Name: turbidimetry on human washed platelets: the effect of the pannexin1-inhibitor brilliant blue fcf on collagen-induced aggregation
Uploaded: 2017-04-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Turbidimetry on Human Washed Platelets: The Effect of the Pannexin1-inhibitor Brilliant Blue FCF on Collagen-induced Aggregation at JoVE.com

Bu çalışma, İsviçre Ulusal Bilim Vakfı hibe (Pierre Fontana 310030_162579 / Brenda Renata Kwak 1 ve 320030_144150) yanı sıra ile İsviçre Kalp Vakfı bir hibe ile desteklenmiştir.

Beş ilgisiz sağlıklı gönüllüler trombosit izolasyon ve kümelenme testleri için kan örneği almak için alınmıştır. Yazılı onayları alınmıştır ve protokol Cenevre Üniversitesi Hastaneleri&#39;nin Merkez Etik Komitesi tarafından onaylandı. sertifikalı Tüm gönüllüler sağlıklı olmak için ve deneyler öncesinde en az 10 gün boyunca herhangi bir trombosit müdahale ilaçları almamış etmek. İnsan Kan Toplama 1. Tampon Hazırlama ve Yıkanmış Trombosit İzolasyo...

<ol>
	<li>Patel, S. R., Hartwig, J. H., Italiano, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biogenesis+of+platelets+from+megakaryocyte+proplatelets.">The biogenesis of platelets from megakaryocyte proplatelets.</a> J Clin Invest. 115 (12), 3348-3354 (2005).</li><li>Andrews, R. K., Berndt, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+physiology+and+thrombosis.">Platelet physiology and thrombosis.</a> Thromb Res. 114 (5-6), 447-453 (2004).</li><li>Go, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics--2014+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association.">Heart disease and stroke statistics--2014 update: a report from the American Heart Association.</a> Circulation. 129 (3), e28-e292 (2014).</li><li>Creager, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Results+of+the+CAPRIE+trial:+efficacy+and+safety+of+clopidogrel.+Clopidogrel+versus+aspirin+in+patients+at+risk+of+ischaemic+events.">Results of the CAPRIE trial: efficacy and safety of clopidogrel. Clopidogrel versus aspirin in patients at risk of ischaemic events.</a> Vasc Med. 3 (3), 257-260 (1998).</li><li>Born, G. V., Cross, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Aggregation+of+Blood+Platelets.">The Aggregation of Blood Platelets.</a> J Physiol. 168, 178-195 (1963).</li><li>Cazenave, J. P., Hemmendinger, S., Beretz, A., Sutter-Bay, A., Launay, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=[Platelet+aggregation:+a+tool+for+clinical+investigation+and+pharmacological+study+Methodology].">[Platelet aggregation: a tool for clinical investigation and pharmacological study Methodology].</a> Ann Biol Clin (Paris). 41 (3), 167-179 (1983).</li><li>Molica, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+role+of+a+polymorphism+in+the+Pannexin1+gene+in+collagen-induced+platelet+aggregation.">Functional role of a polymorphism in the Pannexin1 gene in collagen-induced platelet aggregation.</a> Thromb Haemost. 114 (2), 325-336 (2015).</li><li>Taylor, K. A., Wright, J. R., Vial, C., Evans, R. J., Mahaut-Smith, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amplification+of+human+platelet+activation+by+surface+pannexin-1+channels.">Amplification of human platelet activation by surface pannexin-1 channels.</a> J Thromb Haemost. 12 (6), 987-998 (2014).</li><li>Wang, J., Jackson, D. G., Dahl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+food+dye+FD&amp;C+Blue+No.+1+is+a+selective+inhibitor+of+the+ATP+release+channel+Panx1.">The food dye FD&amp;C Blue No. 1 is a selective inhibitor of the ATP release channel Panx1.</a> J Gen Physiol. 141 (5), 649-656 (2013).</li><li>Mahaut-Smith, M. P., Jones, S., Evans, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+P2X1+receptor+and+platelet+function.">The P2X1 receptor and platelet function.</a> Purinergic Signal. 7 (3), 341-356 (2011).</li><li>Hechler, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+platelet+functions+and+thrombosis+through+selective+or+nonselective+inhibition+of+the+platelet+P2+receptors+with+increasing+doses+of+NF449+[4,4',4'',4'''-(carbonylbis(imino-5,1,3-benzenetriylbis-(carbonylimino)))tetrakis+-benzene-1,3-disulfonic+acid+octasodium+salt].">Inhibition of platelet functions and thrombosis through selective or nonselective inhibition of the platelet P2 receptors with increasing doses of NF449 [4,4',4'',4'''-(carbonylbis(imino-5,1,3-benzenetriylbis-(carbonylimino)))tetrakis -benzene-1,3-disulfonic acid octasodium salt].</a> J Pharmacol Exp Ther. 314 (1), 232-243 (2005).</li><li>Cazenave, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+washed+platelet+suspensions+from+human+and+rodent+blood.">Preparation of washed platelet suspensions from human and rodent blood.</a> Methods Mol Biol. 272, 13-28 (2004).</li><li>Jarvis, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+aggregation:+turbidimetric+measurements.">Platelet aggregation: turbidimetric measurements.</a> Methods Mol Biol. 272, 65-76 (2004).</li><li>Thompson, N. T., Scrutton, M. C., Wallis, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Particle+volume+changes+associated+with+light+transmittance+changes+in+the+platelet+aggregometer:+dependence+upon+aggregating+agent+and+effectiveness+of+stimulus.">Particle volume changes associated with light transmittance changes in the platelet aggregometer: dependence upon aggregating agent and effectiveness of stimulus.</a> Thromb Res. 41 (5), 615-626 (1986).</li><li>Malinski, J. A., Nelsestuen, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+turbidity+to+the+stages+of+platelet+aggregation.">Relationship of turbidity to the stages of platelet aggregation.</a> Biochim Biophys Acta. 882 (2), 177-182 (1986).</li><li>Riess, H., Braun, G., Brehm, G., Hiller, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+evaluation+of+platelet+aggregation+in+whole+human+blood.">Critical evaluation of platelet aggregation in whole human blood.</a> Am J Clin Pathol. 85 (1), 50-56 (1986).</li><li>Hayward, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+evaluation+of+methods+for+determining+reference+intervals+for+light+transmission+platelet+aggregation+tests+on+samples+with+normal+or+reduced+platelet+counts.">An evaluation of methods for determining reference intervals for light transmission platelet aggregation tests on samples with normal or reduced platelet counts.</a> Thromb Haemost. 100 (1), 134-145 (2008).</li><li>Frelinger, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+function+tests,+independent+of+platelet+count,+are+associated+with+bleeding+severity+in.">Platelet function tests, independent of platelet count, are associated with bleeding severity in.</a> ITP. Blood. 126 (7), 873-879 (2015).</li><li>Fusegawa, Y., Goto, S., Handa, S., Kawada, T., Ando, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+spontaneous+aggregation+in+platelet-rich+plasma+is+increased+in+habitual+smokers.">Platelet spontaneous aggregation in platelet-rich plasma is increased in habitual smokers.</a> Thromb Res. 93 (6), 271-278 (1999).</li><li>Davis, R. B., Boyd, D. G., McKinney, M. E., Jones, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+exercise+and+exercise+conditioning+on+blood+platelet+function.">Effects of exercise and exercise conditioning on blood platelet function.</a> Med Sci Sports Exerc. 22 (1), 49-53 (1990).</li><li>Yee, D. L., Sun, C. W., Bergeron, A. L., Dong, J. F., Bray, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggregometry+detects+platelet+hyperreactivity+in+healthy+individuals.">Aggregometry detects platelet hyperreactivity in healthy individuals.</a> Blood. 106 (8), 2723-2729 (2005).</li><li>Cattaneo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+for+the+Standardization+of+Light+Transmission+Aggregometry:+A+Consensus+of+the+Working+Party+from+the+Platelet+Physiology+Subcommittee+of+SSC/ISTH.">Recommendations for the Standardization of Light Transmission Aggregometry: A Consensus of the Working Party from the Platelet Physiology Subcommittee of SSC/ISTH.</a> J Thromb Haemost. , (2013).</li><li>Patel, D., Zhang, X., Veenstra, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Connexin+hemichannel+and+pannexin+channel+electrophysiology:+how+do+they+differ?.">Connexin hemichannel and pannexin channel electrophysiology: how do they differ?.</a> FEBS Lett. 588 (8), 1372-1378 (2014).</li><li>European Food Safety Authority. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scientific+Opinion+on+the+re-evaluation+of+Brilliant+Blue+FCF+(E+133)+as+a+food+additive.">Scientific Opinion on the re-evaluation of Brilliant Blue FCF (E 133) as a food additive.</a> EFSA Journal. 8 (11), 1853-1889 (2010).</li><li>Lages, B., Scrutton, M. C., Holmsen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+gel-filtered+human+platelets:+isolation+and+characterization+in+a+medium+containing+no+added+Ca2+,+Mg2+,+or+K+.">Studies on gel-filtered human platelets: isolation and characterization in a medium containing no added Ca2+, Mg2+, or K+.</a> J Lab Clin Med. 85 (5), 811-825 (1975).</li></ol>

Kanama riskini artıran olmadan tromboz önlemek amacıyla trombosit fonksiyonunu modüle edebilen yeni ilaç bulmakta büyük bir ilgi vardır. Bu amaç için, güvenilir ve tekrarlanabilir bir insan plateletlerinde agregasyon karşılıklarının izlenmesi için, in vitro laboratuar testleri kesinlikle gereklidir. Bulanıklık agregometri gerçekleştirmek için kolay bir tekniktir. Ancak, bazı önlemler unutulmaması gerekir. toplama işlemi karıştırıldıktan büyük ölçüde bağımlı olduğu gibi ö...

Trombositler, kan ve pıhtılaşma ile ana işlevi-birlikte önemli bileşenleridir, kan damar hasarı sonrası kanamayı durdurmak için faktörlerin-olduğunu. Trombositler, kemik iliği 1 megakaryosit türetilmiş küçük (2-3 um) nukleussuz fragmanlarıdır. Trombositler ve bu süreçte mercek şeklinde yapılar olarak görünür, aktif olmayan halde dolaşır. endotelyumdaki kesinti üzerine, trombosit delik, birincil hemostaz adı verilen bir işlem takmak için kan damarı hasar bölgesinde toplanır. Başlangıçta, trombositler yaralanma yapışma aşama 2&#39;de bir sonucu olarak maruz kollajen ve von Willebrand faktörü gibi bir alt endotelial moleküller, ekleyin. Sonra, şekil değiştirebilir ve kimyasal haberciler-aktivasyon aşamasını salgılar. Son olarak, reseptörleri toplanma aşaması köprü ile birbirine bağlanır. Primer hemostaz stabilize fibrin birikimi, pıhtılaşma aktivasyonu kapsayan bir ikincil işlem takip ederBaşlangıç trombus 2 s. Miyokardiyal enfarktüs 3 olarak akut iskemik olaylar nedeniyle sıklıkla bir aterosklerotik plak fiziksel parçalama (kopma) arasında meydana trombusları. Güncel antiplatelet ilaçlar bu yaygın hastalığın tedavisinde temel taşlarıdır ancak klinik yarar kanama riskinde artış ile sınırlıdır. Kardiyovasküler hastalarda, aspirin ve anti-P2Y12 bileşikleri en çok önerilen ilaçlar, tromboksan A2 ve trombosit aktivasyonu giden ana yollar sırasıyla ADP yollar 4, hedef. Ancak, optimum antitrombotik etkileri ve hemorajik riski dengelemek olurdu yeni hedeflere doğru yenilikçi araştırmalar hala gereklidir. Bugüne 1960&#39;lardan 5 itibaren, türbidimetrik agregometri trombosit reaktivitesi ve i bilgimizi arttırmak, araştırma önemli bir rol oynamıştırİnsanlarda anti-trombotik reaktiflerin potansiyelinin kontrolü n. Türbidimetrik ilk kan örneklerinden ekstrakte PRP uygulanmıştır. Gerçekten de, kan toplama sitrat trombosit bütünlüğü ve işlevi üzerinde herhangi bir etkiye sahip olmaksızın PRP hızlı ve büyük üretimine izin verir içeren tüpler içerisinde gerçekleştirildi. Bununla birlikte, PRP kısa süreli kararlılık (yaklaşık 3 saat) ve trombin gibi kalan plazmatik enzim, ve potansiyel olarak artefakt agregasyon profilleri ile bağlantılı düşük kalsiyum konsantrasyonlu PRP kullanımı için önemli bir rahatsızlık vardır. Önemli bir ilerleme ek bir santrifüjleme ve yıkama 6 numaralı adımları ile trombosit izolasyonu için bir yöntemin geliştirilmesi olmuştur. bir izo-ozmotik bir fosfat tamponu (Tyrode tamponu) içeren glikoz, insan serum albumini ve iki değerli c tekrar askıya alınmadan önce Kısacası, PRP asit sitrat dektroz (CD) üzerinde alınan tam kandan izole edilir ve trombosit seri santrifüj aşamasından sonra izole ediliralar (Ca2 + ve Mg2 +). trombosit reaktivite değişiklikleri önlemek için, Tyrode tamponu pH dikkatli bir şekilde 7.35-7.4 tutulur. Ayrıca, trombositlerin arzu edilmeyen aktivasyonunun, bir santrifüj aşamasından önce (PGI2) prostasiklin ilave edilerek baskılanmaktadır. Son olarak, apiraz eklenmesi ATP / ADP etkisine karşı dirençli hale gelen yıkanmış trombositler engeller. Elde edilen trombosit süspansiyonu pıhtılaştırıcı faktörler sahip değildir ve PRP çözümlere kıyasla gibi platelet stabilitesi, en azından iki kat artar. Buna ek olarak, trombositler aktif olmayan fakat sağlam garanti eder türbidimetrik ölçümlerin tekrarlanabilirlik ve aslında optimal bir şekilde agonistleri veya trombosit agregasyon antagonistlerinin işlem çalışma olanağı sağlar. Bu yöntemi kullanarak, son çalışmada göstermiştir ki, bir genetik yaklaşım Panx1 kanallarının oluşumunu inhibe etmek (knock-out fareler) ya da farmakolojik ile Panx1 kanal aktivitesini azaltarakindirgenmiş kolajen ile uyarılan platelet birikmesini 7 yaklaşır. Panx1 her yerde bulunan bir insan trombositleri 7, 8 de dahil olmak üzere bir çok hücre tipinde ifade edilir, ATP-salım kanalları oluşturur. İnsan inhibe çeşitli agonistlerin ilavesinden önce daha çok ya da daha az spesifik kimyasal blokerleri (probenesid, meflokin, 10 Panx1 peptitler) bir panelin bir 7 dakika ön inkübasyon, kolajen ile uyarılan bu yıkanmış plateletler üzerinde Aslında, bulanıklık derecesi gösterdi platelet agregasyon AA ve ADP trombosit tepkileri etkilenmemektedir. Biz Panx1 kanallardan ATP salma, kolajen ile uyarılan agregasyonuna yol açan GPVI sinyalleme yolağında müdahale olduğunu göstermiştir. İlginç bir şekilde, başka hastalıkların (probenesid, meflokin) uygulamaları ile birden çok FDA onaylı bileşikler trombositlerde Panx1 kanallarının aktivitesini etkiler. Bir yandan, bu seçmek için yeni terapötik perspektifler açıyoryanıtını verdiler trombosit reaktivitesi değiştirin. Öte yandan, bir bu bileşiklerin potansiyel ikincil etkilerini dikkate almalıdır. Bu bağlamda, güvenli gıda boyası Parlak Mavi FCF Panx1 9 seçici bir inhibitörü olarak tarif edilmiştir birden fazla şeker ve enerji içecekleri kullanılır. Burada bir trombosit agregasyon antagonisti olarak Parlak Mavi FCF boya etkisini araştırmak üzere uyarlanmış insan yıkanmış trombositler ve trombosit agregasyon türbidimetrik ölçümleri izolasyonu için bir protokol açıklar.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>citric acid monohydrate (C6H8O7*H2O)</td>
			<td>Roth</td>
			<td>5949-29-1</td>
			<td>danger of eye damage/irritation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trisodium citrate dihydrate (Na3C6H5O7*2H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S1804</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D(+)-glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G8270</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride (KCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9541</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S6014</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dihydrogenophosphate monohydrate (NaH2PO4*H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride hexahydrate (MgCl2*6H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M9272</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride hexahydrate (CaCl2*6H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>442909</td>
			<td>danger of eye damage/irritation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2-hydroxyethylpiperazine-N-2-ethane sulfonic acid (Hepes)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific&#160;</td>
			<td>15630</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>human serum albumin</td>
			<td>CSL Behring</td>
			<td>00257/374</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hydrochloric acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>320331</td>
			<td>Corrosive and irritative for the respiratory system. Can cause severe skin and eye damages.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf 5810 R</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heparin</td>
			<td>Drosspharm AG/SA</td>
			<td>20810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>prostacyclin I2 (PGI2)</td>
			<td>Cayman</td>
			<td>18220</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>apyrase from potatoes</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A6535</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fibrinogen (Haemocomplettan)</td>
			<td>CSL Behring</td>
			<td>HS 73466011</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>thrombo-aggragometer SD-Medical</td>
			<td>SD-Innovation</td>
			<td>TA8V</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant blue FCF (Erioglaucine disodium salt)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>80717</td>
			<td>Harmful to aquatic life with long lasting effects (Avoid release to the environnement)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>collagen</td>
			<td>Horm, Nycomed</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>arachidonic acid</td>
			<td>Bio/Data corporation</td>
			<td>C/N 101297</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cell counter Sysmex KX-21N</td>
			<td>Sysmex Digitana&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15630-056</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass cuvettes</td>
			<td>SD-Innovation</td>
			<td>THCV1000</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>magnetic stirrers</td>
			<td>SD-Innovation</td>
			<td>THA100</td>
			<td>-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

turbidimetry on human washed platelets: the effect of the pannexin1-inhibitor brilliant blue fcf on collagen-induced aggregation

Türbidimetrik birine ait kullanım ya da agonist bir kombinasyonu ile (yıkanmış trombositler), ya plazma (platelet bakımından zengin plazma, PRP) &#39;de ya da tampon maddesi içinde süspansiyon haline getirildi, trombosit agregasyonunu ölçülmesi için tatbik edilen bir laboratuar tekniğidir. plazma ortamından ve antikoagülan yokluğunda ayrılır, yıkanır platelet kullanımı içsel trombosit özelliklerini incelemek için izin verir. agonistleri, arakidonik asit (AA), adenozin, di-fosfat (ADP), büyük panelin arasında, trombin ve kollajen en sık kullanılanlardır. agregasyon yanıtı sürekli karıştırma altında trombosit süspansiyonu zamanla görece optik yoğunluk (OD) ölçerek belirlenir. Homojen süspansiyon içinde trombositler bir agonistin eklenmesinden sonra ışığın geçişini sınırlandırmak, trombosit şekil değişimi OD küçük geçici artış meydana oluşur. Bu ilk Aktivasyon aşamasından sonra, trombosit pıhtıları, res olarak süspansiyon içinden ışığın geçmesine izin veren, yavaş yavaş meydanave ön muamele OD azalmıştır. toplama işlemi sonunda, trombosit bakımından fakir plazma ya da tampon OD ile karşılaştırıldığında, bir yüzde olarak ifade edilir. Titiz kalibrasyon her denemenin başında dolayısıyla esastır. Genel bir kural olarak: Kalibrasyon% 0 hiçbir trombositlerden oluşan süspansiyon ortamının OD ölçümü% 100 arasında bir değere temsil ederken olmayan bir uyarılan platelet süspansiyonu OD ölçümü ile ayarlanır. Trombosit agregasyonu, genellikle gerçek zamanlı agregasyon eğrisinin olarak görülür. Türbidimetrik platelet fonksiyonunun incelenmesi için en yaygın olarak kullanılan laboratuar tekniklerinden biridir ve tarihi altın standart olarak kabul edilir ve platelet toplanmasını inhibe etmeyi hedefleyen yeni farmasötik maddelerin geliştirilmesi için kullanılır. Burada, insan hazırlanması yıkanmış plateletler ve insan kolajen kaynaklı agregasyonun 2) türbidimetrik analiz trombositler son kimliklerini olduğu gıda boyası Parlak Mavi FCF ile ön işleme tabi tutulmuş, yıkanmış) 1 için ayrıntılı protokoller tarifPannexin1 (Panx1) kanallarının bir inhibitörü olarak tified.

agregasyonu yazılım otomatik agregasyon eğri oluşturur ve yüzde olarak maksimum agregasyon değerlerini vermektedir. değerleri istatistiksel analiz ve çubuk grafikler halinde maksimum toplanma değerleri görselleştirmek için bir veri analiz yazılımı kopyalanabilir. İsteğe bağlı olarak, toplama eğrileri her bir nokta eğrileri görselleştirmek için bir tablo yazılımı içine ve daha sonra istatistiksel yazılım (örneğin, GraphPad) art arda verilebilir. Ba...

Watch this Scientific Journal Video about Turbidimetry on Human Washed Platelets: The Effect of the Pannexin1-inhibitor Brilliant Blue FCF on Collagen-induced Aggregation at JoVE.com

Turbidimetry on Human Washed Platelets: The Effect of the Pannexin1-inhibitor Brilliant Blue FCF on Collagen-induced Aggregation

Biz bulanıklık derecesi agonist kaynaklı trombosit agregasyon ölçümleri ile takip insan kanından yıkanıp trombosit izolasyonu için basit bir yöntem tarif eder. Bir örnek olarak, Pannexin1 kanalı inhibitörü Parlak Mavi FCF ile bir ön kuluçkalama sonrası kollajen insan trombosit agregasyon cevap üzerinde çalışma yapılması için bu yöntemi uygulanır.

Kollajen ile indüklenen on Aggregation Pannexin1-inhibitör Parlak Mavi FCF: Türbidimetrik İnsanlar üzerinde Trombositler Yıkanmış

Turbidimetry is a laboratory technique that is applied to measure the aggregation of platelets suspended in either plasma (platelet-rich plasma, PRP) or ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Contusive Model of Unilateral Cervical Spinal Cord Injury Using the Infinite Horizon Impactor

Sonsuz Horizon Darbeli kullanarak tek taraflı Servikal Spinal Kord Yaralanması bir Contusive Modeli

While the majority of human spinal cord injuries occur in the cervical spinal cord, the vast majority of laboratory research employs animal models of ...

Immunohistochemical Staining of B7-H1 (PD-L1) on Paraffin-embedded Slides of Pancreatic Adenocarcinoma Tissue

Immunohistochemical Staining of B7-H1 PD-L1 on Paraffin-embedded Slides of Pancreatic Adenocarcinoma Tissue

Pankreas Adenokarsinom Doku B7-H1 immünohistokimyasal boyanma (PD-L1) parafin Slaytlar

B7-H1/PD-L1, a member  of the B7 family of immune-regulatory cell-surface proteins, plays an important  role in the negative regulation of cell-mediated ...

Formation of Human Prostate Epithelium Using Tissue Recombination of Rodent Urogenital Sinus Mesenchyme and Human Stem Cells

Kemirgen Ürogenital Sinüs mezenşimin ve İnsan Kök Hücre Doku Rekombinasyon kullanarak İnsan Prostat epiteli oluşumu

Progress in prostate cancer research is severely  limited by the availability of human-derived and hormone-na&iuml;ve model systems,  which limit our ...

Measuring Frailty in HIV-infected Individuals. Identification of Frail Patients is the First Step to Amelioration and Reversal of Frailty

HIV ile enfekte Bireylerde Frailty ölçüm. Narin Hastalar tanımlanması Islahı ve Frailty iptali için ilk adımdır

A simple, validated protocol consisting of a battery of tests is available to identify elderly patients with frailty syndrome. This syndrome of decreased ...

A Thrombotic Stroke Model Based On Transient Cerebral Hypoxia-ischemia

Geçici Serebral Hipoksi-iskemi Dayalı Bir Trombotik İnme Modeli

Stroke research has endured many setbacks in translating neuroprotective therapies into clinical practice. In contrast, the real-world therapy (tPA ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Fosfor-31 Manyetik Rezonans Spektroskopisi: Ölçme için Aracı<em&gt; İn Vivo</emİnsan İskelet Kası içinde&gt; Mitokondriyal Oksidatif Fosforilasyon Kapasitesi

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Analyzing Beneficial Effects of Nutritional Supplements on Intestinal Epithelial Barrier Functions During Experimental Colitis

Deneysel Kolit sırasında Bağırsak epitel Bariyer Fonksiyonları Üzerine Ek Beslenme Faydalı Etkileri Analizi

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause ...

The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

İnsan vücudunun fizyolojisini bütünleştiren 4 damarlı Örnekleme Yaklaşımı<emIn vivo</em

The human placenta is highly inaccessible for research while still in utero. The current understanding of human placental physiology in vivo is therefore ...

Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of Caenorhabditis elegans

Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of Caenorhabditis elegans

Büyüme ve üreme Caenorhabditis elegans kimyasallar etkisi ölçme

Toxicological evaluation is crucial for understanding the effects of chemicals on living organisms in basic and applied biological science fields. A ...

A Primary Human Trophoblast Model to Study the Effect of Inflammation Associated with Maternal Obesity on Regulation of Autophagy in the Placenta

Plasenta Autophagy düzenlenmesi üzerinde anne obezite ile ilişkili iltihap etkisini incelemek için bir birincil insan Trofoblast modeli

Maternal obesity is associated with an increased risk of adverse perinatal outcomes that are likely mediated by compromised placental function that can be ...