר בחוזקה על ידי גירויים חיצוניים רבים באמצעות תשומות לחות ואת תשומות עצביות. פַּעַםהורמונים מסונתזים, סטרואידים מופרשים לתוך hemolymph ו ממוקדים רבות רקמות ואיברים להסדרת הביטוי במגוון של גנים 2. לכן, הפעולה של הורמון סטרואידים גורמת לתגובה מערכתית לשמור על הומאוסטזיס, צמיחה, רבייה. כדי לחקור את הפונקציות של ביוסינתזה הורמון סטרואידי והפעולות pleiotropic של הורמונים סטרואידים, תסיסנית יכול להיות מנוצל כמערכת מודל מתאים. במהלך שלבי הזחל, הורמון סטרואידי חרקים, ecdysteroid, הוא biosynthesized באיבר האנדוקרינית מיוחד הנקרא בלוטת prothoracic (PG) 3. בשנות ה PG, מספר אנזימים ecdysteroidogenic במיוחד לזרז את הצעדים המרה מרובות מכולסטרול כדי ecdysone, השולטת השרה ואת המטמורפוזה בשלבים התפתחותיים המתאים 4. לכן, שינוי דינמי כייל ecdysteroid מוסדרעל ידי מסלולי איתות רבים בתגובה לגירויים סביבתיים. מצד שני, בשלב הבוגר, ecdysteroid ממלא תפקידים חיוניים פיזיולוגיה, כולל רבייה, שינה, זיכרון, ואת תוחלת החיים 5, 6, 7, 8. זה ידוע כי ecdysteroid הוא biosynthesized פעיל בשחלה, המסדיר את התקדמות oogenesis 6, 7, 8, 9, 10, 11. לאחרונה דיווחנו כי מספר תאי גזע germline (GSCs) מושפע איתות פפטיד ecdysteroid ומין בתגובה ההזדווגות לגירויים 12. כלי רב עצמה של ד melanogaster גנטיקה וביולוגיה תאית, כולל מידע הגנום היטב מבואר, גן בינארימערכות ביטוי, וטכניקות RNAi מהונדסות, אפשרו לנו לזהות גנים חיוניים ecdysteroid ביוסינתזה של PG ואת 13 השחלה, 14, 15. לאחר גני ecdysteroidogenic מזוהים, רגולצית התעתיק של גנים אלה ואת localizations הדינמית של מוצרי גן יכולה להיבחן במסלול ביוסינתזה 16. לשם כך, כמוני-הפוך שעתוק-PCR, RNA כלאה באתרו, וניתוח immunohistological מתנהלת. היישום של טכניקות אלה כולל משימה מאתגרת; לנתיחה המשוכללת של PG או השחלה. בפרט, PG של זבוב הפירות הוא קטן יחסית לזה של חרקים אחרים (למשל תולעי משי ואת הזבוב מכה), כך אחד צריך לתרגל את מיומנות חיונית של זבוב הפירות דיסקציה לדגימה. יתר על כן, איברי ecdysteroidogenic שניהם מקבלים עצבובים ממערכת העצבים המרכזית (CNS) 17, 18, 19, 20. לפיכך, עבור ניתוחים אנטומיים מדויקים, איברי ecdysteroidogenic צריכים להישמר ללא פגע יחד עם CNS ואיברים אחרים, לא לשבש קשרים העצביים שלהם. כאן אנו מספקים פרוטוקולים לנתיחה ו להדמיה של איברים steroidogenic ברה. melanogaster. לימוד הטכניקה לנתיחה הוא נקודת מוצא המפתח עבור ניסויים אלה. בנוסף, אפשר לסמן את איברי steroidogenic בהצלחה, כמו גם האיברים האינטרקטיוויים שלהם עם מספר נוגדנים וקווי נהג GAL4. ניצול טכניקות אלה, החומרים, ואת הגנטיקה, אחד יכול ללמוד את המנגנונים המקיפים של ביוסינתזה הורמון סטרואידים.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>egg collection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tissue culture dish (55 mm)</td>
			<td>AS ONE</td>
			<td>1-8549-02</td>
			<td>&#160;for grape-juice agar plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>collection cup</td>
			<td>HIKARI KAGAKU</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>yeast paste</td>
			<td>Oriental dry yeast, Tokyo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100% grape juice</td>
			<td>Welch Food Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rearing larvae</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>small vials (12ml, 40&#215;23.5 mm, PS)</td>
			<td>SARSTEDT</td>
			<td>58.487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable loop</td>
			<td>AS ONE</td>
			<td>6-488-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>standard fly food</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>&#160;the recepi us on the website of Blooington stock center.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dissection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dissecting microscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>Stemi 2000-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dissecting microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>S8 AP0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tissue culture dish (35 x 10 mm, non-treated)</td>
			<td>IWAKI</td>
			<td>1000-035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard</td>
			<td>TORAY</td>
			<td></td>
			<td>coarting silicon inside dishes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Terumo needle (27G, 0.40 x 19 mm)&#160;</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>NN-2719S</td>
			<td>A &#34;knife&#34; to cut the tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Terumo syringe,&#12288;1ml</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>SS-01T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>forceps, Inox, #5</td>
			<td>Dumont, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>insect pin (0.18 mm in diameter)</td>
			<td>Shiga Brand</td>
			<td></td>
			<td>for fillet dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>micro scissors</td>
			<td>NATSUME SEISAKUSHO CO LTD.&#160;</td>
			<td>MB-50-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fixation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultrapure water</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Nacalai tesque</td>
			<td>16222-65</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Nacalai tesque</td>
			<td>02890-45</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-X100</td>
			<td>Nacalai tesque</td>
			<td>35501-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microtubes (1.5 ml)</td>
			<td>INA OPTIKA</td>
			<td>CF-0150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>As one swist mixer TM-300 (rocker)</td>
			<td>As one</td>
			<td>TM-300</td>
			<td>rocker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>9048-46-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>primary antibody</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Sro (guinea pig), 1:1000</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-GFP (rabbit), 1:1000</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>A6455</td>
			<td>Shimada-Niwa ans Niwa, 2014</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-GFP (mouse mAb, GF200), 1:100</td>
			<td>Nakarai tesque</td>
			<td>04363-66</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-5HT (rabbit), 1:500</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>S5545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Hts 1B1 (mouse)</td>
			<td>Developmental Studies Hybridoma Bank (DSHB)</td>
			<td>1B1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-DE-cadherin (rat), 1:20</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>DCAD2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-nc82 (mouse), 1:50</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>nc82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>secondary antibody</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Secondary Antibody, Alexa Fluor 488 conjugate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A-11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Mouse IgG (H+L) Secondary Antibody, Alexa Fluor 488 conjugate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A-11001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rat IgG (H+L) Secondary Antibody, Alexa Fluor 546 conjugate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A-11081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Guinea Pig IgG (H+L) Secondary Antibody, Alexa Fluor 555 conjugate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A-21435</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 546 dye-conjugated phalloidin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A-22283</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro slide glass</td>
			<td>Matsunami Glass Ind.,Ltd.</td>
			<td>SS7213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Square microscope cover glass</td>
			<td>Matsunami Glass Ind.,Ltd.</td>
			<td>C218181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FluorSave reagent (Mounting reagent)</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>345789</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette 1 ml (Disposable dropper)</td>
			<td>WATSON</td>
			<td>5660-222-1S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM700 laser scanning microscope system</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>inverted Axio Observer. Z1 SP left</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>image processing</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM700 ZEN</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>It is a special user interface based on the 64 bit Microsoft Windows7 operating system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fly stocks</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>w; GMR45C06-GAL4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>&#160;from Bloomington Drosophila Stock Center. (#46260)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UAS&#8211;GFP; UAS&#8211;mCD8::GFP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>gifts from K. Ito, The University of Tokyo.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>w[1118]</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>w; phantom-GAL4#22/UAS-turboRFP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>w; UAS-mCD8::GFP; TRH-GAL4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>see in Ref29, Alekseyenko, O. V, Lee, C. &#38; Kravitz, E. A.(2010)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>w; UAS-mCD8::GFP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>&#160;from Bloomington Drosophila Stock Center. (#32188)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>yw;; nSyb-GAL4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>&#160;from Bloomington Drosophila Stock Center. (#51941)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protocols for visualizing steroidogenic organs and their interactive organs with immunostaining in the fruit fly drosophila melanogaster

בשנת יצורים רב-תאיים, קבוצה קטנה של תאים הוא ניחן פונקציה מיוחדת בפעילות שלהם ביוגני, גרימת תגובה מערכתית כדי גידול ורבייה. בשנת חרקים, בלוטת prothoracic הזחל (PG) ואת התפקידים החיוניים השחלה משחק הנקבה הבוגרת ב biosynthesizing ההורמונים הסטרואידים העיקרי שנקרא ecdysteroids. אברי ecdysteroidogenic אלה מעוצבבים ממערכת העצבים, שדרכו עיתוי ביוסינתזה מושפעת לגירויים סביבתיים. כאן אנו מתארים פרוטוקול המאפשר הדמית איברי ecdysteroidogenic והאיברים האינטרקטיוויים שלהם זחלים ומבוגרים של זבוב הפרות תסיסנית, אשר מספקת מערכת מודל מתאימה ללימוד ביוסינתזה הורמון סטרואידים ואת מנגנון הרגולציה שלה. דיסקציה מיומנת מאפשרת לנו לשמור על העמדות של איברי ecdysteroidogenic והאיברים האינטרקטיוויים שלהם כולל המוח, חוט עצב הגחון, ורקמות אחרות. Immunostaining עםntibodies נגד אנזימי ecdysteroidogenic, יחד עם חלבוני קרינה מהונדסים מונעים על ידי יזמי רקמות ספציפיות, זמינה לתייג תאי ecdysteroidogenic. יתר על כן, innervations של איברי ecdysteroidogenic יכול גם להיות מתויג על ידי נוגדנים ספציפיים או אוסף של נהגי GAL4 בסוגים שונים של נוירונים. לכן, איברי ecdysteroidogenic והקשרים העצביים שלהם ניתן דמיינו בו זמנית על ידי immunostaining וטכניקות מהונדסות. לבסוף, אנו מתארים כיצד לחזות תאי גזע germline, אשר התפשטות ותחזוקה נשלטים על ידי ecdysteroids. שיטה זו תורמת להבנה מקיפה של ביוסינתזה הורמון סטרואידים ואת מנגנון הרגולטורים העצבי שלו.

השתמשנו בפרוטוקולים לעיל כדי להמחיש איברי steroidogenic ואיברים האינטרקטיוויים שלהם אצל נשי זחלי melanogaster ד ו בוגרת. בראייה הכוללת של פרוטוקולים מוצגת באיור 1. RG, כולל PG (איור 2 ד), הוא קטן יותר ושקוף יותר במוח והוא ממוקם בצד-הגבה הקדמי של ה...

Watch this Scientific Journal Video about Protocols for Visualizing Steroidogenic Organs and Their Interactive Organs with Immunostaining in the Fruit Fly Drosophila melanogaster at JoVE.com

Protocols for Visualizing Steroidogenic Organs and Their Interactive Organs with Immunostaining in the Fruit Fly Drosophila melanogaster

אנו מתארים פרוטוקול לנתיחה, קיבעון, ו immunostaining של איברי steroidogenic אצל נשי זחלים בוגרים דרוזופילה ללמוד ביוסינתזה הורמון סטרואידים ואת מנגנון הרגולציה שלה. בנוסף לאיברים steroidogenic, אנו לדמיין את העצבוב של איברים steroidogenic כמו גם תאי היעד steroidogenic כגון תאי גזע germline.

הפרוטוקולים המאפשר הדמיה איברים Steroidogenic ואורגנים אינטראקטיבית שלהם עם Immunostaining ב זבוב הפירות<em&gt; תסיסנית</em

In multicellular organisms, a small group of cells is endowed with a specialized function in their biogenic activity, inducing a systemic response ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Protocols for Visualizing Steroidogenic Organs and Their Interactive Organs with Immunostaining in the Fruit Fly Drosophila melanogaster

Assaying Blood Cell Populations of the Drosophila melanogaster Larva

Assaying Blood Cell Populations of the Drosophila melanogaster Larva

אוכלוסיות תאי דם Assaying של<em&gt; תסיסנית melanogaster</em&gt; זחל

In vertebrates, hematopoiesis is regulated by inductive microenvironments (niches). Likewise, in the invertebrate model organism&#160;Drosophila ...

Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions

Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions

גידול זבוב הפירות<em&gt; תסיסנית</em&gt; בתנאי Axenic ו Gnotobiotic

The influence of microbes on myriad animal traits and behaviors has been increasingly recognized in recent years. The fruit fly Drosophila melanogaster is ...

Visualizing the Interrenal Steroidogenic Tissue and Its Vascular Microenvironment in Zebrafish

לדמיין את רקמות Interrenal Steroidogenic ו microenvironment הדם שלה דג הזברה

This protocol introduces how to detect differentiated interrenal steroidogenic cells through a simple whole-mount enzymatic activity assay. Identifying ...

High-resolution Episcopic Microscopy (HREM) - Simple and Robust Protocols for Processing and Visualizing Organic Materials

High-resolution Episcopic Microscopy HREM - Simple and Robust Protocols for Processing and Visualizing Organic Materials

מיקרוסקופיה אפיסקופית ברזולוציה גבוהה (HREM) - פרוטוקולים פשוטים ורב-עוצמה לעיבוד והדמיה של חומרים אורגניים

We provide simple protocols for generating digital volume data with the high-resolution episcopic microscopy (HREM) method. HREM is capable of imaging ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

ניתוח Immunofluorescent מכתים של פטריות הגוף והנפש ומה קולט אור נוירונים במוח למבוגרים דרוזופילה melanogaster

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Whole-mount Clearing and Staining of Arabidopsis Flower Organs and Siliques

Whole-mount Clearing and Staining of Arabidopsis Flower Organs and Siliques

כולה-הר ניקוי, כתמים של תודרנית פרח איברים, Siliques

Due to its formidable tools for molecular genetic studies, Arabidopsis thaliana is one of the most prominent model species in plant biology and, ...

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

תא מבחני צבירה כדי להעריך את הכריכה של החריץ דרוזופילה עם טרנס-ליגנדים וניגוד שלה על ידי חבר העמים-ליגנדים

Notch signaling is an evolutionarily conserved cell-cell communication system used broadly in animal development and adult maintenance. Interaction of the ...

Three-dimensional Rendering and Analysis of Immunolabeled, Clarified Human Placental Villous Vascular Networks

תלת מימדי עיבוד וניתוח של Immunolabeled, מובהר היפרדות villous חלקית וסקולרית הרשתות האנושיות

Nutrient and gas exchange between mother and fetus occurs at the interface of the maternal intervillous blood and the vast villous capillary network that ...

Three-dimensional Organotypic Cultures of Vestibular and Auditory Sensory Organs

Organotypic תלת מימדי התרבויות שיווי המשקל ושמיעתיים אברי החישה

The sensory organs of the inner ear are challenging to study in mammals due to their inaccessibility to experimental manipulation and optical observation. ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

להמחיש את צומת ואת צלחת Notochordal Gastrulating עוברי העכבר באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סריקה כל הר Immunofluorescence

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...