Name: turbidimetry on human washed platelets: the effect of the pannexin1-inhibitor brilliant blue fcf on collagen-induced aggregation
Uploaded: 2017-04-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Turbidimetry on Human Washed Platelets: The Effect of the Pannexin1-inhibitor Brilliant Blue FCF on Collagen-induced Aggregation at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מענקי הקרן הלאומית למדע השויצרי (310030_162579 / 1 עד ברנדה הרנטה קוואק ו 320030_144150 כדי פיר Fontana) כמו גם על ידי מענק מטעם קרן הלב השויצרית.

חמש מתנדב בריאים שאינו קשור גויסו דגימת דם לבדיקות בידוד צימות טסיות דם. הסכמה מדעת נכתב הושג ואת פרוטוקול שאושר על ידי ועדת האתיקה המרכזית של בתי חולים אוניברסיטת ז&#39;נבה. כל המתנדבים מוסמכים להיות בריאים כדי לא נקטו כל תרופות מפריעה-טסיות במהלך לפחות 10 הימים שקדמו ?...

<ol>
	<li>Patel, S. R., Hartwig, J. H., Italiano, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biogenesis+of+platelets+from+megakaryocyte+proplatelets.">The biogenesis of platelets from megakaryocyte proplatelets.</a> J Clin Invest. 115 (12), 3348-3354 (2005).</li><li>Andrews, R. K., Berndt, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+physiology+and+thrombosis.">Platelet physiology and thrombosis.</a> Thromb Res. 114 (5-6), 447-453 (2004).</li><li>Go, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics--2014+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association.">Heart disease and stroke statistics--2014 update: a report from the American Heart Association.</a> Circulation. 129 (3), e28-e292 (2014).</li><li>Creager, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Results+of+the+CAPRIE+trial:+efficacy+and+safety+of+clopidogrel.+Clopidogrel+versus+aspirin+in+patients+at+risk+of+ischaemic+events.">Results of the CAPRIE trial: efficacy and safety of clopidogrel. Clopidogrel versus aspirin in patients at risk of ischaemic events.</a> Vasc Med. 3 (3), 257-260 (1998).</li><li>Born, G. V., Cross, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Aggregation+of+Blood+Platelets.">The Aggregation of Blood Platelets.</a> J Physiol. 168, 178-195 (1963).</li><li>Cazenave, J. P., Hemmendinger, S., Beretz, A., Sutter-Bay, A., Launay, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=[Platelet+aggregation:+a+tool+for+clinical+investigation+and+pharmacological+study+Methodology].">[Platelet aggregation: a tool for clinical investigation and pharmacological study Methodology].</a> Ann Biol Clin (Paris). 41 (3), 167-179 (1983).</li><li>Molica, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+role+of+a+polymorphism+in+the+Pannexin1+gene+in+collagen-induced+platelet+aggregation.">Functional role of a polymorphism in the Pannexin1 gene in collagen-induced platelet aggregation.</a> Thromb Haemost. 114 (2), 325-336 (2015).</li><li>Taylor, K. A., Wright, J. R., Vial, C., Evans, R. J., Mahaut-Smith, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amplification+of+human+platelet+activation+by+surface+pannexin-1+channels.">Amplification of human platelet activation by surface pannexin-1 channels.</a> J Thromb Haemost. 12 (6), 987-998 (2014).</li><li>Wang, J., Jackson, D. G., Dahl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+food+dye+FD&amp;C+Blue+No.+1+is+a+selective+inhibitor+of+the+ATP+release+channel+Panx1.">The food dye FD&amp;C Blue No. 1 is a selective inhibitor of the ATP release channel Panx1.</a> J Gen Physiol. 141 (5), 649-656 (2013).</li><li>Mahaut-Smith, M. P., Jones, S., Evans, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+P2X1+receptor+and+platelet+function.">The P2X1 receptor and platelet function.</a> Purinergic Signal. 7 (3), 341-356 (2011).</li><li>Hechler, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+platelet+functions+and+thrombosis+through+selective+or+nonselective+inhibition+of+the+platelet+P2+receptors+with+increasing+doses+of+NF449+[4,4',4'',4'''-(carbonylbis(imino-5,1,3-benzenetriylbis-(carbonylimino)))tetrakis+-benzene-1,3-disulfonic+acid+octasodium+salt].">Inhibition of platelet functions and thrombosis through selective or nonselective inhibition of the platelet P2 receptors with increasing doses of NF449 [4,4',4'',4'''-(carbonylbis(imino-5,1,3-benzenetriylbis-(carbonylimino)))tetrakis -benzene-1,3-disulfonic acid octasodium salt].</a> J Pharmacol Exp Ther. 314 (1), 232-243 (2005).</li><li>Cazenave, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+washed+platelet+suspensions+from+human+and+rodent+blood.">Preparation of washed platelet suspensions from human and rodent blood.</a> Methods Mol Biol. 272, 13-28 (2004).</li><li>Jarvis, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+aggregation:+turbidimetric+measurements.">Platelet aggregation: turbidimetric measurements.</a> Methods Mol Biol. 272, 65-76 (2004).</li><li>Thompson, N. T., Scrutton, M. C., Wallis, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Particle+volume+changes+associated+with+light+transmittance+changes+in+the+platelet+aggregometer:+dependence+upon+aggregating+agent+and+effectiveness+of+stimulus.">Particle volume changes associated with light transmittance changes in the platelet aggregometer: dependence upon aggregating agent and effectiveness of stimulus.</a> Thromb Res. 41 (5), 615-626 (1986).</li><li>Malinski, J. A., Nelsestuen, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+turbidity+to+the+stages+of+platelet+aggregation.">Relationship of turbidity to the stages of platelet aggregation.</a> Biochim Biophys Acta. 882 (2), 177-182 (1986).</li><li>Riess, H., Braun, G., Brehm, G., Hiller, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+evaluation+of+platelet+aggregation+in+whole+human+blood.">Critical evaluation of platelet aggregation in whole human blood.</a> Am J Clin Pathol. 85 (1), 50-56 (1986).</li><li>Hayward, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+evaluation+of+methods+for+determining+reference+intervals+for+light+transmission+platelet+aggregation+tests+on+samples+with+normal+or+reduced+platelet+counts.">An evaluation of methods for determining reference intervals for light transmission platelet aggregation tests on samples with normal or reduced platelet counts.</a> Thromb Haemost. 100 (1), 134-145 (2008).</li><li>Frelinger, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+function+tests,+independent+of+platelet+count,+are+associated+with+bleeding+severity+in.">Platelet function tests, independent of platelet count, are associated with bleeding severity in.</a> ITP. Blood. 126 (7), 873-879 (2015).</li><li>Fusegawa, Y., Goto, S., Handa, S., Kawada, T., Ando, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+spontaneous+aggregation+in+platelet-rich+plasma+is+increased+in+habitual+smokers.">Platelet spontaneous aggregation in platelet-rich plasma is increased in habitual smokers.</a> Thromb Res. 93 (6), 271-278 (1999).</li><li>Davis, R. B., Boyd, D. G., McKinney, M. E., Jones, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+exercise+and+exercise+conditioning+on+blood+platelet+function.">Effects of exercise and exercise conditioning on blood platelet function.</a> Med Sci Sports Exerc. 22 (1), 49-53 (1990).</li><li>Yee, D. L., Sun, C. W., Bergeron, A. L., Dong, J. F., Bray, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggregometry+detects+platelet+hyperreactivity+in+healthy+individuals.">Aggregometry detects platelet hyperreactivity in healthy individuals.</a> Blood. 106 (8), 2723-2729 (2005).</li><li>Cattaneo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+for+the+Standardization+of+Light+Transmission+Aggregometry:+A+Consensus+of+the+Working+Party+from+the+Platelet+Physiology+Subcommittee+of+SSC/ISTH.">Recommendations for the Standardization of Light Transmission Aggregometry: A Consensus of the Working Party from the Platelet Physiology Subcommittee of SSC/ISTH.</a> J Thromb Haemost. , (2013).</li><li>Patel, D., Zhang, X., Veenstra, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Connexin+hemichannel+and+pannexin+channel+electrophysiology:+how+do+they+differ?.">Connexin hemichannel and pannexin channel electrophysiology: how do they differ?.</a> FEBS Lett. 588 (8), 1372-1378 (2014).</li><li>European Food Safety Authority. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scientific+Opinion+on+the+re-evaluation+of+Brilliant+Blue+FCF+(E+133)+as+a+food+additive.">Scientific Opinion on the re-evaluation of Brilliant Blue FCF (E 133) as a food additive.</a> EFSA Journal. 8 (11), 1853-1889 (2010).</li><li>Lages, B., Scrutton, M. C., Holmsen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+gel-filtered+human+platelets:+isolation+and+characterization+in+a+medium+containing+no+added+Ca2+,+Mg2+,+or+K+.">Studies on gel-filtered human platelets: isolation and characterization in a medium containing no added Ca2+, Mg2+, or K+.</a> J Lab Clin Med. 85 (5), 811-825 (1975).</li></ol>

יש עניין רב במציאת תרופות חדשות המסוגל ויסות תפקוד הטסיות כדי למנוע פקקת ללא שיפור את הסיכון לדימום. לשם כך, בבדיקות מעבדה במבחנה אשר יכול באמינות reproducibly לפקח תגובות אגרגציה טסיות אדם נחוצות לחלוטין. aggregometry Turbidimetric הוא טכניקה קלה לביצוע. עם זאת, כמה אמצעי זה?...

טסיות הן מרכיב חיוני של דם והתפקוד יחד העיקרי שלהם עם קרישת גורמים-הוא כדי לעצור את הדימום לאחר פציעה של כלי דם. טסיות קטנות (2-3 מיקרומטר) שברי anuclear נגזר megakaryocytes של מח עצם 1. טסיות להסתובב המדינה הלא-מופעל, שבמהלכה הם מופיעים כמו מבנים דמוית-עדשה. לאחר הפסקה של האנדותל, טסיות לאסוף לאתר של פגיעה בכלי הדם כדי לסתום את החור, תהליך הנקרא המוסטאסיס העיקרי. בתחילה, טסיות לצרף מולקולות תת-אנדותל, כגון קולגן גורם פון Willebrand, כי נחשפות כתוצאת הצעד הדבק-פציעת 2. ואז, הם משנים צורה להפריש צעד שליחי הפעלה כימי. לבסוף, הם מתחברים זה לזה על ידי גישור צעד קולטני-צבירה. המוסטאסיס ראשי ואחריו תהליך משני מעורבי הפעלה של מפל הקרישה עם בתצהיר הפיברין, אשר לייצבזה פקיק 2 הראשוני. אירועים חריפים איסכמי כגון אוטם שריר לב 3 לעתים קרובות נובעים בורידים היוצרות בגלל שיבוש פיזי (קרע) של פלאק טרשת עורק. תרופות אנטי-טסיות הנוכחיות הן אבן הפינה של הטיפול במחלה נפוצה זו אך התועלת הקלינית שלהם מוגבלת על ידי סיכון מוגבר לדימומים. תרופות מרשם ביותר בחולים קרדיו, אספירין ותרכובות נגד P2Y12, למקד את thromboxane A2 ואת השבילים ADP 4, בהתאמה, המהווים את המסלולים העיקריים המובילים ההפעלה טסיות. עם זאת, מחקר חדשני לקראת יעדים חדשים שיאזנו בצורה אופטימלית תופעות נוגדות וסיכון haemorragic הוא עדיין נחוץ. מ 1960 5 עד היום, aggregometry turbidimetric שיחק תפקיד מרכזי במחקר, שיפור הידע שלנו היצמדות טסיות הדם ואניn את הניטור של העוצמה של ריאגנטים אנטי טרומבוטיים בבני אדם. Turbidimetry בתחילה היה מוחל PRP מופק דגימות דם. ואכן, איסוף דם שבוצע צינורות המכילים ציטרט מאפשר ייצור מהיר גדול של PRP מבלי כל השפעה על שלמות טסיות ולתפקד. עם זאת, את היציבות לטווח הקצר (כ 3 שעות) של PRP ואת אנזימי plasmatic הנותרים, כגון תרומבין, ואת ריכוז סידן הנמוך הקשורים פרופילי צבירה artefactual בפוטנציה הם של המטרד הזה לשימוש PRP. צעד חשוב קדימה כבר הפיתוח של שיטה לבידוד טסיות עם צנטריפוגה נוסף כביסת שלבי 6. בקיצור, PRP מבודד דם כולו נאסף על ציטרט חומצת דקסטרוז (ACD) וטסיות מבודדות לאחר צעדי צנטריפוגה סדרה בטרם resuspended ב חיץ פוספט iso-אוסמוטי (החיץ של Tyrode) גלוקוז המכיל, אלבומין אנושי ג divalentהוא שינויים (Ca 2+ ו Mg 2+). כדי להימנע משינויי היצמדות טסיות דם, ה- pH של החיץ של Tyrode נשמר בקפידה על 7.35-7.4. יתר על כן, הפעלה לא רצויה של טסיות נמנעת על ידי הוספת prostacyclin (PGI 2) לפני כמה צעדים צנטריפוגה. לבסוף, תוספת של apyrase מונע טסיות שטף מלהפוך עמיד נגד הפעולה של ה- ATP / ADP. השעית טסיות וכתוצאה חסרת גורמים מקרישים ואת היציבות של טסיות גדלה ב לפחות פי שתיים בהשוואה לפתרונות PRP. בנוסף, העובדה כי טסיות הם כתבים פעילים אך ללא פגע השחזור של מדידות turbidimetric ומספקת את היכולת ללמוד את הפעולה של אגוניסטים או אנטגוניסטים של הצטברות טסיות בצורה אופטימלית. באמצעות שיטה זו, אנו הראו במחקר שנערך לאחרונה כי מעכב את יצירתו של ערוצי Panx1 ידי גישה גנטית (נוק-אאוט עכברים) או ירידה בפעילות ערוץ Panx1 ידי תרופתיגישות טסיות מופחתת מושרה קולגן צבירה 7. Panx1 יוצר ערוצי שחרור ATP, אשר באים לידי ביטוי בכל מקום בגוף בסוגי תאים רבים, כולל טסיות אדם 7, 8. למעשה, אנו שהפגנו turbidimetry על אדם שנשטף טסיות כי preincubation 7 הדק &#39;עם פנל של חוסמים כימיים יותר-או-פחות ספציפיים (probenecid, mefloquine ו 10 פפטידים Panx1) לפני התוספת של אגוניסטים שונים, עכבות במיוחד קולגן מושרה צימות טסיות דם ואילו תגובות טסיות ל- AA ו- ADP לא הושפעו. הראינו כי שחרור ATP בערוצי Panx1 מפריע במיוחד את מסלול איתות GPVI המוביל צבירה מושרת קולגן. מעניין, מספר תרכובות ה- FDA עם יישומים במחלות אחרות (probenecid, mefloquine) משפיעים על הפעילות של ערוצי Panx1 במספר טסיות הדם. מצד אחד, זו פותחת אופקים חדשים טיפוליים כדי לבחורively לשנות היצמדות טסיות הדם. מצד השני, יש לשקול השפעות משניות פוטנציאל של תרכובות אלה. בהקשר זה, לצבוע מזון הבטוח FCF הכחול המבריק בשימוש סוכריות מרובות ומשקאות אנרגיה תואר בתור מעכב סלקטיבי של Panx1 9. אנו מתארים כאן פרוטוקול לבידוד של טסיות נשטף האנושית ומדידות turbidimetric של הצטברות טסיות מותאמים לחקור את ההשפעה של צבע FCF הכחול המבריק כאל יריב של הצטברות טסיות.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>citric acid monohydrate (C6H8O7*H2O)</td>
			<td>Roth</td>
			<td>5949-29-1</td>
			<td>danger of eye damage/irritation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trisodium citrate dihydrate (Na3C6H5O7*2H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S1804</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D(+)-glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G8270</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride (KCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9541</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S6014</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dihydrogenophosphate monohydrate (NaH2PO4*H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride hexahydrate (MgCl2*6H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M9272</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride hexahydrate (CaCl2*6H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>442909</td>
			<td>danger of eye damage/irritation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2-hydroxyethylpiperazine-N-2-ethane sulfonic acid (Hepes)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific&#160;</td>
			<td>15630</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>human serum albumin</td>
			<td>CSL Behring</td>
			<td>00257/374</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hydrochloric acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>320331</td>
			<td>Corrosive and irritative for the respiratory system. Can cause severe skin and eye damages.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf 5810 R</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heparin</td>
			<td>Drosspharm AG/SA</td>
			<td>20810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>prostacyclin I2 (PGI2)</td>
			<td>Cayman</td>
			<td>18220</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>apyrase from potatoes</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A6535</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fibrinogen (Haemocomplettan)</td>
			<td>CSL Behring</td>
			<td>HS 73466011</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>thrombo-aggragometer SD-Medical</td>
			<td>SD-Innovation</td>
			<td>TA8V</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant blue FCF (Erioglaucine disodium salt)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>80717</td>
			<td>Harmful to aquatic life with long lasting effects (Avoid release to the environnement)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>collagen</td>
			<td>Horm, Nycomed</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>arachidonic acid</td>
			<td>Bio/Data corporation</td>
			<td>C/N 101297</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cell counter Sysmex KX-21N</td>
			<td>Sysmex Digitana&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15630-056</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass cuvettes</td>
			<td>SD-Innovation</td>
			<td>THCV1000</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>magnetic stirrers</td>
			<td>SD-Innovation</td>
			<td>THA100</td>
			<td>-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

turbidimetry on human washed platelets: the effect of the pannexin1-inhibitor brilliant blue fcf on collagen-induced aggregation

Turbidimetry היא טכניקת מעבדה מוחלת על מנת למדוד את ההצטברות של טסיות מושעה או פלזמה (פלזמה העשירה בטסיות-, PRP) או במאגר (טסיות נשטפה), על ידי שימוש באחד או שילוב של אגוניסטים. השימוש טסיות נשטף מופרד מסביבתם הפלזמה שלהם בהעדר תרופות נגד קרישת הדם מאפשר לחקר מאפיינים טסיות מהותיים. בין הפנל הגדול של אגוניסטים, חומצה הארכידונית (AA), אדנוזין די-פוספט (ADP), תרומבין קולגן הם נפוץ ביותר בשימוש. תגובת הצבירה מכומת על ידי מדידת הצפיפות האופטית היחסית (OD) לאורך זמן השעיה הטסיות תחת בחישה מתמדת. טסיות השעיה הומוגנית להגביל המעבר של אור לאחר התוספת של אגוניסט, שינוי צורה טסיות מתרחש לייצר גידול חולף קטן OD. בעקבות צעד ההפעלה הראשונית הזו, קרישי טסיות יוצרים בהדרגה, המאפשר מעבר של אור דרך ההשעיה כמו מילult של ירידת OD. תהליך הצבירה בסופו של דבר מבוטא באחוזים, לעומת OD של פלזמה ירודה טסיות או חיץ. כיול מדוקדק כן חיוני בתחילת כל ניסוי. ככלל: כיול ל 0% מוגדרים על ידי מדידת OD של השעית הטסיות הלא מגורה תוך מדידת OD של מדיום ההשעיה המכיל שום טסיות מייצגת שווי של 100%. טסיות צבירה היא דמיינה בדרך כלל עקומת צבירה בזמן אמת. Turbidimetry היא אחת טכניקות המעבדה הנפוצות ביותר לחקירת תפקוד הטסיות ונחשבת כתקן זהב ההסטורי המשמשת לפיתוח סוכני תרופות החדשים שמטרתן עיכוב צימות טסיות דם. כאן, אנו מתארים פרוטוקולים מפורטים 1) הכינו אדם שנשטף טסיות 2) ניתוח turbidimetric של צבירת מושרה הקולגן של אדם שנשטף pretreated טסיות עם צבע המזון FCF הכחול המבריק שהיה לאחרונה iDENtified כמעכב של ערוצי Pannexin1 (Panx1).

תוכנת aggregometer אוטומטית מייצרת את עקומות צבירה ונותנת את הערכים עבור צבירה מירבית באחוזים. הערכים ניתן להעתיק תוכנה לניתוח נתונים על מנת לבצע ניתוח סטטיסטי ולדמיין ערכי צבירה מירבית בצורה של תרשימים ברים. לחלופין, כל נקודה בודדת של עקומות צבירה ניתן ...

Watch this Scientific Journal Video about Turbidimetry on Human Washed Platelets: The Effect of the Pannexin1-inhibitor Brilliant Blue FCF on Collagen-induced Aggregation at JoVE.com

Turbidimetry on Human Washed Platelets: The Effect of the Pannexin1-inhibitor Brilliant Blue FCF on Collagen-induced Aggregation

אנו מתארים שיטה פשוטה עבור בידוד של טסיות נשטף מן הדם האנושי ואחריו מדידות צימות טסיות דם הנגרמת אגוניסט ידי turbidimetry. כדוגמא אנחנו מיישמים שיטה זו לחקר התגובה אגרגציה של טסיות אדם קולגן לאחר דגירה מראש עם מעכב ערוץ Pannexin1 בריליאנט בלו FCF.

Turbidimetry על אדם שנשטף טסיות: השפעת מעכבי Pannexin1 FCF הכחול המבריק על צבירה מושרת קולגן

Turbidimetry is a laboratory technique that is applied to measure the aggregation of platelets suspended in either plasma (platelet-rich plasma, PRP) or ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Contusive Model of Unilateral Cervical Spinal Cord Injury Using the Infinite Horizon Impactor

דגם Contusive של פגיעה בחוט השדרה באמצעות צוואר הרחם חד צדדית Impactor אופק אינסופי

While the majority of human spinal cord injuries occur in the cervical spinal cord, the vast majority of laboratory research employs animal models of ...

Immunohistochemical Staining of B7-H1 (PD-L1) on Paraffin-embedded Slides of Pancreatic Adenocarcinoma Tissue

Immunohistochemical Staining of B7-H1 PD-L1 on Paraffin-embedded Slides of Pancreatic Adenocarcinoma Tissue

Immunohistochemical המכתים של B7-H1 (PD-L1) בפרפין מוטבע-שקופיות של רקמת לבלב אדנוקרצינומה

B7-H1/PD-L1, a member  of the B7 family of immune-regulatory cell-surface proteins, plays an important  role in the negative regulation of cell-mediated ...

Formation of Human Prostate Epithelium Using Tissue Recombination of Rodent Urogenital Sinus Mesenchyme and Human Stem Cells

היווצרות של האפיתל ערמונית אנושי באמצעות רקומבינציה של רקמות ואברי מין מכרסם mesenchyme סינוס ותאי גזע אנושיים

Progress in prostate cancer research is severely  limited by the availability of human-derived and hormone-na&iuml;ve model systems,  which limit our ...

Measuring Frailty in HIV-infected Individuals. Identification of Frail Patients is the First Step to Amelioration and Reversal of Frailty

מדידת חולשה באנשים נגועים ב-HIV. זיהוי של חולים חלושים הוא הצעד הראשון להטבה והיפוך של חולשה

A simple, validated protocol consisting of a battery of tests is available to identify elderly patients with frailty syndrome. This syndrome of decreased ...

A Thrombotic Stroke Model Based On Transient Cerebral Hypoxia-ischemia

דגם שבץ טרומבוטיים בהתבסס על היפוקסיה-איסכמיה מוחית חולפת

Stroke research has endured many setbacks in translating neuroprotective therapies into clinical practice. In contrast, the real-world therapy (tPA ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

זרחן-31 ספקטרוסקופיה תהודה מגנטית: כלי למדידת<em&gt; In vivo</em&gt; קיבולת זרחון חמצוני מיטוכונדריאלי של שריר שלד אדם

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Analyzing Beneficial Effects of Nutritional Supplements on Intestinal Epithelial Barrier Functions During Experimental Colitis

ניתוח מועיל אפקטים של תוספי תזונה על פונקציות מעיים אפיתל מכשול במהלך ניסיוני קוליטיס

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause ...

The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

4-כלי דגימה גישה ללימודים אינטגרטיביים של הפיזיולוגיה השליה האדם<em&gt; בויבו</em

The human placenta is highly inaccessible for research while still in utero. The current understanding of human placental physiology in vivo is therefore ...

Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of Caenorhabditis elegans

Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of Caenorhabditis elegans

מדידת אפקט של כימיקלים על גדילה, רבייה של Caenorhabditis elegans

Toxicological evaluation is crucial for understanding the effects of chemicals on living organisms in basic and applied biological science fields. A ...

A Primary Human Trophoblast Model to Study the Effect of Inflammation Associated with Maternal Obesity on Regulation of Autophagy in the Placenta

מודל ראשי Trophoblast האנושי כדי לחקור את ההשפעה של דלקת הקשורות בהשמנת יתר אימהית על ויסות Autophagy את השליה

Maternal obesity is associated with an increased risk of adverse perinatal outcomes that are likely mediated by compromised placental function that can be ...